26_09_13_Proizvodstvo_preparatov_na_osnove_prob..


Чтобы посмотреть презентацию с картинками, оформлением и слайдами, скачайте ее файл и откройте в PowerPoint на своем компьютере.
Текстовое содержимое слайдов презентации:

1Производство препаратов на основе пробиотических микроорганизмовЛектор: доцент, доктор медицинских наук Несчисляев В.А. 2 Нормофлора - совокупность разнообразных популяций микробов отдельных органов и систем, поддерживающих биохимическое, метаболическое и иммунологическое равновесие макроорганизма, необходимое для сохранения здоровья человека. Термины – аналоги: нормальная микрофлора, микробиота, нормобиоценоз, эубиоз. 3Более 60% микрофлоры заселяет различные отделы ЖКТ.15-16% микроорганизмов приходится на ротоглотку Урогенитальный тракт, исключая вагинальный отдел (9%), заселен довольно слабо (2%); Остальная часть приходится на кожные покровы (12%) Распределение представителей микрофлоры в организме 4Этапы становления микробиотыФакультативныеанаэробыАнаэробыБифидобактерииНекультивируемыеУвеличение многообразияЗрелый составмикробиоты6 мес.24 мес.Грудное вскармливаниеВведение прикормаРазнообразие рационаПервоначальная колонизация и генетические факторыВозраст (месяцы)Становление микробиоты в кишечникеБактероидыВелионеллыФузобактерииСтановление микробиоты 55Микрофлора ЖКТ<103 КОЕ/мл102-109 КОЕ/мл104-1012 КОЕ/мл 6Микроколонии бактерий в биоптате прямой кишки расположены вокруг эпителиальных клеток или в виде отдельных агрегатов. (заимствовано с сайта University of Dundee, Scottland) Обильный рост на чашке Петри бактерий из биоптата стенки тонкого кишечника свидетельствует о многочисленности и многообразии микробного сообщества. 7 Все многообразие микробов, встречающихся в организме человека, можно разделить на две группы.1. Резидентнаямикрофлора2. Транзиторнаямикрофлора 8Взаимоотношение внешней среды, человека и его микробиотыБолезни нарушенной эндоэкологии (эндоэкологическая болезнь, болезни качественных и количественных нарушений микробиоты)Неадекватное питание, дефицит (избыток) нутриентов, ГМИ и др.Хронические инфекционные и паразитарные заболевания, очаговые инфекцииАллергические болезниЗаболевания, связанные с нарушением питания и обмена веществХронические интоксикации (алкоголь, курение, ксенобиотики и т.п.)Неблагоприятное воздействие факторов окружающей среды (ОВ, PW. СВЧ и др.)Синдром дисбиоза (дисбактериоза), нарушение пищеварения и всасыванияДепрессии, неврозы, вегетативные дисфункции 9Функции нормофлоры1) Колонизационная резистентность- колонизация эпителиальной зоны;- межмикробный антагонизм (снижение жизнеподдерживающего субстрата и/или конкуренция за него); конкуренция за рецепторные места прикрепления – (конкурентное исключение - блокада рецепторов адгезинами микрофлоры); генерация условий, ограничивающих выживание (поддержание кислой рН; бактериостатический эффект летучих жирных кислот; Re-dox потенциал); иммунная функция (синтез иммуноглобулинов, интерферона); продукция антимикробных субстанций (бактериоцины). 1010Продолжение слайда: «Функции нормофлоры» 2) детоксикация (инактивация энтерокиназы, щелочной фосфатазы); 3) ферментативная функция (гидролиз продуктов метаболизма белков, липидов, углеводов);4) пищеварительная функция (повышение физиологической активности желез пищевого канала, нормализация перистальтики кишечника);5) антианемическая функция (улучшает всасывание железа);6) антирахитическая функция (улучшает всасывание кальция, кальциферолов — вит. D)10 11 Колонизационная резистентность (КР) – это совокупность механизмов, придающих стабильность индигенной (собственной) микрофлоре и предотвращающих заселение макро-организма посторонними микробами. 121212 13 Нормативные показатели микрофлоры толстого кишечника (ОСТ 91500.11.0004-2003) Группы микроорганизмовВозраст, годы<11-60>60Бифидобактерии1010 - 1011109 - 1010108 - 109Лактобактерии106 - 107107 - 108106 - 107Бактероиды107 - 108109 - 10101010 - 1011Энтерококки105 - 107105 - 108106 - 107Фузобактерии<106108 - 109108 - 109Эубактерии106 - 107109 - 1010109 - 1010Пептострептококки<105109 - 10101010Клостридии≤103≤105≤106E.coli типичные107 - 108107 - 108107 - 108E.coli лактозонегативные<105<105<105E.coli гемолитические000Другие условно-патогенные энтеробактерии<104<104<104Стафилококк золотистый000Стафилококки сапрофитный, эпидермальный)≤104≤104≤104Дрожжеподобные грибы рода Candida≤103≤104≤104Неферментирующие бактерии≤103≤104≤104 14 Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника – появление большого количества бактерий (бактериальное обсеменение - «bacteriale overgrowth syndrome») в тонкой кишке, существенное изменение количественного и качественного состава микрофлоры толстой кишки. (Циммерман Я.С.,2000) 15 Дисбиоз не является клиническим диагнозом, а сугубо бактериологическое понятие. Это микробиологический синдром, осложняющий течение того или иного заболевания.Синдром раздраженного кишечника (СРК) – это комплекс функциональных (т.е. не связанных с органическим поражением кишечника) расстройств продолжительностью свыше 12 недель в течение последних 12 месяцев (причем необязательно непрерывных), основными клиническими проявлениями которого являются боли или ощущение дискомфорта в животе. 161616Причины нарушения нормофлоры:АНТИБИОТИКОТЕРАПИЯ (перорально и парентарально);НЕДОСТАТОЧНОЕ УПОТРЕБЛЕНИЕ ПИЩЕВЫХ ВОЛОКОН, НЕПОЛНОЦЕННОЕ ПИТАНИЕ;СТРЕСС (ПСИХОЛОГИЧЕСКИЙ, СМЕНА КЛИМАТИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ, РЕЖИМА ПИТАНИЯ);КИШЕЧНИЕ И ДРУГИЕ ИНФЕКЦИИ;ХРОНИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ;СНИЖЕНИЕ ИММУНИТЕТА И НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ;БЕСКОНТРОЛЬНЫЙ ПРИЁМ АДСОРБЕНТОВ, СЛАБИТЕЛЬНЫХ, ЖЕЛЧЕГОННЫХ, АНТИСЕПТИКОВ, ХИМИОПРЕПАРАТОВ 171717Мечников И.И. (1845 – 1916г.г)В 1908 году за исследования в области иммунологии Мечников получил Нобелевскую премию. 181818 Пробиотики – это живые микроорганизмы и вещества микробного происхождения, оказывающие при естественном способе введении благоприятные эффекты на физиологические функции, биохимические и поведенческие реакции организма хозяина через оптимизацию его микроэкологического статуса. (Шендеров Б.А. «Медицинская микробная экология и функциональное питание» Т.3) 191919 В настоящее время все пробиотики делятся на группы:Лекарственные препараты;БАДы;Продукты функционального питания, содержащие живые пробиотические микробы;Микробиологические очистители. 20Пребиотики Вещества (медицинские препараты, продукты питания), стимулирующие рост и развитие нормофлоры. Выступают в качестве источника энергии, аминокислот, витаминов. Обладают следующими положительными эффектами:Муколитическое действие;Репаративное действие;Поддержание оптимальных значений рН;Увеличение объема каловых масс;Улучшение моторики кишечника;Снижение газообразования;Стимуляция синтеза витаминов группы В и витамина К;Бифидогенная активность;Восстановление нарушенной нормальной микрофлоры. 21Примеры природных пребиотиков:Олигосахариды (лактулоза, фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды);Пищевые волокна;Растительные и микробные экстракты (дрожжевой, морковный и др.);Экстракты водорослей;Моносахариды, спирты (ксилит, сорбит, др);Полисахариды (пектины, инулин, хитозан и др.);Аминокислоты (валин, аргинин, глутаминовая и др.);Антиоксиданты (витамины А, С, Е, селен и др.);Ненасыщенные жирные;Ферменты (микробные β-галактозидазы, протеазы сахаромицетов);Пектины. 22 СИМбиотики – комбинация нескольких пробиотических видов бактерий (Бификол, Бифидин и др.). СИНбиотики – комплексные препараты, включающие пре – и пробиотики (Бифилиз, Линекс био, Ламинолакт и др.). 232323Показания к применению пробиотиков в комплексном лечении (доказанные эффекты)Острые и затяжные кишечные инфекции.Антибиотикоиндуцированные диареи.ВЗК (язвенный колит и болезнь Крона).Ферментопатии (дисахаридазная недостаточность).Синдром хронических запоров.Аллергические заболевания, в том числе пищевая, респираторная и дермато-интестинальная поливалентная аллергия, бронхиальная астма. 242424Гастроэнерологические заболевания (гастриты, гастродуодениты, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, синдром дисхолии и СРК).Хронические заболевания носоглотки и ротоглотки.Дисметаболическая нефропатии (гипероксалурия).Гемато-онкологические заболевания (лейкозы).Стрессы.Гипертоническая болезнь.Урогенитальные заболевания (вагиноз, кольпит)Продолжение: «Показания к применению пробиотиков в комплексном лечении (доказанные эффекты)» 252525При заболеваниях различного генеза с профилактической целью применение пробиотиков показано детям из групп риска по развитию дисбактериоза кишечника:Недоношенные и новорожденные с перинатальной патологией;Морфофункциональная незрелость;Ферментопатии с декопенсацией функцией ЖКТ;Раннее искуственное вскармиливание, изменение или расширение рациона питания у детей грудного возраста; 262626Частое применение антибактериальных препаратов;Частые ОРВИ, наличие оппортунистических инфекций;Вторичные иммунодефицитные состояния;Стрессы (психоэмоциональные расстройства).Продолжение: «При заболеваниях различного генеза с профилактической целью применение пробиотиков показано детям из групп риска по развитию дисбактериоза кишечника:» 272727Классификация пробиотиков:{ED083AE6-46FA-4A59-8FB0-9F97EB10719F}Группы пробиотиковПрепаратыБАДы - парафармацевтикиОтечествен.Зарубежн.Отечествен.Зарубежн.1. Моно-пробиотикиБифидосодержащие:БифидумбактеринБифидобактерии-фортеПробифорБифидогенЭугаланБифидумбактерин-1000Жидкий бифидумбактеринБиосорб-бифидумСоя-бифидумЛактосодержащие:ЛактобактеринБиобактонГастрофармБиобактонНаринеВайтадо-филюсКолисодержащие:Колибактерин2. Поли-пробиотикиБифидосодержащие:БифилонгЛактосодержащие:АцилактБифидо-и лактосодержащие:БифацидБифидо-и колисодержащие:БификолЛинексОмнифлора 2828283. Пробиотики – самоэлимини-рующиеся антагонисты: Бациллярные Сахаромицето-содержащие СпоробактеринБактиспоринБиоспоринБактисубтилФлонивин ВЭнтеролЛактофайберЛактоспораЭнрич Про- Бионикс4. Комбинированные пробиотики (синбиотики)Бифидосодержа-щие:БифилизЛактосодержа-щие:Аципол в тб.Колисодержащие:БиофлорБифидо-содержащие:БифиформЛаминолактБифистимАципол в капс.КипацидБифиформ МалышБифидо- и лакто-содержащие и инулин (пребиотик):Бифиформ Комплекс5. Метаболитные пробиотикиХилак-фортеМикростимАктофлорХилафорБактистатин 292929Требования к микроорганизмам,используемым в качестве пробиотиков: Должны быть изолированы из организма тех видов животных и человека, для которых они и будут предназначены; Должны обладать полезным воздействием на организм хозяина, подтвержденным лабораторными исследованиями и клиническими наблюдениями; При введении в больших количествах они должны обладать минимальной способностью к транслокации из просвета пищеварительного тракта во внутреннюю среду макроорганизма; При длительном использовании они не должны вызывать побочные эффекты; 303030 Должны обладать колонизационным потенциалом (быть устойчивыми к низким значениям рН, желчным кислотам, антимикробным субстанциям, продуцируемым индигенной микрофлорой; хорошо адгезироваться к эпителию соответствующих слизистых оболочек); Должны обладать стабильными характеристиками как в клиническом, так и в технологическом плане; Должны обладать высокой скоростью роста и размножения в условиях, близким таковым в кишечном тракте; Должны иметь четкую физиолого - биохимическую и генетическую маркировку как для исключения фальсификации, так и для периодического контроля идентичности исходных пробиотических штаммов и производственных культур в процессе их эксплуатации.Продолжение: «Требования к микроорганизмам,используемым в качестве пробиотиков:» 313131Микроорганизмы, используемые в качестве пробиотиков в фармацевтических препаратах и пищевых продуктахB. bifidum B. infantisB. longumB. breveB. adolescentisL. acidophilusL. plantarumL. caseiL. brevisL. rhamnosusL. bulgaricusL. fermentumL. helveticusLactococcus lactisLactococcus cremonisE. coliEnterococcus faeciumEnterococcus faecalisStreptococcus salivarumStreptococcus thermophilusBacillus subtilisSaccharomyces boulardii 3232Lactobacillus acidophilus Один из наиболее изученных и широко используемых видрв; Найдены в йогуртах и сырах; Обитают в основном в тонком кишечнике и влагалище; Продуцируют витамин К, лактазу, витамины группы В (фолиевую кислоту, В6, В3) и природные антибиотики (лактоцидин и ацидофилин).32 3333Lactobacillus rhamnosus Один из наиболее широко исследованных видов; Очень стабильная культура микроорганизмов в широком диапазоне температур и рН; Устойчив к желудочному соку и солям желчных кислот.33 3434Lactobacillus plantarum Попадают в организм при приеме в пищу овощей,синтезирует: Витамины K, A, B1, B2, B3, B5, B6; Короткоцепочные жирные кислоты; L-лизин (аминокислота/ противовирусной активнос-ти) Lactolin (природный антибиотик)34 3535Bifidobacterium bifidumусиливают защитную способность организма (благодаря стимулированию бифидобактериями продукции Ig A); синтезируют аминокислоты и белки, витамин К, пантотеновую кислоту, витамины группы В: B1 - тиамин, B2 - рибофлавин, B3 - никотиновую кислоту, B9 - фолиевую кислоту, B6 — пиридоксин;способствуют усилению процессов всасывания через стенки кишечника ионов кальция, железа, витамина D; применение бифидобактерий вместе с молочными продуктами улучшает их усвояемость лицами, которые не переносят лактозу (счет выделения бифидобактериями β-галактозидазы, которая компенсирует дефицит этого фермента в организме человека). 3636Bifidobacterium longum синтезирует витамины группы В (B1, В2, В6, В12, фолиевую кислоту), витамин К, также незаменимые аминокислоты, при этом в качестве источника азота используют аммиак; разрушает канцерогенные вещества, которые образуют некоторые представители кишечной микрофлоры при азотном обмене, выполняя, таким образом, роль «второй печени». 3737Точки приложения и механизм действия современных пробиотиков(Sanders, M 2003)Точка приложенияМеханизм действияАллергия (кожные поражения, ревматоидный артрит)Обеспечение транслокационного барьераИммуномодуляция (иммунный статус, реакция на вакцинирование)Взаимодействие с иммунокомпетентными клетками и клеточными рецепторамиОнкогенезАдсорбция мутагенов, ингибирование патогенов, стимуляция иммунитета)Гипертоническая болезньМетаболиты как ингибиторы АСЕВоспалительные процессы толстой кишки, болезнь КронаСнижение местной воспалительной реакцииСиндром избыточного бактериального роста в тонком кишечникеАнтимикробная активность, конкурентное исключениеНепереносимость лактозыДоставка микробной лактазы в тонкий кишечникДиарея (после приема антибиотиков, ротавирусной инфекции, колит, вызванный C. dificile, диарея путешественников)Конкурентное исключение, усиление иммунного ответаВагиноз, воспаление мочеполовых путейКонкурентное исключениеСиндром воспаленной толстой кишкиИзменение в составе или активности микрофлорыСнижение уровня холестеролаДеконъюгирование желчных кислотКариес зубовИзменение состава, способности к адгезииАлкогольные поражения печениИнгибиция эндотоксин-продуцирующей микрофлоры37 3838Механизмы лечено-профилактического действия споровых пробиотиков 393939Основные технологические стадии производства пробиотиковПриготовление маточной культуры производственного штаммаПроизводственное культивирование штаммаСтабилизация бактериальной культурыИзготовление лекарственных формПриготовление питательных средПриготовление защитных сред для лиофилизации 404040Подготовка посевного производственного штамма (маточной культуры) Флакон с чистой культуройтермостат термостат термостат термостат Культура 1-го пассажаКультура 2-го пассажаКультура 3-го пассажаКультура 4-го пассажаВ реактор 41414141 424242Питательные среды перед использованием должны подвергаться внутрилабораторному контролю: В качестве физико-химических показателей используют, главным образом, следующие: прозрачность и цветность; рН и Eh; содержание хлоридов (в пересчете на натрия хлорид); содержание аминного азота; стерильность. Агаризованные среды контролируют и по таким показателям, как:температура плавления студня среды;температура застудневания среды;плотность студня среды. 434343Состав питательной среды МРС-1 (для маточной культуры)Молочный гидролизатПеченочный экстракт Дрожжевой аутолизат Марганец сернокислый Магний сернокислый L-цистин Аммоний лимоннокислый Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водныйНатрий уксуснокислыйГлюкозаВода очищенная 444444Состав КД - среды (для реакторного культивирования)Дрожжевой аутолизат;Казеиновый гидролизат;Марганца сульфат;Магния сульфат;Цистеина гидрохлорид;Натрия ацетат;Калия фосфат двухзамещённый;30% раствор желатозы;20% раствор гидроксида натрия;Вода очищенная. 454545Производственное культивирование лактобактерийАэробные или анаэробные условия; +(37± 1) ºС; рН 6,0 ± 0,2;Продолжительность: (10 ±2) ч 464646Динамика накопления биомассы при реакторном культивировании лактобактерий Стрелкой указано окончание культивирования 474747Биологически активные метаболиты, содержащиеся в культуральной жидкости лактобактерий Витамины (тиамин, биотин, фолиевая кислота, пантотеновая кислота и др.).Незаменимые аминокислоты.Ферменты.Антибактериальные вещества (перекись водорода, лизоцим, органические кислоты, бактериоцины).Медиаторы.Гормоноподобные соединения.Компоненты пептидогликана, обладающие иммуномодулирующим действием. 484848Стабилизация бактериальной культурыКоррекция рН;Добавление защитной среды (сахарозо-желатино- молочная);Лиофилизация (замораживание и сублимационное высушивание). 494949Лиофилизация: аппаратурное оформление 1 – Сублиматор (камера сушильная)2 – Конденсатор – вымораживатель3 – Вакуум-насос4 – Холодильная установка5 – Насос для циркуляции хлад агента6 – Пустотелая плита7 – Противень 505050Оборудование для сушки 5151 Описание. Кристаллическая или пористая масса желтовато-бежевого цвета со специфическим запахом и вкусом.2.Подлинность. Грамположительные палочки, располагающиеся беспорядочными скоплениями или отдельными короткими цепочками.Растворимость. В 0,9 % растворе натрия хлорида в течение 5 мин.4. рН. От 4,5 до 6,0.Показатели качества лакто- и бифидосодержащих пробиотиков 52525. Контроль безвредности Препарат должен быть безвредным для белых мышей при пероральном введении одной дозыПродолжение слайда: «Показатели качества пробиотиков, содержащих живые бактериальные клетки» 53536. Герметизатия. Флаконы должны быть укупорены герметично.7. Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов.8. Качество маркировки и упаковки. Продолжение слайда: «Показатели качества пробиотиков, содержащих живые бактериальные клетки» 545454 Специфическая активность препаратаАнтагонистическая активностьАктивность кислотообразованияКоличество жизнеспособных клеток Посев на плотную или жидкую питательную средуТитрованиеМетод отсроченного антагонизма на плотной питательной средеПродолжение слайда: «Показатели качества пробиотиков, содержащих живые бактериальные клетки» 555555Метод отсроченного антагонизма (метод штрихов) 48ч 37оС анаэробные условияПробиотическийштаммУПМ24ч 37оС аэробные условия1-ый этап2-ой этап 5656Способы изготовления мази и суппозиториев с лактобактериномИзготовление мази, суппозиториевНа основе сухой биомассыСмешивание бактериальной взвеси с защитной средойОбработка сухой биомассыПолучение бактериальной взвесиСублимационное высушивание бактериальной суспензииРозлив бактериальной суспензии в кассетыПолучение бактериальной взвесиСмешивание бактериальной взвеси с компонентами стабилизирующей среды На основе жидкой биомассы 575757Получение метаболитного пробиотического препарата из культуральной жидкости лактобактерийПолучениебактериальной взвесиОтделение клеток от культуральной жидкостиУльтрафильтрация или центрифугирование Стабилизация метаболитного комплексаДобавление вспомогательных веществ илитемпературная обработкаИзготовление лекарственной формыКонцентрат биомассыИзготовление различных форм лактобактерина 585858УльтрафильтрацияСтандартная система UniFluxКартриджи с полыми волокнами (HF) 595959Биологические эффекты лактобактерий и их метаболитов Образование молочной и других органических кислот (пропионовая, муравьиная, уксусная), токсичных для условно-патогенных и гнилостных микроорганизмов. Одновременно эти кислоты снижают рН кишечного содержимого, что также неблагоприятно сказываются на жизнедеятельности последних; Образование перекисных соединений, при расщеплении которых выделяется атомарный кислород, подавляющий клетки условно-патогенной микрофлоры (УПМ); 606060 Образование антибиотикоподобных веществ (бактериоцинов), подавляющих метаболизм УПМ и гнилостных бактерий, взаимодействуя с клеточной мембраной и вызывая лизис клеток; Способность прикрепляется к эпителию кишечника, образуя на его поверхности плотную биоплёнку (за счёт интенсивного размножения), что является препятствием для фиксации патогенных микроорганизмов.Продолжение: «Биологические эффекты лактобактерий и их метаболитов» 6161БактистатинИнактивированный штамм B. subtilis-(пробиотическаясоставляющая)Гидролизат соевой муки (пребиотическаясоставляющая)Природный минералалюмосиликат-цеолит (адсорбент)Кумулятивное действиепо оптимизации микроэкологическогостатуса и реализации биологических эффектов симбионтной микрофлорыкишечника61 6262Бион3 уменьшает симптомы ОРВИ Снижение интенсивности простудной симптоматики (ринорея, боль в горле, головные и мышечные боли, лихорадка, мышечные боли, потеря аппетита) на 30% (значимо р=0,056)-30%*De Vrese M, Winkler P, Rautenberg P, et al . J. Clinical Nutrition, 200562 6363Открытие: Значительная часть гастритов, язв желудка и двенадцатиперстной кишки является результатом хеликобактерной инфекции и ее можно лечить с помощью антибиотиковJ. ROBIN WARRENAustralia,19372005BARRY J. MARSHALLAustralia, 1951 646464 656565Благодарю за внимание.

Приложенные файлы

  • pptx 18395376
    Размер файла: 4 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий