mikroby

Вариант 5 1)Строение клеточной стенки грам"-" бактерий: 1) тонкая стенка (10-15 нм); 2) один слой пептидогликана (5-10%);  3) нет тейхоевых кислот;  4) много липидов (10-20%).  В стенке - три слоя: 1) один слой пептидогликана; 2) волнообразная наружная мембрана; она соединена с пептидогликаном молекулами липопротеидов; 3) липополисахаридный слой, он не закрывает полностью наружную мембрану. Липополисахариды состоят из трех частей: а) липид А; б) ядро; в) О-специфическая цепь. Липид А погружен в наружную мембрану (придает токсичность – эндотоксин). О-специфическая цепь определяет антигенность (О-антиген). 2)Представителями аскомицетов являются и дрожжи. Они не имеют мицелия. Это – одноклеточные грибы. Клетки имеют овальную форму (3-15 мкм). Размножаются бинарным делением, почкованием или половым путем с образованием аскоспор. Большинство – сапрофиты. Их способность вызывать спиртовое брожение используется в хлебопечении, пивоварении и т.д. Некоторые виды вызывают заболевания – дрожжевые микозы (бластомикозы). К аскомицетам относится и возбудитель эрго-тизма – гриб спорынья), паразитирующий на злаках. 3)Дыхание (биологическое окисление) – окислительно-восстановительные реакции, идущие с выделением энергии и образованием АТФ. Субстраты дыхания: глюкоза, аминокислоты, спирты и др. Аэробное дыхание – участвует кислород. Анаэробное дыхание – без участия кислорода. При аэробном расщеплении выделяется значительно больше энергии, т.е. оно энергетически более выгодно, чем анаэробное расщепление. Брожение – неполное окисление в анаэробных условиях. Продуктами брожения могут быть этиловый спирт, молочная, масляная, уксусная, пропионовая кислоты. 4)В куриных эмбрионах. Заражают куриный эмбрион (аллонтоисная полость, хорион-аллонтоисная оболочка, амниотическая полость, желточный мешок, сам эмбрион). Куриный эмбрион – очень удобен. Он защищен от попадания других микробов (стерильный), техника работы с ним проста, можно накопить большое количество вирусов. Индикация: а) по специфическим поражениям на хорион-аллантоисной оболочке, по гибели эмбриона, б) по реакции склеивания эритроцитов – реакции гемагглютинации (РГА). Недостатки метода: а)не все вирусы (вирус полиомиелита, вирус ящура) можно вырастить в куриных эм-брионах; б) невозможно обнаружить микроб без вскрытия эмбриона; в) в нем много загрязняющих белков и других соединений. 5)По механизму действия антибиотики делят на 4 группы: 1) угнетают синтез белков клеточной стенки (-лактамы – пенициллины, цефалоспорины);  2) нарушают синтез клеточной мембраны (полиены – нистатин; полимикси-ны) 3) ингибируют синтез белков (тетрациклины, левомицетин, аминогликозиды - – стрептомицин, мономицин, неомицин, канамицин, гентамицин); 4) ингибируют синтез нуклеиновых кислот ( протитвоопухолевые антибиотики: актиномицин подавляет синтез РНК, рубомицин – синтез ДНК). Бактерицидным действием обладают стрептомицин, пенициллины, неомицин, канамицин, полимиксин, цефалоспорины. Бактериостатическим действием обладают тетрациклины, макролиды, левомицетин. Бактериостатические препараты необходимо использовать длительно. Их можно применять после бактерицидных препаратов для долечивания.


Вариант 4 1) Цитоплазматическая мембрана (ЦПМ) окружает наружную поверхность цитоплазмы. Строение: двойной слой фосфолипидов и белки. Белки находятся на поверхности бислоя и могут частично или полностью погружаться в липидный слой или пронизывать его насквозь. Функции: 1) активный транспорт 2) метаболические процессы (синтез клеточной стенки, энергетический обмен); 3) деление клетки; 4) образование спор.  2)Грибы рода Aspergillus (леечная плесень) относятся к аскомицетам. Такое название они получили потому, что при половом размножении образуют сумку (аск), в которой находится 4 или 8 гаплоидныхаскоспор. Имеют септированный мицелий. При бесполом размножении на концах плодоносящих гиф – конидиеносцах - образуются утолщения – стеригмы с цепочками экзоспор – конидий (стеригма с отходящими конидиями напоминает струи жидкости, льющиеся из лейки). Некоторые виды аспергилла вызывают аспергиллезы 3)Механизмы транспорта через мембрану: Пассивные(без затраты энергии) а) простая диффузия – вещества транспортируются по направлению меньшей концентрации;  б) облегченная диффузия – происходит при большей концентрации веществ вне клетки при участии транспортных белков - пермеаз;  4)Выделяют несколько типов взаимодействия вируса с клеткой: а) продуктивный тип – активная репродукция с выходом вируса из клетки; б) абортивный тип – образование вирионов внезапно прерывается на какой-то стадии;  в) вирогения – встраивание (интеграция) нуклеиновой кислоты вируса в ДНК клетки-хозяина. Встроенный вирус называется ДНК-провирус. В результате клетка приобретает ряд новых свойств (могут возникнуть аутоимунные хронические заболевания, опухоли).  5)(органо- + греч. tropos поворот, направление) свойство физического, химического или биологического фактора избирательно воздействовать на определенный орган. (этио- + греч. tropos поворот, направление) направленный против причины заболевания, устраняющий или ослабляющий действие фактора, вызвавшего заболевание (о методе лечения)
























Вариант 3 1)Пептидогликан(муреин) (гликан) а)тетрапептид : б) гетерополисахарид -L,D аланин -глутаминовая к-та Гликан образует параллельно расположенные цепи,кот-е связываются цепями-сшивками между тетрапептидами  2) Грибы рода Mucor (головчатая плесень) относятся к зигомицетам. Распространены в почве, воздухе; селятся на хлебе, овощах, навозе и т.п. Мицелий не имеет перегородок, многоядерный, сильно ветвится. При бесполом размножении у мукора образуются вертикальные плодоносящие гифы – спорангиеносцы, на концах которых развиваются шаровидные спорангии в виде головки. Внутри спорангия образуются многочисленные споры (эндоспоры). Половое размножение осуществляется путем образования зигоспор. Представители вызывают мукоромикозы легких, головного мозга и др. органов. 3) Активный перенос осуществляется против градиента концентрации,т.е. из среды с меньшей концентрацией вещества.В перемещении учавствуют специфические пермиазы,процессэнергозатратный. Транслокация-перенос схожийс активным транспортом,но сопровождающийся видоизменением,например,фосфолированием,молекулы переносимого вещества.Такая молекула не способна покинуть клетку.Процесс сопровождается затратой энергии. Осуществление процесса питания-расщепления,видоизменения и дальнейшего усвоения питательных веществ-происходит при участии ферментных систем. 4) На лабораторных животных. Заражают животных (подкожно, внут-римышечно, внутрибрюшино), которые чувствительны к определенным вирусам: хорьков - вирусом гриппа, кроликов - вирусом бешенства, обезьян - вирусом полиомиелита. Индикация (обнаружение) вируса проводится по признакам забо-левания. Недостаток метода - не все вирусы можно культивировать на животных, например, животные невосприимчивы к вирусам человека. 5) Механизм действия сульфаниламидов (сульфонамидов) на микроорганизмы был открыт Вудсом. Сульфаниламиды по своей структуре похожи на парааминобензойную кислоту (ПАБК). ПАБК участвует в синтезе фолиевой кислоты, необходимой для жизнедеятельности бактерий. Бактерии вместо ПАБК включают в свой обмен сульфаниламиды (из-за сходства в структуре). В результате нарушается образование фолиевой кислоты и бактерии погибают.

Вариант 1 1)Основные таксономические категория, используемые при классификации бактерий. Элементарной таксономической единицей является вид. Самый крупный таксон – царство.Весь живой мир подразделяется на 2 империи: доклеточные, к которым принадлежит царство Вирусы, и клеточные, которые подразделяются на 2 надцарства – Эукариоты и Прокариоты. К эукариотам относятся царство Растения, Животные и Грибы, а к прокариотам – царство Бактерии. Бактерии включают 5 типов: Protobacteria, Firmicutes, Actinobacteria, Chlamydia, Spirochates. Для названия видов бактерий используется бинарная или двойная номен-клатура. Первое слово обозначает род, а второе слово – вид. Например: Bacillusanthracis – возбудитель сибирской язвы; 2)Ворсинки (фимбрии и пили). Строение: поверхностные нити, более тонкие и короткие, чем жгутики. Состоят из белка пилина. Ворсинки выполняют различные функции. Ворсинки общего типа покрывают всю поверхность клетки и прикрепляют бактерии к поверхности и к поражаемым клеткам (адгезия), участвуют в питании, водно-солевом обмене. Половые ворсинки или пили участвуют в конъюгации. Их образуют мужские клетки – доноры, которые содержат F-плазмиды. 3)По назначению среды делят на: а) основные (простые) – используют для культивирования многих видов микроорганизмов: ПВ, МПБ, МПА б) специальные (сложные) - используют для тех микроорганизмов, ,иМПА, кровяной МПА, а в) элективные (избирательные) – используют для определенных видов; со-здаются оптимальные условия для этих видов, а другие виды не растут или растут плохо: щелочная ПВ (для холерного вибриона) г) дифференциально-диагностические среды используют для изучения биохимических свойств и дифференцировки (отличия) одного вида микроорга-низмов от другого по его ферментативным свойствам: среды Эндо, Левина, Плоскирева, среды Гисса Среда Эндо состоит из МПА, 1 % лактозы, фуксина и сульфита натрия, ко-торый его обесцвечивает, исходная среда имеет светло-розовый цвет.  Среда Левина состоит из МПА, лактозы, эозина, метиленовой сини и фос-форнокислого натрия, исходная среда имеет красно-фиолетовый цвет. Среда Плоскирева состоит из МПА, лактозы, бриллиантового зеленого, йода, нейтрального красного, солей желчных кислот, минеральных солей. Эти среды используются для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae. Они позволяют отличить патогенные микроорганизмы от кишечной палочки.  4)Размножение – увеличение числа особей. Способы размножения бактерий: а) деление клетки на 2 части (бинарное деление); б) почкование; в) распад ните-видных нитевидных клеток; г) при помощи спор (актиномицеты).  5)Химиотерапевтический индекс - это соотношение минимальной терапевтической дозы к максимальной переносимой дозе). Химиотерапевтический индекс должен быть ниже 1. Этот индекс характеризует степень безвредности препарата.

Вариант2 1.По взаимному расположению клеток кокки подразделяются на:
а) микрококки (р. Micrococcus) – клетки расп. одиночно.
б) диплококки (р. Diplococcus) – располагаются по две клетки.к патогенные: диплококкам относятся пневмококки – возбудители пневмонии; гонококки – возбудители гонореи; менингококки – возбудители менингита;
в) стрептококки (р. Streptococcus) – расп. в виде цепочки клеток.
г) тетракокки (р. Tetracoccus) – расп. по 4 клетки.
д) сарцины (р. Sarcina) – располагаются в виде пакетов (кубиков) клеток.
е) стафилококки (р. Staphylococcus) –беспорядочные скопления в виде виноградной грозди. Также кокки могут иметь овальную или ланцетовидную форму – пневмококки; бобовидную (кофейное зерно) форму – менингококки, гонококки. 2. Жгутики. Строение: тонкие нити, отходящие от ЦПМ. Состоят из фибрилл, покрытых чехлом. Фибриллы состоят из сократительного белка флагеллина. Жгутики прикрепляются к ЦПМ и клеточной стенке специальными дисками (базальное тело). Импульсы в базальном теле вызывают сокращение белка флагеллина и жгутики совершают вращательные движения. Функция: движение клеток.
По количеству и расположению жгутиков выделяют следующие группы бактерий:
- монотрихи – один жгутик на одном из концов клетки (холерный вибрион);
- перитрихи – 20-30 жгутиков по всей клетке (кишечная палочка);
- лофотрихи – пучок (несколько) жгутиков на одном конце клетки (синегнойная палочка);
- амфитрихи – один или пучок жгутиков на противоположных концах клетки (спириллы). 3. Микроорганизмы, способные синтезировать все соединения из глюкозы (как источника углерода) и солей аммония (как источника азота) являются прототрофами.
Если же они не способны синтезировать какое-либо соединение, то являются ауксотрофами (многие патогенные бактерии и бактерии нормальной микрофлоры кишечника человека).
4. 1. Адсорбция 2. Проникновение в клетку 3. Дезинтеграция 4. Синтез ДНК или РНК и вирусных белков 5. Сборка (морфогенез) вириона 6. Выход из клетки 5. По химической структуре антибиотики делят на 8 групп:
1) (- лактамиды – пенициллин, цефалоспорины и др.;
2) макролиды – эритромицин, олеандомицин;
3) аминогликозиды – стрептомицин, канамицин, гентамицин;
4) тетрациклины – окситетрациклин, доксициклин;
5) полипептиды – полимиксины, бацитрины;
6) полиены – нистатин, амфотерицин В;
7) анзимицины – рифампицин;
8) дополнительный класс – левомицетин, линкомицин, гризеофульвин


Вариант 8 1. При/нарушении/синтеза клеточных/стенок/бактерий под влиянием фермента лизоцима или антибиотика пенициллина, которые нарушают синтез пептидогликана, а также под влиянием защитных факторов макроорганизма образуются клетки с измененной, часто шаровидной формой.
Протопласты – это бактерии, полностью лишенные клеточной стенки, а сферопласты – бактерии с частично сохранившейся клеточной стенкой. не способными к делению. После удаления ингибитора синтеза клеточной стенки они могут приобретать клеточную стенку и восстанавливать исходную форму.Бактерии сферопластного и протопластного типов, утратившие способность к синтезу пептидогликана под влиянием антибиотиков или других факторов, но способные к размножению, называются L-формами.
L-формы получены у многих разнообразных бактерий – палочек, кокков и др. Это шаровидные клетки разной величины, проходящие через бактериальные фильтры, осмотически чувствительные, у крупных клеток часто имеются вакуоли.
Нестабильные L-формы сохраняют некоторые элементы клеточной стенки и способны к реверсии в исходный вид. Стабильные L-формы не способны к реверсии. 2. Грибы рода Candida относятся к дейтеромицетам (несовершенным грибам). Их называют дрожжеподобными грибами. Они также делятся почкованием, клетки имеют овальную форму (2-5 мкм). При почковании образуют псевдомицелий: почкующиеся дочерние клетки не отходят от материнской, а вытягиваются в нити. Размножаются при помощи хламидоспор, которые образуются бесполым путем на концах псевдомицелия. Вызывают у человека заболевания – кандидозы – поражения кожи, слизистых оболочек и внутренних органов. Так, C. albicaus – это представитель нормальной микрофлоры человека и вызывает заболевание при нарушении обычных соотношений в микробных ассоциациях (например, при длительной и неправильной антибиотикотерапии). 3.Если в окислительно-восстановительных реакциях и донорами и акцепторами являются органические соединения (т.е. происходит неполное окисление), то такой процесс называется брожением. Он протекает в анаэробных условиях. При брожении чаще всего происходит расщепление глюкозы и других углеводов, но могут быть использованы также аминокислоты, жирные кислоты.
По конечному продукту различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое, маслянокислое, пропионовокислое и другие виды брожения. 4. Перевиваемые – клетки культуры постоянно делятся в условиях in vitro (вне организма), поэтому их можно перевивать непрерывно; их готовят из линий клеток, которые хорошо размножаются в течение многих лет; чаще всего эти культуры получают из опухолевых клеток. Получено около 200 штаммов таких клеток: штамм L (из культуры мышиных фибробластов), штамм HeLa (из карциномы шейки матки), штамм Hep-3 (из лимфоидной карциномы) и т.д.
Перевиваемые линии клеточных культур могут быть загрязнены неизвестными вирусами, в том числе онкогенными, это ограничивает их применение, особенно в производстве вакцин. 5. Комбинированный метод – это сочетание биологического и химического синтеза. Сначала получают антибиотик биологическим путем, а затем химическим путем изменяют структуру молекулы антибиотика для создания нужных свойств. Антибиотики, полученные таким способом, называются полусинтетическими. К ним относятся производные пенициллина – оксациллин, метициллин, ампоциллин. К ним чувствительны те микробы, которые устойчивы к природным антибиотикам.



Вариант 13 1. Актиномицеты (лучистые грибы) – это бактерии, относящиеся к отд. Firmicutes, сем. Actynomycetaceae.
Клетки в виде ветвящихся нитей (гиф) без поперечных перегородок. Гифы переплетаются и образуют мицелий (как грибы). Мицелий бывает субстратный (врастает в питательную среду) и воздушный (на поверхности среды). прокариотами (не имеют оформленного ядра), а по Граму окрашиваются положительно, т.е. клеточная стенка у них как у грам «+» бактерий. Размножение: распад нитей на отдельные клетки (палочки, кокки) и спорами, которые образуются на концах воздушных гиф.
К нокардиоподобным актиномицетам относится группа палочковидных или неправильной формы бактерий, иногда ветвящихся форм ( р. Corynebacterium, р. Mycobacterium, р. Nocardia). 2. а) поливалентные фаги – взаимодействуют с родственными видами бактерий; дизентерийный поливалентный, сальмонеллезный поливалентный групп АВСДЕ б) моновалентные – взаимодействуют с одним определенным видом; брюшнотифозный, дизентерийный, протейный, синегнойный, холерный, стафилококковый, стрептококковый, коли-фаг (кишечной палочки); в) Комбинированные препараты – смеси из фагов против бактерий разных видов. коли-протейный, пиобактериофаг (против стафилококков, стрептококков, клебсиелл, протея, синегнойной и кишечной палочек), интести–бактериофаг (против шигелл, сальмонелл, стафилококков, энтерококков, кишечной и синегнойной палочек, протея). 3. элективные (избирательные) – используют для определенных видов; создаются оптимальные условия для этих видов, а другие виды не растут или растут плохо: щелочная ПВ (для холерного вибриона), среда Сабуро (для грибов), желточно-солевой агар (для стафилококка), сывороточные среды – среда Ру и среда Леффлера (для дифтерийных коринебактерий), среда Китта-Тароцци (для анаэробов), среды с желчью (для тифо-паратифозных бактерий), среды с глицерином (для микобактерий туберкулеза); 4. Сахаролитические свойства – это способность микроорганизмов ферментировать определенные углеводы с образованием органических кислот (молочной, уксусной, муравьиной) и газа (СО2 и Н2). Для многих микроорганизмов они служат таксономическим признаком.
Для определения сахаролитических свойств используются среды: плотные среды Эндо, Левина и Плоскирева, а также жидкие и полужидкие среды Гисса.
Среды Эндо, Левина, Плоскирева содержат лактозу и определенный индикатор. Эти среды позволяют отличить патогенные бактерии от кишечной палочки - E. coli. На одной и той же среде наблюдается различный характер роста разных видов бактерий, т.к. они имеют различные ферменты. Это позволяет отличить один вид от другого.
Среды Гисса содержат лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу и маннит и различные индикаторы. Если бактерии расщепляют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды, а если до кислоты и газа – наблюдают появление газообразных продуктов.
Определенный вид бактерий ферментирует не все, а только некоторые углеводы, поэтому в одних пробирках цвет изменяется, а в других – не изменяется, и получается "пестрый ряд". Каждый вид бактерий характеризуется своим "пестрым рядом". 5. Метод бумажных дисков на питательном агаре. В чашку Петри на питательный агар делают посев микробной взвеси. Избыток жидкости удаляют пипеткой. После впитывания взвеси в агар на засеянную поверхность пинцетом наносят 5-6 разных бумажных дисков с антибиотиками, диски отличаются по цвету. Чашки с дисками ставят в термостат при 37(С на 18-20 часов. Антибиотики из дисков диффундируют в агар. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры судят о ее чувствительности к антибиотикам. Этот метод нельзя применять, если антибиотики плохо диффундируют в агар. Преимущество метода – можно определить чувствительность исследуемой бактериальной культуры сразу к нескольким антибиотикам.

















Билет 9 1. Капсула. Строение: наружный толстый слой слизи определенной формы и упорядоченного строения ( микрокапсула – более тонкое слизистое образование, выявляемое при электронной микроскопии).Состоит из полисахаридов или белков (возбудители сибирской язвы и чумы). Патогенные бактерии образуют капсулу внутри организма хозяина (например, пневмококки, бациллы сибирской язвы). В чистых культурах бактерий капсула образуется реже. Функции: 1) защита от повреждений и высыхания (капсулы гидрофильны и хорошо связывают воду); 2) защита от фагоцитоза патогенных бактерий в макроорганизме (капсула - признак вирулентности этих бактерий).
2. Класс Sporozoa (тип Apicomlexa) представлен только паразитическими формами. Возбудитель малярии – малярийный плазмодий – имеет сложный жизненный цикл, характеризующийся чередованием полового размножения (спорогонии в организме самки комаров рода Anopheles) и бесполого(шизогонии в клетках тканей и эритроцитах человека). 3.Чистая культура микроорганизмов – это популяция клеток (видимый рост) одного вида, выросшая на стерильной питательной среде.
Штаммы – это разные микробные культуры одного вида, выделенные из различных источников или даже из одного и того же источника, но в разное время.. В научно-исследовательской работе, особенно при генетических исследованиях, необходимо получать культуру заведомо из одной клетки. Такая культура называется клоном. 4. полуперевиваемые – клетки этих культур способны размножаться в течение 50 пассажей (перевивок), сохраняя исходный диплоидный набор, типичный для соматических клеток используемых тканей; для их приготовления используют диплоидные клетки человека (фибробласты человеческого эмбриона, диплоидные клетки легких человека). Диплоидные клетки не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых; они нашли широкое применение в вирусологии, особенно в производстве вакцин. 5. По спектру действия антибиотики делят на 4 группы:
1) антибактериальные широкого (тетрациклины, левомицетин) и узкого (полимиксин, бензилпенициллин) спектра действия;
2) противогрибковые широкого (амфотерицин В) и узкого (нистатин) спектра действия;
3) противопротозойные – против простейших ( фумагиллин – антибиотик узкого спектра действия – против амеб);
4) противоопухолевые – препараты, обладающие цитотоксическим действием (рубомицин).
Антибиотики широкого спектра действия – оказывают влияние на все виды бактерий, грибов или простейших.
Антибиотики узкого спектра действия – оказывают влияние на небольшую группу бактерий или других микроорганизмов.







Билет 6 1. Цитоплазма – сложный зернистый коллоидный раствор, заполняющий полость клетки, в которой находятся органеллы. В растворе содержатся белки, ферменты, РНК, ДНК, пигменты и другие органические, а также неорганические вещества. Вода составляет 70-80 % цитоплазмы. Цитоплазматический раствор (цитозоль) это не только место хранения биомолекул, в нем протекают и некоторые важнейшие метаболические процессы (гликолиз, синтез жирных кислот, некоторых аминокислот и др.). Цитоплазма объединяет в одно целое нуклеоид и другие органоиды клетки, обеспечивает их взаимодействие и деятельность клетки как единой целостной живой системы.
2. Грибы рода Penicillium (зеленая плесень, кистевик) относятся к аскомицетам. Мицелий септирован. Плодоносящая гифа имеет вид кисточки, т.к. конидиеносец разветвляется на более мелкие структуры – стеригмы, от которых отходят цепочки конидий. Из некоторых видов пеницилла (P. notatum, P. chrysogenum) был получен первый антибиотик – пенициллин. Имеются патогенные виды, вызывающие заболевания у человека – пенициллинозы.
Большое значение в медицине они имеют в связи со способностью продуцировать антибиотики. 3.основные (простые) – используют для культивирования многих видов микроорганизмов: ПВ, МПБ, МПА; на простых средах хорошо растут прототрофные бактерии; простые среды служат основой для приготовления ряда сложных питательных сред; 4. первичные (первично-трипсинизированные) – клетки этой культуры используются в течение одной генерации, т.е. каждый раз необходимо вновь получать культуру ткани; культуру готовят путем измельчения ткани, разъединения клеток при обработке тканей трипсином, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их размножение; распространяются в виде монослоя на стенках лаб посуды; чаще всего используют эмбриональные ткани (клетки типа фибробластов, почечная ткань эмбриона человека и обезьян, амниона человека, фибробласты куриного эмбриона, эмбриона мыши), а также ткани взрослого человека нормального или опухолевого происхождения;
5. По происхождению антибиотики делят 5 классов:
1) из грибов – пенициллин;
2) из бактерий – субтилин, грамицидин;
3) из актиномицетов – стрептомицин;
4) из тканей животных – лизоцим, интерферон;
5) из растений – хлорофилипт из эвкалипта, аллилчеп – из лука, аллилсат – из чеснока, из лишайников – усниновая кислота.
Антибиотики могут быть получены и путем химического синтеза.


Билет 12 1. Строение клеточной стенки грам"+" бактерий:
1) толстая стенка (15 - 80 нм); 2) несколько слоев пептидогликана (40-90%);
3) есть тейхоевые кислоты;
4) небольшое количество липидов.
В стенке - три слоя: 1) один слой пептидогликана; 2) волнообразная наружная мембрана; она соединена с пептидогликаном молекулами липопротеидов; 3) липополисахаридный слой, он не закрывает полностью наружную мембрану. Липополисахариды состоят из трех частей: а) липид А; б) ядро; в) О-специфическая цепь. Липид А погружен в наружную мембрану (придает токсичность – эндотоксин). О-специфическая цепь определяет антигенность (О-антиген). Грам"+" бактерии: стафилококки, стрептококки, бациллы, клостридии, актиномицеты.
2. Получение:. В бактериальную культуру в жидкой питательной среде вносят маточную взвесь фага. После просветления (лизиса) культуру фильтруют через бактериальные фильтры, и фильтрат вносят в свежую культуру соответствующих бактерий и т.д. После накопления достаточного количества фага лизированную им культуру бактерий вновь фильтруют, и получают препарат фага.
Таким образом, препараты фагов получают путем многократного пассирования через чувствительную бактериальную культуру, а сами препараты фагов – фильтраты бульонных культур лизированных ими бактерий. Применение фагов основано на их строгой специфичности. Они используются для:
а) диагностики инфекционных заболеваний (диагностические препараты): с помощью известного фага можно определить вид или подвид бактериальной культуры;
б) лечения и профилактики заболеваний (лечебно-профилактические препараты). 3. Полужидкие среды Гисса состоят из 0,2-0,5 % мясо-пептонного агара (МПА), 1 % углевода и индикатора ВР (водно-голубая краска и розоловая кислота). Исходный цвет среды - розовато-серый. При расщеплении углевода цвет среды становится голубым, а если образуется газ, наблюдаются разрывы в среде.
Определенный вид бактерий ферментирует не все, а только некоторые углеводы, поэтому в одних пробирках цвет изменяется, а в других – не изменяется, и получается "пестрый ряд". Каждый вид бактерий характеризуется своим "пестрым рядом".
4. Биологические методы (метод Фортнера) основаны на совместном культивировании анаэробов с аэробами (S. aureus, S. marcescens). из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной 1см, получается два агаровых полудиска в одной чашке. На один из них засевают аэроб, а на другой – анаэроб. После посева чашки Петри герметически закрывают пластилином или парафином. Вначале в чашке Петри размножаются аэробы, а когда весь кислород используется, начинают расти анаэробы. 5. Метод «канавки» (предложен А. Флемингом). Берут чашку Петри с питательным агаром. В центре по диаметру вырезают полоску агара шириной 1 см. Затем канавку заполняют агаром, смешанным с антибиотиком. После застывания канавки перпендикулярно делают посев исследуемых культур (4-5). После инкубации в термостате чувствительность определяют по длине зоны задержки роста, чем она больше, тем культура чувствительнее и наоборот. Преимущество метода – можно определить чувствительность сразу нескольких культур к данному антибиотику



Билет 16 1. Хламидии – это бактерии, отд. Gracilicutes, сем. Chlamydiaceae. Имеют различную форму (шаровидную, овоидную, палочковидную),не проходят через бактериальные фильтры, грамотрицательные. Облигатные внутриклеточные паразиты. Не растут на искусственных питательных средах и размножаются только в живых клетках, т.к. у них отсутствует система генерации АТФ. Хламидии – это энергетические паразиты.
В клетке проходят определенный цикл развития. Их морфология и размеры зависят от стадии цикла. Вне клеток хламидии – сферические тельца-элементарными тельцами. Это инфекционная форма хламидий. При попадании в чувствительную клетку они превращаются в крупные ретикулярные тельца-способные к бинарному делению. В результате деления в клетке образуются внутрицитоплазматические включения – микроколонии хламидий, которые находятся в вакуоли и содержат промежуточные формы. После формирования нового поколения внутри вакуоли (через 40-72 час.) хламидии покидают клетку и превращаются в элементарные тельца. Клетка погибает, и элементарные тельца заражают другие чувствительные клетки.У человека вызывают трахому, орнитоз, конъюнктивит, венерический лимфогранулематоз, урогенетальные хламидиозы. 2. специальные (сложные) - используют для тех микроорганизмов, которые не растут на простых средах.Сывороточные среды готовят, добавляя к МПБ или МПА 10-20 % стерильной сыворотки (бычьей, лошадиной и др.). МПА предварительно расплавляют на кипящей водяной бане, а затем остужают до 45-50( С и добавляют сыворотку. Сывороточные среды нельзя подвергать стерилизации, и необходимо контролировать их стерильность (ставят в термостат на 3 дня).
Для приготовления кровяного агара стерильно взятую дефибринированную кровь (кролика, барана и др.) прибавляют к стерильному расплавленному и остуженному до 45( С МПА в количестве 5-20 %, тщательно перемешивают, избегая образования пузырьков, разливают в стерильные чашки Петри или пробирки. Среду также нельзя подвергать стерилизации. 3. Первый этап (1-ый день):
а) из материала (смесь бактерий разных видов) готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют;
б) делают посев материала на чашку Петри с МПА штриховым методом или по методу Дригальского и ставят в термостат при 37(С на 24-48 часов.
Второй этап (2-ой день):
а) наблюдают посевы и проводят описание колоний разных видов (размер, форма, цвет, поверхность, форма края, структура, консистенция);
б) из колоний готовят мазки и окрашивают по Граму (колония должна содержать один вид бактерий);
в) делают пересев разных колоний в разные пробирки со скошенным МПА для накопления чистой культуры; выращивают в термостате при 37(С 24 часа.
Третий этап (3-ий день): проделывают работу по идентификации (определение вида) культуры и проверяют чистоту культуры. Для определения вида изучают морфологические, культуральные, тинкториальные и биохимические свойства:
а) отмечают характер роста выделенной чистой культуры на МПА.
б) готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют;
в) делают посев на среды Гисса и МПБ для изучения сахаролитических и протеолитических свойств чистой культуры; оставляют в термостате при 37( С на 24 часа.
4. К саркодовым (п/тип Sarcodina) относится дизентерийная амеба, паразитирующая в толстом кишечнике. Передвигается при помощи псевдоподий. Половой путь размножения отсутствует.
В жизненном цикле встречаются следующие формы: цисты (четырехядерные), мелкая вегетативная, крупная вегетативная и тканевая формы. . При снижении резистентности организма они внедряются в слизистую оболочку кишечника и превращаются в тканевую форму, питающуюся клетками стенки кишечника и эритроцитами. В результате на слизистой оболочке образуются язвы, и развивается амебная дизентерия (кишечный амебиаз). Вегетативные формы во внешней среде погибают. Цисты устойчивы.
Исследуют в живом виде или применяют сложные методы окраски. По Романовскому-Гимзе цитоплазма окрашивается в синий цвет, а ядро в красный.
5. Метод серийных разведений в МПБ. Готовят основной раствор антибиотика в соответствующем растворителе. Из основного раствора готовят последующие 2-хкратные разведения в бульоне. Берут 12 пробирок по 1 мл МПБ в пробирке. После последовательных разведений антибиотика в МПБ, в каждую пробирку добавляют 0,1 мл взвеси клеток испытуемой бактериальной культуры, содержащей 106-107 клеток. Посевы инкубируют в термостате 18-24 ч. Результаты отмечают по наличию роста. Если есть рост бактерий – среда мутная. Если нет роста бактерий – среда прозрачная. Если среда в пробирке мутная, то в данной концентрации антибиотик не действует, если прозрачная– антибиотик действует. По последней пробирке с прозрачной средой определяют минимальную ингибирующую дозу антибиотика. Одновременно ставят контрольные пробы: 1-ый контроль (контроль бактериальной культуры) - 1 мл МПБ + взвесь бактерий без антибиотика, 2-ой контроль (контроль антибиотика) - 1 мл МПБ + антибиотик, но без взвеси бактерий. В контрольных пробирках должны быть следующие результаты: 1-ый контроль – помутнение среды (есть рост); 2-ой контроль – среда прозрачная (нет роста). Для того, чтобы узнать какое действие оказал антибиотик (бактерицидное или бактериостатическое), петлей делают посевы из пробирок на сектора ПА. Роста нет – бактерицидное действие, рост есть – бактериостатическое действие. Преимущество метода – определение минимальной концентрации антибиотика, которая ингибирует (подавляет) рост бактериальной культуры.


БИЛЕТ 17 1 Микоплазмы – это бактерии, которые относятся к отделу Tenericutes, кл. Mollicutes (мягкокожие), к которому относится один порядок Mycoplasmatales. Это самые мелкие грамотрицательные бактерии, которые могут проходить через бактериальные фильтры. Главная особенность – отсутствие клеточной стенки. Клетки окружены только ЦПМ, поэтому они осмотически чувствительны и не чувствительны к пенициллину. Имеют разнообразную форму. Спор не образуют. В жидкой питательной среде имеют неправильную нитевидную разветвленную форму, а на плотной среде образуют колонии, напоминающие яичницу-глазунью (непрозрачная центральная часть окружена просвечивающимся периферическим кругом). Mycoplasma pneumonia вызывает заболевание у человека по типу острой респираторной инфекции. 2. По консистенции среды делят на: а) жидкие: пептонная вода (ПВ), мясопептонный бульон (МПБ); б) полужидкие: полужидкий мясопептонный агар (МПА) и др.; в) плотные или твердые: МПА, мясопептонный желатин, свернутая сыворотка; г) сыпучие: разваренное пшено, кварцевый песок; д) сухие – гигроскопические порошки, выпускаемые промышленностью; По составу среды делят на: а) естественные – натуральные продукты (яйца, овощи), животные ткани, желчь, сыворотка крови; б) искусственные – среды, приготовленные из различных настоев или отваров с добавлением неорганических солей, углеводов, азотистых веществ; в) синтетические – среды, приготовленные из определенных химических соединений в точно указанных концентрациях. По назначению среды делят на: а) основные (простые) – используют для культивирования многих видов микроорганизмов: ПВ, МПБ, МПА; б) специальные (сложные) - используют для тех микроорганизмов, которые не растут на простых средах: сахарный МПБ, сахарный МПА, сывороточный МПБ и МПА, кровяной МПА, асцитический МПБ; в) элективные (избирательные)- щелочная ПВ (для холерного вибриона), среда Сабуро (для грибов), желточно-солевой агар (для стафилококка) г) дифференциально-диагностические среды используют для изучения биохимических свойств и дифференцировки (отличия) одного вида микроорганизмов от другого по его ферментативным свойствам: среды Эндо, Левина, Плоскирева, среды Гисса. 3. Бактериальные ферменты делят на 6 классов в соответствии с типом катализируемых реакций: - 1 класс – оксидоредуктазы – катализируют окислительно-восстановительные реакции; - 2 класс – трансферазы – катализируют реакции переноса различных функциональных групп (радикалов) и молекулярных остатков от одних соединений к другим; - 3 класс – гидролазы – катализируют реакции расщепления (реже синтеза) веществ на более простые соединения с участием воды (т.е. реакции гидролиза); - 4 класс – лиазы – катализируют реакции отщепления (или присоединения) от субстратов различных химических групп негидролитическим путем; - 5 класс – изомеразы – катализируют реакции изомеризации, т.е. превращения органических веществ в их изомеры; - 6 класс – лигазы – катализируют реакции синтеза сложных соединений из более простых. Ферменты бактерий классифицируют также на экзо- и эндоферменты. Эндоферменты катализируют метаболические процессы внутри клетки. Экзоферменты выделяются бактериями в окружающую среду. Это ферменты: а) пищеварительные ферменты, которые расщепляют сложные питательные вещества до простых веществ; б) защитные ферменты, например, пенициллиназа защищает клеточную стенку от действия антибиотика пенициллина; в) ферменты агрессии – факторы вирулентности патогенных бактерий; - гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту; - дезоксирибонуклеаза – расщепляет ДНК клеток; - фибринолизин – расщепляет коллаген; - плазмокоагулаза – свертывает плазму крови; - нейраминидаза – расщепляет нейраминовую кислоту: - лецитовителлаза – расщепляет лецитин. Ферменты бактерий классифицируются также на конститутивные и индуцибельные. Конститутивные ферменты синтезируются в клетке с постоянной скоростью (непрерывно) вне зависимости от наличия субстратов в питательной среде. Индуцибельные (адаптивные) ферменты синтезируются в клетке только при наличии в среде субстрата данного фермента. Так, у E. coli увеличивается содержание (-галактозидазы при выращивании на среде с лактозой, т.е. происходит индукция синтеза фермента. 4. . Физические методы основаны на физических и механических способах и приемах создания бескислородных условий. Для этого: а) осуществляют посев в глубину плотных питательных сред (кровяной или сахарный агар): посев уколом в высокий столбик агара (анаэробы вырастают в глубине посева); посев в глубину агара в пробирках или трубках Виньяля-Вейона: берут стеклянную трубку (длиной 30 см, d = 3-6 мм), один конец трубки вытягивают в капилляр в виде пастеровской пипетки, а у другого делают перетяжку и вставляют ватную пробку; исследуемый материал засевают в пробирки с расплавленным и охлажденным агаром, а затем засеянный агар насасывают в стерильные трубки Виньяля-Вейона; капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки, и трубки помещают в термостат; б) выращивают анаэробные бактерии в специальных средах, содержащих редуцирующие вещества – глюкозу, муравьинокислый натрий, а также кусочки (около 0,5 г) животных или растительных тканей (печени, селезенки, мозга, картофеля и др.). Универсальной средой является среда Китта-Тароцци - это жидкая питательная среда, состоящая из сахарного бульона (0,5 % глюкозы) и кусочков животных тканей (например, печени, обладающей высокой способностью связывать кислород). Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения в течение 10-30 минут и быстро охлаждают, а после посева заливают слоем стерильного вазелинового масла. Эта среда используется для накопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выделенной чистой культуры. в) выращивают анаэробные микроорганизмы в сосудах, из которых удаляют воздух или заменяют его индифферентным газом (азотом, водородом, СО2); такими сосудами могут быть анаэростат или эксикатор, куда помещают посевы на чашках Петри с кровяным или сахарным агаром. 5. Метод бумажных дисков на питательном агаре. В чашку Петри на питательный агар делают посев микробной взвеси. Избыток жидкости удаляют пипеткой. После впитывания взвеси в агар на засеянную поверхность пинцетом наносят 5-6 разных бумажных дисков с антибиотиками, диски отличаются по цвету. Чашки с дисками ставят в термостат при 37(С на 18-20 часов. Антибиотики из дисков диффундируют в агар. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры судят о ее чувствительности к антибиотикам. Этот метод нельзя применять, если антибиотики плохо диффундируют в агар. Преимущество метода – можно определить чувствительность исследуемой бактериальной культуры сразу к нескольким антибиотикам.






Билет 10 1. Под микроскопом можно наблюдать живые неокрашенные и окрашенные микробы. Но чаще исследуют препараты убитых и окрашенных микробов. Вначале готовят мазок из микробной культуры или патологического материала, высушивают и фиксируют его. Во время фиксации микробные клетки погибают и прикрепляются к стеклу. Используют физические и химические методы фиксации. Физический метод – фиксация мазка над пламенем спиртовки (несколько секунд) мазком вверх. Химические методы – фиксация в этаноле, метаноле, формалине, ацетоне и т.д. Для окраски фиксированных мазков применяют простые и сложные методы окраски. Простые методы – это методы, когда применяют один краситель. Сложные методы – несколько красителей и другие вещества. Окрашенный мазок называется препаратом. 2. Химический состав споры характеризуется незначительным количеством свободной воды (цитоплазма сгущена по сравнению с вегетативной клеткой и содержит воду в связанном состоянии), большим содержанием липидов. Плотная многослойная оболочка обусловливает высокую устойчивость спор к воздействию неблагоприятных физических и химических факторов – высушиванию, воздействию УФ лучей, замораживанию и кипячению, действию спиртов и других химических веществ. Термоустойчивость спор связывают с наличием в оболочке дипиколината кальция. Споры погибают в автоклаве при 120( С в течение 15-20 минут и при действии сухого жара (150-170( С) в течение 1-2 часов.
Функция: перенесение неблагоприятных условий среды. Споры обладают высокой устойчивостью к действию неблагоприятных физических (высушивание, высокая температура, УФ-лучи, замораживание) и химических факторов (спирты, кислоты и др.) Споры окрашивают по методу Ожешко. Сущность метода. Используют сильные воздействия для разрыхления оболочки (протравливание HCl при подогревании), сильные красители (5 % карболовый фуксин Циля). Споры медленно воспринимают краску и с трудом отдают ее обесцвечивающим растворам (5 % H2SO4), т.е. не обесцвечиваются. Споры окрашиваются фуксином в красный цвет, а вегетативные формы окрашиваются метиленовым синим в синий цвет. 3. Эндоферменты катализируют метаболические процессы внутри клетки. Экзоферменты выделяются бактериями в окружающую среду. Эти ферменты: а) участвуют во внеклеточном переваривании; они расщепляют макромолекулы питательных веществ до простых соединений (глюкозы, аминокислот, жирных кислот), которые могут проходить через оболочку клетки и с помощью пермеаз ЦПМ передаваться в цитоплазму клетки для участия в метаболизме; б) выполняют защитную функцию; например, пенициллиназа защищает клеточную стенку от действия антибиотика пенициллина; в) ферменты агрессии – факторы вирулентности патогенных бактерий; они разрушают ткани и клетки, обусловливают распространение в инфицированной ткани микроорганизмов и их токсинов; к ним относятся:
- гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту – составную часть основного вещества соединительной ткани;
- дезоксирибонуклеаза – расщепляет ДНК клеток;
- фибринолизин – расщепляет коллаген;
- плазмокоагулаза – свертывает плазму крови;
- нейраминидаза – расщепляет нейраминовую кислоту;
- лецитовителлаза – расщепляет лецитин.
3. Ферменты бактерий классифицируются также на конститутивные и индуцибельные.
Конститутивные ферменты синтезируются в клетке с постоянной скоростью (непрерывно) вне зависимости от наличия субстратов в питательной среде.
Индуцибельные (адаптивные) ферменты синтезируются в клетке только при наличии в среде субстрата данного фермента. Так, у E. coli увеличивается содержание (-галактозидазы при выращивании на среде с лактозой, т.е. происходит индукция синтеза фермента.
4. Риккетсии и хламидии – бактерии – облигатные внутриклеточные паразиты. размножаются простым делением, содержат оба типа НК (ДНК и РНК) и многие ферменты, необходимые для энергетического и пластического метаболизма. Риккетсии по типу дыхания – аэробные микроорганизмы, активно окисляют глутаминовую кислоту и не расщепляют глюкозу, имеют высокопроницаемую оболочку, что позволяет им получать из клетки-хозяина необходимые ферменты и метаболиты. Хламидии – энергетические паразиты клетки-хозяина, у них отсутствуют энергодающие ферментные системы. Искусственные питательные среды даже самого сложного состава не могут удовлетворить потребности риккетсий и хламидий. Для их размножения необходимы живые метаболизирующие клетки, в отличие от вирусов, эти клетки должны обладать пониженной метаболической активностью. Для выделения и культивирования риккетсий и хламидий применяются: а) тканевые культуры; б) куриные эмбрионы; в) восприимчивые лабораторные животные. Культивирование риккетсий проводят на переживающих тканях в жидкой среде Мейтлендов (раствор Тироде и сыворотка) при 37( С 10-14 дней или на Тироде-сывороточном агаре с добавлением на поверхность измельченной эпителиальной ткани при 37( С 6-10 дней. В тканевых культурах, пораженных риккетсиями, на 3-8-ой день отмечается большое количество коккобациллярных форм, заполняющих целиком цитоплазму или ядро клеток, которые затем гибнут. Хламидии обнаруживают в препаратах клеток, окрашенных по Романовскому-Гимзе, в которых наблюдают различные формы размножающихся организмов. Для выделения риккетсий и хламидий широко используется их культивирование в 8-12-дневном курином эмбрионе; материал вводят в полость желточного мешка или на хорион-аллантоисную оболочку. Зараженные яйца помещают в термостат при 37( С на 6-7 дней. Этот метод используется для массового накопления риккетсий при изготовлении риккетсиозных препаратов (вакцин, диагностических антигенов). Для получения большого количества риккетсий их культивируют в организме чувствительных лабораторных животных – заражают интраназально белых мышей, в легких которых накапливается необходимое количество риккетсий. Риккетсии выращивают по методу Вейгля и Мосинга: платяных вшей заражают взвесью риккетсий путем введения в кишку через анальное отверстие с помощью специальных капилляров. Пшеничнов и Райхер разработали метод культивирования риккетсий на личинках вшей, которых кормят дефибринированной кровью с риккетсиями через мембрану кожи трупа.
5. Биологическая активность антибиотика – это его способность убивать или тормозить рост и развитие микроорганизмов. Активность выражают в единицах действия (ЕД). 1 ЕД - минимальное количество антибиотика, которое задерживает рост стандартного штамма тест-микроба в определенных условиях. Активность антибиотиков определяют:
1) методом серийных разведений;
2) методом диффузии в агар.
Для определения активности антибиотиков в качестве тест - культуры используют непатогенные или условно-патогенные микробы, проявляющие наибольшую чувствительность к данному веществу. Так, для определения активности пенициллина используют S. аureus 209-р.
1. Определение активности антибиотиков методом серийных разведений. Берут ряд пробирок с одинаковым объемом МПБ (1-10 мл). Количество пробирок определяется количеством разведений (степенью разведения) антибиотика. В первую пробирку вносят определенное количество антибиотика, перемешивают, определенный объем раствора переносят из первой пробирки во вторую, перемешивают, из второй пробирки – в третью и т.д. Из последней пробирки такой же объем выливают, чтобы во всех пробирках содержался одинаковых объем жидкости. Контроль – пробирка без антибиотика. Во все пробирки с разведениями антибиотика и контрольную пробирку вносят 0,1 мл взвеси тест культуры (2,5 (106 клеток в 1 мл). На следующий день определяют разведение антибиотика, при котором в пробирке нет роста - среда осталась прозрачной (если нет роста, следовательно антибиотик подействовал). Эта наименьшая концентрация и есть минимальная активная доза антибиотика.
Можно использовать этот метод с применением плотной среды, в том случае, если микробы не растут на жидких средах (для туберкулезных палочек – свернутую сыворотку). Разведения антибиотика в среде готовят следующим образом. Вначале готовят различные разведения антибиотика в растворителе, а затем по 1 мл каждого разведения вносят в пробирку с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45-50(С МПА. Пробирки скашивают для застывания агара, а на поверхность среды петлей засевают тест-культуру.
2. Определение активности антибиотика методом диффузии в агар.
Питательный агар (ПА) по 15 мл разливают в чашки Петри. После застывания и подсушивания агара в каждую чашку наливают по 5 мл ПА, смешанного с тест культурой (20 млн. клеток на 1 мл среды). После застывания второго слоя агара на его поверхность наносят по трафарету 6 цилиндров и делают 6 лунок. В 3 лунки вносят по 0,1 мл испытуемого раствора антибиотика, в другие 3 лунки – по 0,1 мл стандартного раствора. Через 16-18 часов термостатирования при 37(С цилиндры удаляют и измеряют диаметр зон задержки роста. Активность антибиотика устанавливается с помощью расчетной таблицы ГФК или по стандартной кривой на основе диаметра задержки роста.















БИЛЕТ 15
1. Риккетсии – это бактерии, которые относятся к отд. Gracilicutes, сем. Ricketsiaceae. Риккетсии – это мелкие грамотрицательные палочки или кокки. Риккетсии имеют типичное для бактерий строение клетки: клеточную стенку, как у грамотрицательных бактерий с наружной мембраной и большим содержанием липидов; цитоплазму, нуклеоид, рибосомы и т.д. Не имеют жгутиков, спор и капсул (только у некоторых имеется наружный слизеподобный слой). Риккетсии, как и большинство бактерий, размножаются бинарным делением. Риккетсии – это облигатные внутриклеточные паразиты, которые размножаются только в живых клетках. Это свойство сближает их с вирусами. Но в отличие от вирусов их можно наблюдать в обычном световом микроскопе, и они задерживаются бактериальными фильтрами. Риккетсии обычно располагаются в цитоплазме или ядре клетки-хозяина, а также могут находиться и в цитоплазме, и в ядре. Риккетсии плохо окрашиваются простыми анилиновыми красителями, по Граму не красятся. Для их окраски применяют специальные методы. При окраске по методу Романовского-Гимзы риккетсии окрашиваются в розово-красный цвет. При окраске по П.Ф. Здродовскому риккетсии окрашиваются карболовым фуксином в рубиново-красный цвет, а клеточные элементы – в голубой (цитоплазма) или синий (ядро) цвет. Они вызывают заболевания – риккетсиозы, среди которых наибольшее значение имеет эпидемический сыпной тиф. 2. Для изучения разнообразных свойств микроорганизмов в лабораторных условиях их искусственно выращивают, т.е. культивируют. При культивировании микробам должна быть обеспечена возможность расти, размножаться и проявлять свою жизнедеятельность. Для этого необходимо: 1) соответствующая среда; 2) правильно произведенный посев; 3) оптимальные условия: температура, влажность, аэрация (снабжение О2) или создание бескислородных условий. Состав и свойства питательных сред должны соответствовать биологическим свойствам тех микроорганизмов, для выращивания которых они предназначены. Требования к питательным средам: а) среды должны быть питательными. б) среды должны иметь определенное значение Рн в) среды должны обладать буферностью . г) среды должны быть изотоничными. д) среды должны быть стерильными для обеспечения возможности получения чистой культуры; е) среды должные содержать достаточное количество доступной Н2О. ж) среды должны обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, т.е. соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом rH2; для аэробов rH2 – не ниже 10; для анаэробов – не выше 5; з) среды должны быть прозрачными. и) среды должны быть по возможности унифицированными по содержанию основных компонентов Условия культивирования: а) температура: для холодолюбивых (психрофильных) микробов – 6-20( С; для средних (мезофильных) – 34-37( С; для теплолюбивых (термофильных) – более 37( С (до 70-75( С); б) аэрация для аэробов; доступ О2 обеспечивается путем пассивной и активной аэрации. При пассивной аэрации микробы потребляют О2, растворенный в среде, а также находящийся над средой и поступающий в пробирку через ватно-марлевую пробку; при этом культивирование осуществляют на поверхности или в тонком слое среды, куда проникает О2 воздуха, на плотных или жидких средах в сосудах, закрытых ватно-марлевыми пробками или в чашках Петри. При активной аэрации производят постоянное перемешивание культуры, что обеспечивает ее соприкосновение с воздухом; применяют при глубинном культивировании, когда микроорганизмы выращивают в больших объемах среды; чтобы обеспечить достаточное снабжение О2 таких культур, их помещают в специальные качалки; если же объем среды больше 10 и 100 л (в реакторах), то через культуру продувают стерильный воздух; в) создание бескислородных условий для анаэробов; для этого используются физические, химические и биологические методы 3. Репродукцию вирусов в культуре клеток можно обнаружить по следующим признакам: а) цитопатическое действие (ЦПД) – наблюдаются морфологические изменения клеток (вакуолизация цитоплазмы, деструкция митохондрий, округление клеток), при этом часть из них погибает и отслаивается от поверхности стекла, в результате вместо сплошного клеточного монослоя остаются лишь отдельные клеточные островки; ЦПД обнаруживается микроскопически ((8) и служит не только для обнаружения, но и для идентификации вирусов, поскольку характер цитопатических изменений для разных вирусов неодинаков; например, вирус полиомиелита вызывает мелкозернистую деструкцию клеток; аденовирусы вызывают образование скоплений клеток в виде виноградных гроздьев; вирус кори вызывает образование симпластов – многоядерных клеток; б) образование включений в клетках культуры – в ядре или цитоплазме образуются скопления вирусных частиц, имеющие различную форму и размеры (от 0,25 до 25 мкм); они могут быть выявлены в препаратах, приготовленных из ткани и окрашенных по Романовскому-Гимзе или флюорохромами; в) способность к гемадсорбции – инфицированная культура клеток способна адсорбировать эритроциты, что хорошо видно под микроскопом; вирусы выходят на поверхность клеток, в которых они репродуцировались и связывают эритроциты, что позволяет судить о репродукции вирусов даже при отсутствии ЦПД; взвесь эритроцитов добавляют в культуру и после некоторого контакта промывают физиологическим раствором; на поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты в виде разнообразных фигур; г) реакция гемагглютинации – скучивание эритроцитов кур, гусей, морских свинок под влиянием вирусов, содержащих в своей оболочке гемагглютинин (см. выше); их обнаруживают в культуральной жидкости клеточной культуры; д) "цветная" реакция – клетки выращиваются на среде с индикатором (метиленовым красным), который изменяет цвет (с красного на желтый) под влиянием кислых продуктов метаболизма при росте незараженных клеток; при репродукции вируса нарушается нормальный метаболизм, рН не сдвигается и сохраняется первичный (красный) цвет среды. 4. Простейшие составляют подцарство Protozoa, принадлежащее к царству Животные (Animalia). Это одноклеточные эукариотические организмы. 3 типа имеют патогенных представителей. Строение клеток простейших соответствует эукариотам: мембрана (пелликула) – аналог ЦПМ; ядро (одно или несколько) с ядрышком и ядерной оболочкой, эндоплазматическая сеть, митохондрии, лизосомы, многочисленные рибосомы. Некоторые имеют опорные фибриллы. Имеют специальные сократительные и пищеварительные вакуоли. Питаются путем фагоцитоза или образуют специальные структуры. Передвигаются при помощи жгутиков, ресничек, путем образования псевдоподий. Размножение осуществляется простым делением и половым путем. К жгутиконосцам (п/тип Mastigophora) относятся простейшие, имеющие один или несколько жгутиков (органы движения) и ундулирующую мембрану у трипаносом и трихомонад. К ним относятся такие патогенные представители, как: - трипаносомы – возбудители африканского трипаносомоза (сонной болезни) и американского трипаносомоза (болезни Шигаса); - лейшмании – возбудители кожного и висцерального лейшманиозов; - трихомонады – поражают кишечник и мочеполовые пути человека; - лямблии – возбудители лямблиоза (заболевания тонкой кишки). Простейших исследуют в живом виде или применяют сложные методы окраски. По Романовскому-Гимзе цитоплазма окрашивается в синий цвет, а ядро в красный. 5. Химиотерапия – наука, изучающая лечение инфекционных заболеваний с помощью химических веществ. Химиотерапевти
·ческие сре
·дства лекарственные средства, избирательно подавляющие в организме человека развитие и размножение возбудителей инфекционных болезней и инвазий или угнетающие пролиферацию опухолевых клеток либо необратимо повреждающие эти клетки.Действие химических веществ на микробную клетку может быть микробостатическим– задерживающим рост микробов, микробицидным – микробы гибнут, или мутагенным. По механизму действия антибиотики делят на 4 группы: 1) угнетают синтез белков клеточной стенки ((-лактамы – пенициллины, цефалоспорины); 2) нарушают синтез клеточной мембраны (полиены – нистатин; полимиксины) 3) ингибируют синтез белков (тетрациклины, левомицетин, аминогликозиды - – стрептомицин, мономицин, неомицин, канамицин, гентамицин); 4) ингибируют синтез нуклеиновых кислот ( протитвоопухолевые антибиотики: актиномицин подавляет синтез РНК, рубомицин – синтез ДНК). Бактерицидным действием обладают стрептомицин, пенициллины, неомицин, канамицин, полимиксин, цефалоспорины. Бактериостатическим действием обладают тетрациклины, макролиды, левомицетин. Бактериостатические препараты необходимо использовать длительно. Их можно применять после бактерицидных препаратов для долечивания.




Билет 11
1. Микроскоп состоит из механической и оптической части. Механическая часть: штатив, тубус с револьвером, предметный столик, макровинт и микровинт. Оптическая часть: объективы, окуляры, конденсор, зеркало. Для изучения окрашенных препаратов применяется иммерсионная микроскопия при помощи иммерсионного объектива, дающего большие увеличения (х90). При работе с иммерсионным объективом на препарат наносят каплю кедрового масла, т.к. его показатель преломления близок к показателю преломления стекла (n=1,51). 2. Бактериофаги – это вирусы, паразитирующие в бактериальных клетках, бактериофаги проходят через бактериальные мелкопористые фильтры (т.е. являются фильтрующимися агентами) и способны размножаться только в живых молодых бактериальных клетках. Бактериофаги широко распространены в природе и находятся повсеместно там, где встречаются бактерии. У большинство бактериофагов имеют форму головастика или сперматозоида. Они состоят из головки и хвостового отростка. Отросток – стержень с чехлом. Стержень заканчивается шестиугольной пластинкой с короткими шипами, от которых отходят фибриллы. Чехол может сокращаться. Внутри головки находится ДНК. ДНК окружена капсидом. В отростке находятся ферменты – лизоцим и АТФаза. Они участвуют в проникновении фага в клетку. Взаимодействие бактериофага с бактериальной клеткой называется бактериофагией. Стадии взаимодействия фага с клеткой такие же, как и у вирусов: адсорбция, проникновение в клетку, синтез нуклеиновых кислот и белков, морфогенез, выход из клетки. Но имеются особенности. Фаги обладают строгой специфичностью взаимодействия. Определенный фаг взаимодействует с определенным видом или даже подвидом бактерий. По этому название бактериофагов такие же, как видовые или родовые названия тех бактерий, с которыми они взаимодействуют. Например, стафилофаги, дизентерийные фаги и т.д. Различают: а) поливалентные фаги – взаимодействуют с родственными видами бактерий; б) моновалентные – взаимодействуют с одним определенным видом; в) типовые фаги – взаимодействуют с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий. 3. Жидкие среды Гисса состоят из пептонной воды, 1 % углевода и индикатора Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью). В среду опускается поплавок, который при стерилизации заполняется средой. При сбраживании сахара бактериями цвет среды в присутствии индикатора Андреде (интервал рН 7,2-6,5) изменяется от соломенно-желтого (первоначальный цвет) до ярко-розового (красного). Если кроме кислоты происходит также образование газа, он скапливается в поплавке. При отсутствии ферментации цвет среды не изменяется. Поскольку определенный вид бактерий ферментирует не все, а только некоторые углеводы, входящие в состав сред Гисса, то наблюдается довольно пестрая картина. Поэтому набор сред с углеводами и цветным индикатором был назван "пестрым рядом". Каждый вид бактерий характеризуется своим "пестрым рядом". Используют короткий и длинный "пестрый ряд". К первому относятся среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и спиртом маннитом. В длинный "пестрый ряд" наряду с перечисленными углеводами вводят среды с моносахаридами (арабинозой, ксилозой, рамнозой, галактозой и т.д.), полисахаридами (инулином, крахмалом, гликогеном и т.д.) и спиртами (глицерином, дульцитом, инозитом). 4. Химические методы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (аппарате Аристовского) химическими веществами (такими как щелочной пирогаллол или гидросульфит натрия). 5. Микробиологический: антибиотики применять по показаниям, предварительно определять антибиотикограмму. Фармакологический: при назначении антибиотика необходимо определить правильную дозировку препарата, схему лечения, по возможности сочетать различные средства, чтобы предупреждать формирование резистентных форм. Клинический: учитывать общее состояние больных, возраст, пол, состояние иммунной системы, сопутствующие заболевания, наличие беременности. Эпидемиологический: знать, к каким антибиотикам устойчивы микроорганизмы в среде, окружающей больного (отделение, больница, географический регион). Фармацевтический: необходимо учитывать срок годности, условия хранения препарата, так как при длительном и неправильном хранении образуются токсические продукты деградации антибиотика.



Билет 7
1. Спирохеты – это бактерии, относящиеся к отд. Gracilicutes, сем. Spirochaetaceae.
Спирохеты имеют длинные тонкие спирально извитые подвижные клетки. Количество и размеры завитков позволяют дифференцировать спирохет.
Спирохеты имеют сложную структуру. Клетка представляет собой цитоплазматический цилиндр, окруженный тонкой эластичной клеточной стенкой. Между клеточной стенкой и ЦПМ находится аксиальная нить, закрученная вокруг цитоплазматического цилиндра, в результате чего формируется винтообразная форма (первичные завитки). Аксиальная нить состоит из флагеллиновых микрофибрилл. Микрофибриллы обеспечивают передвижение (скольжение) спирохет, придавая клеткам вращательное, сгибательное или поступательное движение. Во время передвижения образуются вторичные завитки.
Патогенными для человека являются три рода спирохет: р. Treponema, р. Borrelia, р. Leptospira. Спирохеты р. Treponema имеют 8-12 неглубоких равномерных завитков. Патогенный представитель – T. pallidum – возбудитель сифилиса. Спирохеты р. Borrelia имеют 3-8 неравномерных завитков. Патогенный представитель – Bor. recurrentis – возбудитель возвратного тифа. Спирохеты р. Leptospira имеют длину 4-8 мкм и очень неглубокие и частые завитки (в виде закрученной веревки), концы изогнуты в виде крючков и имеют пуговчатые утолщения. При движении образуются вторичные завитки в виде букв S или С. Патогенный представитель – L. interrogans – возбудитель инфекционной желтухи. Окрашивают по Романовскому-Гимзе или серебрением. По Романовскому-Гимзе боррелии окрашиваются в фиолетовый цвет, трепонемы – в слабо-розовый, а лептоспиры – в розовый. Спирохеты также изучают в препаратах с тушью (негативный метод), а также в "висячей" или "раздавленной" каплях. Витальные препараты исследуют с помощью темно-польного или фазово-контрастного устройства (четко видны особенности движения и морфологии спирохет).
2. В цитоплазме бактериальной клетки могут быть различные включения: полисахариды (гликоген, гранулеза), поли-(-оксимасляная кислота, полифосфаты (волютин), кристаллы солей щавелевой кислоты, углекислой извести; у серобактерий обнаруживаются капельки серы. Включения накапливаются при избытке питательных веществ в окружающей среде и выполняют роль запасных веществ для питания и энергетических потребностей.Включения имеют отличающийся от цитоплазмы химический состав и окрашиваются в иную окраску. Благодаря разнице в плотности они видны и при микроскопии неокрашенных клеток: жир виден в клетках в виде блестящих ярких капелек.Волютин –полиметафосфат, запасное питательное вещество азотистого обмена. Содержится в виде зерен или капель (в дисперсном состоянии). Волютин встречается в клетках многих бактерий и большинства дрожжей.Зерна волютина окрашиваются темнее цитоплазмы или избирательно принимают иную окраску, чем цитоплазма (явление метахромазии). На этом основана окраска метиленовым синим: зерна волютина – красно-фиолетовые; цитоплазма – голубая.Выявление зерен волютина, расположенных на концах клетки у дифтерийных палочек, используется как важный дифференциально-диагностический признак. Они выявляются при окраске по методу Нейссера. Зерна имеют щелочную реакцию, избирательно воспринимают ацетат синьки и окрашиваются в темно-синий, почти черный цвет, а цитоплазма – в желтый цвет.
Гликоген (полимер глюкозы) и гранулеза (крахмалоподобный полисахарид) являются резервом углеводного питания клетки, энергетическим материалом для его развития. Включения гликогена чаще всего обнаруживаются в клетках дрожжей и спорообразующих бактерий, а гранулеза – в клетках маслянокислых бактерий. "Глыбки" гликогена окрашиваются раствором Люголя в красно-бурый цвет, а гранулеза – серо-синий цвет.
3. дифференциально-диагностические среды используют для изучения биохимических свойств и дифференцировки (отличия) одного вида микроорганизмов от другого по его ферментативным свойствам.
Среда Эндо состоит из МПА, 1 % лактозы, фуксина и сульфита натрия, который его обесцвечивает, исходная среда имеет светло-розовый цвет.
4. Во время роста бактерии потребляют питательные вещества, и если объем питательной среды не изменяется, то наблюдается ее истощение и прекращение роста. Такое культивирование называется периодическим, а культура – периодической. Если производить непрерывную подачу свежей питательной среды и отток такого же объема культуральной жидкости, то такая культура называется непрерывной.
5. Токсическое действие на различные органы и ткани зависит от самого препарата, его свойств, дозы, способа введения. Антибиотики вызывают:
а) поражение печени (тетрациклины);
б) поражение почек (аминогликозиды, тетрациклины, цефалоспорины);
в) поражение слухового нерва (аминогликозиды);
г) угнетение кроветворения (левомицетин);
д) поражение ЦНС (длительное применение пенициллина);
е) нарушение желудочно-кишечного тракта (тетрациклины, противоопухолевые антибиотики).
Для предупреждения токсического действия нужно назначать больному человеку наиболее безвредные для его состояния антибиотики. Например, если у человека больны почки, то нельзя применять препараты, обладающие нефротоксическим действием. Нужно использовать комбинации антибиотиков с другими лекарственными средствами. Это позволит снизить дозу антибиотика, а, следовательно, и его токсичность.




















Билет 14
1. При окраске бактерий по методу Циля-Нильсена используют концентрированные растворы, содержащие протравы (5 % карболовый фуксин Циля) и ведут окраску при подогревании. Карболовая кислота разрыхляет клеточную стенку и повышает ее тинкториальные свойства. Высокая концентрация красителя и нагревание усиливают реакцию его взаимодействия с миколовой кислотой. Затем препарат обесцвечивают 5 % раствором серной кислоты и докрашивают метиленовым синим по Леффлеру. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет (цвет фуксина), т.к. миколовая кислота вступает во взаимодействие с карболовым фуксином. В результате краска фиксируется в микробной клетке, поэтому кислотоустойчивые палочки не обесцвечиваются серной кислотой. Остальные бактерии обесцвечиваются и докрашиваются в синий цвет метиленовым синим. Благодаря этому кислотоустойчивые бактерии могут быть дифференцированы от других.
2. Рост и размножение периодической культуры в жидкой питательной среде имеет несколько фаз, что можно изобразить в виде кривой зависимости логарифма числа клеток от времени.
I фаза – лаг-фаза – период между посевом и началом размножения (4-5 часов); происходит адаптация к условиям размножения и увеличение размеров клеток.
II фаза – фаза логарифмического роста – период интенсивного деления бактерий (5-6 часов); клетки делятся с постоянной скоростью, и логарифм числа клеток линейно зависит от времени; в этот период бактерии обладают высокой химической и биологической активностью, но слабой резистентностью.
III фаза – фаза стационарного роста – период равновесия межу делящимися, находящимися в покое и отмершими клетками; количество живых клеток остается без изменения и составляет максимальный уровень в единице объема (М-концентрация); продолжительность этой фазы выражается в часах и зависит от вида бактерий, особенностей культивирования; М-концентрация также зависит от вида бактерий и условий среды.
IV фаза – фаза гибели – период логарифмического снижения количества живых клеток (от 10 часов до нескольких недель); происходит отмирание клеток с постоянной скоростью.
V фаза – фаза уменьшения скорости отмирания клеток – период, когда оставшиеся в живых клетки переходят в состояние покоя.
3. Три этапа заключаются в следующем:
Первый день. Делают посев (земля, гной) на среду Китта-Тароцци.
Второй день: для получения колоний делают пересев со среды Китта-Тароцци по методу Цейсслера, методу Вейнберга и методу Перетца.
Третий день: колонии пересевают в пробирку с новой средой Китта-Тароцци для накопления чистой культуры; проводят идентификацию чистой культуры анаэробов по морфологическим, культуральным, тинкториальным, биохимическим и антигенным свойствам.
Посев по методу Цейсслера. Каплю (петлю) материала со среды Китта-Тароцци последовательно засевают в три чашки Петри с кровяным агаром. Посевы ставят в анаэростат или аппарат Аристовского, которые ставят в термостат. На следующий день на третьей чашке вырастают отдельные колонии. Делают пересев этих колоний на среду Китта-Тароцци для накопления чистой культуры, изучения ее свойств и точного определения вида микроорганизмов.
Посев по методу Вейнберга. Пастеровской пипеткой переносят материал со среды Китта-Тароцци последовательно в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, погружая пипетку в расплавленный агар до самого дна пробирки. Пробирки быстро охлаждают под холодной водой. Агар застывает и разобщает микробные клетки в глубине агара. Из этих клеток вырастают колонии, которые пересевают в новую среду Китта-Тароцци, накапливают чистую культуру и идентифицируют.
4. Протеолитическая активность – это способность микроорганизмов расщеплять белки с образованием различных продуктов (H2S, NH3, индола и т.д.). Изучение этих свойств применяется для идентификации бактерий Протеолитические свойства бактерий изучают:
а) по способности разжижать желатин: разные виды бактерий имеют разную форму разжижения желатина; S. aureus – в виде воронки; Bac. antracis – в виде опрокинутой елки; Vibrio cholerae – в виде гвоздя и т.д. Разжижают желатин бактерии, имеющие фермент - коллагеназа;
б) по конечным продуктам распада белков после посева на мясо-пептонный бульон (МПБ). Могут быть следующие конечные продукты: индол, Н2S, NH3.
Для обнаружения этих продуктов используют бумажки с индикаторами. Индикатор для индола - щавелевая кислота (бумажка окрашивается в розовый цвет). Для Н2S – ацетат свинца (черный цвет). Для NH3 – лакмусовая бумажка (синий цвет).
Дополнительно изучаются такие свойства, как восстановление нитратов в нитриты, бутандиоловое брожения на среде Кларка, расщепление крахмала и др.
Индол обнаруживают по способу Мореля, для чего используют индикаторную бумажку, смоченную насыщенным раствором щавелевой кислоты, которая розовеет при образовании индола. Для обнаружения аммиака используют лакмусовую бумажку, в присутствии которого она синеет. Для обнаружения H2S используют полоску фильтровальной бумаги, смоченную уксуснокислым свинцом, которая чернеет в присутствии H2S. Образование H2S связано с ферментацией серосодержащих аминокислот, чаще всего цистеина. Образование индола и аммиака связано с ферментацией триптофана, под влиянием фермента триптофаназы.
Микроорганизмы, расщепляющие казеин (белок молока), вызывают пептонизацию молока, которое приобретает вид молочной сыворотки.
5. . Метод серийных разведений в МПБ. Готовят основной раствор антибиотика в соответствующем растворителе. Из основного раствора готовят последующие 2-хкратные разведения в бульоне. Обычно берут 12 пробирок по 1 мл МПБ в пробирке. После последовательных разведений антибиотика в МПБ, в каждую пробирку добавляют 0,1 мл взвеси клеток испытуемой бактериальной культуры, содержащей 106-107 клеток. Посевы инкубируют в термостате 18-24 ч. Результаты отмечают по наличию роста. Если есть рост бактерий – среда мутная. Если нет роста бактерий – среда прозрачная. Если среда в пробирке мутная, то в данной концентрации антибиотик не действует, если прозрачная– антибиотик действует. По последней пробирке с прозрачной средой определяют минимальную ингибирующую дозу антибиотика. Одновременно ставят контрольные пробы: 1-ый контроль (контроль бактериальной культуры) - 1 мл МПБ + взвесь бактерий без антибиотика, 2-ой контроль (контроль антибиотика) - 1 мл МПБ + антибиотик, но без взвеси бактерий. В контрольных пробирках должны быть следующие результаты: 1-ый контроль – помутнение среды (есть рост); 2-ой контроль – среда прозрачная (нет роста). Для того, чтобы узнать какое действие оказал антибиотик (бактерицидное или бактериостатическое), петлей делают посевы из пробирок на сектора ПА. Роста нет – бактерицидное действие, рост есть – бактериостатическое действие. Преимущество метода – определение минимальной концентрации антибиотика, которая ингибирует (подавляет) рост бактериальной культуры.













15

Приложенные файлы

  • doc 18350355
    Размер файла: 228 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий