Izmenenie_aktinovogo_tsitoskeleta_i_dinamiki_ad..


Чтобы посмотреть презентацию с картинками, оформлением и слайдами, скачайте ее файл и откройте в PowerPoint на своем компьютере.
Текстовое содержимое слайдов презентации:

Изменение актинового цитоскелета и динамики адгезионных структур клетки - матрикс при мезенхимально-амебоидном переходе – этапе опухолевой прогрессиипри трансформации Выполнила – Луферова Александра, 4 курс, кафедра клеточной биологии и гистологииНаучный руководитель – Александрова А.Ю., в.н.с.Место выполнения курсовой: Институт Канцерогенеза РОНЦ имени Н.Н. Блохина РАМН, лаборатория механизмов канцерогенеза.МГУ, 2012 Прогрессия злокачественных опухолей сопряжена с изменением морфологии клеток и характера их движенияЭпителио-мезенхимальный переход (ЭМП), потеря связей между клетками, самостоятельная миграцияМезенхимально-амебоидный переход (МАП), скорость движения индивидуальных клеток растет, происходит выход из под контроля многих внешних факторов ( состава внеклеточного матрикса и активности протеолитических ферментов) В отличии от ЭМП, МАП почти не изучен, хотя это важный этап развития опухоли – движение индивидуальных клеток в МАПе становится быстрее и выходит из под контроля многих внешних факторов Так как клетки в результате МАП приобретают ярко выраженную способность к инвазии и метастазированию, исследование изменений цитоскелета, лежащих в основе их движения и молекулярных механизмов, регулирующих МАП, представляется чрезвычайно важным. Как «заставить» клетки сменить состояние (МАП  ЭМП):1. покрыть стекла спец.покрытием (polyHEMA)2. заингибировать ГТФазы3. заингибировать Интегрины4. регулировать/ ингибировать сигнальные пути The plasticity of cytoskeletal dynamics underlying neoplastic cell migration, Victoria Sanz-Moreno and Christopher J Marshall, 2010 Цели работы : Проверить гипотезу о том, что низко_адгезивное покрытие «сталкивает» клетки в МАПИзучить механизм амебоидного движения в МАПе в 2D Основные методы работы: Выращивание трансформированных клеточных культурИммунофлуоресцентное окрашивание клеточных структурРабота на видеомикроскопеРабота на конфокальном микроскопеТрансфекция клеток конструктами, несущими окрашенные белки адгезионных структур для дальнейшего исследования динамики клеточных контактов Задачи: 1. научиться всем методам работы, указанным в методике2. вести культуру фибросаркомы человека HT1080 (на среде DMEM + 10% SCF), чтобы:3. красить адгезионные контакты и цитоскелет – и смотреть их изменения при различном покрытии стекол (разл.конц. polyHEMA);4. получить видеосъемку клеток в МАПе;5. провести трансфекцию клеток конструктами с винкулином или паксиллином – и отснять динамику ФК на этих концентрациях polyHEMA Ожидаемые результаты 1. получение результатов фото- и видеосъемки клеток в МАПе, с четко видимыми ФК и актиновым цитоскелетом2. новых сведений о МАПе и амебоидном движении клеток План презентации:1. титульный лист2. введение 1-2 слайда3. цель работы4. задачи (необходимые для достижения цели, типа культуру ращу чтобы обнаружить, изучить...)5. методика6.конкретные результаты (на сегодня, видимо)7. обсуждение того, что получилось (открыть перспективу для дальнейших исследований)8. общие выводы9. заключение (что тут не знаю;) План работы Этап 1: сажать HT1080 на разные polyHEMA и красить контакты и цитоскелетЭтап 2: выбрать 2 концентрации polyHEMA как контроль и опыт и отснять движение клетокЭтап 3: провести трансфекцию конструктами с винкулином или паксиллином – и отснять динамику ФК на этих концентрациях polyHEMA HT1080Клетки культуры HT1080 (это линия клеток фибросаркомы, созданная из ткани биопсийного материала 35-летнего мужчины, не подвергавшегося радио- или химиотерапии, что важно - значит, на образец не повлияли эти сильные внешние факторы повреждения/ мутагенности, т.е. образцы клеток - относительно естественные). Клетки этой культуры требуется пересевать два раза в неделю - раз в 3-4 дня. Среда DMEM + 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS) + 100 ед./мл смеси антибиотиков пенициллина & стрептомицина. Окрашивание клеток АТ-1:h-vin1 (human vinkullin1) к интегринам! (1:100)АТ-2:Окраска на актин – phalloidin Alexa 488 (1:100), зеленая флуоресценцияОкраска на ФК – Rhodamine (TRITC), (1:100), conjugated AffiniPure Goat…antimouse – IgG(H+L) Докраска ядра (и на микоплазму) – DAPI (1:100) Цели и задачи:1. Научиться применять приведенные выше методы2. Узнать что-то новое об адгезионных комплексах при переходе клеток от мезенхимального к амебоидному состоянию. 3. смоделировать движение клеток в 3D - трансфецированные меченные GFP клетки посадить на агарозу - и залить сверху еще одним слоем агарозы - и снять их движение (цейтраферно).

Приложенные файлы

  • ppt 18241726
    Размер файла: 1 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий