Mikra_vse_otvety

История микробиологии

1. Луи Пастер и его роль в развитии микробиологии. Разработка Пастером научных основ специфической профилактики инфекционных болезней.
Пастер сделал ряд выдающихся от¬крытий. За короткий период с 1857 по 1885 г. он доказал, что брожение (молочнокислое, спиртовое, уксуснокислое) не явля¬ется химическим процессом, а его вызывают микроорганизмы; опроверг теорию самозарождения; открыл явление анаэробио¬за, т.е. возможность жизни микроорганизмов в отсутствие кис¬лорода; заложил основы дезинфекции, асептики и антисепти¬ки; открыл способ предохранения от инфекционных болезней с помощью вакцинации.
Многие открытия Л. Пастера принесли человечеству огром¬ную практическую пользу. Путем прогревания (пастеризации) были побеждены болезни пива и вина, молочнокислых продук¬тов, вызываемые микроорганизмами; для предупреждения гной¬ных осложнений ран введена антисептика; на основе принципов Л. Пастера разработаны многие вакцины для борьбы с инфекционными болезнями.
Однако значение трудов Л. Пастера выходит далеко за рамки только этих практических достижений. Л. Пастер вывел микро¬биологию и иммунологию на принципиально новые позиции, показал роль микроорганизмов в жизни людей, экономике, про¬мышленности, инфекционной патологии, заложил принципы, по которым развиваются микробиология и иммунология и в наше время.
Л. Пастер был, кроме того, выдающимся учителем и органи¬затором науки.
Работы Л. Пастера по вакцинации открыли новый этап в раз¬витии микробиологии, по праву получивший название имму¬нологического.
Принцип аттенуации (ослабления) микроорганизмов с помо¬щью пассажей через восприимчивое животное или при выдерживании микроорганизмов в неблагоприятных условиях (темпе¬ратура, высушивание) позволил Л. Пастеру получить вакцины против бешенства, сибирской язвы, куриной холеры; этот прин¬цип до настоящего времени используется при приготовлении вакцин. Следовательно, Л. Пастер является основоположником научной иммунологии, хотя и до него был известен метод пре¬дупреждения оспы путем заражения людей коровьей оспой, разработанный английским врачом Э. Дженнером. Однако этот метод не был распространен на профилактику других болезней.
Роберт Кох. Физиологический период в развитии микробиологии связан также с именем немецкого ученого Роберта Коха, которому при¬надлежит разработка методов получения чистых культур бактерий, окраски бактерий при микроскопии, микрофотографии. Известна также сформулированная Р. Кохом триада Коха, которой до сих пор пользуются при установлении возбудителя болезни.
2. Роль отечественных ученых в развитии микробиологии, иммунологии и вирусологии (работы Д.Самойловича, Л.С. Ценковского, И.И.Мечникова, Н.Ф. Гамалея, Д. И. Ивановского, И.Г.Савченко, Л. А. Тарасевича, В.Д.Тимакова,
П.Ф.Здродовского и других).
После работ Л. Пастера появилось множество исследований, в которых пытались объяснить причины и механизмы формиро¬вания иммунитета после вакцинации. Выдающуюся роль в этом сыграли работы И. И. Мечникова и П. Эрлиха.
Исследования И. И. Мечни¬кова (18451916) показали, что большую роль в формировании иммунитета играют особые клетки макро- и микрофаги. Эти клетки поглощают и переваривают чужеродные частицы, в том числе бактерии. Исследования И. И. Мечникова по фагоцитозу убедительно доказали, что, помимо гуморального, существует клеточный иммунитет. И. И. Мечников, ближайший помощник и последователь Л. Пастера, заслуженно считается одним из ос¬новоположников иммунологии. Его работы положили начало изу¬чению иммунокомпетентных клеток как морфологической основы иммунной системы, ее единства и биологической сущности.
Д.И.Ивановский (1864 1920) открыл вирусы представителей царства vira. Один из основоположников вирусологии. Впервые открыл проходящий через бактериологические фильтры возбудитель табачной мозаики, названный впоследствии вирусом. Труды по фитопатологии и физиологии растений.
Гамалея - выдающийся микробиолог. Вместе с И. И. Мечниковым в 1886 году организовал в Одессе первую в России бактериологическую станцию. Автор многих работ по микробиологии и иммунологии (по профилактике холеры, чумы, оспы, паразитарных тифов, бешенства). Открыл бактериолизины, возбудители холеры птиц. Обосновал значение дезинсекции для ликвидации сыпного и возвратного тифов. В 1888 году ученый издал книгу "О прививках против сибирской язвы".
Здровский (1890-1976 года), российский микробиолог, иммунолог и эпидемиолог, академик АМН. Исследования по проблемам тропических болезней, бруцеллеза и др. Под руководством Здродовского разработаны методы вакцинации против столбняка, дифтерии и др. инфекций. Автор книги "Учение о риккетсиях и риккетсиозах"
Смородинцев, российский вирусолог и иммунолог. Труды по этиологии и профилактике гриппа, энцефалитов и др. вирусных инфекций. Совместно с М. П. Чумаковым разработал и внедрил вакцину против полиомиелита.
Ермольева, российский микробиолог. Получила первые отечественные образцы антибиотиков - пенициллина, стрептомицина и др.; интерферона.
Жданов, российский вирусолог. Труды по вирусным инфекциям, молекулярной биологии и классификации вирусов, эволюции инфекционных болезней.

3. Приоритет отечественных ученых в открытии патогенных простейших.
П. Ф. Боров¬ский (1863-1932) и Ф. А. Леш (1840-1903) - первооткрывате¬ли патогенных простейших, лейшманий и дизентерийной амебы. И. Г. Савченко установил стрептококковую этиологию скарлати¬ны, первым использовал антитоксическую сыворотку для ее лече¬ния, предложил вакцину против нее, создал Казанскую школу микробиологов в Росши и вместе с И. И. Мечниковым изучал ме¬ханизм фагоцитоза и проблемы специфической профилактики холеры. Д. К. Заболотный (18661929) крупнейший организа-тор борьбы с чумой, установил и доказал ее природную очаго¬вость. Он создал первую самостоятельную кафедру бактериоло¬гии в Петербургском женском медицинском институте в 1898 г.

Большой вклад в развитие общей, технической и сельскохозяйственной микробиологии внесли академики В. Н. Шапошников (1884-1968), Н. Д. Иерусалимский (1901-1967), Б. Л. Исаченко (1871-1947), Н. А. Красильников (1896-1973), В. Л. Омелянский (1867-1928). С. П. Костычев (18771931), Е. И. Мишустин (1901-1983) и их многочисленные ученики. Меди¬цинская микробиология, вирусология и иммунология во многом обязаны исследо¬ваниям таких широко известных отечественных ученых, как Н. Ф. Гамалея (1859 1949), П. Ф. Здродовский (1890-1976), Л. А. Зильбер (1894-1966), В. Д. Тимаков, Е. И. Марциновский (1874-1934), В. М. Жданов (1914-1987), 3. В. Ермольева (1898-1979), А. А. Смородинцев (1901-1989), М. П. Чумаков (1909-1990), П. Н. Кашкин (1902-1991), Б. П. Первушин (1895-1961) и многих других. Труда¬ми отечественных микробиологов, иммунологов и вирусологов внесен крупный вклад в развитие мировой науки, в теорию и практику здравоохранения.
4. И.Г.Савченко и его роль в развитии отечественной микробиологии. Развитие микробиологии в России. Роль медицинской микробиологии в осуществлении профилактического направления здравоохранения.
Савченко Иван Григорьевич (1862-1932), доктор медицинских наук, профессор, заведовал кафедрой микробиологии с 1920 по 1928 гг. Ученик и сподвижник И. И. Мечникова, заслуженный деятель науки РСФСР. Один из организаторов Кубанского мединститута, первый заведующий кафедрой бактериологии и общей патологии. Организовал в 1920 г. на базе городской санбаклаборатории химико-бактериологический институт, которым руководил до 1932 г. Создал школу бактериологов, представители которой стали руководителями кафедр в различных институтах страны.
На основе собственных исследований И. Г. Савченко написал ряд ценных работ об иммунизации против сибирской язвы, против холеры. Занявшись разработкой волнующего вопроса о происхождении злокачественных новообразований, публикует научный тракт "О паразитарном происхождении опухолей" (Киев, 1894), который был одновременно его диссертацией на степень доктора медицины. Экспериментальные данные И. Савченко стали широко известны и вошли в учебные руководства русских и иностранных авторов по общей патологии и патологической анатомии...
В этот период особенное влияние на направление работ И. Г. Савченко оказали, как писал Иван Григорьевич, "гениальные исследования" И. И. Мечникова, его фагоцитарная теория и полемика, разгоревшаяся в ученом мире вокруг нее. К счастью молодого исследователя, нередким гостем в лаборатории профессора В. В. Подвысоцкого был сам Илья Ильич Мечников. Однажды он присутствовал при докладе И. Г. Савченко об иммунитете против сибирской язвы, заинтересовался его опытами и дал им высокую оценку. "Он попросил меня, - вспоминал И. Г. Савченко, - подробно изложить протокол опытов, показать препараты и, познакомившись с работой, порекомендовал напечатать ее в немецком журнале", где раньше была напечатана статья немецкого ученого Чаплевского, направленная против теории фагоцитоза Мечникова... "С этой работы, - продолжал Иван Григорьевич, - началось мое знакомство с гениальным Мечниковым, работать у которого стало моей мечтой, осуществившейся в 1895 году".
И вот И. Г. Савченко в Париже, в Пастеровском институте, в лаборатории И. И. Мечникова.
В институте И. Г. Савченко работал над выяснением физической природы и механизма фагоцитоза. Он установил две фазы: первая - притяжение объекта фагоцитоза к поверхности фагоцита и вторая - погружение его в протоплазму с последующим перевариванием... Эти исследования по изучению фагоцитарной реакции принесли И. Г. Савченко всеобщую известность в ученом мире.
После заграничной командировки И. Г. Савченко, воспринявший лучшие традиции Пастеровского института и вооруженный огромным научным опытом, в конце 1896 года возвратился в Россию, прибыл в Казань, где и началась его плодотворная работа в только что построенном бактериологическом институте. Он возглавлял новый институт и кафедру общей патологии в старейшем Казанском университете (основан в 1804 году).
В 1905 году И. Г. Савченко публикует сообщение об открытии им скарлатинозного токсина, а еще через два года предлагает свой метод борьбы со скарлатиной - лечебной сывороткой антитоксического характера. Любопытно, что лишь спустя два десятилетия по этому же пути пошли американцы Дики, не оспаривая однако приоритета изготовления такой сыворотки у русского ученого и придавая его трудам громадное значение. Этот метод приготовления стрептококковой противоскарлатинозной сыворотки, предложенный Иваном Григорьевичем, пользовался большой известностью в Соединенных Штатах Америки и носил название "способа профессора Савченко..."
В 1919 году ученый переезжает из Казани на Кубань. Через год отдел здравоохранения предлагает ему создать окружной бактериологический институт и ставит перед ним неотложные задачи - срочно изготовить в "широком масштабе" вакцины для армии и населения.
Кубань была охвачена эпидемией тифа и холеры. В 1913 году сооружено, возле Сенного базара, специальное двухэтажное здание для химико-бактериологической лаборатории, где и приступил в 1920 году к созданию чудотворных вакцин знаменитый микробиолог. Были созданы необходимые вакцины и препараты, несущие спасение людям, зараженным холерой и сыпняком.
В 1923 году в Краснодаре была создана малярийная станция, возглавлял которую профессор Иван Григорьевич Савченко. Усилия были направлены на борьбу с малярийным комаром анофелесом. Если в 1923 году в Краснодаре числилось 6171 "малярик", то 1927-м - 1533 человека.
Малярия полностью искоренена на Кубани - и в этом немалая заслуга известного микробиолога И. Г. Савченко.
По своим научным исследованиям, по гигантской работе, проводимой в лабораториях, Кубанский химико-бактериологический институт занимал в то время третье место в СССР. В 1928 году ученому присвоено, почетное звание заслуженного деятеля науки (И. Г. Савченко был первым профессором на Северном Кавказе, получившим почетное звание заслуженного деятеля науки.)
Сорок лет ученый отдал служению науке, просвещению, борьбе с недугами и страданиями человечества. Опубликовал более 100 ценных научных рабо







Морфология микробов

1. Определение понятия о микробах. Понятие о виде микробов. Основные принципы классификации микроорганизмов. Критерии и признаки, используемые при классификации. Нумерическая таксономия.
Микроорганизмы это невидимые простым глазом представители всех царств жизни: эукариоты, прокариоты (эубактерии и архебактерии), виру¬сы и плазмиды. Они занимают низшие ступени эволюции, но играют важ¬ную и разнообразную роль в общей экономике природы, в круговороте ве¬ществ, в патологии человека, животных и растений.
Вид группа или совокупность близких между собой организмов, которые имеют общий ко¬рень происхождения, на данном этапе эволюции характеризуются определен¬ными морфологическими, биохимическими и физиологическими признаками, обособлены отбором от других видов и приспособлены к определенной среде обитания.

Специфические особенности микроорганизмов определили и набор тех призна¬ков и свойств, которые используются для их систематики и классификации.
-Морфологические признаки величина, форма, характер взаиморасполо¬жения.
-Тинкториальные свойства способность окрашиваться различными кра¬сителями. Особенно важным признаком является отношение к окраске по Граму, ко¬торое зависит от структуры и химического состава клеточной стенки бактерий. По этому признаку все бактерии делятся на грамположительные и грамотрицательные Морфологические свойства и отношение к окраске по Граму определяют принад-лежность к крупным таксонам роду, семейству и т. д.
-Культуральные свойства особенности роста бактерий на жидких (образова¬ние пленки, осадок, помутнение) и плотных (форма, размеры, консистенция, края, по¬верхность, прозрачность колоний, образование пигмента и другие свойства) питатель¬ных средах. В микробиологии широко используют такие специфические термины, как «колония», «культура», «штамм», «типы» или «варианты». Под колонией принято по¬нимать видимую простым глазом изолированную структуру, образующуюся в резуль¬тате размножения и накопления бактерий за определенный срок инкубации. Колония образуется обычно из одной родительской клетки или из нескольких идентичных кле¬ток. Поэтому пересевом из изолированной колонии может быть получена чистая куль¬тура возбудителя. Под культурой понимают всю совокупность бактерий, выросших на плотной или жидкой питательной среде. Как колония, так и культура каждого вида ха¬рактеризуются определенными признаками. Основной и главный принцип бактерио¬логии во избежание ошибок изучать свойства только чистых, однородных культур. Каждая выделенная культура данного вида бактерий называется также штаммом, т. е. конкретным образцом данного вида. Штаммы одного и того же вида бактерий, различающиеся по антигенному строению, называют серотипа- ми (сероварами, серовариантами), по чувствительности к фагу фаготипами (фагова- рами), по биохимическим или культуральным признакам биотипами (биоварами) и т. п. Штамм можно считать низшей таксономической единицей бактерий.
-Подвижность бактерий. Различают бактерии подвижные и неподвижные. Подвижные бактерии подразделяют на ползающие, или скользящие, они передвига¬ются за счет волнообразного сокращения клеток; и плавающие бактерии, у которых активная подвижность связана с наличием жгутиков.
-Спорообразование форма и характер расположения споры в клетке.
-Физиологические свойства способы углеродного (аутотрофы, гетеротрофы), азотного (аминоавтотрофы, аминогетеротрофы) питания; тип дыхания: аэро¬бы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы, микроаэрофилы.
-Биохимические свойства способность ферментировать различные угле¬воды, протеолитическая активность, образование индола, сероводорода, наличие уреазы и других ферментов и т. д.
-Чувствительность к специфическим бактериофагам.
-Антигенные свойства. Они зависят от химического состава клеточной стен¬ки и жгутиков бактерий.
-Химический состав клеточных стенок (содержание и состав основных Сахаров и аминокислот).
-Липидный и жирнокислотный состав. Изучение состава жирных кислот проводят с помощью газовой хроматографии, которая обладает высокой раздели¬тельной способностью и чувствительностью.
-Белковые спектры. С помощью различных методов фракционирования, а главным образом двумерного электрофореза в полиакриламидном геле, разделяют сложные смеси рибосомных, мембранных или внутриклеточных белков и получают электрофореграммы, или белковые спектры, соответствующей фракции данного ви¬да бактерий.
В связи с тем, что количество фенотипических признаков, используемых для клас¬сификации микроорганизмов, значительно возросло, в конце 50-х гг. XX в. возникла нумерическая (численная) таксономия.
Ее возникновению способствовало появление более совершенных компьютерных систем, которые позволяют быстро и точно произ¬водить громоздкие математические расчеты. В основе нумерической таксономии ле¬жит принцип сопоставления организмов по возможно большему количеству учитыва¬емых признаков при допущении, что все они для систематики равноценны. Однако принцип равнозначности является основным недостатком этого метода.

2. Специальные методы микроскопии: люминесцентная, фазовоконтрастная, темнопольная. Понятие об электронной микроскопии. Принципы устройства и работы электронного микроскопа.

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно¬вана на явлении фотолюминесценции.
Люминесценция свечение веществ, возникающее после воз¬действия на них каких-либо источников энергии: световых, элек¬тронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесцен¬ция люминесценция объекта под влиянием света. Если осве¬щать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В ре¬зультате возникает цветное изображение объекта.
Темнопольная микроскопия. Микроскопия в темном поле зре¬ния основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоидконденсора, которые заменяют обычный конденсор в био¬логическом микроскопе .
Фазовоконтрастная микроскопия. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным светлое изображение объек¬та на темном фоне.
Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные осветители.
Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способно¬сти светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмик¬роскопических объектов.

Принципиальная оптическая схема электронного микроскопа аналогична схеме светового, в котором все оптические элементы заменены соответствующими элек¬трическими: источник света источником электронов, стеклянные линзы линзами электромагнитными. В электронных микроскопах просвечивающего типа различа¬ют три системы: электронно-оптическую, вакуумную, электропитания. Фотографи¬рование изображений при всех видах исследований проводится на фотопластинки или фотопленку. Источником электронов является электронная пушка, состоящая из V образного вольфрамового термокатода, который при нагревании до 2900 °С при подаче постоянного напряжения до 100 кВ в результате термоэмиссии испуска¬ет свободные электроны, ускоряемые затем электростатическим полем, создавае¬мым между фокусирующим электродом и анодом. Электронный пучок затем форми¬руется с помощью конденсорных линз и направляется на исследуемый объект. Элек¬троны, проходя сквозь объект, за счет его разной толщины и электроноплотности отклоняются под различными углами и попадают в объективную линзу, которая формирует первое полезное увеличение объекта.
После объективной линзы электроны попадают в промежуточную линзу, кото¬рая предназначена для плавного изменения увеличения микроскопа и получения дифракции с участков исследуемого образца. Проекционная линза создает конеч¬ное увеличенное изображение объекта, которое направляется на флуоресцирую¬щий экран. Благодаря взаимодействию быстрых электронов с люминофором экра¬на на нем возникает видимое изображение объекта. После наведения резкости сразу проводят фотографирование. Увеличение конечного изображения на экране определяется как произведение увеличений, даваемых объективной, промежуточ¬ной и проекционной линзами.

4. L-формы бактерий, их особенности и роль в патологии человека. Факторы, способствующие образованию L-форм. Микоплазмы и заболевания, вызываемые ими.

Она может быть обратимой и необратимой. В случае если генетический контроль синтеза клеточной стенки сохраняется, L-формы при благоприятных условиях могут возвращаться в исходную бактериальную форму с восстановлением всех основных биологических свойств, включая патогенность. Если же генетический контроль синтеза клеточной стенки нарушен необратимо, трансформация приоб¬ретает необратимый характер, а такие L-трансформанты по своим морфологичес¬ким, культуральным и иным свойствам становятся неотличимыми от микоплазм. L-трансформация происходит как in vitro, так и in vitro (в организме человека и жи¬вотных). Факторами, индуцирующими ее, являются различные антибиотики, угнетаю¬щие биосинтез клеnочной стенки (пенициллин, цефалоспорины, циклосерин, ванкомицин и т. п.); ферменты (лизоцим, амидаза, эндопептидаза); антимикробные антитела; высокие концентрации некоторых аминокислот, особенно глицина и фенилаланина.
Исключительное значение L-трансформации патогенных бактерий заключается в том, что она является частой причиной перехода острых форм заболеваний в хро¬нические и их обострений. L-трансформацию надо рассматривать не просто как одно из проявлений изменчивости бактерий, а как своеобразную, присущую всем бакте¬риям форму приспособления к неблагоприятным условиям существования (подоб¬но спорообразованию), которая способствует сохранению вида бактерий в природе. Клеточная стенка и ее синтез чувствительны к действию антител и различных химиопрепаратов. Освобождение от нее не лишает бактерии жизнеспособности, но по¬зволяет переживать действие этих неблагоприятных для них факторов, а по их устра¬нении возвращаться в свое исходное состояние.
Клеточная стенка сложный структурный эле¬мент, встречающийся только у эубактерий (кроме микоплазм) и характеризующий¬ся наличием в его составе уникального химического соединения пептидогликана, наделяющего клетку важными иммунобиологигескими свойствами и определяющего ее постоянную форму;

Микоплазмы различные по форме бактериальные клетки (мелкие шары, короткие нити), лишенные клеточной стенки, имеющие небольшие размеры (125-250 нм).
Микоплазмы адсорбируются на поверхности клеток хозяина и внедряются в нее.
Вирусы урогенитальных и респираторных заболеваний могут располагаться на мембранах микоплазм, обитающих в мочеполовой или дыхательной системах.
Классификация микоплазм
Микоплазмы относятся к семейству Mycoplasmataceal. Это семейство разделяется на 2 рода:
Род Mycoplasma включает около 100 видов.
Основные 4 вида:
Mycoplasma hominis
Mycoplasma genitalium
Mycoplasma species
Mycoplasma pneumonia
Род Ureaplasma (2 вида)
ureaplasma urealiticum
ureaplasma parvum
Ныне известно 6 видов микоплазм, вызывающих болезни человека: Mycoplasma pneumonia, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Mycoplasma species, Ureaplasma urealticum, Mycoplasma incognita(выделена у больных СПИДом).
В настоящее время количество заболеваний, вызванных микоплазмами, существенно увеличилось.
Микоплазма гениталиум (Mycoplasmagenitalium) обладает наиболее выраженным патогенным потенциалом.
С помощью специальной структуры (органеллы) клетки микоплазмы прикрепляются к эритроцитам и другим клеткам.
Микоплазма хоминис (Mycoplasmahominis) является менее патогенной, но встречается значительно чаще при инфекционных процессах мочеполовой системы. Mycoplasmahominis значительно чаще обнаруживается при воспалительных процессах у женщин, чем у мужчин.
Микоплазма пневмония (Mycoplasmapneumoniae) возбудитель первичной атипичной пневмонии человека служит причиной внутриутробной инфекции.
Микоплазмозы классифицируются по локализации (микоплазменный уретрит, простатит, цервицит, эндометрит, сальпингит и т.д.)
Мочеполовые микоплазменные инфекции могут быть острыми, хроническими и бессимптомными.
Обычно малосимптомные вульвовагиниты, уретриты, цервициты переходят в хроническую форму мочеполового микоплазмоза (например, воспалительные процессы в маточных трубах, яичниках, негонококковые уретриты).
Больные жалуются на: зуд в области мочеполовых органов, незначительные слизистые выделения, которые могут и исчезать, а спустя некоторое время вновь появляться и усиливаться.
Острый урогенитальный микоплазмоз наблюдается редко. При правильном лечении пациент полностью выздоравливает.
У мужчин: микоплазмозы вызывают поражение мочеиспускательного канала, предстательной железы, семенных пузырьков, придатков яичек, мочевого пузыря, почек и мочевыводящих путей.
При мужском бесплодии целесообразно исследовать сперму микробиологическим методом (бактериальный посев) на микоплазму и уреаплазму.
У женщин: женщины наиболее часто являются бессимптомными носителями микоплазм.
Под воздействием стрессовых факторов скрытая инфекция может перейти в хроническую или острую инфекцию.


5. Строение бактериальной клетки. Цитоплазматическая мембрана, ее структура и основные функции. Роль мембраны в процессах мобилизации энергии, механизм энергизации мембраны.
Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы с включениями и яд¬ра, называемого нуклеоидом. Имеются дополни¬тельные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики, пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях спо¬собны образовывать споры.
ЦМ содержит фосфолипиды, образующие два слоя, белки и углеводы. Молекулы фосфолипидов асимметричны: головки, несущие электрический заряд, гидрофиль¬ны; хвостики нейтральны и гидрофобны. Фосфолипиды упакованы в мембране следующим образом: их полярные гидрофильные головки обращены наружу и обра¬зуют два слоя ЦМ внутренний и внешний, а неполярные гидрофобные хвостики скрыты в толще мембраны. На электронограммах ЦМ имеет вид трехслойной струк¬туры, состоящей из двух параллельных темных слоев и разделяющего их светлого слоя. Этот слой более проницаем для электронов, чем слои, состоящие из полярных концов фосфолипидов, ассоциированных с белками. Специфичность функций ЦМ во многом зависит от набора содержащихся в них белков.
Структура, состоящая из клеточной стенки и ЦМ, получила название оболочки клетки.

Цитоплазматическая мембрана (ЦМ) является исключительно полифункцио¬нальной структурой.
1. ЦМ воспринимает всю химическую информацию, поступающую в клетку из внешней среды.
2. Она является основным осмотическим барьером, благодаря которому внутри клетки поддерживается определенное осмотическое давление.
3. ЦМ совместно с клеточной стенкой участвует в регуляции роста и клеточного деления бактерий.
4. ЦМ участвует в регуляции процессов репликации и сегрегации хромосом и плазмид (они связаны с ее рецепторами).
5. В ЦМ содержится значительное количество ферментов, в том числе системы переноса электронов (ЦМ место генерации энергии у бактерий).
6. С ЦМ связаны жгутики и аппарат регуляции их движения.
7. ЦМ участвует в процессах транспорта (в том числе активного) питательных ве¬ществ в клетку и продуктов жизнедеятельности, включая ферменты и экзотоксины, из клетки в окружающую среду. В ней содержатся белки, участвующие в облегчен¬ной диффузии и активном транспорте.
8. ЦМ участвует в синтезе компонентов клеточной стенки и образовании мезосом (мезосомы возникают в результате инвагинации участка ЦМ в цитоплазму, они открыты в периплазматическое пространство).
9. ЦМ играет важную роль в компартментализации, т. е. в разделении на «отсеки» рибосом и их стабилизации.


6. Рибосомный аппарат бактериальной клетки, его функции. Структура рибосмы. Содержание рибосом в клетке. Сущность процессов транскрипции и трансляции.
Основным компонентом белоксинтезирующей системы является рибосома. Она объединяет все компоненты в единый комплекс. Рибосомы «святая святых» клетки.
так как именно на них совершается самое удивительное таинство живой материи биологический синтез белка. Информация, содержащаяся в геноме, расшифровыва¬ется и материализуется в виде белков на рибосомах. Без них проявление жизнедея¬тельности невозможно.
Вирусы и плазмиды потому и являются облигатными внутриклеточными парази¬тами, что у них отсутствуют собственные рибосомы, и для реализации генетической информации (т. е. для проявления своей жизнедеятельности) они используют рибосомный аппарат клетки-хозяина.
Процесс синтеза белка складывается из двух основных этапов: транскрипции и трансляции.
Транскрипция- или пере¬писывания информации с ДНК-гена на мРНК-ген. Транскрипция осуществляется с помощью ДНК-зависимой РНК-полимеразы.
Трансляция процесс расшифровки генетического кода в мРНК и овеществле¬ние его в виде полипептидной цепи, последовательность расположения аминокис¬лот в которой определяется порядком расположения кодонов в данной мРНК. Трансляция, таким образом, это процесс собственно биосинтеза белка на рибосо¬мах. Он состоит из следующих основных этапов:
1. Инициации (начала) трансляции.
2. Элонгации, или удлинения полипептидной цепи (собственно трансляция).
3. Терминации (окончания) трансляции.
4. Модификации полипептидной цепи.
Каждый из этих этапов представляет собой сложный многоступенчатый процесс и находится под жестким контролем, осуществляемым прежде всего компонентами самой белоксинтезирующей системы.


7. Споры бактерий. Образование и структура споры, ее прорастание. Генетический контроль спорообразования.
Некоторые роды бактерий (Васilus, Сlоstridium, Sporosarcina) при неблагоприят¬ных для их существования условиях образуют защитные формы эндоспоры. Споры представляют собой своеобразные покоящиеся клетки; у них чрезвычайно низкая метаболическая активность, но они обладают высокой устойчивостью к высушива¬нию, действию повышенной температуры и различных химических веществ. Высо¬кую резистентность спор к действию указанных факторов связывают с присутствием в оболочке большого количества кальциевой соли дипиколиновой кислоты. Споры сильно преломляют свет, поэтому они хорошо заметны в неокрашенных препаратах.
В процессе спорообразования (споруляции) бактериальная клетка подвергается сложной перестройке. Вначале на одном из ее полюсов происходит конден¬сация нуклеоида и отделение его за счет образования септы. Затем ЦМ начинает об¬растать образовавшийся протопласт споры и возникает складка, состоящая из двух слоев ЦМ, позднее они сливаются, в результате образовавшаяся предспора оказыва¬ется окруженной двойной оболочкой. На следующей стадии между двумя мембрана¬ми, покрывающими предспору, формируется толстый слой кортекса (коры). Самый внутренний слой его представляет собой зародышевую стенку (из него образуется клеточная стенка прорастающей вегетативной клетки). По мере созревания споры обе ее мембраны участвуют в образовании специальных слоев споры. Таким обра¬зом между обращенными друг к другу мембранами образуются зародышевая стенка, кортекс, а также расположенные снаружи от мембран наружная и внутренняя обо¬лочки и экзоспорий. Сформировавшаяся эндоспора состоит из протопласта с нуклеоидом, стенки споры, кортекса, оболочки и экзоспория.
-Протопласт споры (ядро) содержит ЦМ, цитоплазму, хромосому, все компо¬ненты белоксинтезирующей системы и анаэробной энергообразующей системы.
-Стенка споры непосредственно окружает внутреннюю мембрану ее и представ¬лена пептидогликаном, из которого формируется клеточная стенка прорастающей клетки.
-Кортекс самый толстый слой оболочки споры. Он состоит из пептидогликана, содержащего мало поперечных сшивок и поэтому очень чувствительного к лизоциму. Разрушение кортекса лизоцимом играет пусковую роль в процессе прорастания споры.
-Оболочка споры построена из кератиноподобного белка. Плохая проницаемость ее определяет высокую устойчивость спор к действию различных химических веществ.
-Экзоспорий липопротеиновая оболочка, содержащая немного углеводов. После завершения спорообразования вегетативная часть клетки отмирает, спора высвобождается и длительное время сохраняется в окружающей среде, до тех пор, пока не возникнут условия, благоприятные для ее прорастания.

Генетигеский контроль спорообразования
Процесс спорообразования контролируется более чем 40 оперонами, которые представляют собой как бы дополнительный геном у спорообразующих бактерий. В составе этого генома насчитывается более 60 генов. Инициация споруляции связа¬на с геном sроО, мутации в котором делают невозможным образование споры с са¬мых начальных стадий. Транскрипция гена sроО запускает последовательную тран¬скрипцию всех оперонов спорового генома. Спорообразующие бактерии обладают механизмами, с помощью которых они распозна¬ют определенные изменения в окружающей среде, например, уменьшение содержа¬ния источников энергии, некоторых аминокислот и оснований. В ответ на это в клетке происходят метаболические изменения, которые и запускают споруляцию.
Прорастание споры происходит после получения соответствующего химического сигнала. Различные виды спорообразующих бактерий располагают рецепторами, распознающими наличие в среде источников энергии, L-аланина, аденозина и дру¬гих веществ. Связывание с такими эффекторами активирует содержащийся в споре автолизин (лизоцим), который быстро разрушает пептидогликан кортекса.
Прорастание спор включает три стадии: активацию, начальную стадию и ста¬дию роста.

Физиология бактерий

1. Размножение микробов. Механизмы деления бактериальной клетки. Методы культивирования микробов: стационарный, глубинный с аэрацией, проточный. Периодические, непрерывные и синхронные культуры. Фазы роста периодической культуры.

В условиях скоординированного роста деление клетки происходит, когда она удваивает свою биомассу, строго посередине. Про¬цесс деления клетки сопряжен с процессом сегрегации (распределения) дочерних хромосом и дочерних плазмид в дочерние клетки. У бактерий обнаружены белки- гомологи белков РаrА и РаrВ (они осуществляют равномерное распределение плазмид между дочерними клетками) и белок МuсВ. Вместе с белками мембраны они образуют комплекс, растаскивающий хромосомы в дочерние клетки перед образованием межклеточной перегородки. Связь между вегетативной репликаци¬ей хромосомы и клеточным делением включает три следующих последователь¬ных события:
1. подготовку к инициации репликации;
2. цикл репликации хромосомы (и плазмиды);
3. интервал времени между завершением репликации хромосомы и клеточным делением. Клеточный цикл бактерий можно выразить следующей формулой:
Т = С + Э,
где Т время удвоения; С время цикла репликации; Б время между заверше¬нием цикла репликации и клеточным делением.
При благоприятных условиях роста Т для Е. соli и многих других бактерий со¬ставляет около 30 мин. Деление бактериальной клетки находится также под строгим генетическим контролем, нарушение которого приводит и к нарушению механизма клеточного деления.
Деление бактерий наступает в результате формирования межклеточной перего¬родки, которое происходит следующим образом. В том участке ЦМ, с которым свя¬зана с помощью особого рецептора молекула ДНК (хромосома, плазмида), происходят события, инициирующие процесс репликации, в результате которого вновь образу¬ющаяся дочерняя молекула ДНК прикрепляется также к рецептору на ЦМ. Область последней между двумя рецепторами, к одному из которых прикреплена родительская, а к другому дочерняя ДНК, начинает удлиняться, в результате этого расстояние между ними увеличивается в течение времени С. По завершении процесса репликации строго по экватору между отделившимися друг от друга хро¬мосомами начинает формироваться межклеточная перегородка путем встречной инвагинации (врастания навстречу друг к другу) ЦМ и связанной с ней области кле¬точной стенки.
В результате слияния инвагинирующих участков ЦМ и КС образуется межклеточная перегородка, и родительская клетка разделяется на две дочерние клетки равной длины. Функцию аппарата митоза у бактерий выполняет ЦМ путем своего удлинения, которое раздвигает хромосомы (и плазмиды) таким образом, что они оказываются по ту и дру¬гую стороны формирующейся межклеточной перегородки в равных соотношениях.

Для выращивания бактерий используют следующие способы их культивирования: стационарный, глубинный с аэрацией и с использованием проточных питательных сред.
1. Стационарный способ: питательные среды сохраняются постоянными, с ними никаких дополнительных манипуляций не производят. Однако при таком способе культивирования в жидких питательных средах, где преобладают анаэробные энер¬гетические процессы, выход биомассы незначителен. Поэтому в связи с развитием микробиологической промышленности были разработаны принципиально новые способы культивирования, позволяющие получать гораздо больший выход биомас¬сы или биологически активных соединений. К их числу относятся метод глубинно¬го культивирования с аэрацией и метод использования проточных сред.
2. Метод глубинного культивирования с аэрацией. Для выращивания с помо¬щью этого способа применяют специальные устройства реакторы. Они представ¬ляют собой герметические котлы (приспособленные автоклавы), в которые залива¬ется жидкая питательная среда. Реакторы снабжены автоматическими приспособле¬ниями, позволяющими поддерживать постоянную температуру, оптимальные рН и гН2, дозированное поступление необходимых дополнительных питательных ве¬ществ. Однако главная особенность таких реакторов в том, что они постоянно про¬дуваются стерильным воздухом и в них установлены мешалки, с помощью которых среда постоянно перемешивается. Поэтому во всей питательной среде создается та¬кая концентрация свободного кислорода, при которой энергетические процессы происходят в аэробных условиях, т. е. достигается максимальное использование энергии, заключенной в глюкозе, а следовательно, и максимальный выход биомас¬сы. Для примера: выход биомассы при стационарном методе культивирования Е. соli в МПБ через 1820 ч составляет 12 млрд клеток на 1 мл среды, а при глубинном методе через 12-14 ч - 50-60 млрд клеток/мл среды.
3. Использование проточных питательных сред позволяет создать условия, при которых клетки имеют возможность длительное время находиться в определенной фазе роста (экспоненциальной) при постоянной концентрации питательных ве¬ществ и в одних и тех же условиях, обеспечивающих непрерывный рост культуры. Методы получения непрерывных культур основаны на том, что в аппарат, где растут клетки, непрерывно добавляют свежую питательную среду и одновременно из него удаляют соответствующее количество бактерий.
Таким образом, в соответствии со способами культивирования различают:
1) периодические (при ста¬ционарном и глубинном методах культивирования) и
2) непрерывные (при проточном способе) культуры микроорганизмов.
3) синхронные культуры, в которых все клетки одновременно (синхронно) делятся. Однако такая синхронность сохраняется, как правило, в течение 23 циклов деления, а затем она нарушается. Синхронные культуры используют в ос¬новном для изучения тех или иных стадий клеточного цикла бактерий и роли отдель¬ных генов (и их продуктов) в их осуществлении.

2. Искусственные питательные среды, применяемые для выращивания микробов. Требования, предъявляемые к питательным средам. Дифференциально-диагностические среды, принципы их конструирования. Состав сред Эндо и Плоскирева.

Они могут выть жидкими, твердыми (лучше называть их плотными) или полужидкими. Жидкие cреды готовят на основе водных растворов каких-либо веществ, чаще всего мясной воды, различных гидролизатов, иногда жидких естественных продуктов (молока, крови и др.). Для получения плотных сред к ним добавляют или агар, или желатин, или силикагель в соответствующих концентрациях. По происхождению среды де¬лят на естественные (кровяные, молочные, картофельные, яичные) и искусственные, получившие особенно широкое распространение.
Питательные сре¬ды должны обязательно отвечать трем основным требованиям:
1. они должны содержать в достаточном количестве все необходимые питатель¬ные вещества (источники энергии, углерода, азота), соли и ростовые факторы;
2. должны иметь оптимальную для роста данного вида бактерий рН;
3. должны иметь достаточную влажность (при их усыхании повышается концент¬рация питательных веществ, особенно солей, до уровней, тормозящих рост бактерий).
-Дифференциально-диагностические среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям. К ним относятся среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса и многие др.
-Среда Эндо. Состоит из МПА с добавлением 1% лактозы и обесцвеченного сульфитом натрия основного фуксина (индикатор). Среда Эндо имеет слаборозовый цвет. Используется в диагностике кишечных инфекций для дифференциации бактерий, разлагающих лактозу с образованием кислых продуктов, от бактерий, не обладающих этой способностью.
-Среда Плоскирева.
В состав среды входят: 53,6% сухого питательного агара с желчными солями, 14,4% лимонно¬кислого натрия, 11% гипосульфита, 12% лактозы, 3,7% фосфорнокислого натрия, 0,030,06% нейтрального красного, 0,002 бриллиантового зеленого, 1,2% соды кальцинированной, 0,04% йода, 3,7% NaCl.

3. Питание микробов. Типы питания. Источники углерода, азота и энергии. Механизм питания бактерий, диффузия, облегченная диффузия, активный транспорт. Пермеазные системы, их состав, этапы активного транспорта.
Большинство бактерий живет в среде, мало подходящей для того, чтобы поддер¬живать строгое соотношение воды, солей и органических веществ, без которого не¬возможна жизнь. Это обусловливает необходимость постоянного и тщательного ре-гулирования обмена различными веществами, который происходит между клеткой и внешней средой и контролируется клеточной мембраной. Она проницаема для многих веществ, поток их идет в обоих направлениях (из клетки и в клетку), но структура мембраны такова, что она обладает избирательной и неравномерной про¬ницаемостью, определяющей механизмы питания бактерий.

Типы питания.
По способу углеродного питания бактерии делят на аутотрофы и гетеротрофы.
-Аутотрофы организмы, которые полно¬стью удовлетворяют свои потребности в углероде за счет С02.
-Гетеротрофы организмы, которые не могут удовлетворить свои потребности в углероде только за счет С02, а требуют для питания готовых органических соединений. В свою очередь, гетеротрофов подразделяют на сапрофитов; и паразитов . Для превращения С02 в органические соединения требуется энергия. Существует два источника этой энергии - фотосинтез и хемосинтез.
-Фотосинтез это синтез за счет энергии солнечного света.
-Хемотаксис грамотрицательные бактерии используют для своего роста энергию хемо¬синтеза, т. е. энергию, получаемую за счет окисления неорганических соединений.

Питательные вещества из внешней среды поступают в бактериальную клетку с помощью трех основных механизмов: пассивной диффузии, облегченной диффу¬зии и активного транспорта.
1. Пассивная диффузия осуществляется за счет различного содержания пита¬тельных веществ в среде и в клетке и происходит в направлении от большей концен¬трации к меньшей, т. е. по градиенту концентрации. Для пассивной диффузии характерно отсутствие субстратной специфично¬сти, и она не требует затраты энергии.
2. Облегченная диффузия характеризуется выраженной субстратной специфично¬стью и протекает при обязательном участии специфических белков, локализованных в мембране. Эти белки, получившие название пермеаз, обладают субстратной специфичностью. Они распознают и связывают молеку¬лу субстрата на внешней стороне мембраны и обеспечивают каким-то образом ее пере¬нос через мембрану. Главное свойство пермеаз - способность проходить через мембрану как с присоединенной молекулой субстрата, так и без нее. Однако облегченная диффузия происходит только по градиенту концентрации, но не против него, поэтому она не требует затраты энергии. Пермеазы, присоединившись к субстрату, повышают его способность проникать через мембрану. Облегченная диффузия протекает со значительно более высокой скоростью, чем пас¬сивная.
3. Активный транспорт. С помощью механизмов активного транспорта растворен¬ные вещества могут поступать в клетку против градиента концентрации, поэтому ак¬тивный транспорт требует от клетки затраты энергии. С его помощью они обеспечивают такие концентрации растворенных питательных веществ внутри клетки, которые могут во много раз превышать их концентрации во внешней среде и обеспечивают им высокие скорости метаболизма даже при низкой концентрации химических веществ в окружающей сре¬де.

4. Дыхание микробов. Аэробы и анаэробы. Получение энергии в аэробных и анаэробных условиях. Облигатные и факультативные анаэробы. Причины высокой чувствительности анаэробов к молекулярному кислороду. Методы культивирования анаэробов.
По типу дыхания подразделяются на следующие четыре группы:
1. строгие аэробы (размножаются только в присутствии кислорода);
2. микроаэрофилы (нуждаются в уменьшенной концентрации свободного кисло¬рода);
3. факультативные анаэробы (могут потреблять глюкозу и размножаться как в аэробных, так и в анаэробных условиях);
4. строгие анаэробы (размножаются только в бескислородных условиях, т. е. не используют 02 в качестве конечного акцептора электронов).
--Строгие анаэробы. Синтез АТФ при потреб¬лении глюкозы в анаэробных условиях (гликолиз) происходит за счет фосфорили- рования субстрата. Из одной молекулы глюкозы в этих условиях образуются две мо-лекулы молочной кислоты, а выход энергии составляет всего 20 ккал (синтезируются две молекулы АТФ) на моль глюкозы, т. е. во много раз меньше, чем при полном окислении этого основного носителя энергии. Хотя анаэробы также мобилизуют энергию в результате окислительно-восстановительных процессов, т. е. в результате переноса водорода (электронов), но кислород для них не служит конечным акцепто¬ром электронов. Более того, молекулярный кислород оказывает на них токсическое действие, причины которого следующие:
1. у анаэробных бактерий кислород угнетает анаэробные энергообразующие ре¬акции (эффект Пастера);
2. у строгих анаэробов отсутствует фермент каталаза, поэтому накапливающая¬ся в присутствии кислорода Н202 оказывает на них бактерицидное действие;
3. у строгих анаэробов отсутствует система регуляции окислительно-восста¬новительного потенциала (редокс-потенциала)
--Различают облигатные (строгие, обязательные) и факультативные (необязательные) анаэробы. Облигатные анаэробы погибают при наличии свободного кислорода в окружающей среде. Факультативные анаэробы способны существовать и размножаться как в кислородной, так и в бескислородной среде. К факультативным анаэробам относятся кишечная палочка, иерсинии, стафилококки, стрептококки и шигеллы и др.
--Культивирование анаэробов. В связи с высокой чув¬ствительностью строгих анаэробов к молекулярному кислороду для их культиви¬рования с помощью различных способов создаются бескислородные условия. С этой целью используются механические, физические, химические и биологиче¬ские способы удаления кислорода: посевы в глубокие столбики агара; кипячение (регенерация) жидкой питательной среды (КиттаТароцци), содержащей глюко¬зу и кусочки печени (для связывания растворенного кислорода), и заливка ее сте¬рильным вазелиновым маслом; добавление в атмосферу роста химических ве¬ществ, поглощающих кислород (например, щелочного пирогаллола); совместное культивирование строгих аэробов и анаэробов на кровяном агаре с глюкозой в за- парафинированной чашке Петри (вначале растут строгие аэробы, а после сниже¬ния содержания кислорода анаэробы) способ Фортнера и т. п. Наилучшим методом является применение специальных анаэростатов, из которых воздух от¬качивается и (или) замещается каким-либо инертным газом или смесью азота и углекислого газа.


5. Процессы брожения и гниения. Их значение для круговорота веществ в природе, а также для хозяйственной деятельности человека. Круговорот азота в природе и бактерии, участвующие в нем. Виды брожения.
Анаэробиоз жизнедеятельность, протекающая при отсутствии сво¬бодного кислорода. Если донорами и акцепторами водорода яв¬ляются органические соединения, то такой процесс называется брожением. При брожении происходит ферментативное расщепление органических соединений, преимущественно углеводов, в анаэробных условиях. С учетом конечного продукта расщепления углеводов различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое и другие виды брожения.
Гниение, разложение сложных азотсодержащих органических соединений (преимущественно белков) под действием гнилостных микроорганизмов; т.к. при гниение выделяется преимущественно газообразный аммиак, гниение называется также аммонификацией, а микроорганизмы, участвующие в нём, аммонификаторами. Гниение сложный многоступенчатый биохимический процесс, направление которого и результат не постоянны и зависят от химической природы субстрата, от доступа кислорода и состава микрофлоры. На разных этапах гниение доминируют специфические группы микробов.
Среди гнилостных микроорганизмов ведущая роль принадлежит бактериям анаэробам и факультативным анаэробам, обладающим мощными протеолитическими ферментами, а также аэробным спороносным бактериям рода Bacillus и неспороносным из рода Pseudomonas. В гниение участвуют и плесневые грибы; роль актиномицетов незначительна. Большинство гнилостных бактерий сапрофиты, некоторые из них способны гидролизовать живую ткань, вызывая заболевания.
Гниение играет важную роль в круговороте веществ в природе: в результате жизнедеятельности и гибели животных и растений в почву и водоёмы попадает много белковых продуктов, которые лишь благодаря деятельности гнилостной микрофлоры не накапливаются, а минерализуются и вновь могут быть использованы растениями. С помощью протеолитических ферментов (протеаз и пептидаз) гнилостные бактерии расщепляют белки на полипептиды и далее на аминокислоты, подвергаемые многими микроорганизмами дезаминированию или декарбоксилированию. В результате дезаминирования выделяется газообразный аммиак, образуются насыщенные и ненасыщенные кислоты жирного и ароматического ряда, кето- и оксикислоты; при декарбоксилировании амины, многие из которых очень ядовиты. Радикалы аминокислот, появляющиеся в результате дезаминирования и декарбоксилирования, подвергаются дальнейшему распаду. Из триптофана образуются скатол и индол, из серусодержащих аминокислот метионина и цистеина сероводород; жирные кислоты могут сбраживаться с выделением метана. При гниение без доступа воздуха преобладают восстановительные процессы и накапливаются многие указанные продукты; при свободном доступе воздуха Г. проходит до конца, и весь углерод органических соединений выделяется в виде CO2.
6. Ферментация углеводов как дифференциально-диагностический признак бактерий.
Среды Гисса. принципы их конструирования. Оценка результатов роста бактерий на средах Гисса.
Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и в некоторых слу¬чаях для видов. Поэтому определением спектра ферментативной активности поль¬зуются при установлении таксономического положения бактерий. Наличие экзофермен¬тов можно определить при помощи диффе¬ренциально-диагностических сред.
Для многих микроорганизмов таксономическим при¬знаком служит способность разлагать определенные углеводы с образованием кислот и газообразных продук¬тов. Для выявления этого используют среды Гисса, со¬держащие различные углеводы (глюкозу, сахарозу, маль¬тозу, лактозу и др.). Для обнаружения кислот в среду добавлен реактив Андреде, который изменяет свой цвет от бледно-желтого до красного в интервале рН 7,26,5, поэтому набор сред Гисса с ростом микроорганизмов называют «пестрым рядом».



Генетика микроорганизмов

1.Ядерный аппарат у бактерий и его особенности. Механизм репликаиии бактериальной хромосомы.
Генетическая система бактерий имеет по крайней мере четыре особенности, при¬сущие только этим организмам.
1. Хромосомы бактерий (и соответственно плазмид) располагаются свободно в цитоплазме, не отграничены от нее никакими мембранами, но связаны с опреде¬ленными рецепторами на цитоплазматической мембране. Поскольку длина хромо¬сомы (у Е. соli около 1,6 мм) во много раз превышает длину бактериальной клетки (1,53,0 мкм в среднем), хромосома особым компактным образом в ней упакована: молекула хромосомной ДНК находится в суперспирализованной форме и свернута в виде петель, число которых составляет 1280 на хромосому. Петли в центре нуклеоида объединяются за счет связывания ДНК с сердцевинной структурой, пред¬ставленной молекулами особого класса РНК 4,55 РНК. Такая упорядоченная упа¬ковка обеспечивает постоянную транскрипцию отдельных оперонов хромосомы и не препятствует ее репликации. Возможно, что петли упакованной хромосомы способствуют компартментализации рибосом.
2. Хотя бактерии являются гаплоидными организмами, т. е. имеют один набор ге¬нов, содержание ДНК у них непостоянно, оно может при благоприятных условиях достигать значений, эквивалентных по массе 2, 4, 6 и даже 8 хромосомам. У всех прочих живых существ содержание ДНК постоянное, и оно удваивается (кроме ви¬русов и плазмид) перед делением.
3. У бактерий в естественных условиях передача генетической информации проис¬ходит не только по вертикали, т. е. от родительской клетки дочерним, но и по горизон¬тали с помощью различных механизмов: конъюгации, сексдукции, трансдукции, трансформации.
4. У бактерий очень часто помимо хромосомного генома имеется дополнительный плазмидный геном, наделяющий их важными биологическими свойствами, неред¬ко специфическим (приобретенным) иммунитетом к различным антибиотикам и другим химиопрепаратам.
Содержание ДНК у бактерий зависит от условий их роста: при благоприятных условиях оно возрастает до величин, соответствующих массе нескольких хромо¬сом. Это уникальное свойство бактериального генома. Биологическое значение его состоит в том, что, регулируя содержание копий своих генов (а оно будет опре деляться количеством копий синтезируемых хромосом), бактерии одновременно приспосабливают скорость своего размножения к условиям роста. Наряду с увели¬чением содержания ДНК у бактерий в этом случае существенно возрастает и коли¬чество рибосом. Благодаря этому создаются необходимые условия для транскрип¬ции и трансляции (а у бактерий они происходят одновременно) нескольких копий генов одновременно, возрастает суммарная скорость биосинтеза всех субклеточ¬ных и клеточных структур и соответственно скорость размножения бактерий. Время клеточного цикла бактерий сокращается от нескольких часов до 2030 мин. Скорость размножения определяет возможность накопления в окружающей среде большого запаса клеток данного вида. Это и является причиной существования бактерий в природе многие миллионы лет. Возможность регулировать ско¬рость собственного размножения одно из главных условий, обеспечивающих выживание бактерий в окружающей среде, а следовательно, и сохране¬ние вида в природе.

Репликация ДНК у бактерий начинается со строго фиксированного сайта хромосомы оriС. Он включает в себя участки с так назы¬ваемыми ДНК-боксами и расположенными между ними короткими последова-тельностями. Оба элемента примыкают к гену dnaА. Это и служит сигналом для действия ДНК-хеликазы. Репликация имеет полуконсервативный характер, идет одновременно в двух направлениях и заканчивается также в строго фиксиро¬ванной точке - terminus. Поскольку цепи ДНК антипараллельны (если одна нить начинается с 5'-конца, другая с З'-конца), а ДНК-полимераза III осуществляет синтез ДНК только в направлении 5'>3', репликация происходит своеобразно: на одной из расплетенных нитей «прямой», или лидерной, или веду¬щей, она идет непрерывно, а на другой отстающей ДНК-полимераза III долж¬на возвращаться, чтобы наращивать нить тоже в направлении 5'>3', прерывисто, че¬рез образование сегментов Оказаки, длиной у бактерий около 1000 нуклеотидов (у эукариот - около 200300 нуклеотидов).
2. Бактериальная хромосома, ее упаковка в клетке. Формы обмена генетическим материалом у бактерий: конъюгация, трансформация, трансдукция, трансфекция и сексдукция.
Бактериальная хромосома представлена одной двухцепочечной молекулой ДНК кольцевой фор¬мы. Размеры бактериальной хромосомы у различ¬ных представителей царства Procaryotae варьируют. Бактериальная хромосома формиру¬ет компактный нуклеоид бактериальной клетки. Бактериальная хромосома имеет гаплоидный на¬бор генов. Она кодирует жизненно важные для бактериальной клетки функции.
Плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные молекулы ДНК. Они кодируют не основные для жизнедеятельности бактериальной клетки функции, но придающие бактерии преиму¬щества при попадании в неблагоприятные условия существования.

Помимо основного механизма передачи генов по наследству (по вертикали), у бактерий существуют следующие формы обмена генетическим материалом по го¬ризонтали, т. е. между отдельными особями в популяции клеток: трансформация, трансфекция, трансдукция, конъюгация и сексдукция.
1.Трансформация перенос генетического материала, заключающийся в том, что бактерия-реципиент захватывает (поглощает) из внешней среды фрагменты чу¬жеродной ДНК. Трансформация может быть спонтанной или индуцированной. Ин¬дуцированная (искусственно получаемая) трансформация происходит при добавле¬нии к культуре бактерий очищенной ДНК, полученной из культур тех бактерий, генетические признаки которых стремятся передать исследуемой культуре. Спон¬танная трансформация происходит в естественных условиях и проявляется в воз¬никновении рекомбинантов при смешивании генетически различающихся клеток. Она протекает за счет ДНК, выделяющейся клетками в окружающую среду вслед-ствие их лизиса или в результате активного выделения ДНК жизнеспособными клет¬ками-донорами.
2.Трансфекция вариант трансформации бактериальных клеток, лишенных клеточной стенки, осуществляемый вирусной (фаговой) нуклеиновой кислотой. С помощью трансфекции удается вызвать у таких бактерий (без клеточной стенки) вирусную инфекцию. Трансфекцию можно осуществить и с другими (не бактери¬альными) клетками, если ввести в них чужеродную ДНК, способную рекомбинировать с ДНК этих клеток, или воспроизводить вирионы, или самостоятельно реплицироваться.
3.Трансдукция перенос генетического материала от клетки-донора клетке-ре¬ципиенту с помощью бактериофагов. Различают трансдукцию неспецифическую и специфическую.
Неспецифическая трансдукция случайный перенос фрагментов ДНК от одной бактериальной клетки к другой.
Специфическая трансдукция осуществляется только умеренными фагами, обла¬дающими способностью включаться в строго определенные участки хромосомы бактериальной клетки и трансдуцировать определенные гены.
4.Конъюгация это процесс обмена генетическим материалом (хромосомным и плазмидным), осуществляемый при непосредственном контакте клеток донора и ре¬ципиента. Процесс контролируется только конъюгативными плазмидами, имеющими совокупность генов, называемую tra-опероном. Этот оперон контролирует синтез аппарата переноса, конъюгативную репликацию и явление по¬верхностного исключения. Аппаратом переноса являются специальные донорные ворсинки, с помощью которых устанавливается контакт между конъюгирующими клетками.
5.Сексдукция перенос генетического материала между бактериальными клет¬ками, осуществляемый F-плазмидой с помощью механизма, аналогичного специ¬фической транcдукции.

3. Конъюгативный механизм обмена генетическим материалом у бактерий. F-плазмиды, их роль, функции tra-оперона.
Конъюгация это процесс обмена генетическим материалом (хромосомным и плазмидным), осуществляемый при непосредственном контакте клеток донора и ре¬ципиента. Процесс контролируется только конъюгативными плазмидами, имеющими совокупность генов, называемую tra-опероном. Этот оперон контролирует синтез аппарата переноса, конъюгативную репликацию и явление по¬верхностного исключения.
Процесс конъюгации протекает через следующие стадии: установление контакта между донором и реципиентом, протаскивание нити ДНК от донора к реципиенту, достройка перенесенной нити ДНК комплементарной ей нитью в реципиентной клетке и рекомбинация между переданной хромосомой (ее фрагментами) и хромо¬сомой клетки-реципиента, размножение мерозиготы и образование клеток, несущих признаки донора и реципиента.
Конъюгативная репликация переносимой нити хромосомной или плазмидной ДНК осуществляется также под контролем плазмидных генов. Классическим приме¬ром конъюгативной плазмиды является половой фактор, или F-плазмида. Эта плазмида представляет собой двунитевую кольцевид¬ную молекулу ДНК, состоящую из 94,5 тыс. п. н.
Главная функция этой плазмиды контроль конъюгации у бактерий кишечной группы. Ее tra-оперон содержит больше тридцати генов, которые контролируют процесс конъюгации. Эта плазмида может как находиться в автономном состоянии, так и интегрироваться в хромосому клетки. Находясь в автономном состоянии, она контролирует только собственный перенос, при котором F-клетка (клетка, лишен¬ная F-плазмиды) превращается в F-клетку (клетку, содержащую F-плазмиду).
5. Понятие о генотипе и фенотипе микроба. Категории изменчивости: наследствен¬но закрепленная и фенотипическая. Мутации индуцированные и спонтанные. Мо¬лекулярные механизмы мутаций. Транспозируемые элементы и их роль в эволю¬ции. Свойства микроор¬ганизмов, как и любых других организмов, определяются их генотипом, т.е. совокупностью генов данной особи. Термин «геном» в отношении микроорганизмов почти синоним по¬нятия «генотип».
Фенотип представляет собой результат взаимодействия меж¬ду генотипом и окружающей средой, т. е. проявление генотипа в конкретных условиях обитания. Фенотип микроорганизмов хотя и зависит от окружающей среды, но контролируется генотипом, так как характер и степень возможных для данной клетки сте¬нотипических изменений определяются набором генов, каждый из которых представлен определенным участком молекулы ДНК.
В основе изменчивости лежит либо изменение реакции гено¬типа на факторы окружающей среды, либо изменение самого генотипа в результате мутации генов или их рекомбинации. В свя¬зи с этим фенотипическую изменчивость подразделяют на на¬следственную и ненаследственную.
Ненаследственная (средовая, модификационная) изменчивость обусловлена влиянием внутри- и внеклеточных факторов на про¬явление генотипа. При устранении фактора, вызвавшего моди¬фикацию, данные изменения исчезают.
Наследственная (генотипическая) изменчивость, связанная с мутациями, мутационная изменчивость. Основу мутации со¬ставляют изменения последовательности нуклеотидов в ДНК, полная или частичная их утрата, т. е. происходит структурная пе¬рестройка генов, проявляющаяся фенотипически в виде изме¬ненного признака.
Наследственная изменчивость, связанная с рекомбинациями, называется рекомбинационной изменчивостью.

Под мутацией подразумеваются стабильные наследуемые изменения в генотипе, проявляющиеся фенотинически в виде измененного признака. Основу мутации составляют качественные или количественные изменения последовательности нуклеотидов в ДНК, которые могут возникать при жизнедеятельности бактерий под влиянием эндогенных факторов или при действии химических и физических мутагенов.
Различают так называемые спонтанные мутации, под которыми понимают мутации, причины возникновения которых неизвестны. Частота спонтанных мутаций мала.
При искусственном же воздействии различных физических и химических мутагенов частота мутаций возрастает, эти мутации принято называть индуцированными.

Подвижные генетические элементы.
В состав бактериального генома, как в бак¬териальную хромосому, так и в плазмиды, входят подвижные генетические элементы. К подвижным генетическим элементам от¬носятся вставочные последовательности и транспозоны.
Вставочные (инсерционные) последова¬тельности IS-элементы это участки ДНК, способные как целое перемещаться из одного участка репликона в другой, а также между репликонами. Они содержат лишь те гены, которые необходимы для их собственного перемещения транс¬позиции: ген, кодирующий фермент транспозазу, обеспечивающую процесс исключения IS-элемента из ДНК и его интеграцию в но¬вый локус, и ген, детерминирующий синтез репрессора, который регулирует весь процесс перемещения.
Отличительной особенностью IS-элементов является наличие на концах вставочной последовательности инвертированных повто¬ров. Эти инвертированные повторы узнает фермент транспозаза. Транспозаза осуществляет одноцепочечные разрывы це¬пей ДНК, расположенных по обе стороны от подвижного элемента. Оригинальная копия IS-элемента остается на прежнем месте, а ее реплицированный дупликат перемещается на новый участок.
Перемещение подвижных генетических элементов принято называть репликативной или незаконной рекомбинацией. Однако в отличие от бактериальной хромосомы и плазмид подвижные генетические элементы не являются самостоятельными репликонами, так как их репликация составной элемент репликации ДНК репликона, в составе кото¬рого они находятся.
Известно несколько разновидностей IS-элементов, которые различаются по раз¬мерам и по типам и количеству инвертиро¬ванных повторов.
Транспозоны это сегменты ДНК, облада¬ющие теми же свойствами, что и IS-элементы, но имеющие структурные гены, т. е. гены, обеспечивающие синтез молекул, обладаю¬щих специфическим биологическим свойс¬твом, например токсичностью, или обеспечи¬вающих устойчивость к антибиотикам.
Перемещаясь по репликону или между реп¬ликонами, подвижные генетические элемен¬ты вызывают:
1. Инактивацию генов тех участков ДНК, куда они, переместившись, встраиваются.
2. Образование повреждений генетического материала.
3. Слияние репликонов, т. е. встраивание плазмиды в хромосому.
4. Распространение генов в популяции бак¬терий, что может приводить к изменению биологических свойств популяции, смене возбудителей инфекционных заболеваний, а также способствует эволюционным процес-сам среди микробов.
Изменения бактериального генома, а следо¬вательно, и свойств бактерий могут происхо¬дить в результате мутаций и рекомбинаций.
6. Плазмиды бактерий. Определение понятия. Классы плазмид. Характеристика R-плазмид, их значение, распространение среди бактерий.
Плазмиды наипростейшие организмы, лишенные обологки, собствен¬ных систем синтеза белка и мобилизации энергии и представляющие собой особый класс абсолютных внутриклетогных паразитов, наделяющих своих бактерий-хозяев полезными для них свойствами. Плаз¬миды способны автономно копироваться (реплицироваться) и существовать в цитоплазме клетки, поэтому в клетке может быть несколько копий плазмид. Плазмиды могут включаться (интег¬рировать) в хромосому и реплицироваться вместе с ней. Разли¬чают трансмиссивные и нетрансмиссивные плазмиды. Трансмиссив¬ные (конъюгативные) плазмиды могут передаваться из одной бактерии в другую.
Плазмиды несут гены, не обязательные для клетки-хозя¬ина, придают бактериям дополнительные свойства, которые в определенных условиях окружающей среды обеспечивают их вре¬менные преимущества по сравнению с бесплазмидными бакте¬риями.
Некоторые плазмиды находятся под стро¬гим контролем. Это означает, что их реплика¬ция сопряжена с репликацией хромосомы так, что в каждой бактериальной клетке присутс¬твует одна или, по крайней мере, несколько копий плазмид.
У бактерий различных видов обнаружены R-плазмиды, несу¬щие гены, ответственные за множественную устойчивость к лекарственным препаратам антибиотикам, сульфаниламидам и др., F-плазмиды, или половой фактор бактерий, определяющий их способность к конъюгации и образованию половых пилей, Ent-плазмиды, детерминирующие продукцию энтеротоксина.
Плазмиды могут определять вирулентность бактерий, напри¬мер возбудителей чумы, столбняка, способность почвенных бак¬терий использовать необычные источники углерода, контроли¬ровать синтез белковых антибиотикоподобных веществ бактериоцинов, детерминируемых плазмидами бактериоциногении, и т. д. Существование множества других плазмид у микроорганиз¬мов позволяет полагать, что аналогичные структуры широко рас¬пространены у самых разнообразных микроорганизмов.

Классификация плазмид по свойствам, которыми они наделяют своих носителей
1) F-плазмиды- донорные функции
2) R-плазмиды- устойчивость к лекарственным препаратам
3) Соl-плазмиды- синтез колицинов
4) Еnt-плазмиды- синтез энтеротоксинов
5) Нlу-плазмиды- Синтез гемолизинов
6) Биодеградативные плазмиды- разрушение различных органических и неорганических соединений, в том числе содержащих тяжелые металлы
7) Криптические плазмиды -неизвестны

В условиях широкого применения антибиотиков и других химиопрепаратов происходит естественный отбор тех штам¬мов патогенных бактерий, которые являются носителями R-плазмид. Среди них формируются новые эпидемические клоны патогенных бактерий. В настоящее вре¬мя они играют ведущую роль в эпидемиологии инфекционных болезней, и от их рас¬пространения во многом зависит эффективность антибиотико- и химиотерапии, а в итоге здоровье и жизнь людей.

7. Лекарственная устойчивость микробов. Генетические и биохимические основы устойчивости бактерий к антибиотикам. Конъюгативные и неконъюгативные R-плазмиды, их основные свойства, механизмы передачи и значение.
--Биохимические основы устойчивости. Инактивация препарата бактериальными ферментами. Некоторые бактерии способны продуцировать особые ферменты, которые де¬лают препараты неактивными (например, бета-лактамазы, аминогликозид-модифицирующие ферменты, хлорамфениколацетилтрансфераза). Бета-лактамазы это ферменты, разруша¬ющие бета-лактамное кольцо с образованием неактивных соединений. Гены, кодирующие эти ферменты, широко распространены среди бактерий и могут быть как в составе хромосо¬мы, так и в составе плазмиды.
Для борьбы с инактивирующим действием бета-лактамаз используют вещества ин¬гибиторы (например, клавулановую кисло¬ту, сульбактам, тазобактам). Эти вещества содержат в своем составе бета-лактамное кольцо и способны связываться с бета-лактамазами, предотвращая их разрушитель¬ное действие на бета-лактамы. При этом собственная антибактериальная активность таких ингибиторов низкая. Клавулановая кислота ингибирует большинство известныхбета-лактамаз. Ее комбинируют с пеницил-линами: амоксициллином, тикарциллином, пиперациллином.
Предупредить развитие антибиотикорезистентности у бактерий практически не¬возможно, но необходимо использовать антимикробные препараты таким образом, чтобы не способствовать развитию и рас-пространению устойчивости (в частности, применять антибиотики строго по показа¬ниям, избегать их использования с профи¬лактической целью, через 1015 дней ан-тибиотикотерапии менять препарат, по воз¬можности использовать препараты узкого спектра действия, ограниченно применять антибиотики в ветеринарии и не использо¬вать их как фактор роста).
--Генетические основы приобретенной резис¬тентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях. Приобретенная лекарственная устойчивость может возникать и распространяться в попу¬ляции бактерий в результате:
мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т. е. отбором) му¬тантов.
переноса трансмиссивных плазмид резис¬тентности (R-плазмид).
переноса транспозонов, несущих r-гены

Разли¬чают трансмиссивные и нетрансмиссивные плазмиды. Трансмиссив¬ные (конъюгативные) плазмиды могут передаваться из одной бактерии в другую.
Существует несколько генетических меха¬низмов переноса плазмид между бактериальными клетками:
а) путем трансформации;
б) с помощью трансдуцирующих фагов;
в) путем мобилизации на перенос с помощью конъюгативных плазмид;
г) с помощью механизма самопереноса, контролируемого системой генов, объ¬единенных в tга-оперон.
В условиях широкого применения антибиотиков и других химиопрепаратов происходит естественный отбор тех штам¬мов патогенных бактерий, которые являются носителями R-плазмид. Среди них формируются новые эпидемические клоны патогенных бактерий. В настоящее вре¬мя они играют ведущую роль в эпидемиологии инфекционных болезней, и от их рас¬пространения во многом зависит эффективность антибиотико- и химиотерапии, а в итоге здоровье и жизнь людей.


10. Пути и способы проникновения патогенных микробов в организм человека. Динамика развития инфекционного процесса, периоды. Бактерионосительство и его значение.Пути заражения человека
Заражение человека патогенными микроорганизмами может произойти только через поврежденную кожу и слизистые оболочки глаза, дыхательных, пищевари¬тельных и мочеполовых путей. Заражение через неповрежденную кожу происходит исключительно редко, так как кожа для большинства микро¬организмов трудно проницаема. Однако даже самые ничтожные повреждения ее (укус насекомого, укол иглой, микротравмы и т. п.) могут стать причиной зараже¬ния. Место проникновения возбудителя в организм человека или животного назы¬вается входными воротами инфекции. В случае, если ими является слизистая обо¬лочка, возможны три типа инфекции: размножение возбудителя на поверхности эпителиальных клеток; проникновение его в клетки с последующим внутриклеточ¬ным размножением; проникновение возбудителя через клетки и распространение его по организму.

Способы заражения
Заражение человека происходит одним из следующих способов:
1. Воздушно-капельным или воздушно-пылевым.
2. Фекально-оральным. Возбудитель выделяется с испражнениями или мочой, заражение происходит через рот при употреблении инфицированных пищевых про¬дуктов или воды.
3. Трансмиссивным, т. е. через укусы кровососущих членистоногих.
4. Контактным прямой контакт с больным, реконвалесцентом, бактерионоси¬телем или через загрязненные предметы обихода, т. е. непрямым контактом.
5. Половым путем.
6. При использовании нестерильных медицинских приборов, особенно шприцев и т. п.
7. Вертикальным, т. е. от матери ребенку через плаценту, во время родов или сра¬зу после них.

Динамика развития инфекционной болезни.
1. Инкубационный период период от момента заражения до появления первых признаков заболевания.
2. Продромальный период, или период предвестников. Он характеризуется обычно неспецифическими, общими проявлениями слабость, разбитость, голов¬ная боль, общее недомогание, повышение температуры и т. п.
3. Период развития (расцвета) болезни.
4. Период выздоровления, или реконвалесценции. Клиническое выздоровле¬ние наступает обычно раньше патологоанатомического и бактериологического выздоровления.

Бактерионосительство. Очень часто после либо латентной инфекции, ли¬бо перенесенного заболевания организм человека не в состоянии полностью осво¬бодиться от возбудителя. При этом человек, будучи практически здоровым, стано¬вится его носителем в течение многих месяцев или даже лет. Являясь источником заражения для других лиц, бактерионосители играют большую роль в эпидемио¬логии многих заболеваний (брюшного тифа, дифтерии и др.), поскольку они вы¬деляют их возбудителей в окружающую среду, заражают воздух, воду, пищевые продукты. Около 58 % людей, переболевших брюшным тифом, становятся хро¬ническими (на срок более 3 мес.) носителями S. typhi и служат основным их резер¬вуаром в природе.


Учение об инфекции

1. Антисептика. Дж. Листер и Н. И. Пирогов - основоположники антисептики. Асептика. Методы стерилизации.
Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в ране, патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или ликвидацию воспалительного процесса.
Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания возбудителя инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических процедурах. Методы асептики применяют для борьбы с экзогенной инфекцией, источниками которой являются больные и бактерионосители.
Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся обработке.
Существует три основных метода стерили¬зации: тепловой, лучевой, химической.
Тепловая стерилизация основана на чувстви¬тельности микробов к высокой температуре. При 60 "С и наличии воды происходит денату¬рация белка, деградация нуклеиновых кислот, липидов, вследствие чего вегетативные фор¬мы микробов погибают. Споры, содержащие очень большое количество воды в связанном состоянии и обладающие плотными оболоч¬ками, инактивируются при 160170 °С.
Химическая стерилизация предполагает ис¬пользование токсичных газов: оксида этиле¬на, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бро¬мистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и формальдегида. Эти вещества являются ал-килирующими агентами, их способность в присутствии воды инактивировать активные группы в ферментах, других белках, ДНК и РНК приводит к гибели микроорганизмов.
Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от 18 до 80 °С в специальных камерах. В больницах используют формальдегид, в промышленных условиях оксид этилена и смесь ОБ.
Перед химической стерилизацией все из¬делия, подлежащие обработке, должны быть высушены.
Лучевая стерилизация осуществляется либо с помощью гамма-излучения, либо с помо¬щью ускоренных электронов.
Лучевая стерилизация является альтернати¬вой газовой стерилизации в промышленных условиях, и применяют ее также в тех случаях, когда стерилизуемые предметы не выдержи¬вают высокой температуры.
Фильтрование. Фильтрование с помощью раз¬личных фильтров (керамических, асбестовых, стеклянных), а в особенности мембранных уль¬трафильтров из коллоидных растворов нитроцеллюкозы или других веществ позволяет освободить жидкости (сыворотку крови, лекарства) от бак¬терий, грибов, простейших и даже вирусов. Для ускорения процесса фильтрации обычно создают повышенное давление в емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в емкости с фильтратом.

Н.И. Пирогов ближе других подошел вплотную к антисептики. собранные вместе его статьи и высказывания представляют собой стройную методику борьбы с инфекцией. Он рекомендовал разделение разделения больных зараженных различными госпитальными миазмами от незараженных больных. Также он рекомендовал различные способы очищения воздуха, сжигать испачканные гноем тюфяки, следить за чистотой белья, мыть стены и полы в госпиталях хлорной известью.
Н.И. Пирогов отмечал в своих статьях, что является « ревностным сторонником антисептического способа лечения ран». Еще до 1852 года Н.И. Пирогов применял при лечении ран повязки, пропитанные антисептическими веществами (азотнокислое серебро, сернокислый цинк, винный спирт и др.).
Почти одновременно с Н.И. Пироговым применял антисептические вещества для лечения ран русский хирург и анатом И.В. Буяльский, широко пользовавшийся раствором хлорной извести для лечения инфицированных ран. Весьма близко к идее антисептики подошли венгерский акушер Игнац Земмельвейс, петербургские акушеры Ф.К. Гугенбергер и А.А. Китер.
Из всех работ Пастера наибольшее влияние оказали на Листера те, в которых доказывалось, что брожение и гниение вызывается живыми существами, находящимися в воздушной пыли, и эта пыль может быть уничтожена при нагревании или фильтрации через вату или же задержана в изогнутых и вытянутых трубках бутылей. Не менее важным для Листера было указание Пастера на то, что жидкости человеческого тела, кровь и моча, свободны от микроорганизмов, и если эти жидкости тщательно сохранять в стерилизованных сосудах, то они неопределенно долгое время не подвергаются гниению. Таким образом, к 1865 г. Листер был уже в сущности вполне подготовлен к открытию антисептики.
Жизненно важным вопросом как для больного, так и для хирурга был вопрос о нагноении, ибо оно нередко переходило в госпитальную гангрену. Теперь, когда стало ясно, что в основе нагноения лежит разложение тканей, оставалось только выяснить, в чем причина этого разложения. Понятно поэтому, что открытие Пастером роли микроорганизмов в процессах брожения и гниения явилось для Листера настоящим откровением. Листер решил, что те же средства, которые останавливают брожение и гниение, должны так же влиять на возникновение госпитальных болезней. Однако практическое применение этих средств, пока в науке господствовал взгляд, что истинной причиной разложения является кислород, исключалось. Когда же Пастер опроверг убеждение Либиха, что кислород является причиной нагноения, и доказал, что истинная причина - мельчайшие живые существа, находящиеся в воздухе, открылись широкие возможности для антисептики. Исходя из работ Пастера, который доказал, что кровь или мясо, находясь в антисептическом растворе и в стерильной посуде с плотно заткнутой пробкой, не подвергаются гниению и разложению, Листер пытался провести аналогию с человеческим организмом. Он стал рассматривать кожу человека как своего рода бутылку, которая обволакивает тело, способное к гниению. Но стоит каким-либо путем поранить кожу, как начинается борьба между живой тканью организма и несущими смерть зародышами, находящимися в воздухе.


2. Влияние на микробов физических факторов. Стерилизация. Пастеризация. Тиндализация.
Влияние физических факторов.
Влияние температуры. Различные группы микроорга¬низмов развиваются при определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой температуре, называют психрофилами, при средней (около 37 °С) мезофилами, при вы¬сокой термофилами.
Высушивание. Обезвоживание вызывает нарушение функ¬ций большинства микроорганизмов. Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы (возбудители гоно¬реи, менингита, холеры, брюшного тифа, дизентерии и др.). Более устойчивыми являются микроорганизмы, защищенные слизью мокроты.
Высушивание под вакуумом из замороженного состояния лиофилизацию используют для продления жизнеспособнос¬ти, консервирования микроорганизмов. Лиофилизированные куль¬туры микроорганизмов и иммунобиологические препараты дли¬тельно (в течение нескольких лет) сохраняются, не изменяя своих первоначальных свойств.
Действие излучения. Неионизирующее излучение уль¬трафиолетовые и инфракрасные лучи солнечного света, а также ионизирующее излучение гамма-излучение радиоактивных ве¬ществ и электроны высоких энергий губительно действуют на микроорганизмы через короткий промежуток времени. УФ-лучи применяют для обеззараживания воздуха и различных предме¬тов в больницах, родильных домах, микробиологических лабо¬раториях. С этой целью используют бактерицидные лампы УФ-излучения с длиной волны 200450 нм.
Ионизирующее излучение применяют для стерилизации од¬норазовой пластиковой микробиологической посуды, питатель¬ных сред, перевязочных материалов, лекарственных препаратов и др. Однако имеются бактерии, устойчивые к действию иони¬зирующих излучений, например Micrococcus radiodurans была вы-делена из ядерного реактора.
Действие химических веществ. Химические вещества могут ока¬зывать различное действие на микроорганизмы: служить источ¬никами питания; не оказывать какого-либо влияния; стимули¬ровать или подавлять рост. Химические вещества, уничтожающие микроорганизмы в окружающей среде, называются дезинфи¬цирующими. Антимикробные хи¬мические вещества могут обладать бактерицидным, вирулицидным, фунгицидным действием и т.д.
Химические вещества, используемые для дезинфекции, отно¬сятся к различным группам, среди которых наиболее широко представлены вещества, относящиеся к хлор-, йод- и бромсодержащим соединениям и окислителям.
Антимикробным действием обладают также кислоты и их соли (оксолиновая, салициловая, борная); щелочи (аммиак и его соли)

Стерилизация - предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся обработке.
Пастеризация - способ уничтожения микроорганизмов в жидкостях и пищевых продуктах однократным нагреванием (обычно при 60-70C в течение 15-30 мин). Предложен Л. Пастером. Применяется для консервирования молока, вина, пива и др.
Тиндализация - способ униточжения микробов и их спор в определенном объекте. Осуществляется дробной обработкой паром обычно при температуре 100 °С. В периоды между нагреваниями объекты выдерживают в условиях, способствующих прорастанию спор. Применяется в основном для стерилизации жидкостей и пищевых продуктов, портящихся при температуре выше 100 °С.

5. Микрофлора воздуха. Роль воздуха в распространении возбудителей инфекцион¬ных болезней. Методы исследования микрофлоры воздуха.
Микробиологический контроль возду¬ха проводится с помощью методов естест¬венной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 510 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная седиментация микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специаль¬ных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы приборы для при-нудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактерио¬логический и др.). Импшджеры приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотоничес¬кий раствор хлорида натрия.
Санитарно-гигиеническое состояние воз¬духа определяется по следующим микробио¬логическим показателям:
1. Общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха (так называемое общее микробное число, или обсемененность воздуха) коли¬чество колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37 °С, выра¬женное в КОЕ;
2. Индекс санитарно-показательных микро¬бов количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха. Эти бактерии являются представителями мик¬рофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроор¬ганизмами, передающимися воздушно-капель-ным путем. Появление в воздухе спорообразующих бактерий показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий показатель воз¬можного антисанитарного состояния.
Для оценки воздуха лечебных учреждений мож¬но использовать данные из официально рекомен¬дованных нормативных документов.
3. Антагонизм среди микробов. Работы И. И. Мечникова в этой области. Микробы- антагонисты как продуценты антибиотиков.
Анти¬биотики вещества природного происхождения, обладающие выраженной биологигеской активностью. Они могут быть получены из микробов, расте¬ний, животных тканей и синтетическим путем.
Основными продуцентами антибиотиков служат микроорганизмы, обитающие в почве и воде, где они постоянно вступают между собой в самые разнообразные взаимоотношения. Последние могут быть нейтральными, взаимовыгодными (на¬пример, деятельность гнилостных бактерий создает условия для деятельности ни¬трифицирующих бактерий), но очень часто они являются антагонистическими. И это понятно. Только таким путем в природе могло сложиться сбалансированное сосуществование громадного числа видов живых существ. Антагонистические вза¬имоотношения между бактериями наблюдал еще Л. Пастер. И. И. Мечников пред¬ложил использовать антагонизм между бактериями на пользу человеку. Он, в част¬ности, рекомендовал подавлять активность гнилостных бактерий в кишечнике че¬ловека, продукты жизнедеятельности которых, по его мнению, сокращают жизнь человека, молочнокислыми бактериями.
Механизмы микробного антагонизма различны. Они могут быть связаны с кон¬куренцией за кислород и питательные вещества, с изменением рН среды в сторону, неблагоприятную для конкурента, и т. д.
Одним из универсальных механизмов микробного антагонизма является синтез химических веществ-антибиотиков, которые либо подавляют рост и размножение других видов микроорганизмов (бактериостатическое действие), либо убивают их (бактерицидное действие).

4. Химиотерапия и химиопрофилактика инфекционных болезней. Антибиотики. Принципы их лечебного применения. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам. Осложнения при антибиотикотерапии и их предупреждение.

Химиотерапия специфическое антимикробное, антипаразитар¬ное лечение при помощи химических веществ. Эти вещества обла¬дают важнейшим свойством избирательностью действия против болезнетворных микроорганизмов в условиях макроорганизма.
Анти¬биотики вещества природного происхождения, обладающие выраженной биологигеской активностью. Они могут быть полугены из микробов, расте¬ний, животных тканей и синтетигеским путем
Рациональное лечение антибиотиками должно строиться на основе знания инди¬видуальных особенностей пациента, течения заболевания, биологии возбудителя и его отношения к антибиотикам, а также свойств назначаемого препарата (препаратов). По мнению С. М. Навашина, необходимо придерживаться следующих основ¬ных принципов рациональной антибиотикотерапии:
1) выделение и идентификация возбудителя, изучение его антибиотикограммы;
2) выбор наиболее активного и наименее токсичного препарата;
3) определение оптимальных доз и методов введения на основе знания особенно¬стей кинетики антибиотика в организме больного для создания в крови, жидкостях и тканях организма терапевтических концентраций, превышающих в 23 раза ми¬нимальную подавляющую концентрацию для данного возбудителя;
4) своевременное начало лечения и проведение курсов антибиотикотерапии не¬обходимой продолжительности вплоть до полного закрепления терапевтического эффекта;
5) знание характера и частоты побочных явлений при назначении антибиотиков, особенно в условиях нарушения их распределения в организме больного при неко¬торых патологических состояниях, например почечно-печеночной недостаточности;
6) комбинирование антибиотиков между собой и с другими препаратами с целью усиления антибактериального эффекта, улучшения их фармакокинетики и сниже¬ния частоты побочных явлений.
Чаще всего для определения чувствительности бактерий к антибиотикам используются два метода: метод диффузии в агар с приме¬нением стандартных дисков, пропитанных антибиотиком, и метод серийных разве-дений антибиотика.

--Осложнения. При неоднократном или длительном применении, наблюдаются нежелательные реакции, которые можно разделить на следующие 4 группы: аллергические, токсические, эндотоксические и дисбактериозы.
Аллергические реакции наблюдаются в тех случаях, когда антибио¬тик выступает в качестве аллергена. Могут носить ха¬рактер крапивницы, дерматита, сыпи, ринита и т. п. Наибольшую опасность представ¬ляет пенициллиновый шок реакция гиперчувствительности немедленного типа.
Токсические реакции возникают чаще всего в связи с органотропным фармакодинамическим действием антибиотика и при продолжительном лечении. Проявля¬ются в виде поражения вестибулярного аппарата (неомицин, канамицин, стрепто¬мицин), почек (полимиксин, неоми¬цин, мономицин, стрептомицин), периферических нервов, различных поражений ЦНС (циклосерин, неомицин, поли¬миксин) и других нарушений.
Наиболее тяжелым бывает токсическое воздействие на кровь: агранулоцитоз, апластическая анемия (левомицетин).
Эндотоксические реакции развиваются в тех случаях, когда под влиянием ан¬тибиотика происходит массовое разрушение грамотрицательных бактерий, со¬провождающееся выделением и поступлением в кровь их эндотоксина (липополисахарида).
Одним из самых частых осложнений, особенно при длительном применении ан¬тибиотиков с широким антимикробным спектром, являются дисбактериозы.
5. Микрофлора воздуха. Роль воздуха в распространении возбудителей инфекцион¬ных болезней. Методы исследования микрофлоры воздуха.
Микробиологический контроль возду¬ха проводится с помощью методов естест¬венной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 510 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная седиментация микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специаль¬ных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы приборы для при-нудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактерио¬логический и др.). Импшджеры приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотоничес¬кий раствор хлорида натрия.
Санитарно-гигиеническое состояние воз¬духа определяется по следующим микробио¬логическим показателям:
1. Общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха (так называемое общее микробное число, или обсемененность воздуха) коли¬чество колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37 °С, выра¬женное в КОЕ;
2. Индекс санитарно-показательных микро¬бов количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха. Эти бактерии являются представителями мик¬рофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроор¬ганизмами, передающимися воздушно-капель-ным путем. Появление в воздухе спорообразующих бактерий показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий показатель воз¬можного антисанитарного состояния.
Для оценки воздуха лечебных учреждений мож¬но использовать данные из официально рекомен¬дованных нормативных документов.
6.Микрофлора воды. Роль воды в распространении возбудителей инфекционных болезней. Понятие о коли-титре и коли-индексе.

Вода, как и почва, является естественной средой обитания для многих видов микро¬организмов всех царств жизни. Разнообразные микроорганизмы обитают как в воде от¬крытых водоемов, так и в грунтовых водах: палочки, кокки, вибрионы, спириллы, спи¬рохеты, различные фотосинтезирующие бактерии, грибы, простейшие, вирусы и плаз¬миды. Многие виды галофильных бактерий обитают в морских водах. Численность микроорганизмов в воде определяется главным образом содержанием в ней органичес¬ких веществ, которые под влиянием микроорганизмов подвергаются совершенно таким же превращениям, как и в почве. В 1 мл воды количество микробов может превышать несколько миллионов. Грунтовые подземные воды чище, так как, просачиваясь через почву, вода подвергается своеобразной фильтрации, в результате которой большинство микробов задерживается в фильтрующем слое. Численность микроорганизмов в воде открытых водоемов подвержена колебаниям и зависит от климатических условий, времени года, а главным образом, от степени загрязнения рек, озер и морей сточными и ка¬нализационными водами и отходами промышленных, агропромышленных и других предприятий. В реки, озера, моря из прибрежных городов и других населенных пунктов выбрасывается такое количество сточных вод, несущих милиариады микробов и содержа¬щих огромное количество органических веществ, что вода не успевает самоочищаться. В результате возникла и сохраняется серьезная глобальная экологическая проблема.
Питьевая вода считается хорошей, если общее количество бактерий в 1 мл не более 100; сомнительной 100150; загрязненной, если содержание бактерий в 1 мл 500 и более. Количество микроорганизмов в придонном слое ила озер и рек варьирует в пределах от 100 до 400 млн на 1 г.
Вода играет исключительно важную роль в эпидемиологии многих инфекционных заболеваний, особенно кишечных (брюшного тифа, дизентерии, сальмонеллезов, холе¬ры, вирусных гепатитов, полиомиелита и т. п.), возбудители которых выделяются вме¬сте с испражнениями от больных и носителей и вместе со сточными водами поступают в воду открытых водоемов, а оттуда нередко и в питьевую воду. Хотя патогенные бак¬терии слабо приспособлены к существованию в воде, где на них оказывают неблагопри-ятное действие солнечный свет и различные другие факторы, включая конкурентную водную микрофлору, многие из них могут достаточно длительное время сохраняться в воде. Более того, в летнее время при наличии в воде органических веществ, щелочной рН и благоприятной температуры некоторые из них, в том числе холерный вибрион, могут даже размножаться. Заразиться можно и через лед, в котором патогенные бакте¬рии могут сохраняться в течение нескольких недель и даже месяцев.
Загрязненная вода главный источник заражения холерой, дизентерией, брюш¬ным тифом и другими кишечными инфекциями, а также лептоспирозом и, нередко, туляремией.
Микробиологические методы исследования воды сводятся к определению общего количества микроорганизмов в 1 мл воды и выявлению тех или иных видов патоген¬ных бактерий (особенно холерного вибриона). Кроме того, поскольку прямое выделе¬ние патогенных бактерий из воды требует специальных исследований, существуют косвенные методы, позволяющие дать количественную оценку степени фекального загрязнения.

Нормативы микробиологических показателей питьевой воды таковы:
1. Общее микробное число (количество микроорганизмов в 1 мл воды) не бо¬лее 100.
2. Число бактерий группы кишечной палочки (коли-индекс) количество БГКП в 1000 мл воды не более
3. Эшерихии (показатель свежего фекального загрязнения) количество эшерихий в 1000 мл воды отсутствие.
4. Колифаги количество бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1000 мл воды отсутствие.

7. Микрофлора почвы. Роль почвы в распространении возбудителей инфекционных болезней. Значение почвы в распространении столбняка в условиях Краснодарского края.
Почва среда обитания многочисленных видов микроорганизмов и крупнейший резервуар их в природе. Количество микробов в 1 г почвы измеряется обычно сотнями и тысячами миллионов клеток. Оно варьирует от 200 млн в глинистой почве до 5 млрд в черноземной почве. В 1 г пахотного слоя почвы содержится 110 млрд бактерий, а в слое ее толщиной 15 см на площади в 1 га может содержаться от 1 до 56 тонн микроб-ной массы. Даже в песках пустынь, где почти отсутствует влага, содержится до 100000 микробов в 1 г. Численность и видовой состав их в почве зависят от содержания в ней органических веществ и влаги, структуры почвы, способа ее сельскохозяйственной обработки, климатических условий, характера растительного покрова, степени загряз¬нения почвы отходами хозяйственной деятельности человека и многих других факто- ров. Состав микрофлоры почвы складывается из различных комбинаций бактерий (сот¬ни и тысячи видов), грибов, простейших и вирусов. Фактически она содержит предста¬вителей всех царств жизни вирусов, архебактерий, эубактерий и эукариот во всем их многообразии, которое зависит от действия многих факторов.
Самый поверхностный слой почвы содержит ограниченное число микробов из-за действия солнечных лучей и высушивания. Главная масса микробов содержится на глу¬бине 1020 см, в нижележащих ее горизонтах количество микроорганизмов уменьша¬ется, и на глубине 56 метров почва может быть уже стерильной, так как распростра¬нению микробов в глубину препятствует высокая поглотительная способность почвы.
Почва постоянно загрязняется различными отбросами, выделениями человека и животных, мертвыми растениями и животными. Огромная роль в процессах само¬очищения почвы и в круговороте веществ в природе принадлежит микроорганиз¬мам. В превращении органических веществ, поступающих в почву и образующихся в ней, принимают участие различные группы микробов: гнилостные, нитрифициру¬ющие, азотфиксирующие, денитрифицирующие и др.
Патогенные микроорганизмы попадают в почву с испражнениями, мочой, гноем, мокротой, слюной и другими выделениями, с трупами людей и животных, погибших от инфекционных заболеваний. Попадая в почву, значительная часть патогенных микроорганизмов, не образующих спор, рано или поздно погибает. Сроки выжива¬ния в почве возбудителей кишечных инфекций (дизентерии, брюшного тифа, холе¬ры), чумы, бруцеллеза, туляремии, туберкулеза широко варьируют и составляют от нескольких часов до нескольких месяцев. Отмирание патогенных бактерий в почве зависит от ряда причин: высушивания; отсутствия необходимых питательных суб¬стратов; действия антибиотических веществ, вырабатываемых почвенными бакте¬риями и грибами; солнечных лучей; бактериофагов и т. п. Значительно дольше в почве сохраняются спорообразующие патогенные бактерии аэробные и анаэробные возбудители столбняка, газовой гангрены, ботулизма (их споры также сохраняются в почве многие годы, а при благоприятных условиях прорастают и бактерии размножаются, поддер¬живая тем самым свое существование в почве). Поэтому почва играет основную роль в эпидемиологии столбняка, газовой гангрены (особенно в военных условиях) и боту¬лизма, она является основным резервуаром возбудителей этих заболеваний.

8. Нормальная микрофлора человека и ее значение для организма. Микрофлора толстого кишечника. Ее формирование и состав. Дисмикробиоценоз, причины возникновения и способы предупреждения и лечения.
Организм человека заселен (колонизирован) более чем 500 видов микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору человека, находящихся в состоянии равновесия (эубиоза) друг с другом и организмом человека. Микрофлора представляет со¬бой стабильное сообщество микроорганизмов, т.е. микробиоценоз. Она колонизирует поверхность тела и полости, сообщающиеся с окружающей средой. Место обитания сообщества микроорга¬низмов называется биотопом. В норме микроорганизмы отсутству-ют в легких и матке. Различают нормальную микрофлору кожи, слизистых оболочек рта, верхних дыхательных путей, пищева¬рительного тракта и мочеполовой системы. Среди нормальной микрофлоры выделяют резидентную и транзиторную микрофлору. Резидентная (постоянная) облигатная микрофлора представ¬лена микроорганизмами, постоянно присутствующими в орга¬низме. Транзиторная (непостоянная) микрофлора не способна к длительному существованию в организме.
Микрофлора пищеварительного тракта является наиболее представительной по своему качественному и количе¬ственному составу. При этом микроорганизмы свободно обита¬ют в полости пищеварительного тракта, а также колонизируют слизистые оболочки.
Микро¬флора толстой кишки своеобразный экстракорпораль¬ный орган. Она является антагонистом гнилостной микрофлоры, так как продуцирует молочную, уксусную кислоты, антибиоти¬ки и др. Известна ее роль в водно-солевом обмене, регуляции газового состава кишечника, обмене белков, углеводов, жирных кислот, холестерина и нуклеиновых кислот, а также продукции биологически активных соединений антибиотиков, витаминов, токсинов и др. Морфокинетическая роль микрофлоры заключа¬ется в ее участии в развитии органов и систем организма; она принимает участие также в физиологическом воспалении сли-зистой оболочки и смене эпителия, переваривании и детокси-кации экзогенных субстратов и метаболитов, что сравнимо с функцией печени. Нормальная микрофлора выполняет, кроме того, антимутагенную роль, разрушая канцерогенные вещества.
Пристеночная микрофлора кишечника колонизирует слизис¬тую оболочку в виде микроколоний, образуя своеобразную био¬логическую пленку, состоящую из микробных тел и экзополи-сахаридного матрикса. Экзополисахариды микроорганизмов, на¬зываемые гликокаликсом, защищают микробные клетки от раз-нообразных физико-химических и биологических воздействий. Слизистая оболочка кишечника также находится под защитой биологической пленки.
Важнейшей функцией нормальной микрофлоры кишечника является ее участие в колонизационной резистентнос¬ти, под которой понимают совокупность защитных факторов организма и конкурентных, антагонистических и других особен¬ностей анаэробов кишечника, придающих стабильность микро¬флоре и предотвращающих колонизацию слизистых оболочек посторонними микроорганизмами.

--При дисмикробиоценоз происходят стойкие количест¬венные и качественные изменения бактерий, входящих в состав нормальной микрофло¬ры. При дисбиозе изменения происходят и среди других групп микроорганизмов (виру¬сов, грибов и др.). Дисбиоз и дисбактериоз могут приводить к эндогенным инфекция-ми.
Дисбиозы классифицируют по этиологии (грибковый, стафилококковый, протейный и др.) и по локализации (дисбиоз рта, кишки, влагалища и т. д.). Изменения в составе и функциях нормальной микрофлоры сопро-вождаются различными нарушениями: разви¬тием инфекций, диарей, запоров, синдрома мальабсорбции, гастритов, колитов, язвенной болезни, злокачественных новообразований, аллергий, мочекаменной болезни, гипо- и гиперхолестеринемии, гипо- и гипертензии, кариеса, артрита, поражений печени и др.
9. Сапрофитизм и паразитизм микробов. Патогенность и ее проявление (инфекциозность агрессивность, токсическое действие). Факторы патогенности. Вирулентность, методы ее определения.
Сапронозы - группа инфекционных заболеваний, для возбудителей которых главным естественным местом обитания являются абиотические (неживые) объекты окружающей среды. Этим данная группа отличается от прочих заразных болезней, для возбудителей которых главным естественным местом обитания служит заражённый организм человека (антропонозы) или животного (зоонозы).
Паразитизм - форма взаимоотношений между организмами (растениями, животными, микроорганизмами), относящимися к разным видам, из которых один (паразит) использует другого (хозяина) в качестве среды обитания и источника пищи.
Патогенность видовой признак, передающийся по наследству, закрепленный в геноме мик¬роорганизма, в процессе эволюции паразита, т. е. это генотипический признак, отражающий потенциальную возможность мик¬роорганизма проникать в макроорганизм (инфективность) и раз¬множаться в нем (инвазионность), вызывать комплекс патоло¬гических процессов, возникающих при заболевании.
Фенотипическим признаком патогенного микроорганизма является его вирулентность, т.е. свойство штамма, которое проявляется в определенных условиях (при изменчивости микроорганизмов, изменении восприимчивости макроорганизма и т.д.). Вирулент¬ность можно повышать, понижать, измерять, т.е. она является мерой патогенности. Количественные показатели вирулентности могут быть выражены в DLM (минимальная летальная доза), DL« (доза, вызывающая гибель 50 % экспериментальных живот¬ных). При этом учитывают вид животных, пол, массу тела, спо¬соб заражения, срок гибели.
К основным факторам патогенности относят способность микроорганизмов прикрепляться к клеткам (адгезия), размещаться на их поверхности (колонизация), проникать в клетки (инвазия) и противостоять факторам защиты организма (агрессия).
Конкретных факторы патогенности:
1. Хемотаксис и подвижность
2. Ферменты, разрушающие субстраты слизи
3. Факторы адгезии и колонизации
4. Факторы инвазии
5. Факторы, препятствующие фагоцитозу
6. Факторы, подавляющие фагоцитоз
7. Ферменты «защиты и агрессии» бактерий
8. Токсины микробов


10. Пути и способы проникновения патогенных микробов в организм человека. Динамика развития инфекционного процесса, периоды. Бактерионосительство и его значение.Пути заражения человека
Заражение человека патогенными микроорганизмами может произойти только через поврежденную кожу и слизистые оболочки глаза, дыхательных, пищевари¬тельных и мочеполовых путей. Заражение через неповрежденную кожу происходит исключительно редко, так как кожа для большинства микро¬организмов трудно проницаема. Однако даже самые ничтожные повреждения ее (укус насекомого, укол иглой, микротравмы и т. п.) могут стать причиной зараже¬ния. Место проникновения возбудителя в организм человека или животного назы¬вается входными воротами инфекции. В случае, если ими является слизистая обо¬лочка, возможны три типа инфекции: размножение возбудителя на поверхности эпителиальных клеток; проникновение его в клетки с последующим внутриклеточ¬ным размножением; проникновение возбудителя через клетки и распространение его по организму.

Способы заражения
Заражение человека происходит одним из следующих способов:
1. Воздушно-капельным или воздушно-пылевым.
2. Фекально-оральным. Возбудитель выделяется с испражнениями или мочой, заражение происходит через рот при употреблении инфицированных пищевых про¬дуктов или воды.
3. Трансмиссивным, т. е. через укусы кровососущих членистоногих.
4. Контактным прямой контакт с больным, реконвалесцентом, бактерионоси¬телем или через загрязненные предметы обихода, т. е. непрямым контактом.
5. Половым путем.
6. При использовании нестерильных медицинских приборов, особенно шприцев и т. п.
7. Вертикальным, т. е. от матери ребенку через плаценту, во время родов или сра¬зу после них.

Динамика развития инфекционной болезни.
1. Инкубационный период период от момента заражения до появления первых признаков заболевания.
2. Продромальный период, или период предвестников. Он характеризуется обычно неспецифическими, общими проявлениями слабость, разбитость, голов¬ная боль, общее недомогание, повышение температуры и т. п.
3. Период развития (расцвета) болезни.
4. Период выздоровления, или реконвалесценции. Клиническое выздоровле¬ние наступает обычно раньше патологоанатомического и бактериологического выздоровления.

Бактерионосительство. Очень часто после либо латентной инфекции, ли¬бо перенесенного заболевания организм человека не в состоянии полностью осво¬бодиться от возбудителя. При этом человек, будучи практически здоровым, стано¬вится его носителем в течение многих месяцев или даже лет. Являясь источником заражения для других лиц, бактерионосители играют большую роль в эпидемио¬логии многих заболеваний (брюшного тифа, дифтерии и др.), поскольку они вы¬деляют их возбудителей в окружающую среду, заражают воздух, воду, пищевые продукты. Около 58 % людей, переболевших брюшным тифом, становятся хро¬ническими (на срок более 3 мес.) носителями S. typhi и служат основным их резер¬вуаром в природе.
11. Инфекция и инфекционный процесс. Факторы инфекционного процесса. Типы инфекций - абортивная, латентная, дремлющая, типичное инфекционное заболевание, атипичное заболевание, вирогения, медленная инфекция, бактерионосительство. Мех-мы персистирования.
--Термин инфекция или инфекционный процесс обозначает совокупность физиологических и патологических восстановительно-приспособительных реакций, возникающих в восприимчивом макроорганизме при определенных условиях окружающей внешней среды в результате его взаимодействия с проникшими и размножающимися в нем патогенными или условно-патогенными бактериями, грибами и вирусами и направленных на поддержание постоянства внутренней среды макроорганизма (гомеостаза).
-Современным учением об инфекции является признание того, что возникновение, развитие и исход инфек-ции как процесса взаимодействия между микро- и макроорганизмом зависят от свойств того и другого участников этого конкурентного взаимодействия и от условий внешней среды, в которых оно происходит.
1.Абортивная. Возбудитель проникает в организм, но не размножается в нем или в связи с надежной естественной резистентностью, или с приобретенным специ¬фическим иммунитетом, подавляющим возбудителя. Таким образом, инфекцион¬ный процесс обрывается, и возбудитель рано или поздно погибает или удаляется из организма.
2. Латентная (инаппарантная). Возбудитель проникает в организм, размножа¬ется в нем, макроорганизм отвечает на него соответствующими иммунобиологичес¬кими реакциями, ведущими к формированию приобретенного иммунитета и удале¬нию возбудителя из организма. Однако никаких внешних клинических проявлений этой инфекции нет, она протекает скрыто (латентно). Нередко в такой латентной форме люди переносят полиомиелит, бруцеллез, некоторые вирусные гепатиты и другие болезни.
3. Дремлющая инфекция. Бессимптомное пребывание возбудителя в орга¬низме может сохраняться долгое время после латентной инфекции или после пе¬ренесенного заболевания, например легочного туберкулеза, закончившегося формированием первичного комплекса.
4. Типичная для данного возбудителя форма инфекции. Возбудитель проникает в организм, активно в нем размножается, вызывая характерные (типичные) для дан¬ной болезни клинические проявления, которые также характеризуются определен¬ной цикличностью.
5. Атипичная форма. Возбудитель проникает в организм, активно в нем раз¬множается, организм отвечает соответствующими иммунобиологическими реакци¬ями, которые приводят к формированию активного иммунитета, но клинические симптомы болезни носят невыраженный, стертый или атипичный характер.
6. Персистентная (хроническая). Возбудитель проникает в организм, раз¬множается в нем, вызывает активную форму болезни, но под влиянием иммунных систем организма и химиопрепаратов подвергается L-трансформации. Поскольку L-формы бактерий не чувствительны ко многим антибиотикам и химиопрепаратам, чей механизм действия связан с нарушением синтеза клеточной стенки, а так¬же к антителам, они могут длительное время переживать в организме. Возвращаясь в свою исходную форму, возбу¬дитель восстанавливает патогенные свойства, размножается и вызывает обостре¬ние (рецидив) болезни.
7. Медленные инфекции. Возбудитель проникает в организм и может долгое время месяцы, годы сохраняться в нем внутриклеточно в латентном состоянии. Типич¬ным примером медленной инфекции является СПИД.
8. Бактерионосительство. Очень часто после либо латентной инфекции, ли¬бо перенесенного заболевания организм человека не в состоянии полностью осво¬бодиться от возбудителя. При этом человек, будучи практически здоровым, стано¬вится его носителем в течение многих месяцев или даже лет. Являясь источником заражения для других лиц, бактерионосители играют большую роль в эпидемио¬логии многих заболеваний (брюшного тифа, дифтерии и др.), поскольку они вы¬деляют их возбудителей в окружающую среду, заражают воздух, воду, пищевые продукты. Около 58 % людей, переболевших брюшным тифом, становятся хро¬ническими (на срок более 3 мес.) носителями S. typhi и служат основным их резервуаром в природе.


12. Экзотоксины и эндотоксины, их свойства, химическая природа, действие на организм.
Эндотоксины имеются только у грамотрицательных бактерий. Они представлены липополисахаридами и связанными с ними белками. Особенность эндотоксинов в том, что они термостабильны и высвобождаются из бактериальных клеток после их разрушения. Эндотоксины, в отличие от экзотоксинов, не обладают специфичностью действия. Их токсичность и пирогенность обусловлены липидом А, входящим в состав ЛПС и имеющим сходную структуру у разных грамотрицательных бактерий. Пирогенное действие эндотоксинов не связано с их непосредственным действием на терморегулирующие центры головного мозга. Они индуцируют выброс какого-то пирогенного вещества из полиморфно-ядерных лейкоцитов. Эндотоксины являются воспалитель¬ными агентами; они увеличивают проницаемость капилляров и оказывают разруша¬ющее действие на клетки. Их воспалительное и пирогенное действие неспецифично. Многообразие проявлений отравления эндотоксином обусловлено не только самим ЛПС, но и высвобождением многочисленных биологически активных соединений, синтез которых он индуцирует в организме человека и животных (гистамин, серотонин, простагландины, лейкотриены и др., всего более 20). Эти вещества и обусловливают нарушения в различных органах и тканях.
Все три компонента ЛПС липид А, ядро полисахарида и его боковая цепочка из повторяющихся cахаров обладают выраженными антигенными свойствами. ЛПС стимулирует синтез интерферонов, активизирует систему комплемента по классическому пути, оказывает митогенное действие на лимфоциты, а также аллер¬генное действие. Его токсические свойства, в отличие от экзотоксинов, не снимают¬ся при обработке формалином, и ЛПС не превращается в анатоксин.

Экзотоксины. Их продуцируют как грамположительные, так и грамотрицатель¬ные бактерии. У грамположительных бактерий экзотоксины активно секретируются через ЦМ и клеточную стенку в окружающую среду с использованием специальных секретирующих систем. У грамотрицательных бактерий (холерный вибрион, токсигенные кишечные палочки, сальмонеллы) некоторые экзотоксины (энтеротоксины) синтезируются только при определенных условиях непосредственно в инфициро¬ванном организме и нередко сохраняются в цитоплазме, освобождаясь из клетки только после ее разрушения.
Все известные бактериальные экзотоксины белки, среди них есть термола¬бильные и термостабильные. С белковой природой экзотоксинов связаны их основ¬ные свойства: они обладают высокой силой действия (самые сильные токсины в природе микробного происхождения), высокой избирательностью и связанной с ней специфичностью действия (картина столбняка у лабораторных животных оди¬накова, как при заражении их возбудителем, так и его экзотоксином), которое они проявляют после некоторого латентного периода. Экзотоксины являются сильными антигенами, а некоторые даже суперантигенами. Они индуцируют образование в организме антител, т. е. антитоксинов, которые нейтрализуют их действие. При обра¬ботке формалином экзотоксины обезвреживаются и превращаются в анатоксины. Анатоксины лишены токсических свойств, но сохраняют свою способность индуциро¬вать синтез антитоксинов, поэтому широко используются для создания искусственно¬го иммунитета против дифтерии, столбняка, ботулизма и других заболеваний.
13. Влияние социальной среды на возникновение, течение и исход инфекционных болезней .
Было установлено, что большое значение для возникновения болезней имеет отрицательное влияние на организм таких социально обусловленных факторов, как неполноценное питание, изнурительный труд, антисанитарные бытовые условия, безработица, инфляция, хронический алкоголизм, наркомания и др. Они играют важную роль в предрасположении организма ко многим болезням и обусловливают более тяжелое, чем обычно, их течение и исход. Существенное влияние на рост заболеваемости оказывают загрязнение окружающей среды, различные профессиональные вредности и др. В качестве патогенных факторов учитывают и специфические местные условия, которые являются объектом изучения географической патологии.




Иммунология

1. Луи Пастер и его роль в развитии микробиологии. Разработка Пастером научных основ специфической профилактики инфекционных болезней.
Пастер сделал ряд выдающихся от¬крытий. За короткий период с 1857 по 1885 г. он доказал, что брожение (молочнокислое, спиртовое, уксуснокислое) не явля¬ется химическим процессом, а его вызывают микроорганизмы; опроверг теорию самозарождения; открыл явление анаэробио¬за, т.е. возможность жизни микроорганизмов в отсутствие кис¬лорода; заложил основы дезинфекции, асептики и антисепти¬ки; открыл способ предохранения от инфекционных болезней с помощью вакцинации.
Многие открытия Л. Пастера принесли человечеству огром¬ную практическую пользу. Путем прогревания (пастеризации) были побеждены болезни пива и вина, молочнокислых продук¬тов, вызываемые микроорганизмами; для предупреждения гной¬ных осложнений ран введена антисептика; на основе принципов Л. Пастера разработаны многие вакцины для борьбы с инфекционными болезнями.
Однако значение трудов Л. Пастера выходит далеко за рамки только этих практических достижений. Л. Пастер вывел микро¬биологию и иммунологию на принципиально новые позиции, показал роль микроорганизмов в жизни людей, экономике, про¬мышленности, инфекционной патологии, заложил принципы, по которым развиваются микробиология и иммунология и в наше время.
Л. Пастер был, кроме того, выдающимся учителем и органи¬затором науки.
Работы Л. Пастера по вакцинации открыли новый этап в раз¬витии микробиологии, по праву получивший название имму¬нологического.
Принцип аттенуации (ослабления) микроорганизмов с помо¬щью пассажей через восприимчивое животное или при выдерживании микроорганизмов в неблагоприятных условиях (темпе¬ратура, высушивание) позволил Л. Пастеру получить вакцины против бешенства, сибирской язвы, куриной холеры; этот прин¬цип до настоящего времени используется при приготовлении вакцин. Следовательно, Л. Пастер является основоположником научной иммунологии, хотя и до него был известен метод пре¬дупреждения оспы путем заражения людей коровьей оспой, разработанный английским врачом Э. Дженнером. Однако этот метод не был распространен на профилактику других болезней.
Роберт Кох. Физиологический период в развитии микробиологии связан также с именем немецкого ученого Роберта Коха, которому при¬надлежит разработка методов получения чистых культур бактерий, окраски бактерий при микроскопии, микрофотографии. Известна также сформулированная Р. Кохом триада Коха, которой до сих пор пользуются при установлении возбудителя болезни.
2. Виды иммунитета. Приобретенный иммунитет, пассивный и активный иммунитет. Нейрогуморальные механизмы регуляции продукции антител (гипоталамо-гипофизо-адренокортикальная система).
Существуют две основные формы противоинфекционного иммунитета. Первая видовой, или врожденный (наследственный), или неспецифический, иммунитет. Вторая приобретенный, или специфический, иммунитет.
Приобретенный иммунитет отличается от видового следующими особенностями.
-Во-первых, он не передается по наследству. По наследству передается лишь ин¬формация об органе иммунитета, а сам иммунитет формируется в процессе индиви¬дуальной жизни в результате взаимодействия с соответствующими возбудителями или их антигенами.
-Во-вторых, приобретенный иммунитет является строго специфическим, т. е. все¬гда направлен против конкретного возбудителя или антигена.
Форми¬рование приобретенного специфического иммунитета происходит благодаря коопера¬тивному взаимодействию макрофагов (и других антигенпредставляющих клеток), В- и Т-лимфоцитов и при активном участии всех остальных иммунных систем.
-Активно приобретенный иммунитет, особенно постинфекционный, устанавлива¬ется спустя некоторое время после заболевания или прививки (12 нед.), сохраня¬ется долго годами, десятилетиями, иногда пожизненно (корь, оспа, туляремия).
-Пассивный иммунитет создается очень быстро, сразу после введения иммунной сы¬воротки, но зато сохраняется очень недолго (несколько недель) и снижается по ме¬ре исчезновения введенных в организм антител.

Существуют по крайней мере три системы регуляции продукции антител, или, в более широком плане, силы иммунного ответа. Одна из них действует на генетиче¬ском уровне, другая на нейрогуморальном. Не исключено, что вторая подчинена первой. Давно было замечено, что введение одного и того же антигена индуцирует у разных индивидуумов данного вида появление различного количества антител: от нуля до высокого уровня.
Вместе с тем продукция антител регулируется и симпатико-адреналовой систе¬мой. Показано, что генерализованное возбуждение медиальных зон гипоталамуса ведет к резкому усилению продукции антител. Такой же эффект вызывает гормон роста, образуемый гипофизом.
Третья система регуляции содержания антител связана с идиотип-антиидиотипическими отношениями.

3. Видовой иммунитет (резистентность). Физиологические механизмы, лежащие в основе видовой резистентности. Гуморальные факторы видового, иммунитета - комплемент, его свойства, природа, состав; пропердин.
Под видовым иммунитетом понимают невосприимчивость, обусловленную врожденными биологическими особенностями, присущими данному виду животных или человеку. В основе видового иммунитета лежат различные механизмы естественной неспецифической резистентности. Характерными особенностями ее являются наслед¬ственная передача и отсутствие специфичности. Неспецифическая видовая резистентность обусловлена целым рядом анатомо- физиологических механизмов. Схематически их можно разделить на следующие группы факторов: защитная роль кожных и слизистых покровов; нормальная мик¬рофлора макроорганизма; воспаление; лихорадка; барьерная функция лимфатичес¬ких узлов; гуморальные антимикробные вещества, содержащиеся в тканях и жидко¬стях организма; функции выделительной системы; фагоцитоз и др.

Природа и характеристика комплемента. Комплемент является одним из важных фак¬торов гуморального иммунитета, играющим роль в защите организма от антигенов. Комплемент представляет со¬бой сложный комплекс белков сыворотки крови, находящийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при соедине¬нии антигена с антителом или при агрега¬ции антигена.
1. Девять белков, составляющих собственно комплемент и обозначаемых ПОЭТО¬МУ буквой С: С1...С9, причем С1-компонент состоит из трех белковых субъединиц (С1q, С1г, С1s), все остальные представляют собой единичные белковые молекулы. В составе молекулы имеется рецептор для связывания с Рс-фрагментом молеку¬лы антитела. Антитела, относящиеся к иммуноглобулинам различных классов, вза-имодействуют с комплементами с различной степенью активности. Белки С5, С6, С7, С8 и С9 участвуют в организации мембрано-атакующего комплекса.
2. Регуляторные белки: С1Е1, С4bр, фактор Н, фактор I (инактиватор СЗb/С4b), белок S.
3. Факторы, участвующие в альтернативном пути активации системы комплемента: фактор В (протеиназа), фактор В (гликопротеин), фактор Р (пропердин) у-глобулин, его обнаружил в 1954 г. Л. Пиллемер. Этот белок, образуя комплекс с эндоток¬сином, в присутствии ионов Mg разрушает С3, поэтому был назван пропердином. Пропердин стабилизирует СЗ-конвертазу альтернативного пути


4. Комплемент, состав, основные свойства. Пути активации. Участие комплемента в реакциях иммунитета. РСК, методика ее постановки и практическое использование.
Комплемент является одним из важных фак¬торов гуморального иммунитета, играющим роль в защите организма от антигенов. Комплемент представляет со¬бой сложный комплекс белков сыворотки крови, находящийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при соедине¬нии антигена с антителом или при агрега¬ции антигена.
Состав:
1. Девять белков, составляющих собственно комплемент и обозначаемых ПОЭТО¬МУ буквой С: С1...С9, причем С1-компонент состоит из трех белковых субъединиц (С1q, С1г, С1s), все остальные представляют собой единичные белковые молекулы. В составе молекулы имеется рецептор для связывания с Рс-фрагментом молеку¬лы антитела. Антитела, относящиеся к иммуноглобулинам различных классов, вза-имодействуют с комплементами с различной степенью активности. Белки С5, С6, С7, С8 и С9 участвуют в организации мембрано-атакующего комплекса.
2. Регуляторные белки: С1Е1, С4bр, фактор Н, фактор I (инактиватор СЗb/С4b), белок S.
3. Факторы, участвующие в альтернативном пути активации системы комплемента: фактор В (протеиназа), фактор В (гликопротеин), фактор Р (пропердин) у-глобулин, его обнаружил в 1954 г. Л. Пиллемер. Этот белок, образуя комплекс с эндоток¬сином, в присутствии ионов Mg разрушает С3, поэтому был назван пропердином. Пропердин стабилизирует СЗ-конвертазу альтернативного пути.

Функции комплемента многообразны: а) участвует в лизисе микробных и других клеток (цитотоксическое действие); б) обладает хемотаксической активностью; в) принимает учас¬тие в анафилаксии; г) участвует в фагоцитозе. Следовательно, комплемент является компонен¬том многих иммунологических реакций, направ-ленных на освобождение организма от микробов и других чужеродных клеток и антигенов (на¬пример, опухолевых клеток, трансплантата).
Механизм активации комплемента представляет собой каскад фер¬ментативных протеолитических реакций, в результате которого образуется активный цитолитический комплекс, разрушающий стен¬ку бактерии и других клеток.
Известны три пути активации комплемента: классический, альтернативный и лектиновый.
По классическому пути комплемент активирует¬ся комплексом антиген-антитело. Для этого достаточно участия в связывании антигена одной молекулы IgM или двух молекул IgG.
Альтернативный путь активации комплемен¬та проходит без участия антител. Каскадная цепная реакция при аль¬тернативном пути начинается с взаимодействия антигена (например, полисахарида) с протеи¬нами В, D и пропердином (Р) с последующей активацией компонента СЗ. Далее реакция идет так же, как и при классическом пути образу¬ется мембраноатакующий комплекс.
Лектиновыи путь активации комплемента также происходит без участия антител. Он ини¬циируется особым маннозосвязывающим белком сыворотки крови, который после взаимодейс¬твия с остатками маннозы на поверхности мик¬робных клеток катализирует С4. Дальнейший каскад реакций сходен с классическим путем.

Реакция связывания комплемента.
Уникальная способность комплемента специфически связываться с различными по своей природе комплексами антиген + антитело нашла широкое применение в реакции связывания комплемента (РСК). Особое преимущество РСК состоит в том, что природа антигена, участвующего в ней (корпускулярный или раствори¬мый), не имеет значения, так как комплемент связывается с Fс-фрагментом лю¬бого антитела, относящегося к IgG и IgМ, независимо от его антительной специ¬фичности. В ее основе лежат два свой¬ства комплемента:
1)способность связываться с комплексом антиген + антитело;
2)лизирование эритроцитов, использованных для получения гемолитической сыворотки.
РСК ставят в два этапа, и в ней соответственно участвуют две системы опыт¬ная, или диагностическая, и индикаторная.
6. Антигены. Определение понятия, свойства, химическая природа. Специфичное антигенов. Детерминантная группа (эпитоп), шлеппер. Полноценные и неполноценные антигены. Гаптены и полугаптены. Факторы, определяющие антигенность белка и ее специфичность.
Антигены любые вещества, содержащиеся в микроорганизмах и других клетках или выделяемые ими, которые несут признаки генетически чуже¬родной информации и при введении в организм вызывают развитие специфи¬ческих иммунных реакций.
Реализация антигенности зависит от способности антиге¬на метаболизироваться в организме, т. е. быть объектом разрушающего действия макрофагов и взаимодействовать с другими клетками иммунной системы. Благода¬ря такому взаимодействию происходит распознавание антигенной специфичности. Все антигены обладают специфичностью, т. е. определенными особенностями, гене¬тически детерминированными и связанными с их структурой, почему они и отлича¬ются друг от друга.
Для характеристики микроорганизмов помимо родовой, видовой и групповой антигенной специфичности очень важное значение имеет определение типоспецифичности антигенов. Типоспецифичность особенность антигенного строения, которая обусловливает различия среди особей одной группы сходных организмов данного вида и позволяет выделить среди них серотипы, или сероварианты (серовары). Выявление сероваров дает возможность осуществлять очень тонкую дифферен¬циацию внутри вида микроорганизмов.
Большинство современных классификаций патогенных микроорганизмов по¬строены с учетом этих типов антигенной специфичности.
Изучение антигенных свойств различных сложных химических соединений белков, полисахаридов, липидов, нуклеиновых кислот и т. д. показало, что суще¬ствует два типа антигенов полноценные и неполноценные.
-Полноценные антигены обладают обеими функциями антигена: способностью индуцировать образование антител и специфически с ними взаимодействовать.
-Неполноценные антигены сами по себе способностью индуцировать образование антител не обладают, они приоб¬ретают это свойство только после соединения с белками или другими полноценными антигенами. Такие неполноценные антигены называются гаптенами или полугаптенами.
Неполноценные антигены обладают только од¬ним свойством антигена: они способны специфически взаимодействовать с теми антителами, в индукции синтеза которых они участвовали (после присоединения к белку и превращения в полноценные антигены).
Если взаимодействие неполноценного антигена с антителом сопровождается обычными иммунологическими реакциями, его называют гаптеном. Если неполно¬ценный антиген имеет очень небольшую молекулярную массу и его взаимодействие с антителами не сопровождается обычными видимыми реакциями, его называют полугаптеном. О присутствии полугаптена в этом случае судят по тому признаку, что антитела, будучи связаны с полугаптеном, уже не проявляют себя в обычной реак¬ции с полноценным антигеном (задерживающая реакция Ландштейнера).

7. Антигенное строение микробной клетки. Н-, О- и К-антигены, токсины и ферменты бактерий как антигены. Перекрестнореагирующие антигены. Принципы определения антигенного состава бактерий, дифференциация общих (групповых) типоспецифических антигенов.
Антигенное строение микробной клетки. Обладая слож¬ным химическим строением, бактериальная клетка представляет собой целый ком¬плекс антигенов. Антигенными свойствами обладают жгутики, капсула, клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, рибосомы и другие компоненты цитоплаз¬мы, а также различные продукты белковой природы, выделяемые бактериями во внешнюю среду, в том числе токсины и ферменты. В связи с этим различают следу¬ющие основные виды микробных антигенов: соматические, или О - антигены; жгути¬ковые, или Н-антигены; поверхностные, или капсульные К-антигены.

Видовая специфичность антигенные особенности, присущие представите¬лям данного вида. Отпечаток видовой специфичности имеют многие макромолекулы данного организма. Определение видовых антигенов может быть использовано для дифференциации особей одного вида от другого.
Групповая специфичность особенности антигенного строения, свойствен¬ные определенной группе особей внутри данного вида организмов. Групповые анти¬гены, позволяющие различать отдельных особей или группы особей внутри одного вида, называются изоантигенами.
Гетероспецифичность антигенная специфичность, обусловленная наличием общих для представителей разных видов антигенов. Гетероантигены обусловливают перекрестные иммунологические реакции.

Типоспецифичность особенность антигенного строения, которая обусловливает различия среди особей одной группы сходных организмов данного вида и позволяет выделить среди них серотипы, или сероварианты (серова- ры). Выявление сероваров дает возможность осуществлять очень тонкую дифферен-циацию внутри вида микроорганизмов.
Большинство современных классификаций патогенных микроорганизмов по¬строены с учетом этих типов антигенной специфичности.
8. Антигенное строение микробной клетки. Н-, О- и К-антигены, токсины и ферменты бактерий как антигены. Перекрестнореагирующие антигены. Принципы определения антигенного состава бактерий, дифференциация общих (групповых) типоспецифических антигенов.
Антигенное строение микробной клетки. Обладая слож¬ным химическим строением, бактериальная клетка представляет собой целый ком¬плекс антигенов. Антигенными свойствами обладают жгутики, капсула, клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, рибосомы и другие компоненты цитоплаз¬мы, а также различные продукты белковой природы, выделяемые бактериями во внешнюю среду, в том числе токсины и ферменты. В связи с этим различают следу¬ющие основные виды микробных антигенов: соматические, или О - антигены; жгути¬ковые, или Н-антигены; поверхностные, или капсульные К-антигены.
Видовая специфичность антигенные особенности, присущие представите¬лям данного вида. Отпечаток видовой специфичности имеют многие макромолекулы данного организма. Определение видовых антигенов может быть использовано для дифференциации особей одного вида от другого.
Групповая специфичность особенности антигенного строения, свойствен¬ные определенной группе особей внутри данного вида организмов. Групповые анти¬гены, позволяющие различать отдельных особей или группы особей внутри одного вида, называются изоантигенами.
Гетероспецифичность антигенная специфичность, обусловленная наличием общих для представителей разных видов антигенов. Гетероантигены обусловливают перекрестные иммунологические реакции.

Типоспецифичность особенность антигенного строения, которая обусловливает различия среди особей одной группы сходных организмов данного вида и позволяет выделить среди них серотипы, или сероварианты (серова- ры). Выявление сероваров дает возможность осуществлять очень тонкую дифферен-циацию внутри вида микроорганизмов.
Большинство современных классификаций патогенных микроорганизмов по¬строены с учетом этих типов антигенной специфичности.


9. Иммунные сыворотки, их назначение, способы получения. Приготовление диагностических агглютинирующих сывороток и их практическое применение.
--В диагностике инфекционных болезней широко применя¬ются иммунные реакции при идентификации возбудителя: при установлении родовой, видовой и типовой принадлежности микроба (вируса). Для постановки таких реакций необходимы специфические диагностические сыворотки, которые в зависи¬мости от содержания соответствующих антител называются агглютинирующие, преципитирующие, гемо-литические, противовирусные.
--Иммунные сыворотки получают путем гипе¬риммунизации животных (ло¬шади) специфическим антигеном (анатоксином, бактериальными или вирусными культурами и их антигенами) с пос¬ледующим, в период максимального антителообразования, выделением из крови иммунной сыворотки. Иммунные сы¬воротки, полученные от животных, называют гетерогенными, так как они содержат чужерод¬ные для человека сывороточные белки.
Для получения гомологичных нечужеродных иммунных сывороток используют сы¬воротки переболевших людей (коревая, оспенная сыворотки) или специ¬ально иммунизированных людей-доноров (противостолбнячная, противоботулиническая), содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакци¬нации или перенесенного заболевания.
Нативные иммунные сыворотки содержат ненужные белки (альбумин), из этих сывороток выделяют и подвергают очистке специфические белки- иммуноглобулины. Методы очистки: осаждение спиртом, ацетоном на холоде, обработка ферментами.
Агглютинирующие сыворотки. Агглютинирующую сыворотку получают иммунизацией Кроликов (внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно) взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 78 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител. Титром агглютини¬рующей сыворотки называется то макси¬мальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствую¬щим микроорганизмом.
Агглютинирующие сыворотки применяются при идентифи¬кации микроба в развернутой реакции агглютинации.
Недостатком таких сывороток является то, что они способ¬ны давать групповые реакции агглютинации, так как они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода.
Поэтому в настоящее время большинство агглютинирую¬щих сывороток выпускаются адсорбированиими, монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содер¬жащими только типовые или видовые антитела и соответст¬вующими или определенному типу или виду микроорганизма. Эти сыворотки не подлежат разведению.

10. Структура молекулы антитела. Константные и вариабельные участки легких и тяжелых полипептидных цепей, определяемые ими свойства антител. Классы и типы иммуноглобулинов.
Антитела являются уникальными сывороточными белками глобулинами.
Совокупность сывороточ¬ных белков, обладающих свойствами антител, называют иммуноглобулинами и обозначают символом Ig.
Основная структурная единица молекулы иммуноглобулина состоит из двух идентичных полипептидных L-цепей и двух идентичных Н-цепей. Эти четыре цепи ковалентно связаны дисульфидными связями.
Существуют легкие цепи двух ти¬пов - каппа (х) и - лямбда (л).
Идентифи¬цировано пять классов тяжелых цепей, их обозначают греческими буквами: альфа (а), гамма (у), эпсилон (е), мю (ц) и дельта (8). Соответственно обозначению тяже¬лой цепи обозначается и класс молекул иммуноглобулинов.
Для выяснения природы специфичности антител большое значение имело изуче¬ние аминокислотной последовательности L- и Н-цепей. Все легкие цепи состоят из двух почти равных областей, по 110112 аминокислотных остатков каждая. Первые 110 ( из 214220) аминокислотных остатков очень изменчивы, т. е. со¬ставляют вариабельную (V) область, а остальные 110 остатков у данного вида всегда постоянны, составляя константную (С) область L-цепи. Тяжелая цепь также состоит из вариабельной области (Vн), включающей около 110 аминокислотных остатков, и константной части (Сн).
Существует пять различных классов иммуногло¬булинов: IgG, IgМ, IgА, IgЕ, IgD Они различаются по молекулярной массе, содержа¬нию углеводов, составу полипептидных цепей, коэффициентам седиментации и дру¬гим характеристикам.

11. Антитоксины, их свойства, механизм действия. Значение антитоксинов в формировании иммунитета. Получение и титрование антитоксических сывороток, применение в медицинской практике.
Экзотоксины являются сильными антигенами, а некоторые даже суперантигенами. Они индуцируют образование в организме антител, т. е. антитоксинов, которые нейтрализуют их действие. При обра¬ботке формалином экзотоксины обезвреживаются и превращаются в анатоксины. Анатоксины лишены токсических свойств, но сохраняют свою способность индуциро¬вать синтез антитоксинов, поэтому широко используются для создания искусственно¬го иммунитета против дифтерии, столбняка, ботулизма и других заболеваний.

Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Ме¬ханизм. Способы постановки, применение.
В основе этой реакции лежит способность специфической ан¬титоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин.
Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувст¬вительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.
Реакцию нейтрализации проводят путем введения смеси антигенантитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микро¬организмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализу¬ющем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о спе¬цифичности взаимодействия комплекса антигенантитело.
Для прове¬дения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свин-кам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследу¬емого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сыво¬роткой, животные опытной группы останутся живыми. Конт¬рольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.
12. Иммунитет. Выработка антител по типу первичного и вторичного иммунного ответа. Образование клеток иммунологической памяти.
Иммунитет – это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ – антигенов экзогенного и эндогенного происхождения, направленный на поддержание и сохранение гомеостаза, структурной и функциональной целостности организма, биологической (антигенной) индивидуальности каждого организма и вида в целом.
Выработка антител по первичному и вторичному иммунному ответу.
Различают два варианта выдачи иммунного ответа в форме биосинтеза антител: первичный ответ после первой встречи организма с данным антигеном, и вторич¬ный ответ при повторном контакте его с одним и тем же антигеном спустя 23 не¬дели.
-Первичный иммунный ответ. 1) Биосинтез антител начинается не сразу после контакта с антигеном, а после некоторого латентного периода, продолжающегося 35 дней. В течение этого периода происходит процесс распознавания антигена и формирования клеток, которые способны синтезировать антитела к нему; 2) ско¬рость синтеза антител относительно невелика; 3) титры синтезируемых антител не достигают максимальных значений; 4) первыми синтезируются антитела, относя¬щиеся к иммуноглобулинам класса IgМ, затем IgG. Позже всех появляются, да и то не во всех случаях, IgА и IgЕ.
-Вторичный иммунный ответ.
1) Латентный период очень непродолжитель¬ный, в пределах нескольких часов;
2) кривая, характеризующая скорость накопления антител, идет значительно круче вверх, чем при первичном ответе, и имеет логариф¬мический характер;
3) титры антител достигают максимальных значений;
4) синте¬зируются сразу антитела, относящиеся к классу IgG.
Вторичный иммунный ответ обусловлен формированием клеток иммунной памяти.
Иммунная память на клеточном уровне это результат генерации особых антиген- специфических популяций Т- и В-клеток памяти. Она проявляется как в отношении выработки антител, так и в отношении других форм иммунного ответа и может сохраняться долгое время.
Клетки памяти представляют собой ту часть Т- и В-антигенстимулированных лимфоцитов, которые после 23 делений переходят в покоящееся состояние и дли¬тельное время рециркулируют в организме.
13. Современные теории, объясняющие происхождение и специфичность антител. Клонально-селективная теория и ее основные предпосылки. Особенности генетического контроля биосинтеза антител.
Антитела являются уникальными сывороточными белками глобулинами, ко¬торые вырабатываются в ответ на поступление в организм антигена и способны с ним специфически взаимодействовать. Совокупность сывороточ¬ных белков, обладающих свойствами антител, называют иммуноглобулинами и обозначают символом Ig
Уникальность антител заключается в том, что они способны взаимодействовать только с тем антигеном, который индуцировал их образование.
Антите¬ла это белки, а синтез каждого белка запрограммирован соответствующим геном.
Схе¬матически полный ген L-цепи иммуноглобулинов: L (область, коди рующая лидерный пептид, необходимый для секреции иммуноглобулинов из клетки) интрон V-ген интрон -J-ген интрон С-ген.
Схе¬матически полный ген Н-цепи иммуноглобулинов: L-ген интрон V-ген интрон D-ген интрон J-ген интрон С-ген.
Точки объединения зародышевых генов строго не фиксированы. Это увеличива¬ет количество возможных вариантов полипептидных цепей, а в том случае, когда они участвуют в формировании активных центров, то и их разнообразия. Кроме то¬го, в период созревания В-лимфоцитов в V-генах происходят точечные соматичес¬кие мутации, которые окончательно подгоняют структуру активного центра антите¬ла к структуре детерминанта антигена. Считается, что общее количество вариантов антител возрастает за счет неточности сплайсинга и соматических мутаций еще в 100 раз и составляет около 2 млрд:
Таким образом, приобретенный иммунитет может быть обеспечен к любому воз¬будителю, к любому возможному чужеродному антигену. Решающий вклад в обеспе¬чение многообразия иммуноглобулинов (специфичности антител) вносят следую¬щие механизмы:
1. наличие множества зародышевых генов иммуноглобулинов;
2. внутригенные рекомбинации, обусловленные экзон-интронной структурой V-, D-,J-, С-генов;
3. ассоциация различных L-цепей с различными Н-цепями;
4. неточность сплайсинга;
соматические мутации V-генов в зрелых В-лимфоцитах.
14. Центральные и периферические органы иммунитета. Основные формы иммунного ответа. Роль антител в формировании иммунитета. Полные и неполные антитела методы их обнаружения.

-Центральные органы иммунитета. К ним относятся костный мозг, тимус (вилочковая железа), сумка Фабрициуса у птиц, печень у млекопитающих.
-Периферические отделы иммунной системы. К ним относятся: селезенка, лимфатические узлы, лимфоидные ткани желудоч¬но-кишечного тракта (пейеровы бляшки и солитарные фолликулы), а также кровь и лимфа, в которые поступают и непрерывно в них циркулируют все иммунокомпетентные клетки. В селезенке содержится больше всего плазматических клеток, воз¬никающих в результате дифференцировки из В-лимфоцитов и являющихся основ¬ными продуцентами антител.
-Формы иммунного ответа: биосинтез антител, образование клеток иммунной памяти, реакция ги-перчувствительности немедленного типа, реакция гиперчувствительности замед¬ленного типа (в том числе трансплантационный иммунитет), иммунологическая то¬лерантность, идиотип-антиидиотипические отношения.

Благодаря своей способности специфически взаимодействовать с бактериальны¬ми клетками и продуктами их жизнедеятельности, в том числе с токсинами и фер¬ментами, а также с другими микроорганизмами, антитела играют важную роль в формировании приобретенного постинфекционного, поствакцинального и пассив¬ного иммунитета. Эта их роль заключается в том, что связываясь с токсинами, они нейтрализуют их действие и обеспечивают формирование антитоксического имму¬нитета. Связываясь с вирусами, особенно блокируя рецепторы, с помощью которых они адсорбируются на клетках, антитела создают иммунитет против вирусов. Обра¬зование комплекса антитело + антиген запускает классический путь активации си-стемы комплемента со всеми его эффекторными последствиями (лизис бактерий, опсонизация, формирование очага воспаления, стимуляция системы макрофагов). Антитела, взаимодействуя с бактериями, опсонизируют их, т. е. делают их фагоци¬тоз более эффективным. В результате взаимодействия антител с растворимыми ан¬тигенами, выделяющимися в кровь, образуются так называемые циркулирующие иммунные комплексы, с помощью которых антигены выводятся из организма, в ос¬новном, желчью и мочой.

Cуще¬ствует два типа антигенов полноценные и неполноценные.
-Полноценные антигены обладают обеими функциями антигена: способностью индуцировать образование антител и специфически с ними взаимодействовать.
-Неполноценные антигены сами по себе способностью индуцировать образование антител не обладают, они приоб¬ретают это свойство только после соединения с белками или другими полноценными антигенами. Такие неполноценные антигены называются гаптенами или полугаптенами.
Неполноценные антигены обладают только од¬ним свойством антигена: они способны специфически взаимодействовать с теми антителами, в индукции синтеза которых они участвовали (после присоединения к белку и превращения в полноценные антигены).
Если взаимодействие неполноценного антигена с антителом сопровождается обычными иммунологическими реакциями, его называют гаптеном. Если неполно¬ценный антиген имеет очень небольшую молекулярную массу и его взаимодействие с антителами не сопровождается обычными видимыми реакциями, его называют полугаптеном. О присутствии полугаптена в этом случае судят по тому признаку, что антитела, будучи связаны с полугаптеном, уже не проявляют себя в обычной реак¬ции с полноценным антигеном (задерживающая реакция Ландштейнера).

15. Роль тимуса в иммунитете. Механизм дифференциации стволовых клеток в тимусе в иммунокомпетентные лимфоциты. Система Т-лимфоцитов: Т-киллеры, помощники, Т-супрессоры, Т-контрсупрессоры, их функции.
Клетки, являющиеся предшественниками Т-лимфоцитов, поступают из кровотока в тимус, где и происходит их превращение в иммунокомпетентные Т-лимфоциты под влиянием гуморальных факторов, секретируемых эпителиальными клетками тимуса; затем они покидают его и циркулируют по лимфатической и кровеносной системам, а также расселяются по лимфоидным образованиям организма.
Установлено, что для приобретения иммунокомпетентности клетки необязатель¬но должны вступать в непосредственный контакт с тканью тимуса.
Решающая роль в дифференцировке предшественников Т-лим¬фоцитов в иммунокомпетентные клетки принадлежит гуморальным факторам, об¬разуемым тимусом.
Гуморальные факторы тимуса делят на продукты лимфоидных и продукты нелимфоидных (эпителиальных) клеток.
По характеру действия на Т-клетки гуморальные факторы тимуса делят на фак¬торы активации, дифференцировки и размножения. Помимо этого, к числу важней¬ших свойств пептидов тимуса относится их способность активировать продукцию лимфокинов; некоторые тимозины, а также сывороточный тимусный фактор усили¬вают продукцию Т-клетками интерлейкина-2.
Тимус играет важнейшую роль не только в функционировании иммунной систе¬мы и регуляции иммунного гомеостаза, но и опосредует взаимодействие иммунной системы с другими важнейшими системами организма.
По морфологическим свойствам Т- и В-лимфоциты не отличаются друг от друга. Однако они существенным образом различаются по вкладу в реакции иммунитета, по многим другим свойствам, в том числе структуре и функции рецепторов и по ан¬тигенной специфичности.
Самый ответственный момент в процессе иммунного ответа это распознавание химического маркера, свойственного «чужому» агенту и отличающегося от «своего». Эту роль выполняют макрофаги, антитела, Т- и В-лимфоциты. Антитела распознают антиген с помощью своих активных центров, а макрофаги, Т- и В-лимфоциты благодаря имеющимся на их мембранах особым рецепторам.
Т-лимфоциты по своим функциям разделены на три суб¬класса:
-Т-хелперы, или Т-помощники;
-Т-киллеры, или Т-цитотоксические лимфоциты;
-Т-супрессоры.
Т-хелперы необходимы для превращения В-лимфоцитов в антителообразующие клетки и клетки памяти. Т-киллеры разрушают клетки трансплантата, опухолевые клетки и клетки, инфицированные вирусными, бактериальными и другими антиге¬нами. Т-супрессоры подавляют функции определенных эффекторных Т- и В-клеток и обеспечивают иммунологическую толерантность.

16. Происхождение и пути дифференцировки клеток-эффекторов иммунной системы. Лимфокины, их роль в иммунитете.
Не все индуцированные антигеном В-лимфоциты подвергаются дифференцировке до конца. Часть из них после нескольких циклов деления перестает размножать¬ся и образует субклон клеток памяти (из одной В-клетки образуется около 1000 кле¬ток памяти, таким же образом образуются клетки памяти и из Т-лимфоцитов). Клетки памяти определяют продолжительность приобретенного иммунитета. При повторном контакте с данным антигеном они быстро превращаются в клетки-эф¬фекторы. При этом В-клетки памяти обеспечивают синтез антител в более короткие сроки, в большем количестве и с более высоким сродством антител другого класса иммуноглобулинов IgG вместо IgМ.
Таким образом, наиболее важными событиями дифференцировки В-лимфоцитов являются: 1) сборка гена иммуноглобулина из его фрагментов, содержащихся в ДНК эмбриональных клеток; 2) формирование пула клеток памяти; 3) возникновение но¬вых вариантов генов в результате дополнительных класс-переключающих реком¬бинаций; 4) вспышка соматических мутаций на строго определенной стадии диффе-ренцировки. В результате этих событий происходит образование множества генети¬чески стабильных клонов антителообразующих клеток (вероятно, не менее чем 108).

Происхождение и дифференцировка Т- и В-лимфоцитов и макро¬фагов из исходных стволовых клеток.
В соответствии с этой схемой, исходная костно-мозговая клетка (НSС) генериру¬ет два типа предшественников: лимфоидную стволовую клетку (LSС), от которой происходят клетки-предшественники Т-лимфоцитов (РТС), клетки-предшественни¬ки В-лимфоцитов (РВС); и клетку, являющуюся предшественником клеток красной крови, от которой, в свою очередь, происходит предшественник лейкоцитов (СFUс) и берет начало система мононуклеарных макрофагов. Предшественники Т-лимфоцитов под влиянием тимуса превращаются в Т-лимфоциты и их субклассы.
В целом система В-лимфоцитов обеспечивает синтез антител, отвечает за имму¬нитет против большинства бактериальных и вирусных инфекций, анафилаксию и другие реакции гиперчувствительности немедленного типа, некоторые аутоим¬мунные болезни, за формирование клеток иммунной памяти и иммунологическую толерантность.
Система Т-лимфоцитов играет регуляторную роль по отношению к В лимфо¬цитам, отвечает за все реакции гиперчувствительности замедленного типа, имму¬нитет против вирусных и некоторых бактериальных инфекций (туберкулез, бру¬целлез, туляремия и др.), осуществляет иммунологический надзор, отвечает за противоопухолевый иммунитет, иммунологическую толерантность, некоторые виды иммунопатологии.
Вместе с тем Т- и В-клетки являются двумя частями единой иммунной системы организма. Поэтому деление иммунитета на гуморальный и клеточный носит весь¬ма условный характер, так как антитела синтезируются
В-клетками. а Т-лимфоциты и другие клетки осуществляют свою иммунокомпетентность через синтезируемые ими гуморальные факторы (цитокины, лимфокины, интерлейкины и др.).
Координированное взаимодействие макрофагов, Т- и В-лимфоцитов при встрече с антигеном обеспечивает выдачу адекватного иммунного ответа.

17. Определение понятия иммунитет. Феномен бласттрансформации как пример распознавания генетически отличающихся клеток лимфоцитами и превращения их клетки-эффекторы.

Иммунитет – это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ – антигенов экзогенного и эндогенного происхождения, направленный на поддержание и сохранение гомеостаза, структурной и функциональной целостности организма, биологической (антигенной) индивидуальности каждого организма и вида в целом.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ). В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов перифери¬ческой крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их in vitro под действием специфических фак¬торов аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и другие вещества).


18. Система В-лимфоцитов, их происхождение, основные свойства, природа специфических рецепторов. Превращение В-лимфоцитов в антителообразующие клетки.
B-лимфоциты – преимущественно эффекторные иммунокомпетентные клетки. Зрелые В-лимфоциты и их потомки – плазматические клетки являются антителопродуцентами. Их основными продуктами являются иммуноглобулины. В-лимфоциты участвуют в формировании гуморального иммунитета, В-клеточной иммунологической памяти и гиперчувствительности немедленного типа.
В-лимфоциты помимо антигенов Lу, общих с Т-лимфоцитами, имеют свойственные только им антигены Lyb. В-лимфоциты подраз¬деляют на Lyb5+, т. е. имеющие этот антиген, и Lyb5- .
В-лимфоциты Lyb5- и Lyb5+ отличаются по условиям своей активации. В связи с этим В-лимфоциты подразделяют на три основные субпопуляции:
1. Клетки В-1а (СД5+), первыми появляющиеся в онтогенезе.
2. Клетки В-1b (СД5-). Клетки этих двух субпопуляций продуцируют НИГ.
3.Клетки В-2, которые впоследствии дифференцируются в АОК и играют веду¬щую роль в формировании приобретенного специфического иммунитета.
Помимо, существуют также В-супрессоры и В-киллеры. В-супрессоры выполняют такую же роль, как и Т-супрессоры. В-киллеры взаимодействуют с Fс-фрагментами IgG, фиксированных на клетках трансплантата, и разрушают их.
В ходе своего созревания (от эмбриональной клетки до рождения), а также по¬сле рождения В-лимфоциты подвергаются дифференцировке, биологический смысл которой состоит в создании клона клеток, синтезирующих и секретирующих антите¬ла, специфически взаимодействующие с данным антигеном.
Процесс созревания В-лимфоцитов включает в себя две стадии:
1. Антигеннезависимую, которая происходит в эмбриональном периоде.
2. Антигензависимую, которая происходит после рождения и наступает только после встречи с соответствующим антигеном.


19. И. И. Мечников и его учение о невосприимчивости к инфекционным болезням Клеточная теория иммунитета Мечникова в свете современных данных. Роль макрофагов в иммунном ответе. Механизм кооперативного взаимодействия Т-лимфоцитов и макрофагов в распознавании антигена.
И. И. Мечников, изучая воспалительные процессы у различных групп животных, обратил внимание на то, что вводимое в их организм инородное тело всегда окружа¬лось подвижными амебовидными клетками мезодермы, способными его заглаты¬вать. Такие клетки являются непременными участниками воспалительных процес¬сов как у животных, имеющих кровеносную систему, так и у организмов, лишенных ее. Процесс поглощения чужеродных элементов этими клетками И. И. Мечников на¬звал фагоцитозом, а сами клетки фагоцитами. Изучив подробно фагоцитоз, И. И. Мечников показал, что у простейших он служит целям питания, а у многоклеточных целям их защиты.
И. И. Мечников выступил с докладом «О целебных свойствах организма», в котором сообщил, что «подобные клетки (фагоциты) должны служить в организме для противодействия вредным деятелям». В последующем И. И. Мечников и его сотрудники обстоятельно изучили фагоцитарную реакцию у млекопитающих и, наконец, у человека. Так была создана фагоцитар¬ная теория иммунитета, и целебные силы организма впервые были связаны с со¬зданной самой природой для этих целей системой особых клеток фагоцитов.
За короткий срок учение о невосприимчивости к инфекционным болезням до¬стигло расцвета. В это время И. И. Мечников дал следующее определение понятия иммунитета. «Под невосприимчивостью к заразным болезням надо понимать общую систему явлений, благодаря которым организм может выдерживать нападение болезнетворных микробов. В настоящее время невозможно дать более точное определение, так что бесполезно настаивать на этом».

Макрофагам принадлежит исключительно важная роль в обеспечении защитных реакций. Основные Функции, посредством которых они выполняют эту роль, могут быть разделены на четыре типа:
1) Хемотаксис.
2) Фагоцитоз.
3) Секреция биологически активных соединений.
4) Переработка антигена (процессинг) и представ¬ление его с участием белков МНС класса II иммунокомпетентным клеткам, принимающим участие в форми¬ровании иммунного ответа (кратко процессинг и представление антигена).

Форми¬рование приобретенного специфического иммунитета происходит благодаря коопера¬тивному взаимодействию макрофагов (и других антигенпредставляющих клеток), В- и Т-лимфоцитов и при активном участии всех остальных иммунных систем.
Самый ответственный момент в процессе иммунного ответа это распознавание химического маркера, свойственного «чужому» агенту и отличающегося от «своего». Эту роль выполняют макрофаги, антитела, Т- и В-лимфоциты. Антитела распознают антиген с помощью своих активных центров, а макрофаги, Т- и В-лимфоциты благодаря имеющимся на их мембранах особым рецепторам.
Т-хелперы необходимы для превращения В-лимфоцитов в антителообразующие клетки и клетки памяти. Т-киллеры разрушают клетки трансплантата, опухолевые клетки и клетки, инфицированные вирусными, бактериальными и другими антиге¬нами. Т-супрессоры подавляют функции определенных эффекторных Т- и В-клеток и обеспечивают иммунологическую толерантность.
20. Роль макрофагов в иммунитете.
Макрофагам принадлежит исключительно важная роль в обеспечении защитных реакций. Основные Функции, посредством которых они выполняют эту роль, могут быть разделены на четыре типа:
1) Хемотаксис.
2) Фагоцитоз.
3) Секреция биологически активных соединений.
4) Переработка антигена (процессинг) и представ¬ление его с участием белков МНС класса II иммунокомпетентным клеткам, принимающим участие в форми¬ровании иммунного ответа (кратко процессинг и представление антигена).
21. Роль фагоцитоза в защитных реакциях организма. Механизм и фазы фагоцитарного процесса. Завершенный и незавершенный фагоцитоз. Мононуклеарная фагоцитарная система. Опсонины.
Фагоцитоз это уничтожение чужеродного объекта и представление антигена для запуска цепи иммунных реакций, приводящих к формированию иммунитета. Функция фагоцитоза является центральной, посколь¬ку она запускает секрецию обширного круга биологически активных веществ широ¬кого спектра действия, в том числе медиаторов иммунного ответа, реакции воспале¬ния, а также обеспечивает процессинг и представление антигена.

Процесс фагоцитоза складывается из следующих этапов:
1) продвижение фагоцита к объекту фагоцитоза, например к бактериальной клетке;
2) прилипание бактерии к фагоциту;
3) поглощение бактериальной клетки;
4) исход фагоцитоза. Энергия, необхо¬димая для поглощения макрофагами чужеродных частиц, обеспечивается благодаря гликолизу. Агенты, угнетающие гликолиз, резко подавляют фагоцитоз.
Возможны три исхода фагоцитоза:
1) полное внутриклеточное переваривание микробных кле¬ток завершенный фагоцитоз;
2) приживление и активное размножение бактерий внутри фагоцита незавершенный фагоцитоз;
3) выталкивание микробов из фагоцитов обратно в окружающую среду. Незавершенный фагоцитоз часто на¬блюдается при вяло и длительно протекающих инфекционных болезнях и служит одной из причин хрониосепсиса.

Одним из мощных факторов резистентности является фагоцитоз. И. И. Мечников установил, что фагоцитарными свойствами обладают зернистые лейкоциты крови и лимфы, главным образом полиморфно-ядерные нейтрофилы (микрофаги), а также моноциты и различные клетки ретикулоэндотелиальной системы, которые он назвал макрофагами. В настоящее время под макрофагами понимают клетки, которые обла¬дают высокой фагоцитарной активностью. Они различаются по форме и размерам, в зависимости от тканей, где они обнаруживаются. По классификации ВОЗ (1972), все макрофаги объединены в систему мононуклеарных фагоцитов.


22. Реакция гиперчувствительности немедленного типа. Анафилаксия, ее обусловленность веществами антигенной природы. Условия, определяющие возможность развития анафилаксии и ее механизм. Способы предупреждения анафилактической реакции.
К реакциям гиперчувствительности немедленного типа (ГЧН) относятся: сыво¬роточная анафилаксия, лекарственная анафилаксия, сывороточная болезнь, сен¬ная лихорадка, бронхиальная астма, крапивница и другие аллергические реакции, в том числе к таким аллергенам, как пыльца некоторых растений, красители, шерсть и т. п. В их основе лежат общие механизмы, которые лучше всего изучены при анафилаксии.
Реакции анафилаксии, как и другие реакции гиперчувствительности немедленно¬го типа, являются иммунологически специфичными и проявляются в отношении то¬го антигена, к которому организм сенсибилизирован. Для возникновения состояния сенсибилизации достаточно введения очень малых доз антигена (аллергена). Состояние повышенной чувствительности развива¬ется через 714 дней после введения антигена и сохраняется месяцами и годами. Для его выявления вводят внутривенно вторую, разрешающую дозу антигена. Если разрешающую дозу ввести не внутривенно, а внутрикожно, то развивается местная анафилаксия (феномен Артюса). Она характеризуется появлением через 3060 мин на месте введения отека и развитием гиперемии. В последующем воспалительный очаг уплотняется, подвергается некрозу и рубцеванию.
Реакция анафилаксии характеризуется следующими особенностями: иммуноло¬гической специфичностью, немедленностью проявления (анафилактический шок развивается через несколько минут после введения разрешающей дозы) и опосредо- ванностью антителами.
В развитии анафилаксии можно выделить следующие три стадии: 1) иммуноло¬гическую, 2) патохимическую и 3) патофизиологическую. Иммунологическая стадия, которая определяет специфичность анафилаксии, характеризуется взаимо¬действием антигена с антителом, фиксированным на клетках сенсибилизированного организма. Для патохимической стадии характерна активация протеолитических ферментов, в результате действия которых из клеток высвобождаются биологичес¬ки активные вещества. В настоящее время известно более 30 таких веществ, участву¬ющих в механизме развития анафилаксии, однако основная роль принадлежит гистамину, серотонину, брадикинину и лейкотриенам. Патофизиологическая стадия развивается в результате действия биологически активных веществ на различные системы органов, в особенности на гладкую мускулатуру. Наблюдающееся в резуль¬тате такого воздействия сокращение гладких мышц определяет клиническую карти¬ну анафилактического шока, у человека страдает сердечно-сосудистая система. К наиболее характерным симптомам анафилактического шока относятся: гипотония, учащение мочеиспуска¬ния и дефекации, отек, лейкопения, тромбоцитопения, снижение титра комплемен¬та, понижение свертываемости крови и температуры тела.
В развитии кожной реакции, выявляющей гиперчувствительность немедленною типа, преобладающую роль играют полиморфно-ядерные лейкоциты.
--Механизм анафилаксии. Основную роль в механизме анафилаксии и других реакций гиперчувствительно-сти немедленного типа играет процесс взаимодействия с антигеном антител, фикси¬рованных на клетках, которые в результате этого взаимодействия высвобождают биологически активные вещества. Клетками, способными высвобождать медиаторы данного типа повышенной чувствительности явля¬ются мастоциты и базофилы. Мастоциты находятся в соединительной ткани почти всех органов. В самом общем виде механизм анафилаксии может быть описан следующим об¬разом. Введение сенсибилизирующей дозы антигена индуцирует образование специ¬фических антител, в том числе относящихся к классу IgЕ. Благодаря своей цитофильности последние фиксируются на поверхности тучных клеток и базофилов. Этот процесс и лежит в основе сенсибилизации организма к данному антигену. Попадая повторно в организм, он распознается антителами, фиксированными на клетках, и быстро вступает во взаимодействие с ними. Следствием этого является активация протеаз клеток, в результате которой высвобождаются медиаторы, опо¬средующие патофизиологическую основу анафилактического шока.
Развитие анафилактического шока можно предупредить с помощью различных лекарственных препаратов, например атропина, димедрола, эфирного наркоза, а также других веществ с различным механизмом действия (сапонин, желчно-кислотные соли и т. п.). Вместе с тем установлено, что если животное благополучно пере¬несло анафилактический шок, оно утрачивает на некоторое время (23 нед.) чув-ствительность к данному антигену. Такое же состояние десенсибилизации может быть достигнуто путем введения сенсибилизированному животному небольших раз¬решающих доз специфического антигена. В связи с этим А. М. Безредка предложил для предупреждения сывороточного анафилактического шока перед введением большой дозы сыворотки вводить сначала небольшую ее часть (0,5-1,0 мл) под¬кожно или несколько более мелких, но постепенно возрастающих доз внутривенно с интервалом 1530 мин.
23. Реакции гиперчувствительности замедленного типа, их отличия от реакций: гиперчувствительности немедленного типа. Основные клетки - эффекторы реакций гиперчувствительности замедленного типа и трансплантационного иммунитета, их специфические рецепторы. Роль лимфокинов.
Этот тип гиперчувствительности возникает при многих инфекционных болезнях, например при туберкулезе, бруцеллезе, дизентерии, токсоплазмозе, некоторых гельминтозах, микозах и т. д., и выявляется с помощью соответствующих кожных реакций, которые служат специфическими диагностическими пробами. Состояние гиперчувствительности замедленного типа могут индуцировать различные лекар¬ственные препараты, красители, антисептики и другие аллергены. К аллергенам ор¬ганической и неорганической природы, имеющим низкую молекулярную массу, но обладающим способностью соединяться с белками кожи и слизистых оболочек (т. е. являющимся гаптенами), нередко возникает так называемая контактная ал-лергия. Сенсибилизация формируется в результате длительного контакта с такими веществами и проявляется в местных изменениях на коже и слизистых оболочках. Наиболее типичным примером повышенной чувствительности замедленного типа является аллергическая реакция кожи больных туберкулезом людей и животных на туберкулин. К реакциям гиперчувствительности замедленного типа относится также трансплантационный иммунитет.
Гистологическая картина местных проявлений гиперчувствительно¬сти замедленного действия отличается от таковой при повышенной чувствительно¬сти немедленного типа тем, что в очаге реакции преобладают лимфоциты и моноци¬ты.

Главное отличие реакций ГЗТ от реакций ГНТ заключается в том, что они опосредуют¬ся не антителами, а сенсибилизированными клетками Т-лимфоцитами, т. е. лим¬фоцитами, которые прошли иммунологическое «обучение» в тимусе. Т-лимфоциты несут на своей поверхности различные специфические рецепторы, с помощью которых распознают самые различные чужеродные вещества, в том числе трансплантационные антигены, и способны с ними взаимодействовать. Все типы реакций гиперчувстви¬тельности замедленного действия характеризуются общностью иммунологических механизмов, в которых главными действующими агентами являются лимфоциты и продуцируемые ими гуморальные факторы.
Опосредуемость этих реакций лимфо¬цитами подтверждается многими феноменами среди которых в первую очередь можно выделить следующие три:
1)Состояние повышенной чувствительности замедленного типа можно передать от донора другому организму, но только путем введения последнему от сенсибили¬зированного организма его лимфоцитов, а не антител.
2) В отличие от пассивного, такой тип иммунного состояния, передаваемого не сывороткой, а лимфоцитами, получил название адоптивного, т. е. присвоенного. Например, если от сенсибилизированного туберкулином животного передать внутривенно или внутрибрюшинно лимфоидные клетки здоровому животному, то оно будет отвечать на введение туберкулина положительными кожными реакциями гиперчувствитель¬ности замедленного типа.
3) Реакции гиперчувствительности замедленного типа можно подавить или осла¬бить, если перед введением разрешающей дозы аллергена ввести антилимфоцитарную сыворотку.
С реакцией ГЧЗ хорошо коррелирует способность сенсибилизированных Т-лимфоцитов синтезировать различные медиаторы - лимфокины, в том числе фактор, ингибирующий миграцию макрофагов (ФИМ).
Т-лимфоциты, участвующие в реак¬циях гиперчувствительности замедленного типа, обозначают как Тгчз. они имеют обычно фенотип Lyt-1-2+, т. е. обладают специфическими рецепторами, с помощью которых осуществляют свои функции. Таким образом, можно считать окончательно установленным, что реакция ГЧЗ является одной из форм иммунного ответа, опосредуемого сенсибилизированными Т-лимфоцитами (Тгчз) и выявляемого в виде характерного воспаления; в месте введения (обычно в коже) антигена, который индуцировал ее развитие.

24. Трансплантационный иммунитет и его механизм. Феномен инактивации несингенных стволовых клеток и его роль в поддержании генетического гомеостаза.
Под трансплантационным иммунитетом понимают отторжение генетически от¬личающегося от хозяина трансплантата. Хотя по отношению к антигенам транс¬плантата организм также может вырабатывать антитела, главная роль в механизме трансплантационного иммунитета, как и всех реакций гиперчувствительности за¬медленного типа, принадлежит популяции Т-лимфоцитов, которые получили назва¬ние Т-цитотоксических лимфоцитов, или Т-киллеров.
Ведущая роль лимфоцитов в реакциях трансплантационного иммунитета подтверждается следующими феноме¬нами:
1)Феномен «трансплантат против хозяина». Клетки лимфоидной ткани, переса¬женные в генетически отличающийся организм, продолжают вести себя так же, как и в собственном организме, в соответствии со своей главной функцией они распо¬знают клетки нового хозяина как генетически чужеродные, атакуют и разрушают их.
2)Трансфер-реакция (местное проявление реакции «трансплантат против хозяи¬на»), Суть этого явления в том, что если организму, который был предварительно сенсибилизирован трансплантатом аллогенного донора, ввести внутрикожно лим¬фоциты того же донора, через 2448 ч на месте введения наблюдается кожная реак¬ция, аналогичная туберкулиновой. Подобная реакция может быть воспроизведена, хотя и не в столь резкой форме, при внутрикожном введении и неиммунных лимфо¬цитов, но обязательно от генетически чужеродного донора.
В основе этой реакции лежит все то же свойство Т-лимфоцитов способность распознавать чужеродные антигены и реагировать на них. Из экстрактов сенсибили¬зированных Т-лимфоцитов выделен фактор переноса гиперчувствительности замед¬ленного типа трансфер-фактор.
Цитотоксические Т-лимфоциты относятся к субпопуляции, несущей специфиче¬ские рецепторы Lyt-2 и Lyt-3.
25. Инфекционная аллергия. Аллергическая проба в диагностике инфекционных бо¬лезней. Отличие реакций гиперчувствительности замедленного типа от реакций гиперчувствительности немедленного типа.
Аллергические пробы - биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.
При многих инфекционных заболеваниях за счет активации кле¬точного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. На этом основаны аллергические пробы, используемые для диагно¬стики бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, мико¬зов и гельминтозов. Аллергические пробы обладают специфично¬стью, но нередко они бывают положительными у переболевших и привитых.
Все аллергические пробы подразделяют на две группы про¬бы in vivo и in vitro.
-К первой группе (in vivo) относятся кожные пробы, осуществ¬ляемые непосредственно на пациенте и выявляющие аллергию немедленного (через 20 мин) и замедленного (через 24 48 ч) типов.
-Аллергические пробы in vitro основаны на выявлении сенсиби¬лизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.
Для проведения аллергических проб используют аллергены диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные ал¬лергены, используемые в диагностике инфекционных заболева¬ний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных куль¬тур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.

Ос¬новные отличия гиперчувствительности замедленного типа от повышенной чув¬ствительности немедленного типа следующие.
Во-первых, местные и общие реакции, выявляющие гиперчувствительность за¬медленного типа, развиваются спустя значительно больший срок после введения антигена, чем в случае гиперчувствительности немедленного типа. В частности, кож¬ные реакции в этом случае появляются через 68 ч и достигают максимального раз¬вития через 12 суток. Интенсивность ГЧЗ определяют по диаметру уплотненного участка ткани на поверхности кожи, лишенной волос. Таким образом, для реакции повышенной чувствительности замедленного типа характерно отсутствие эффекта немедленности.
Во-вторых, гистологическая картина местных проявлений гиперчувствительно¬сти замедленного действия отличается от таковой при повышенной чувствительно¬сти немедленного типа тем, что в очаге реакции преобладают лимфоциты и моноци¬ты. В развитии кожной реакции, выявляющей гиперчувствительность немедленною типа, преобладающую роль играют полиморфно-ядерные лейкоциты.
В-третьих, гиперчувствительность замедленного типа не может быть передана пассивно от сенсибилизированного организма с помощью его сыворотки интактному (несенсибилизированному) организму, т. е. этот тип повышенной чувствительно¬сти не связан с антителами.
Главное отличие реакций гиперчувствительности замедленного типа от реакций гиперчувствительности немедленного типа заключается в том, что они опосредуют¬ся не антителами, а сенсибилизированными клетками Т-лимфоцитами, т. е. лим¬фоцитами, которые прошли иммунологическое «обучение» в тимусе.

26. Иммунологическая толерантность, ее обусловленность веществами антигенной природы и иммунологическая специфичность. Критерии толерантности. Т- и В- супрессоры и их роль в формировании толерантности. Способы получения иммунологической толерантности у взрослых организмов
Под иммунологической толерантностью (отсутствием иммунного ответа) пони¬мают специфическое подавление иммунного ответа, вызванное предварительным введением антигена. Толерантность может проявляться в подавлении специфичес¬кого иммунного ответа, включающего и синтез антител на соответствующий анти¬ген, и гиперчувствительность замедленного типа, или же избирательно влияет на синтез антител того или иного класса иммуноглобулинов либо на тип иммунного от¬вета.
Толерантность может быть полной либо частичной (существенное снижение иммунного ответа).
Изучение
Они предположили, что в результате воздействия на лимфоидную систему собственных антигенов во время эмбрионального развития, пока еще иммунная си¬стема не созрела, у животного формируется специфическая толерантность к антиге¬нам собственных тканей. Поэтому, если воздействовать чужеродным антигеном на животное до созревания его иммунной системы, то такой антиген впоследствии бу¬дет распознаваться как собственный, и он не станет вызывать иммунного ответа. Следовательно, введение антигена эмбриону не только не вызывает обычных имму¬нологических реакций, направленных на удаление этого антигена, а, наоборот, индуцирует развитие к нему толерантности. Состояние иммунологической толерант¬ности к различным антигенам возможно получить искусственно, что позволило вы¬яснить его основные механизмы.
Для иммунологической толерантности, как одной из форм иммунного ответа, характерны следующие особенности:
Во-первых, развитие этого состояния индуцируется только веществами антиген¬ной природы.
Во-вторых, толерантность иммунологически специфична.
В-третьих, искусственно полученная толерантность проявляется в разной степени, и продолжительность ее сохранения сильно варьирует. Это зависит от периода жиз¬ни, во время которого индуцируется развитие толерантности, от характера исполь¬зуемого для этой цели антигена, его дозы, физических свойств и способа введения, а также от физиологического состояния организма.
Эффективнее всего развитие толерантности удается индуцировать в эмбриональном периоде, хотя ее можно вызвать и у взрослых животных. Однако чем позднее, тем это состояние индуцируется труднее и большей дозы антигена требует. Чем больше доза антигена, тем выше степень толерантности и тем дольше она сохраняется.
Определенные способы введения антигена, не вызывающие иммунного ответа, приводят к развитию толерантности. Её очень легко вызывают микробные полисахариды. Установлено, что уменьшение молекулярной массы антигена при сохранении его специфичности снижает способность вызывать иммунный ответ, но повышает толерантную актив¬ность. Для поддержания состояния иммунологической толерантности важно постоянное присутствие антигена. Развитие иммунологической толерантности во многом зависит от физиологичес¬кого состояния организма. Любые воздействия, подавляющие иммунный ответ будут способствовать развитию толерантности.
Необходимость создания иммунологической толерантности во взрослом состоя¬нии всегда возникает при аллотрансплантации для преодоления трансплантацион¬ного иммунитета. В этих случаях прибегают к облучению организма реципиента рентгеновскими лучами или использованию химиопрепаратов, подавляющих био¬синтез ДНК и размножение клеток лимфоидной ткани. Такими иммунодепрессивными препаратами являются 6-меркаптопурин, аметоптерин, акрифлавин, циклофосфамид, антилимфоцитарная сыворотка. Очень сильным супрессором иммунной системы является антибиотик циклоспорин А
27. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней. Серологические реакции. Коагглютинация. Радиоиммунный метод (РИМ). Иммуноферментный метод (ИФМ).
Взаимодействие антигена с антителом проявляется в форме различных иммуно¬логических, или серологических реакций. В связи с их вы¬сокой чувствительностью и специфичностью они нашли широкое диагностическое применение.
С диагностической целью используют следующие серологические реакции:
Реакция агглютинации в ее различных вариантах.
Реакция преципитации и ее различные модификации.
Реакции иммунофлуоресценции (РИФ) в прямом и непрямом вариантах.
Реакции, протекающие с участием комплемента.
Реакции, протекающие с участием фагоцитов.
Реакции иммуносорбентного анализа твердой фазы.
Реакции нейтрализации биологической активности возбудителя или токсинов.

Реакция коагглютинации. Является одним из вариантов пассивной, т. е. опо¬средованной клетками-носителями антител, ускоренной реакции агглютинации на стекле. В основу этой реакции положено уникальное свойство золотистого стафило¬кокка, имеющего в составе своей клеточной стенки белок А, связываться с Fс-фрагментами и IgМ. При этом активные центры антител остаются свободными и могут взаимодействовать со специфическими детерминантами антигенов. На предметное стекло наносят каплю 2 %-ной взвеси стафилококков, сенсибилизированных соот¬ветствующими антителами, и добавляют каплю взвеси исследуемых бактерий. При соответствии антигена антителам через 3060 с происходит четкая агглютинация нагруженных антителами стафилококков.

Обнаружение антигена с помощью ИФМ и РИМ.
Первый этап адсорбция специфических антител твердой фазой, в качестве которой обычно используют полистироловые или поливинилхлоридные поверхно¬сти лунок пластиковых микротитраторных панелей. Антитела нековалентно связы ваются со стенками лунок, у них сохраняются свободными активные центры, и по¬этому они способны специфически реагировать с соответствующим антигеном.
Второй этап связывание антигена из суспензии исследуемого материала за счет реакции антитело + антиген, происходящей на границе твердая фазажидкость. После этого луночки промывают раствором, содержащим слабый неионный детергент, для удаления из системы других, неспецифически связанных с антителами компонентов.
Третий этап - обработка твердой фазы с фиксированными на ней комплексами антитело + антиген специфическими антителами против данного антигена, но мечен¬ными либо ферментом, либо изотопом. Такие меченые антитела присоединяются к ан¬тигенам, а их избыток удаляется из системы промыванием. Таким образом, в случае присутствия в исследуемом материале искомого антигена на поверхности твердой фа¬зы формируется комплекс: антитело + антиген + меченое антитело. Результаты реакции учитывают в зависимости от характера метки. Для иммуноферментного метода антите¬ла метят ферментом, чаще всего пероксидазой или щелочной фосфатазой. Субстратом для пероксидазы служит Н202 в смеси с ортофенилендиамином, используемые в виде раствора в цитратно-фосфатном буфере (рН 5,0). Добавление в опытную луночку рас¬твора субстрата приводит к тому, что он подвергается действию пероксидазы, фиксиро¬ванной на антителах, образующиеся продукты реакции имеют желтую окраску, интен¬сивность которой может быть определена путем фотометрирования.

Радиоиммунный метод (РИМ) предусматривает использование антител, мечен¬ных изотопом, поэтому результаты реакции оценивают путем определения радиоак¬тивности исследуемых образцов. При положительной реакции уровень радиоактив¬ности опытных образцов более чем в 2 раза превышает уровень радиоактивности контрольных, заведомо отрицательных образцов.
Обнаружение специфических антител с помощью ИФМ и РИМ
ДЛЯ обнаружения антител реакции также ставят в три этапа. Первый этап адсорбция специфических антигенов на стенках луночек. Обычно планшеты в коммерческих тест-системах уже имеют сенсибилизированные луночки, т. е. на их дне и стенках антигены уже адсорбированы.
Второй этап добавление в луночки образцов исследуемой сыворотки для обнаружения в ней специфических антител к данному антигену. Если они имеют¬ся, то вступают во взаимодействие с антигеном и образуют комплекс антиген + + антитело.
Третий этап после отмывания луночек в них добавляют специфические антиглобулиновые антитела (антивидовые, т. е. антитела против человеческих иммуно¬глобулинов), но меченные ферментом (ИФМ) либо изотопом (РИМ). Результаты реакции оценивают, как указано выше. В качестве контроля используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные.
Предложены различные варианты иммуноферментного метода. Большое значе¬ние имеет вариант ИФМ, позволяющий осуществлять «захват» антител, относящихся к IgМ. Этот метод позволяет более точно производить серологическую диагностику, так как основан на обнаружении специфических иммуноглобулинов IgМ, которые появляются в первую очередь при встрече с возбудителем.


28. Иммунофлуоресцентный метод (прямой и непрямой) диагностики инфекционных бо¬лезней. Сущность метода, его преимущества и недостатки.
Реакция иммунофлуоресценции.
Молекулы иммуноглобулинов способны необратимо связываться (метиться) с некоторыми химическими веществами без потери своей антительной специ¬фичности и свойства связываться с антигеном. Для такого мечения можно ис¬пользовать красители, флуоресцирующие при облучении их коротковолновым светом (ультрафиолетовым, фиолетовым, синим), например изотиоционат флуо- ресцеина, дающий зеленовато-желтое окрашивание, или другие флуорохромы. Использование для обнаружения антигенов меченных флуорохромами антител, т. е. реакцию иммунофлуоресценции (РИФ), предложил в 1950 г. А. Куне. С по-мощью РИФ можно быстро обнаруживать даже ничтожные количества антиге¬нов, в том числе бактериальных и вирусных, по эффекту флуоресценции ком¬плекса антиген + антитело в люминесцентном микроскопе.
Метод иммунофлуоресценции используют в двух вариантах. Один из них полу¬чил название прямого метода РИФ, и в этом случае метят антитела, которые не¬посредственно участвуют в реакции с исследуемым антигеном. Второй вариант известен под названием непрямого метода РИФ. В этом случае с исследуемым антигеном вначале взаимодействуют специфические к нему антитела, а уже с ни¬ми взаимодействуют антивидовые антитела (антитела против иммуноглобули¬нов диагностической сыворотки), меченные флуорохромом (рис. 74). Преиму¬ществом непрямого метода РИФ является то, что при его использовании отпадает необходимость иметь большой набор различных специфических флуоресцирую¬щих антител, так как он основан на использовании антиглобулиновых антител. В качестве последних обычно используют сыворотку козы или барана, иммунизи¬рованных сывороткой кролика (коммерческие диагностические иммунные сыворотки чаще всего готовят путем иммунизации кроликов). Непрямой метод иммунофлуо-ресценции применяют не только для ускоренного обнаружения антигенов (воз¬будителя), но и для обнаружения антител в сыворотке крови больных. Напри¬мер, для серологической диагностики токсоплазмоза токсоплазмы фиксируют на предметном стекле и обрабатывают сывороткой исследуемого больного. После ее отмывки мазок повторно обрабатывают сывороткой, содержащей меченные флуорохромом антитела против человеческого глобулина. Если в крови больно¬го есть антитела, т. е. человек болен, в люминесцентный микроскоп будут видны светящиеся токсоплазмы.
29. Реакция пассивной гемагглютинации, механизм протекания и ее практическое применение.
Классическая реакция агглютинации предусматривает использование корпуску¬лярных антигенов. Однако в ней могут участвовать и растворимые антигены. Чтобы это стало возможным, такие антигены адсорбируют на иммунологически инертных частицах. В качестве носителя можно использовать частицы латекса или бентонита, однако в настоящее время наиболее часто применяют эритроциты животных или че¬ловека, улучшая их адсорбирующие свойства обработкой растворами танина, фор¬малина или бензидина. Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизированными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они уча¬ствуют, реакцией непрямой, или пассивной, гемагглютинации (РНГА, или РПГА), так как эритроциты участвуют в ней пассивно.
РПГА ставят в специальных полистироловых пластинках с луночками, имею¬щими полусферическое дно. При использовании ее для серологической диагности¬ки в этих луночках готовят двукратные разведения в физиологическом растворе исследуемой сыворотки и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Учет результатов проводят через 2 ч инкубации при температуре 37 °С по четырехкрестной системе. При положительной реакции агглютинировавшиеся эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покры¬вают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, жидкость становится прозрачной, осадок выглядит как маленький диск в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА считается последнее ее разведение, которое еще дает ярко выраженную гемагглютинацию без значительных призна¬ков наличия диска.
РПГА может применяться также в качестве ускоренного метода бактериологиче¬ской диагностики для обнаружения непосредственно в исследуемом материале неиз¬вестных бактерий, вирусов, токсинов, например возбудителей чумы, стафилококко¬вых энтеротоксинов и др. При таком варианте постановки РПГА в роли известного компонента реакции используют эритроциты, адсорбировавшие антитела известной специфичности антительный эритроцитарный диагностикум. Если исследуемый материал содержит достаточное количество известного антигена, РПГА будет поло-жительна.
Вариантами использования РПГА являются: реакция нейтрализации антигена (РНАг), реакция нейтрализации антител (РНАт), реакция торможения пассив¬ной гемагглютинации (РТПГА). Для этих реакций используют антигенные и ан-тительные эритроцитарные диагностикумы. Можно использовать одновременно две взаимно контролирующие однонаправленные реакции, например РПГА с ан¬тигенным диагностикумом и РНАг с антительным эритроцитарным диагностикумом.
Реакция нейтрализации антител (РНАт) заключается в том, что суспензию, со¬держащую искомый антиген, смешивают со специфической иммунной сывороткой, содержащей известные антитела, в соответствующих объемах и инкубируют при температуре 37 °С в течение двух часов. После этого добавляют антигенный эрит¬роцитарный диагностикум. Смесь встряхивают и оставляют при комнатной темпера¬туре. Результаты учитывают через 34 ч и окончательно через 1824 ч. Если в исследуемом материале имеется антиген, он свяжет антитела (нейтрализует их), и по¬этому гемагглютинации не произойдет.
По такому же принципу ставят реакцию нейтрализации антигена (РНАг). Только в этом случае в исследуемом материале обнаруживают антитела. Специфический ан¬тиген, добавленный к такому исследуемому материалу, будет связываться с антите¬лами, содержащимися в нем, т. е. произойдет нейтрализация антигена антителами, и поэтому гемагглютинации при добавлении антительного эритроцитарного диа- гностикума не произойдет.

30. Агглютинины и реакция агглютинации. 0- и Н-агглютинация бактерий. Механизм реакции агглютинации. Получение агглютинирующих сывороток. Методика поста¬новки и оценки результатов развернутой реакции агглютинации.
Реакция агглютинации
Агглютинация - склеивание (соединение) антигеннесущих корпускулярных частиц (цельные клетки, частицы латекса и др.) молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое закан-чивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината).
В реакции агглютинации участвуют главным образом антитела, относящиеся к классам IgG и IgМ. Она протекает в две фазы: вначале происходит специфическое взаимодействие активного цент¬ра антител с детерминантом антигена, эта стадия может происходить в отсут¬ствие электролитов и не сопровождается видимыми изменениями реагирующей си¬стемы. Для второй стадии образования агглютината необходимо наличие электролитов, которые снижают электрический заряд комплексов антиген + ан¬титело и ускоряют процесс их склеивания. Эта фаза заканчивается образованием агглютината.
Реакции агглютинации ставят либо на стеклянных, либо на гладких картонных пластинках, либо в стерильных агглютинационных пробирках. Реакции агглюти¬нации (прямые и пассивные) на стекле обычно применяют в качестве ускоренно¬го метода обнаружения специфических антител в сыворотке больного (например, при бруцеллезе) или для серологической идентификации возбудителя. В послед¬нем случае обычно используют хорошо очищенные (адсорбированные) диагнос¬тические сыворотки, содержащие только монорецепторные антитела или их на¬бор к различным антигенам. Несомненным достоинством реакции агглютинации на стекле является простота ее постановки и то, что она протекает несколько ми¬нут или даже секунд, так как оба компонента в ней используются в концентриро¬ванном виде. Однако она имеет лишь качественное значение и менее чувствитель¬на, чем пробирочная. Развернутая реакция агглютинации в пробирках дает более точные результаты, ибо она позволяет определить количественное содержание антител в сыворотке (установить ее титр) и при необходимости зарегистрировать факт нарастания титра антител, что имеет диагностическое значение. Для поста¬новки реакции в агглютинационные пробирки вносят определенным образом разведенную 0,85 % раствором NaС1 сыворотку и равный объем (обычно 0,5 мл) суспензии стандартного диагностикума (или исследуемой культуры), содержаще¬го в 1 мл 1 млрд бактерий. Учет результатов реакции агглютинации производят предварительно через 2 ч инкубации пробирок при температуре 37 °С и оконча¬тельно через 2024 ч по двум признакам: наличию и величине осадка и степени прозрачности надосадочной жидкости. Оценку осуществляют по четырехкрест- ной системе. Реакция обязательно сопровождается контролем сыворотки и антиге¬на. В тех случаях, когда развернутую реакцию агглютинации в пробирке ставят для серологической идентификации возбудителя, она имеет диагностическое зна¬чение, если реакция оценена как положительная при разведении диагностической сыворотки не менее половины ее титра.
Необходимо учесть, что при смешивании растворов гомологичных антигенов и антител не всегда наблюдаются видимые проявления реакции агглютинации. Осадок образуется только при некоторых оптимальных соотношениях обоих компонентов реакции. Вне этих пределов, при значительном избытке антигена или антител, реакции не наблюдается. Это явление получило название «феномена прозоны». Оно наблюдается как при реакции агглютинации, так и при реакции преципитации. Появление прозоны в иммунных реакциях объясняется тем, что участвующие в них антигены, как правило, являются полидетерминантными, а мо¬лекулы антител IgG имеют два активных центра. При избытке антител поверх-ность каждой частицы антигена покрывается молекулами антител так, что не остается свободных детерминантных групп, поэтому второй, несвязанный активный центр антител не может взаимодействовать с другой антигенной частицей и связывать их друг с другом. Образование видимого агглютината или преципитата подав¬ляется также при избытке антигена, когда не остается ни одного свободного актив¬ного центра антител, и поэтому комплексы антиген + антитело + антиген не могут более укрупняться.
31. Преципитирующие свойства иммунных сывороток. Использование преципитации в агаре и применение ее для изучения- антигенов и определения токсигенности дифтерийной палочки.
Реакция преципитации и ее варианты
Реакции агглютинации и преципитации очень близки по своей сути. Различия между ними зависят главным образом от величины частиц антигена. Преципитаци¬ей называют процесс, когда происходит агрегация антител с растворимыми антиге¬нами; если же антиген представлен корпускулами, специфическая агрегация таких антигенов описывается как агглютинация.
Появление преципитата при реакции антигенантитело определяется не только возникновением решетки, образуемой ее участниками, но и особой ро¬лью Fс-фрагмента иммуноглобулина, изменение конформации которого приво¬дит к утрате этим комплексом растворимости в солевых растворах. В связи с этим в реакции преципитации используют неразведенную или слабо разведен¬ную сыворотку.
Для постановки реакции преципитации необходимы: антитела испытуемая сы¬воротка больного или иммунная диагностическая сыворотка (при идентификации выделенных микробов); антиген экстрагированный гаптен или полный гаптен со¬ответствующих микроорганизмов; физиологический раствор как источник электро¬литов. Существует множество модификаций этой реакции, которые подразделяют на две группы: преципитация в жидкой среде (реакция флоккуляции и реакция коль- цепреципитации) и преципитация в геле.

Реакция флоккуляции представляет собой преципитацию, при которой рас¬творы антигенов и антител смешивают в пробирке. Учет реакции производят с по¬мощью измерения на фотоэлектроколориметре мутности получаемой системы, что позволяет определить концентрацию исследуемого антигена.
Значительно чаще применяется качественная реакция кольцепреципитации. Для ее постановки в тонкие преципитационные пробирки наливают сначала неразведенную преципитирующую сыворотку и сверху на нее наслаивают, не до¬пуская перемешивания, раствор антигена. В случае гомологичности антител и ан-тигена на границе между этими растворами быстро, через 310 мин, появляется кольцо преципитата. В отличие от реакции агглютинации, титр преципитирующей сыворотки определяют с помощью разведения не сыворотки, а антигена.
Реакция преципитации в геле является одним из наиболее эффективных методов анализа растворимых антигенов. Она позволяет выявить число индиви¬дуальных антигенов в исследуемой жидкости и провести анализ их антигенного родства. В 1946 г. Дж. Оудин предложил метод простой диффузии, по которому один из компонентов реакции преципитации, обычно сыворотка, находится в ге¬ле, а другой антиген наслаивается на первый в виде раствора. Антиген, диф¬фундируя в гель, образует в нем с антителами белые линии преципитации, хоро¬шо видимые при боковом освещении. В 1948 г. Ё. Оухтерлоню разработал еще бо¬лее простой и удобный метод встречной двумерной диффузии, позволяющий про¬водить прямое сравнение различных ан¬тигенов и сывороток. Этот метод также является весьма ценным при исследова¬нии перекрестных реакций (рис. 73).
Для постановки реакции по Оухтерло¬ню используют 1 %-ный агар, приготов¬ленный на физиологическом растворе, ко¬торый разливают в чашки Петри слоем 0,5 см. После застывания в пластинке агара вырезают луночки диаметром 56 мм одна в центре чашки, 45 по окружно¬сти на расстоянии 12 см от центральной. В центральную луночку наливают диагнос¬тическую преципитирующую сыворотку, а в периферические раствор гомологич¬ного и сравниваемых с ним антигенов. Учет результатов проводят через 24, 48 и 72 ч инкубации при комнатной темпера¬туре. Антитела и антигены диффундируют навстречу друг другу, и в участках, где со¬здаются их эквивалентные концентрации,
образуются дугообразные полосы преципитации. Если полосы преципитации, иду¬щие от двух соседних луночек, сливаются, это указывает на наличие нескольких ан¬тигенных компонентов в исследуемой жидкости. Реакцию встречной диффузии по Оухтерлоню часто применяют для определения токсигенности бактерий, например дифтерийных.
Дальнейшим развитием метода преципитации в геле является иммуноэлектро- форез. Этим термином обозначают метод, объединяющий электрофоретическое разделение смеси антигенов и встречную диффузию по Оухтерлоню на одной и той же пластинке агарового геля. Преципитирующую сыворотку при этом наливают в канавку, вырезанную в геле параллельно направлению электрофоретического раз¬деления. Образующиеся в результате реакции линии преципитации имеют вид дуг, вытянутых в направлении электрофоретического движения фракций антигенов. Иммуноэлектрофорез позволяет определять состав сложных смесей растворимых антигенов, содержащих до 30 компонентов, и является поэтому ценным диагности¬ческим методом.

32. Литические свойства иммунных сывороток. Роль комплемента, механизм взаимодействия комплемента с комплексом антиген-антитело.

Реакция гемолиза. Литическое действие иммунной сыворотки в присутствии комплемента особенно четко проявляется в отношении эритроцитов. Если кролика иммунизировать эритроцитами другого вида животных (барана), кроличья сыворотка приобретает специфическую гемолитическую активность, т. е. способность вызывать гемолиз эритроцитов, использованных для иммунизации. Этот эффект абсолютно зависим от комплемента. Инактивация последнего путем прогревания сыворотки при температуре 56 °С приводит к утрате ею гемолитической активности. Таким образом, наличие или отсутствие активного комплемента в гемолитической сыворотке очень четко выявляется по результатам ее взаимодействия с гомологичными эритроцитами: при наличии комплемента гемолиз, образование «лаковой крови»; при его отсутствии гемагглютинация, эритроциты выпадают на дно пробирки, образуя осадок в виде зонтика, жидкость бесцветна.

Комплемент является одним из важных факторов гуморального иммунитета, играющим роль в защите организма от антигенов. Комплемент представляет со¬бой сложный комплекс белков сыворотки крови, находящийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при соединении антигена с антителом или при агрега¬ции антигена.
33. Вакцины и их виды, способы приготовления и применения. Токсины и анатоксины. Отечественные вакцинные препараты. Успехи и задачи здравоохранения в борьбе с инфекционными болезнями.

Вакцина медицинский препарат, предназначенный для создания иммунитета к инфекционным болезням.
Классификации вакцин:
1.Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий. Примером таких вакцин являются БЦЖ и вакцина против натуральной оспы человека, в качестве которой используется непатогенный для человека вирус оспы коров.
2.Инактивированные (убитые) вакцины – препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины). В препараты иногда добавляют консерванты и адьюванты.
Молекулярные вакцины – в них антиген находится в молекулярной форме или даже в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов, детерминант.
Корпускулярные вакцины – содержащие в своем составе протективный антиген
3.Анатоксины относятся к числу наиболее эффективных препаратов. Принцип получения – токсин соответствующей бактерии в молекулярном виде превращают в нетоксичную, но сохранившую свою антигенную специфичность форму путем воздействия 0.4% формальдегида при 37t в течение 3-4 недель, далее анатоксин концентрируют, очищают, добавляют адьюванты.
4.Синтетические вакцины. Молекулы эпитопов сами по себе не обладают высокой иммуногенностью для повышения их антигенных свойств эти молекулы сшиваются с полимерным крупномолекулярным безвредным веществом, иногда добавляют адьюванты.
5.Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных антигенов.

Способы приготовления.
Инактивированные (убитые, корпускулярные или молекулярные) вакцины – препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины).
Для выделения из бактерий и вирусов антигенных комплексов (гликопротеинов, ЛПС, белков) применяют трихлоруксусную кислоту, фенол, ферменты, изоэлектрическое осаждение.
Их получают путем выращивания патогенных бактерий и вирусов на искусственных питательных средах, инактивируют, выделяют антигенные комплексы, очищают, конструируют в виде жидкого или лиофильного препарата.
Преимуществом данного типа вакцин является относительная простота получения (не требуется длительного изучения и выделения штаммов). К недостаткам же относятся низкая иммуногенность, потребность в трехкратном применении и высокая реактогенность формализированных вакцин. Так же, по сравнению с живыми вакцинами, иммунитет, вызываемый ими, непродолжителен.
В настоящее время применяются следующие убитые вакцины: брюшнотифозная, обогащенная Vi антигеном; холерная вакцина, коклюшная вакцина

Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий.
Аттенуация (ослабление) возможна путём воздействия на штамм химических (мутагены) и физических (температура) факторов или посредством длительных пассажей через невосприимчивый организм. Так же в качестве живых вакцин используются дивергентные штаммы (непатогенные для человека), имеющие общие протективные антигены с патогенными для человека микробами. Примером такой вакцины является БЦЖ и вакцина против натуральной оспы.
Возможно получение живых вакцин генно-инженерным способом. Принцип получения таких вакцин сводится к созданию непатогенных для человека рекмбинантных штаммов, несущих протективные антигены патогенных микробов и способных при введении в орг. человека размножаться и создавать иммунитет. Такие вакцины называют векторными.
Вне зависимости от того, какие штаммы включены в вакцины, бактерии получают путём выращивания на искусственных питательных средах, культурах клеток или куриных эмбрионах. В живую вакцину, как правило, добавляют стабилизатор, после чего подвергают лиофильному высушиванию.

Молекулярные вакцины – в них антиген находится в молекулярной форме или даже в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов, детерминант.
В процессе культивирования природных патогенных микробов можно получить протективный антиген, синтезируемый этими бактериями токсин затем превращается в анатоксин, сохраняющий специфическую антигенность и иммуногенность. Анатоксины являются одним из видов молекулярных вакцин. Анатоксины – препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные своих токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Получение: токсигенные бактерии выращивают на жидких средах, фильтруют с помощью бактериальных фильтров для удаления микробных тел, к фильтрату добавляют 0,4% формалина и выдерживают в термостате при 30-40t на 4 недели до полного исчезновения токсических свойств, проверяют на стерильность, токсигенность и иммуногенность. Эти препараты называются нативными анатоксинам, в настоящее время почти не используются, т. к. содержат большое количество балластных веществ, неблагоприятно влияющих на организм. Анатоксины подвергаю физической и химической очистке, адсорбируют на адъювантах. Такие препараты называются адсорбированными высокоочищенными концентрированными анатоксинами.




Вирусология общая

1. Вирусы. Основные свойства вирусов, отличающие их от всех остальных живых организмов. Группы критериев, используемых для классификации вирусов.
Вирусы особое царство ультрамикроскопических размеров организмов, обладающих только одним типом нуклеиновых кислот, лишенных собствен¬ных систем синтеза белка и мобилизации энергии и являющихся поэтому аб¬солютными внутриклеточными паразитами (А. И. Коротяев).
Основные свойства вирусов, по которым они отличаются от всех остальных жи¬вых существ, следующие:
1)Ультрамикроскопические размеры.
2)Вирусы содержат нуклеиновую кислоту только одного типа или ДНК, или РНК. Все другие организмы содержат нуклеиновые кислоты обоих типов, а генбм у них представлен только ДНК.
3)Вирусы не способны к росту и бинарному делению.
4)Вирусы размножаются путем воспроизводства себя из собственной геномной нуклеиновой кислоты. Размножение всех прочих организмов включает стадии би¬нарного деления клеток.
5)У вирусов отсутствуют собственные системы мобилизации энергии.
6)У вирусов нет собственных белоксинтезирующих систем.
7)В связи с отсутствием собственных систем синтеза белка и мобилизации энер¬гии вирусы являются абсолютными внутриклеточными паразитами. Средой обита¬ния вирусов являются бактерии, клетки растений, животных и человека.

В основу классификации вирусов положены следующие кате¬гории:
тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структура, ко¬личество нитей (одна или две), особенности воспроизводства вирусного генома;
размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;
наличие суперкапсида;
чувствительность к эфиру и дезоксихолату;
место размножения в клетке;
антигенные свойства и пр.


2. Молекулярная структура вирусов. Вирион. Особенности упаковки нуклеокапсида. Особенности структуры генома вирусов. Основные этапы взаимодействия вируса с клеткой.
Основой таксономии вирусов является вирион, который представляет собой конеч¬ную фазу развития вируса. Вирион состоит из геномной нуклеиновой кислоты, окру¬женной одной или двумя оболочками. По строению вирусы можно разделить на четыре типа, которые различаются по характеру упаковки морфологических субъединиц:
1)вирусы со спиральной симметрией;
2)изометрические вирусы с кубической симметрией;
3)вирусы с бинарной симметрией, например фаги: у них головка имеет кубиче¬ский тип симметрии, а хвостик спиральный;
4)более сложно организованные вирусы, имеющие вторую оболочку.
Оболочка, в которую упакована геномная нуклеиновая кислота, называется капсидом. Наиболее просто организованные вирусы представляют собой нуклеокапсиды: они состоят только из нуклеиновой кислоты и белковой оболочки, построенной из идентичных пептидных молекул. Поскольку число ами¬нокислотных остатков в белковой молекуле всегда меньше числа нуклеотидов в ге¬не (код триплетный), то для того, чтобы упаковать геномную нуклеиновую кислоту, требуется большое число одинаковых белковых молекул. А многократное повторе¬ние белок-белковых взаимодействий возможно лишь при условии симметричного расположения субъединиц. Существует всего два способа упаковки одинаковых бел¬ковых молекул в капсид, при которых он обладал бы стабильностью. Полимер будет стабильным, если он соответствует наименьшему уровню свободной энергии. Про¬цесс образования такого полимера родствен процессу кристаллизации, он протекает по типу самосборки. Один из вариантов такой самосборки происходит с использова¬нием спиральной симметрии, другой кубической симметрии.
При спиральной симметрии (ее имеют нитевидные вирусы) белковые субъеди¬ницы располагаются по спирали, а между ними, также по спирали, уложена геном¬ная нуклеиновая кислота.
При спиральной симметрии белковый чехол лучше защищает геномную нук¬леиновую кислоту, но при этом требуется большее количество белка, чем при ку¬бической симметрии. Большинство вирусов с замкнутым чехлом обладает куби¬ческой симметрией. В ее основе лежат различные комбинации равносторонних треугольников, образующихся из сочетания шаровидных белковых субъединиц. Сочетаясь определенным образом друг с другом, они могут формировать замкну¬тую сферическую поверхность. Из различных сочетаний равносторонних тре¬угольников, которые образуют общую вершину и общую ось симметрии, могут возникать различные варианты многогранников: тетраэдры, октаэдры и икосаэд¬ры.

Типы взаимодействия вируса с клеткой. Различают три типа взаимодействия вируса с клеткой: продуктивный, абортивный и ин-тегративный.
Продуктивный тип завершается обра¬зованием нового поколения вирионов и ги¬белью (лизисом) зараженных клеток (цитоли-тическая форма). Некоторые вирусы выходят из клеток, не разрушая их (нецитолитическая форма).
Абортивный тип не завершается обра¬зованием новых вирионов, поскольку инфек¬ционный процесс в клетке прерывается на одном из этапов.
Интегративный тип, или вирогения характеризуется встраиванием (интеграцией) вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их совместным сосуществованием (совместная репликация).

Основные этапы взаимодействия вируса с клеткой:
1) адсорбция вируса на клетке;
2) проникновение вируса в клетку;
3) «раздевание» вируса;
4) биосинтез вирусных компонентов в клетке;
5) формирование вирусов; выход вирусов из клетки.

10. Особенности противовирусного иммунитета. Роль фагоцитоза и гуморальных факторов в иммунитете. Интерфероны, характеристика основных свойств, классификация. Особенности действия интерферонов на вирусы.

В защите организма от вирусов участвуют все системы иммунитета, однако противовирусный иммунитет имеет существенные специфические черты. Они определяются тем, что в первую очередь на проникновение вируса в организм реагируют не системы комплемента и макрофагов, а системы интерферонов и Т-киллерных кле¬ток. Другая особенность формирования иммунитета связана с тем, что вирусы ока¬зывают слабое антигенное воздействие на В-лимфоциты и для их активирования, пролиферации и дифференцировки необходимо участие Т-хелперов и соответствен¬но представление последним процессированного вирусного антигена (пептидных фрагментов) при участии молекул МНС класса II. Поэтому роль макрофагов и дру¬гих антигенпредставляющих клеток заключается не столько в самом фагоцитозе, сколько в процессировании и представлении антигена.
На проникновение вируса раньше всего реаги¬рует система интерферонов, которые подавляют внутриклеточное размножение вирусов. Кроме того, противовирусное действие оказывают находящиеся в сыворотке крови a- и b-ингибиторы. Альфа-ингибитор термостабильный субстрат, входит в состав а-глобулинов, препятствует адсорбции вирусов на клетке, Разрушается нейраминидазой орто- и парамиксовирусов. Бета-ингибитор термолабильный мукопептид, входит в состав b-глобулинов, подавляет размно¬жение орто- и парамиксовирусов.
Однако интерферонов и ингибиторов оказалось недостаточно для защиты от вирусов, поэтому природа создала против вирусов другой, очень мощный механизм защиты на уровне организма. Он представлен прежде всего Т-цитотоксическими лимфоцитами и другими киллерными клетками. Эти клетки распознают все чуже¬родные антигены, в том числе и вирусные, предсталяемые им молекулами МНС класса I. Главное биологическое значение Т-киллерных клеток и заключается в обнаружении и уничтожении любых клеток, инфицированных чужеродными антигенами.


Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединитель¬ной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделя¬ют три типа: ?, ? и ?-интерфероны.
Альфа-интерферон вырабатывается лейко¬цитами и он получил название лейкоцитар¬ного; бета-интерферон называют фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами клетками соединительной ткани, а гамма-интерферон иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.
Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании виру¬сами, помимо противовирусного действия интер¬ферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размноже¬ние) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.
Механизм действия. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со спе-циальными рецепторами клеток и оказыва¬ет влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.


3. Вирусы, их природа, происхождение. Методы культивирования вирусов.
Вирусы мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци¬топлазме или ядре клетки. Они автономные генетические структуры. Отличаются особым разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке от¬дельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.

Методы культивирования вирусов
Для культивирования клеток были предложены различные среды, содержащие все необходимые для размноже¬ния клеток питательные вещества (аминокислоты, основания, витамины и др.), ми¬неральные соли, имеющие оптимальную рН и т. д. К питательным средам добав¬ляли индикатор, по изменению цвета которого можно было судить о метаболизме клеток и их размножении. Было установлено, что в качестве основы, на которой клетки размножаются и образуют монослой, может быть использовано хорошо об-работанное стекло пробирок и колб. Для подавления возможного роста бактерий вируссодержащий материал перед посевом его в культуры клеток обрабатывают ан¬тибиотиками.
Как оказалось, вирусы могут размножаться не только в культурах клеток, обра¬зующих монослой на стекле пробирок, но и в суспензиях живых клеток.
Таким образом, для выделения чистых культур вирусов в настоящее время используют чаще всего заражение куриных эмбрионов, первично-трипсинизиро¬ванных и перевиваемых культур клеток.

О росте вирусов в клетках можно судить также по поведению индикатора, до¬бавляемого к питательной среде. Если клетки активно осуществляют метаболизм, рН среды сдвигается в кислую сторону, и среда окрашивается в желтый цвет.
Для обнаружения вируса в культурах клеток могут быть использованы различные серологические реакции: преципитации в агаре, иммунофлуоресценции, РСК, ИФМ и пр., а также метод ДНК-зонда и заражение животных, чувствительных к данному вирусу.

4. Строение бактериофагов. Взаимодействие Т-фагов с микробной клеткой (адсорбция, проникновение фаговой ДНК в клетку, размножение фага и выход его из клетки). Лизогения и лизогенная конверсия, механизм. Практическое использование фагов в медицине.
Бактериофаги вирусы бактерий. Бактериофагия процесс взаимодействия фагов с бактериями, заканчивающийся очень часто их разрушени¬ем.
Поскольку естественной средой обитания лю¬бого фага является микробная клетка, жизнь фагов связана с бактериями. Фагам присущи все биологические особенности, которые свойственны вирусам. Их геном представлен либо ДНК, либо РНК и заключен в белковую оболочку (капсид), структурные субъединицы которой уложены по типу либо спиральной, либо куби¬ческой симметрии. Крупные фаги, имеющие хвостик, устроены по типу бинарной симметрии (головка икосаэдр, хвостик спиральная симметрия). Фаги разли¬чаются по форме нитевидные, сферические; фаги, имеющие головку и хвостик; по размерам мелкие, среднего размера и крупные. Чем крупнее фаги, тем больше у них генов и сложнее их жизненный цикл.

Лизогения и лизогенная конверсия, механизм.
Жизненный цикл фага может проявляться в форме продуктивной (фаг размножа¬ется в клетке и выходит из нее), редуктивной (геном фага проникает в клетку, однако размножения фага не происходит, его геном интегрируется в хромосому клетки-хозя¬ина, становится ее составной частью, т. е. фаг превращается в профаг, а клетка стано¬вится лизогенной) и абортивной инфекции, при которой взаимодействие фага с клет-кой обрывается на какой-то стадии жизненного цикла фага, и он погибает.
Клетка, несущая профаг, называется лизогенной, потому что профаг, передаю¬щийся клеткой по наследству, может выйти из хромосомы, активироваться и вы¬звать продуктивную форму инфекции.
Если в результате лизогении, т. е. внедрения профага в хромосому клетки-хозяи¬на, она получает новые наследуемые признаки, такую форму ее изменчивости назы¬вают лизогенной конверсией, т. е. изменчивостью, обусловленной лизогенией. Ли- зогенную конверсию вызывают только умеренные фаги.

Взаимодействие Т-фагов с микробной клеткой:
1)Адсорбция фагов на клеточной поверхности бактерий при помощи специфиче¬ских рецепторов (белков-лоцманов), которые располагаются на кончике нити, ши¬па или хвостика. В свою очередь, на клеточной стенке бактерии располагаются ее фагоспецифические рецепторы, распознаваемые фагом.
2)Проникновение фагового генома через клеточную стенку и цитоплазматиче- скую мембрану внутрь клетки и освобождение его от оболочки (раздевание фага).
3)Установление фагового генома с помощью белка-лоцмана для реализации со¬держащейся в геноме информации:
4)Репликация фаговой геномной ДНК или РНК.
5)Сборка вновь синтезированных вирионов заключение геномной НК в бел¬ковую оболочку, морфогенез фагов.
6) Выход вновь синтезированных фагов из клетки:
а) путем отпочковывания;
б) путем лизиса клетки изнутри. Он осуществляется свободным лизоцимом и вы¬зывает гибель клетки.
Практическое применение фагов. Благодаря своему разрушающему (литическому) действию на бактерии фаги мо¬гут быть использованы с лечебно-профилактической целью при различных заболе¬ваниях (дизентерия, холера, различные гнойно-воспалительные заболевания и т. д.). Наборы стандартных фагов, в том числе международные, используются для фаготипирования возбудителей ряда болезней (холеры, брюшного тифа, сальмонел- лезов, дифтерии, стафилококковых и других заболеваний). Фаги широко использу¬ют для изучения генетики микроорганизмов.


5. Бактериофаги. Вирулентные и умеренные фаги. Механизм взаимодействия вирулентного фага с микробной клеткой. Особенности морфогенеза крупных фагов.
Бактериофаги вирусы бактерий. Бактериофагия процесс взаимодействия фагов с бактериями, заканчивающийся очень часто их разрушени¬ем.
Поскольку естественной средой обитания лю¬бого фага является микробная клетка, жизнь фагов связана с бактериями. Фагам присущи все биологические особенности, которые свойственны вирусам. Их геном представлен либо ДНК, либо РНК и заключен в белковую оболочку (капсид), структурные субъединицы которой уложены по типу либо спиральной, либо куби¬ческой симметрии. Крупные фаги, имеющие хвостик, устроены по типу бинарной симметрии (головка икосаэдр, хвостик спиральная симметрия). Фаги разли¬чаются по форме нитевидные, сферические; фаги, имеющие головку и хвостик; по размерам мелкие, среднего размера и крупные. Чем крупнее фаги, тем больше у них генов и сложнее их жизненный цикл.

Лизогения и лизогенная конверсия, механизм.
Жизненный цикл фага может проявляться в форме продуктивной (фаг размножа¬ется в клетке и выходит из нее), редуктивной (геном фага проникает в клетку, однако размножения фага не происходит, его геном интегрируется в хромосому клетки-хозя¬ина, становится ее составной частью, т. е. фаг превращается в профаг, а клетка стано¬вится лизогенной) и абортивной инфекции, при которой взаимодействие фага с клет¬кой обрывается на какой-то стадии жизненного цикла фага, и он погибает.
Клетка, несущая профаг, называется лизогенной, потому что профаг, передаю¬щийся клеткой по наследству, может выйти из хромосомы, активироваться и вы¬звать продуктивную форму инфекции.
Если в результате лизогении, т. е. внедрения профага в хромосому клетки-хозяи¬на, она получает новые наследуемые признаки, такую форму ее изменчивости назы¬вают лизогенной конверсией, т. е. изменчивостью, обусловленной лизогенией. Ли- зогенную конверсию вызывают только умеренные фаги.

Взаимодействие Т-фагов с микробной клеткой:
1)Адсорбция фагов на клеточной поверхности бактерий при помощи специфиче¬ских рецепторов (белков-лоцманов), которые располагаются на кончике нити, ши¬па или хвостика. В свою очередь, на клеточной стенке бактерии располагаются ее фагоспецифические рецепторы, распознаваемые фагом.
2)Проникновение фагового генома через клеточную стенку и цитоплазматиче- скую мембрану внутрь клетки и освобождение его от оболочки (раздевание фага).
3)Установление фагового генома с помощью белка-лоцмана для реализации со¬держащейся в геноме информации:
4)Репликация фаговой геномной ДНК или РНК.
5)Сборка вновь синтезированных вирионов заключение геномной НК в бел¬ковую оболочку, морфогенез фагов.
6) Выход вновь синтезированных фагов из клетки:
а) путем отпочковывания;
б) путем лизиса клетки изнутри. Он осуществляется свободным лизоцимом и вы¬зывает гибель клетки.
Практическое применение фагов. Благодаря своему разрушающему (литическому) действию на бактерии фаги мо¬гут быть использованы с лечебно-профилактической целью при различных заболе¬ваниях (дизентерия, холера, различные гнойно-воспалительные заболевания и т. д.). Наборы стандартных фагов, в том числе международные, используются для фаготипирования возбудителей ряда болезней (холеры, брюшного тифа, сальмонел- лезов, дифтерии, стафилококковых и других заболеваний). Фаги широко использу¬ют для изучения генетики микроорганизмов.
6. Методы культивирования вирусов. Заражение животных, куриных эмбрионов. Получение культур клеток. Среды, применяемые для культур клеток. Цитопатический эффект и его проявления. Реакция гемадсорбции.

Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах.
Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей живот¬ных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.
Приготовление первичной культуры клеток складывает¬ся из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания получен¬ной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.
Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохра¬няются на протяжении нескольких десятков пассажей.
Перевиваемые однослойные культуры клеток приготов¬ляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладаю¬щих способностью длительно размножаться in vitro в определен¬ных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки ам¬ниона человека, почек обезьяны и др.
К полуперевиваемым культурам относятся диплоид¬ные клетки человека. Они представляют собой клеточную систе¬му, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток использу¬емой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают зло-качественного перерождения и этим выгодно отличаются от опу¬холевых.
О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), кото-рое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.
Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорби¬ровать эритроциты реакция гемадсорбции. Для ее по¬становки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На по¬верхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 67-дневной инку¬бации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса при¬нимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.
Более точным количественным методом учета отдельных ви¬русных частиц является метод бляшек.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.
Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно вы¬сокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздей¬ствиям.
Для получения чистых культур риккетсий, хламидий. и ря¬да вирусов в диагностических целях, а также для приготов¬ления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 812-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим из¬менениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его обо¬лочках.
О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.
К недостаткам данного метода относятся невозможность об¬наружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очист¬ку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препа¬ратов.
Лабораторные животные. Видовая чувствительность живот¬ных к определенному вирусу и их возраст определяют репродук¬тивную способность вирусов. Во многих случаях только ново¬рожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки к вирусам Коксаки).
Преимущество данного метода перед другими состоит в воз¬можности выделения тех вирусов, которые плохо репродуциру¬ются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся кон¬таминация организма подопытных животных посторонними ви¬русами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данно¬го вируса, что удлиняет сроки исследования.

7. Особенности размножения вирусов, геном которых представлен однонитчатой ДНК. Репликативная и промежуточная репликативные формы. Особенности размножения вирусов, геном которых представлен однонитчатой РНК.
Однонитевая ДНК. Ее репликация происходит через образование вначале репликативной формы, а затем промежуточной репликативной формы. Репликативная форма возникает в результате синтеза на исходной вирионной ДНК («+» нити) ком¬плементарной ей «» нити, т. е. однонитевая ДНК превращается в двунитевую структуру ДНК. Промежуточная репликативная форма это репликативная форма, «» нить которой служит матрицей для синтеза «+» нити ДНК, идентичной исход¬ной вирионной ДНК. Такой механизм обеспечивает передачу генов дочерним вирио- нам (рис. 80.1).

У вирусов, геном которых представлен однонитевой РНК, ее репликация про¬исходит по следующей схеме: вначале на вирионной РНК (вРНК) синтезируются комплементарные ей РНК (кРНК). Этот процесс катализируется специфической РНК-репликазой I. Затем на кРНК синтезируется комплементарная ей, но идентич¬ная исходной вирионная РНК (вРНК), этот процесс также катализируется специфи¬ческой репликазой И. Таким образом, репликация идет по схеме:
вРНК > кРНК > вРНК.

Общие закономерности размножения вирусов.
Во-пер¬вых, все РНК-содержащие вирусы, кроме вирусов гриппа и ретровирусов, размножа¬ются в цитоплазме. Для своего размножения вирусы гриппа А и В и ретровирусы проникают в ядро, что связано с особенностями поведения их генома. Во-вторых, размножение всех ДНК-содержащих вирусов, кроме вирусов оспы, протекает в ядре, где происходит транскрипция и репликация их геномных нуклеиновых кислот, и в цитоплазме, где происходит трансляция вирусных белков, их процессинг и мор¬фогенез вирионов. Лишь размножение вирусов группы оспы происходит в цитоплаз¬ме клетки, поскольку они обладают собственными системами транскрипции
1. Реакция гемагглютинации, ее механизм у вирусов гриппа. Реакция торможения гемагглютинации, ее практическое применение.

Реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид¬кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.



9. Методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний. Методы выделе¬ния и идентификации вирусов. Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных болезней.
ДЛЯ диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:
1) Вирусоскопический.
2) Иммунной электронной микроскопии.
3) Вирусологический.
4) Серологический.
5) Иммунофлуоресцентный.
6) Биологический.
7) Использование ДНК-(РНК)-зондов.
8) Цепная полимеразная реакция.

О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), кото-рое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.
Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
Методов индикации вирусов:
1) Реакция гемадсорбции - основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорби¬ровать эритроциты реакция гемадсорбции. Для ее по¬становки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На по¬верхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
2) Реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид¬кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.
Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследу¬емом материале как специфических антител, так и вирусных антигенов. Для этих це¬лей могут быть использованы все известные серологические реакции:
1) Реакция связывания комплемента.
2) Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты (РНАг, РНАт).
3) Реакция торможения гемагглютинации.
4) Реакция гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс антиген + анти¬тело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах).
5) Реакции преципитации в геле.
6) Реакции нейтрализации вирусов.
7) Радиоиммунный метод.
8) Методы иммуноферментного анализа.
Из перечисленных методов все большей популярностью пользуются методы им¬муноферментного анализа, отличающиеся высокой специфичностью и удобством
использования.
10. Особенности противовирусного иммунитета. Роль фагоцитоза и гуморальных факторов в иммунитете. Интерфероны, характеристика основных свойств, классификация. Особенности действия интерферонов на вирусы.

В защите организма от вирусов участвуют все системы иммунитета, однако противовирусный иммунитет имеет существенные специфические черты. Они определяются тем, что в первую очередь на проникновение вируса в организм реагируют не системы комплемента и макрофагов, а системы интерферонов и Т-киллерных кле¬ток. Другая особенность формирования иммунитета связана с тем, что вирусы ока¬зывают слабое антигенное воздействие на В-лимфоциты и для их активирования, пролиферации и дифференцировки необходимо участие Т-хелперов и соответствен¬но представление последним процессированного вирусного антигена (пептидных фрагментов) при участии молекул МНС класса II. Поэтому роль макрофагов и дру¬гих антигенпредставляющих клеток заключается не столько в самом фагоцитозе, сколько в процессировании и представлении антигена.
На проникновение вируса раньше всего реаги¬рует система интерферонов, которые подавляют внутриклеточное размножение вирусов. Кроме того, противовирусное действие оказывают находящиеся в сыворотке крови a- и b-ингибиторы. Альфа-ингибитор термостабильный субстрат, входит в состав а-глобулинов, препятствует адсорбции вирусов на клетке, Разрушается нейраминидазой орто- и парамиксовирусов. Бета-ингибитор термолабильный мукопептид, входит в состав b-глобулинов, подавляет размно¬жение орто- и парамиксовирусов.
Однако интерферонов и ингибиторов оказалось недостаточно для защиты от вирусов, поэтому природа создала против вирусов другой, очень мощный механизм защиты на уровне организма. Он представлен прежде всего Т-цитотоксическими лимфоцитами и другими киллерными клетками. Эти клетки распознают все чуже¬родные антигены, в том числе и вирусные, предсталяемые им молекулами МНС класса I. Главное биологическое значение Т-киллерных клеток и заключается в обнаружении и уничтожении любых клеток, инфицированных чужеродными антигенами.


Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединитель¬ной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделя¬ют три типа: ?, ? и ?-интерфероны.
Альфа-интерферон вырабатывается лейко¬цитами и он получил название лейкоцитар¬ного; бета-интерферон называют фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами клетками соединительной ткани, а гамма-интерферон иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.
Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании виру¬сами, помимо противовирусного действия интер¬ферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размноже¬ние) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.
Механизм действия. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со спе-циальными рецепторами клеток и оказыва¬ет влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Вирусология частная

1. Вирусы-возбудители острых респираторных заболеваний (ОРЗ) . Классификация. Общая характеристика ортомиксовирусов. Структура вириона гриппа. Особенно¬сти его генома и реализации содержащейся в нем информации. Репликация вирионной РНК.

1.Вирусы - возбудители орз. классификация.
Возбудителями ОРЗ являются следующие вирусы:
1. Вирусы гриппа А, В, С (Orthomyxoviridae)
2. Парамиксовирусы (Paramyxoviridae) это семейство включает три рода: paramyxovirus вирусы парагриппа человека (ВПГЧ) 1, 2, 3, 4-го типов, болезни Ньюкасл, парагриппа птиц и паротита; Pneumovirus респираторно-синцитиальный вирус (RS-вирус); Morbillivirus вирус кори.
3. Респираторные коронавирусы (Coronaviridae).
4. Респираторные реовирусы (Reoviridae).
5. Пикорнавирусы (Picornaviridae).
Вирус гриппа А
Вирион имеет сферическую форму и диаметр 80120 нм. Геном вируса представлен однонитевой фрагментированной (8 фрагментов) не-гативной РНК с общей м. м. 5 МД. Тип симметрии нуклеокапсида спиральный. Вирион Имеет суперкапсид (мембрану), содержащий два гликопротеида гемагглютинин и нейраминидазу, которые выступают над мембраной в виде различных шипов.
2. Вирусы - возбудители острых респираторных заболеваний. Особенности проявления заболеваний, вызываемых вирусами гриппа, парагриппа, риновирусами, респираторно-синцитиальным вирусом и аденовирусами. Лабораторные методы их диагностики.
Вирион имеет сферическую форму и диаметр 80120 нм. Геном вируса представлен однонитевой фрагментированной (8 фрагментов) не-гативной РНК с общей м. м. 5 МД. Тип симметрии нуклеокапсида спиральный. Вирион имеет суперкапсид (мембрану), содержащий два гликопротеида гемагглютинин и нейраминидазу, которые выступают над мембраной в виде различных шипов.
У вирусов гриппа А человека, млекопитающих и птиц обнаружено 13 различающихся по антигену типов гемагглютинина, которым присвоена сквозная нумерация (отН1доН13).
Нейраминидаза (N) является тетрамером с м. м. 200250 кД, каждый мономер имеет м. м. 5060 кД.
У вируса гриппа А обнаружено 10 различных вариантов ней-раминидазы
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служит отделяемое носоглотки, которое получают либо путем смыва, либо с помощью ватно-марлевых тампонов, и кровь. Методы диагностики применяют следующие:
1. Вирусологический заражение куриных эмбрионов, культур клеток почек зеленых мартышек (Vero) и собак (МДСК). Культуры клеток особенно эффективны для выделения вирусов A (H3N2) и В.
2. Серологический выявление специфических антител и возрастания их титра (в парных сыворотках) с помощью РТГА, РСК, иммуноферментного метода.
3. В качестве ускоренной диагностики используют иммунофлуоресцентный метод, позволяющий быстро обнаружить вирусный антиген в мазках-отпечатках со слизистой оболочки носа или в смывах из носоглотки больных.
4. Для обнаружения и идентификации вируса (вирусных антигенов) предложены методы РНК-зонда и ПЦР.
Специфическая профилактика
1) живая из аттенуированного вируса; 2) убитая цельновирион-ная; 3) субвирионная вакцина (из расщепленных вирионов); 4) субъединичная -вакцина, содержащая только гемагглютинин и нейраминидазу.

3. Вирусы гриппа (ортомиксовирусы). Общая характеристика. Белки суперкапсида, их функции, значение изменчивости (шифта и дрейфа) для эпидемиологии грип¬па. Методы лабораторной диагностики. Вакцины, применяемые для профилактики гриппа.
Острая инфекционная болезнь, с лихорадкой, поражением печени. Антропоноз.
Таксономия, морфология, антигенная струк¬тура: Семейство Picornaviridae род Hepatovirus. Типовой вид имеет один серотип. Это РНК-содержащий вирус, просто организо¬ванный, имеет один вирусоспецифический антиген.
Культивирование: Вирус выращивают в культурах клеток. Цикл репродукции более длительный, чем у энтеровирусов, цитопатический эффект не выражен.
Резистентность: Устойчивос¬тью к нагреванию; инактивируется при кипячении в течение 5 мин. Относительно устойчив во внешней среде (воде).
Эпидемиология. Источник-больные. Механизм заражения фекально-оральный. Вирусы выделяются с фекалиями в начале клинических проявлений. С появлением желтухи интенсив¬ность выделения вирусов снижается. Вирусы передаются через воду, пищевые продукты, руки.
Болеют преимущественно дети в возрасте от 4 до 15 лет.
Микробиологическая диагностика. Материа¬л для исследования - сыворотка и испражнения. Диагностика основана глав¬ным образом на определении в крови IgM с помощью ИФА, РИА и иммунной электрон¬ной микроскопии. Этими же методами можно обнаружить вирусный антиген в фекалиях. Вирусологическое исследование не проводят.

4. Механизм взаимодействия вируса гриппа с клеткой (адсорбция, слияние вирусного суперкапсида с мембраной клетки, проникновение нуклеокапсида в клетку, транскрипция вирионной РНК, репликация геномной РНК, образование нуклеокап¬сида, особенности формирования суперкапсида и выхода вириона из клетки).

5. Вирусологическая диагностика гриппа. Выделение вируса, определение его ти¬па. Серологические методы диагностики гриппа: РСК, РТГА. Ускоренный метод диагностики с использованием флуоресцирующих антител.
Микробиологическая диагностика. Диагноз «грипп» базируется на (1) выделении и иден¬тификации вируса, (2) определении вирусных АГ в клетках больного, (3) поиске вирусоспецифических антител в сыворотке больно¬го. При отборе материала для исследования важно получить пораженные вирусом клетки, так как именно в них происходит репликация вирусов. Материал для исследования но¬соглоточное отделяемое. Для определения антител исследуют парные сыворотки крови больного.
Экспресс-диагностика. Обнаруживают ви¬русные антигены в исследуемом материале с помощью РИФ (прямой и непрямой вариан¬ты) и ИФА. Можно обнаружить в материале геном вирусов при помощи ПЦР.
Вирусологический метод. Оптимальная лабо¬раторная модель для культивирования штаммовку¬риный эмбрион. Индикацию вирусов проводят в зависи¬мости от лабораторной модели (по гибели, по клиническим и патоморфологическим изменениям, ЦПД, образованию «бляшек», «цветной пробе», РГА и гемадсорбции). Идентифицируют вирусы по антигенной структуре. Применяют РСК, РТГА, ИФА, РБН (реакцию биологической нейтрализа¬ции) вирусов и др. Обычно тип вирусов грип¬па определяют в РСК, подтип в РТГА.
Серологический метод. Диагноз ставят при четырехкратном увеличении титра антител в парных сыворотках от больного, полученных с интервалом в 10 дней. Применяют РТГА, РСК, ИФА, РБН вирусов.


6. Парамиксовирусы. Парагриппозные вирусы. Вирус паротита, респираторно-синцитиальный вирус, заболевания вызываемые ими. Лабораторная диагностика. Профилактика.
Вирионы имеют сферическую форму, их диаметр 150200 нм. Геном представлен однонитевой нефрагментированной негативной РНК с м. м. 5,6 МД и состоит из 6 генов.
Для лабораторной диагностики парагриппозных заболеваний применяются следующие методы:
а) обнаружение вирусных антигенов с помощью методов иммунофлуоресценции и ИФМ в эпителиальных клетках слизистой оболочки носовых ходов и носоглотки;
б) выделение вируса в культурах клеток с последующей идентификацией его с помощью реакций торможения гемадсорбции или гемагглютинации;
в) определение противовирусных антител с помощью реакций торможения гемадсорбции (гемагглютинации) или нейтрализации в культуре клеток с использованием парных сывороток (нарастание титра антител).
Эпидемический паротит острое вирусное заболевание, для которого характерно поражение одной или обеих околоушных слюнных желез.Морфологически вирус сходен с другими парамиксовирусами, обладает гемаг-глютинирующей, гемолитической, нейраминидазной и симпластообразующей активностью. Геном представлен однонитевой нефрагментированной негативной РНК, м. м. ее 8 МД. В составе вириона 8 белков; суперкапсидные белки HN и F выполняют такие же функции, как и у других парамиксовирусов.
Заболевание встречается повсеместно. Источником инфекции является только больной человек
Лабораторная диагностика. Применяют вирусологические и серологические методы, используя слюну, мочу, спинномозговую жидкость, пунктат желез. Заражают 78-дневные куриные эмбрионы или культуры клеток. Вирус идентифицируют с помощью реакций торможения гемагглютинации (гемадсорбции), иммунофлуо-ресценции, нейтрализации и связывания комплемента. Серологическая диагностика осуществляется на основании нарастания титра антител в парных сыворотках больных с помощью РТГА или РСК.
Специфическая профилактика.создание коллективного иммунитета с помощью живой вакцины, приготовленной из аттенуированного штамма (пассажи на куриных эмбрионах приводят к снижению патогенности вируса для человека). Вакцина вводится подкожно однократно детям на первом году жизни.
RS-вирус является одним из наиболее частых возбудителей ОРЗ у детей первых 23 лет жизни.Вирион сферической формы, диаметр его варьирует у отдельных частиц от 120 До 200 нм. Геном представлен однонитевой нефрагментированной негативной РНК с м. м. около 5,6 МД; она несет, очевидно, 10 генов, кодирующих 10 вирусспецифи-ческих белков, из которых 7 входят в состав вириона, а остальные являются неструктурными. RS-вирус отличается от других парамиксовирусов тем, что у него не обнаружены гемагглютинин и нейраминидаза, и он не обладает гемолитической активностью.
Лабораторная диагностика основана на быстром обнаружении вирусных антигенов в отделяемом носоглотки (у погибших исследуют ткани легких, трахеи, бронхов) с помощью иммунофлуоресцентного метода, выделении и идентификации вируса и определении специфических антител. Для выделения вируса исследуемым материалом заражают культуры клеток, о его размножении судят по характерному цитопатическому эффекту; вирус идентифицируют с помощью иммунофлуоресцентного метода, РСК и реакции нейтрализации в культуре клеток.
Серологический метод (РСК, РН) у детей первых шести месяцев жизни, которые имеют материнские антитела в титре до 1: 320, недостаточно надежен. Для диагностики заболевания у них лучше использовать методы обнаружения специфических антигенов с помощью РИФ или ИФМ.

7. Вирус кори, характеристика его свойств. Патогенез кори. Иммунитет после перенесенного заболевания. Противокоревая вакцина. Проблемы ликвидации кори.

Возбудитель кори Morbillivirus Морфологически он сходен с другими парамиксовирусами: диаметр вириона 150250 нм, геном вируса представлен однонитевой нефрагментированной негативной РНК длиной в 15 900 нуклеотидов, включенной в спиральный нуклеокапсид. Подобно другим парамиксовирусам, вирус кори обладает гемагглютинирующей, гемолитической и симпластообразующей активностью, но у него отсутствует нейраминидаза.
Заражение происходит воздушно-капельным путем. Вирус размножается в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки, трахеи и бронхов. Проникая в кровь, вызывает поражение клеток эндотелия сосудов, вследствие чего появляется сыпь. Наиболее характерным симптомом является образование на слизистой оболочке щек пятен КопликаФилатова. Инкубационный период около 10 дней. Картина болезни настолько характерна, что диагноз легко ставится клинически.
Специфическая профилактика кори. Единственный радикальный способ борьбы с корью вакцинопрофилактика. Для этой цели используют высоко эффективные живые вакцины из аттенуированных штаммов кори . Элиминация кори из Региона Европы должна быть достигнута к 2007 г., а к 2010 г. ее элиминация должна быть сертифицирована во всех странах мира. Для этого необходимо достигнуть вакцинации 98100 % вновь родившихся детей в возрасте 912 мес. Кроме того, необходимо каждые 57 лет дополнительно ревакцинировать всех детей в возрасте от 910 мес. до 1416 лет для снижения количества лиц, восприимчивых к кори.
Вирус кори вызывает не только острую продуктивную инфекцию, каковой является корь, но и, очень редко, тяжелую медленную инфекцию подострый склерозирующий панэнцефалит (ПСПЭ)
8. Аденовирусы, характеристика свойств, состав группы. Аденовирусы, патогенные для человека. Особенности патогенеза аденовирусных инфекций, методы культи¬вирования аденовирусов. Диагностика аденовирусных болезней.
Семейство Adenoviridae разделяется на два рода: Mastadenovirus аденовирусы млекопитающих, он включает аденовирусы человека (41 серовариант), обезьян (24 се-роварианта), а также крупного рогатого скота, лошадей, овец, свиней, собак, мышей, земноводных; и Aviadenovirus аденовирусы птиц (9 серовариантов).
Аденовирусы лишены суперкапсида. Вирион имеет форму икосаэдра кубический тип симметрии, его диаметр 7090 нм. Капсид состоит из 252 капсомеров диаметром 79 нм.
В составе вириона выявлено не менее 7 антигенов. Инкубационный период 69 дней. Вирус размножается в эпителиальных клетках верхних дыхательных путей, слизистой оболочки глаз. Может проникать в легкие, поражать бронхи и альвеолы, вызывать тяжелую пневмонию; характерное биологическое свойство аденовирусов тропизм к лимфоидной ткани.
Аденовирусные заболевания можно характеризовать как лихорадочные с катаральным воспалением слизистой оболочки дыхательных путей и глаз, сопровождающиеся увеличением подслизистой лимфоидной ткани и регионарных лимфатических узлов.
Лабораторная диагностика. 1. Выявление вирусных антигенов в пораженных клетках с помощью методов иммунофлуоресценции или ИФМ. 2. Выделение вируса. Материалом для исследования служат отделяемое носоглотки и конъюнктивы, кровь, испражнения (вирус удается выделить не только в начале болезни, но и на 7 14-й ее день). Для изоляции вируса используют первично-трипсинизированные культуры клеток (в том числе диплоидные) эмбриона человека, которые чувствительны ко всем серовариантам аденовирусов. Вирусы обнаруживают по их цитопа-тическому эффекту и с помощью РСК, так как все они обладают общим комплемент-связывающим антигеном. Идентификацию производят по типоспецифическим антигенам с помощью РТГА и РН в культуре клеток. 3. Выявление нарастания титра антител в парных сыворотках больного с помощью РСК. Определение нарастания титра типоспецифических антител осуществляют с эталонными сероштаммами аденовирусов в РТГА или РН в культуре клеток.
9. Вирусы - возбудители острых кишечных заболеваний (ротавирусы, калицивирусы и другие). Характеристика основных свойств.
Острые кишечные заболевания (ОКЗ) по частоте, по-видимому, занимают второе место после острых респираторных заболеваний.
Причины повсеместного распространения
1. Низкий уровень жизни населения
2. Отсутствие эффективных вакцин против многих кишечных заболеваний.
3. Наличие большого количества разнообразных возбудителей ОКЗ.
Большинство случаев небактериальных диарей в различных регионах мира (6070 %) вызывают ротавирусы и калицивирусы.Известно более 200 потенциальных возбудителей инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта человека из 11 семейств
Основные признаки энтеровирусов, по которым они объединяются в один род, следующие.
Вирусологигеские:
1) размер 2230 нм;
2) геном однонитевая нефрагментированная позитивная РНК;
3) отсутствие суперкапсида;
4) тип симметрии кубический, количество капсомеров 60;
5) устойчивость к эфиру (нет липидов);
6) повышение термостабильности в присутствии ионов Mg" или Са*;
7) устойчивость к желчи, а также к кислотам и щелочам (в диапазоне рН от 3,0 до 10,0);
8) способность размножаться в определенных культурах клеток;
9) устойчивость во внешней среде.
Эпидемиологигеские особенности вызываемых вирусами болезней:
1) выраженная сезонность заболеваний (летоосень);
2) фекально-оральный путь распространения;
3) выделение вируса из кишечника, носоглотки, ликвора и крови;
4) обнаружение вирусов в сточных водах;
5) преимущественное поражение детей в возрасте до 12 лет;
6) широкое носительство среди здоровых людей.


10. Вирус полиомиелита. Общая характеристика, типы полиовирусов, пути и способами заражения. Патогенез полиомиелита. Выделение вируса от больных и его идентификация. Специфическая профилактика полиомиелита.
Возбудитель (poliovirus hominis) относится к группе пикорнавирусов, к семейству энтеровирусов(кишечным вирусам)
существует в виде 3 независимых типов (I, II и III). Наиболее часто встречается 1 тип. Размеры вируса 812 нм, содержит РНК. Устойчив во внешней среде (в воде сохраняется до 100 сут, в испражнениях до 6 мес), хорошо переносит замораживание, высушивание. Не разрушается пищеварительными соками и антибиотиками. Культивируется на клеточных культурах
Масса вириона составляет 89 МД. Вирус имеет сферическую форму. Тип симметрии кубический. Капсид вириона образован четырьмя белками по 60 копий Каждого. Три из них VP1, VP2, VP3 образуют внешнюю поверхность капсида, a VP4 внутреннюю, поэтому он снаружи не виден.
Пути и способы зараженя полиомиелитом.
Источник инфекции человек. возбудитель выделяется через рот (несколько суток), а затем с испражнениями (несколько недель, а иногда и месяцев). Заражение может произойти воздушно-капельным путём, но чаще при попадании в рот активного вируса (через загрязнённые руки, пищу). Механическим переносчиком вируса могут быть мухи.
Входными воротами инфекции является слизистая оболочка носоглотки или кишечника. Проникнув в организм, вирус размножается в лимфатическом глоточном кольце (миндалины), кишечнике, регионарных лимфатических узлах, проникает в кровь, а в некоторых случаях и в центральную нервную систему, вызывая её поражение. В большинстве случаев полиомиелит протекает бессимптомно и инфекцию можно обнаружить лишь с помощью лабораторных исследований. В других случаях после инкубационного периода (3-35, чаще 9-11 сут) появляются признаки заболевания.
Различают четыре основные клинические формы полиомиелита: 1) абортивная (малая болезнь); 2) непаралитическая (менингеальная), проявляющаяся серозным менингитом; 3) паралитическая и 4) инаппарантная (скрытая)
Профилактика
1. Инактивированная формалином вакцина Дж. Солка.
2. Живая вакцина А. Себина из аттенуированных им штаммов полиовирусов I, II и III типов.
Обе вакцины убитая и живая являются достаточно эффективными, однако в нашей стране отдается предпочтение живой вакцине, так как вакцинные штаммы, размножаясь в эпителиальных клетках кишечного тракта, выделяются во внешнюю среду и, циркулируя в коллективах, вытесняют дикие штаммы полиовирусов. По рекомендации ВОЗ, прививки против полиомиелита являются обязательными и проводятся начиная с 3-месячного возраста и до 16 лет. Поскольку живая вакцина, хотя и крайне редко, вызывает осложнения, прививки теперь рекомендуется Проводить инактивированной вакциной Солка


11. Пути и способы заражения полиомиелитом. Патогенез полиомиелита. Успехи оте¬чественного здравоохранения в борьбе с полиомиелитом.
Источник инфекции человек. возбудитель выделяется через рот (несколько суток), а затем с испражнениями (несколько недель, а иногда и месяцев). Заражение может произойти воздушно-капельным путём, но чаще при попадании в рот активного вируса (через загрязнённые руки, пищу). Механическим переносчиком вируса могут быть мухи.
Входными воротами инфекции является слизистая оболочка носоглотки или кишечника. Проникнув в организм, вирус размножается в лимфатическом глоточном кольце (миндалины), кишечнике, регионарных лимфатических узлах, проникает в кровь, а в некоторых случаях и в центральную нервную систему, вызывая её поражение. В большинстве случаев полиомиелит протекает бессимптомно и инфекцию можно обнаружить лишь с помощью лабораторных исследований. В других случаях после инкубационного периода (3-35, чаще 9-11 сут) появляются признаки заболевания.
Различают четыре основные клинические формы полиомиелита: 1) абортивная (малая болезнь); 2) непаралитическая (менингеальная), проявляющаяся серозным менингитом; 3) паралитическая и 4) инаппарантная (скрытая)
Профилактика
1. Инактивированная формалином вакцина Дж. Солка.
2. Живая вакцина А. Себина из аттенуированных им штаммов полиовирусов I, II и III типов.
Обе вакцины убитая и живая являются достаточно эффективными, однако в нашей стране отдается предпочтение живой вакцине, так как вакцинные штаммы, размножаясь в эпителиальных клетках кишечного тракта, выделяются во внешнюю среду и, циркулируя в коллективах, вытесняют дикие штаммы полиовирусов. По рекомендации ВОЗ, прививки против полиомиелита являются обязательными и проводятся начиная с 3-месячного возраста и до 16 лет. Поскольку живая вакцина, хотя и крайне редко, вызывает осложнения, прививки теперь рекомендуется Проводить инактивированной вакциной Солка.
12. Вирусы Коксаки и ЕСНО. Характеристика их свойств. Состав групп. Методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки и ЕСНО.
Коксаки являются наиболее кардиотропными из всех энтеровирусов. У 2040 % больных в возрасте до 20 лет Кок-саки-инфекция осложняется миокардитом. Вирусы Коксаки представлены двумя группами: группа Коксаки А включает 23 сероварианта (А1А22, 24); группа Коксаки В включает 6 серовариантов (В1В6).
Вирусы Коксаки А и В могут вызывать у человека помимо полиомие-литоподобных заболеваний, иногда сопровождающихся параличами, и различные другие заболевания со своеобразной клиникой: асептический менингит, эпидемическая миалгия (Борнхольмская болезнь), герпангина, малая болезнь, гастроэнтериты, острые респираторные заболевания, миокардиты
ECHO, что означает: Е - enteric; С cytopathogenic; H human; О orphan сиротка. насчитывает 32 сероварианта.
Источником Коксаки- и ЕСНО-инфекций является человек. Заражение вирусами Происходит фекально-оральным путем.
Патогенез заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки и ECHO, сходен с патогенезом полиомиелита. Входными воротами являются слизистая оболочка носа, глотки, тонкого кишечника, в эпителиальных клетках которых, а также в лимфоид-ной ткани и происходит размножение этих вирусов.
Сродство к лимфоидной ткани одна из характерных особенностей этих вирусов. После размножения вирусы проникают в лимфу, а затем в кровь, обусловливая вирусемию и генерализацию инфекции.
Попадая в ток крови, вирусы гематогенно распространяются по всему организму, избирательно оседая в тех органах и тканях, к которым они обладают тропизмом.
Методы диагностики энтеровирусных заболеваний. используют вирусологический метод и различные серологические реакции. исследование необходимо проводить на всю группу энтеровирусов. Для их выделения используют кишечное содержимое, смыв и мазки из зева, реже ликвор или кровь, а в случае смерти больного ис-следуют кусочки ткани из разных органов. Исследуемым материалом заражают культуры клеток (полиовирусы, ECHO, Коксаки В и некоторые серовары Коксаки А), а также новорожденных мышей (Коксаки А).
Типирование выделенных вирусов осуществляют в реакциях нейтрализации, РТГА, РСК, реакции преципитации, используя эталонные смеси сывороток различных сочетаний. Для выявления антител в сыворотках людей при энтеровирусных инфекциях используют те же серологические реакции (РН, цветные реакции, РТГА, РСК, реакции преципитации), но для этих целей необходимо иметь парные сыворотки от каждого больного (в острый период и через 23 нед. от начала болезни). Реакции считаются положительными при увеличении титра антител не менее чем в 4 раза. При двух этих методах используют также ИФМ (для обнаружения антител или антигена).
13. Гепатит А. Возбудитель, характеристика вириона. Способы заражения. Методы лабораторной диагностики. Проблема специфической профилактики.
Вирус гепатита А (ВГА, Hepatitis A virus). Вирус гепатита А имеет сферическую форму, диаметр вириона 27 нм. Геном Представлен однонитевой позитивной РНК с м. м. 2,6 МД. Суперкапсид отсутствует. Тип симметрии кубический - икосаэдр. Капсид имеет 32 капсомера, он образован четырьмя полипептидами (VP1VP4). По своим свойствам вирус гепатита А отнесен к роду Heparnovirus, семейству Picornaviridae. В антигенном отношении вирус гепатита A (HAV hepatitis A virus) является однородным.
Источником инфекции является только инфицированный человек. Вирус выделяется в большом количестве с испражнениями за 1214 дней до появления желтухи и в течение 3 нед. желтушного периода.
Способ заражения фекально-оральный, главным образом водный, а также бытовым и пищевым путем. Возможно также заражение воздушно-капельным путем. Восприимчивость населения всеобщая. Болеют преимущественно дети в возрасте до 14 лет.
Для диагностики гепатита А предложены различные иммунологические методы: РСК, иммунофлуоресцентный метод, гемагглютинация иммунного прилипания (комплекс вирусный антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах и вызывает их склеивание). Однако возможности применения этих методов ограничены из-за отсутствия специфических вирусных антигенов, а реакция иммунофлуоресценции требует биоптатов печени, что нежелательно. Надежным и специфическим является метод иммунной электронной микроскопии, однако он очень трудоемкий. Поэтому пока единственной приемлемой иммунологической реакцией является метод имму-носорбентного анализа твердой фазы в виде ИФМ или РИМ, особенно в модификации «захвата» иммуноглобулинов класса М. В нашей стране для этой цели предложена тест-система «ДИАГН-А-ГЕП». Принцип работы этой тест-системы следующий. На стенках полистироловых луночек сорбируются вначале антитела к иммуноглобулинам класса М (антииммуноглобулины М), затем добавляется исследуемая сыворотка больного. Если в ней есть антитела класса IgM, они будут связываться ан-ти-антителами М, затем добавляется специфический вирусный антиген (вирус гепатита А), который получают путем выращивания в культуре клеток. Система промывается, и к ней добавляются противовирусные антитела, меченные пероксидазой хрена. Если произошло взаимодействие всех четырех компонентов системы, возникает четырехслойный «сэндвич»:
1) антииммуноглобулины М, 2) иммуноглобулины М (против вируса гепатита А в исследуемой сыворотке больного), 3) вирусный антиген, 4) антивирусные антитела, меченные ферментом.
Для обнаружения этого комплекса в луночки добавляют субстрат для фермента. Под влиянием фермента он разрушается, и образуется окрашенный продукт. Интенсивность окраски можно измерить количественно с помощью спектрофотометра или фотоколориметра.
В России эффективная вакцина против гепатита А была получена еще в 1995 г., и сейчас она успешно применяется.
14. Гепатит В. Структура и характеристика основных свойств вириона. Поверхност¬ный антиген, его значение. Особенности взаимодействия вируса с клеткой. Способы заражения. Методы лабораторной диагностики. Специфическая профилактика.

Hepatitis B virus, HBV В составе вириона имеются три основных антигена
1. HBsAg поверхностный (superficial), или растворимый (soluble), или австралийский антиген.
2. HBcAg сердцевинный антиген (сог-антиген).
3. HBeAg антиген е, локализован в сердцевине вириона
Собственно вирион частица Дейна имеет сферическую форму и диаметр 42 нм. Суперкапсид вириона состоит из трех белков: главного (основного), большого и среднего (рис. 88,1). Геном заключен в капсид и представлен двунитевой кольцевидной ДНК с м. м. 1,6 МД. ДНК состоит приблизительно из 3200 нуклеотидов, однако ее «плюс»-нить на 2050 % короче «минус»-нити.
Поверхностный антиген HBsAg существует в виде трех морфологически различных вариантов: 1) представляет суперкапсид цельного вириона; 2) в большом количестве встречается в виде частиц диаметром 20 нм, имеющих сферическую форму; 3) в виде нитей длиной 230 нм. Химически они идентичны. В составе HBsAg имеется один общий антиген а и две пары взаимоисключающих типоспецифических детерминантов: d/y и w/r, поэтому существуют четыре основных субтипа HBsAg (и соответственно HBV): adw, adr, ayw и ayr. Антиген а обеспечивает формирование общего перекрестного иммунитета ко всем субтипам вируса.
Белки, образующие поверхностный антиген, существуют в гликозилированной (gp) и негликозилированной форме. Гликозилированными являются gp27, gp33, gp36 и gp42 (цифры обозначают м. м. в кД). Суперкапсид HBV состоит из главного, или основного, S-белка (92 %); среднего М-белка (4 %) и большого, или длинного, L-белка (1 %).
Главный белок p24/gp27, Большой белок p39/gp42, Средний белок - gp33/gp36.
Взаимодействие с клеткой.
1. Адсорбция на клетке.
2. Проникновение в клетку с помощью механизма рецепторопосредованного эн-доцитоза (окаймленная ямка -> окаймленный пузырек -> лизосома -> выход нук-леокапсида и проникновение вирусного генома в ядро гепатоцита).
3. Внутриклеточное размножение.
Источником заражения вирусом гепатита В является только человек. Заражение происходит не только парентеральным путем, но и половым, и вертикальным (от матери плоду)
В настоящее время основным методом диагностики гепатита В является использование реакции обратной пассивной ге-маглютинации (РОПГА) для обнаружения вируса или его поверхностного антигена HBsAg. Как уже отмечалось, в крови поверхностного антигена содержится во много раз больше, чем самого вируса (в 1001000 раз). Для реакции РОПГА используют сенсибилизированные антителами против вируса гепатита В эритроциты. При наличии антигена в крови происходит реакция гемагглютинации. Для обнаружения антител к вирусному антигену HBsAg используют различные иммунологические методы (РСК, РПГА, ИФМ, РИМ и др.)
Специфическая профилактика
прививки против гепатита В являются обязательными и должны проводиться на первом году жизни. Для вакцинации предложено два типа вакцин. Для приготовления одной из них в качестве сырья используют плазму вирусоноси-телей, поскольку в ней вирусный антиген содержится в количествах, достаточных для приготовления вакцины. Главное условие для приготовления этого типа вакцин их полная безопасность,Для изготовления вакцины другого типа применяют методы генной инженерии, в частности, для получения антигенного материала используют рекомбинантный клон дрожжей, вырабатывающих поверхностный антиген вируса гепатита В.
В России созданы вакцины как для взрослых людей, так и для новорожденных и детей раннего возраста. Полный курс прививки состоит из трех инъекций:
I доза сразу после рождения; II доза через 12 мес; III доза до конца 1-го года жизни.

15. Ретровирусы. Особенности их размножения. Роль обратной транскриптазы. Вирогения и ее значение. Онкогенные вирусы. Протоонкогены и онкогены.
Вирионы сферической формы размером 80 100 нм, покрыты внешней липопротеиновой оболочкой, имеющей ворсинки длиной 8 10 нм. Внутри икосаэдрального капсида находится спиральный РНП. Наружная оболочка, капсидная мембрана и нуклеопд на разрезе вириона расположены концентрически.
Характерной чертой семейства является наличие в составе вириона РНК-зависимой ДНК- полимеразы, иначе называемой обратной транскриптазой. Это и послужило основой для названия семейства (от лат. retro обратный). Вирионы имеют 6 структурных белков, из них 4 внутренних (капсидных) негликолизированных
Особенности их размножения.
1. В состав вириона входит обратная транскриптаза, т. е. РНК-зависимая ДНК-полимераза, или ревертаза. По этому признаку семейство получило название (англ. retro обратно, назад). Этот фермент, называемый полимеразным комплексом, состоит из нескольких доменов и обладает 3 видами активности: обратной тран-скриптазы, РНКазы Н и ДНК-зависимой ДНК-полимеразы.
2. Благодаря наличию обратной транскриптазы РНК-геном вируса в клетке превращается в ДНК-геном и в таком виде интегрируется в хромосому клетки-хозяина, в результате чего она либо погибает (ВИЧ), либо превращается в опухолевую (онковирусы).
3. В связи с тем что функция обратной транскриптазы не контролируется, фермент допускает много ошибок. Это влечет за собой высокую частоту мутаций в генах, кодирующих структурные белки вируса, т. е. его постоянную изменчивость, что создает трудности в создании эффективных вакцин.
4. По структуре нуклеокапсида и расположению его в вирионе ретровирусы подразделяют на 5 форм: А, В, С, D, Е
5. Все ретровирусы имеют общие структурные гены: gag, pol, env.
Семейство Retroviridae включает три подсемейства.
A. Spumavirinae «пенящие» вирусы; такое название дано потому, что при размножении в культуре клеток происходит интенсивное симпластообразование, которое придает культуре «вспененный» вид. Связи этих вирусов с какими-либо патологическими процессами не установлено.
Б. Oncovirinae онкогенные вирусы, т. е. вирусы, ответственные за превращение нормальной клетки в опухолевую.
B. Lentivirinae вирусы возбудители медленных инфекций. К этому подсемейству относится вирус, вызывающий СПИД.
Онкоген это ген, кодирующий белок, который, в случае нарушения регуляции, может вызвать образование злокачественной опухоли. Считается, что гены-супрессоры опухолей (ГСО) предохраняют клетки от ракового перерождения, и, таким образом, рак возникает либо в случае нарушения работы генов-супрессоров опухолей, либо при появлении онкогенов
Протоонкоген это обычный ген, который может стать онкогеном из-за мутаций или повышения экспрессии. Многие протоонкогены кодируют белки, которые регулируют клеточный рост и дифференцировку. Протоонкогены часто вовлечены в пути передачи сигнала и в регуляцию митоза, обычно через свои белковые продукты. После активации (которая происходит из-за мутации самого протоонкогена или других генов) протоонкоген становится онкогеном и может вызвать опухоль.





16. Вирус бешенства, его свойства. Дикий и фиксированный вирусы и их отличия. Специфическая профилактика бешенства.
Штаммы вирусов бешенства, циркулирующие в природе у животных, называются уличными. Они вызывают заболевания с довольно длительным инкубационным периодом и обычно образуют специфические тельца-включения в цитоплазме клеток. У зараженных животных может наблюдаться длительный период возбуждения и агрессивности.
Специфическая профилактика и лечение. Профилактика заключается в борьбе с бешенством среди животных и предупреждении развития болезни у людей, подвергшихся укусам или ослюнению больным животным. Программу ликвидации бешенства наземных животных необходимо рассматривать в двух аспектах: 1) искоренение городского собачьего бешенства и 2) оздоровление природных очагов рабической инфекции.
При укусах или ослюнении необходимо тщательно промыть рану или кожу в месте попадания слюны мыльной водой, рану прижечь спиртовым раствором йода и начать проведение специфической профилактики антирабической вакциной и анти-рабическим гамма-глобулином. сейчас для профилактики бешенства рекомендована антирабическая инактивиро-ванная культуральная вакцина, которая изготовлена на культуре клеток, инфицированных аттенуированным вирусом бешенства.
Экстренная лечебно-профилактическая вакцинация проводится вакциной или вакциной в сочетании с антирабическим гамма-глобулином по схемам, указанным в наставлениях к их применению. Схема вакцинации определяется степенью тяжести укуса, его локализацией, временем, прошедшим после укуса, информацией об укусившем животном и другими обстоятельствами.
17. Арбовирусы. Общая характеристика арбовирусов, их отличительные особенности и классификация. Вирусы клещевого и японского энцефалитов. Источники и пути передачи. Природная очаговость. Выделение вирусов от больного. Специфиче¬ская профилактика. Заслуги русских ученых в изучении вирусных природночаговых заболеваний.
Под названием «арбовирусы» в настоящее время понимают вирусы, передающиеся восприимчивым позвоночным (в том числе и человеку) через укусы кровососущих членистоногих.В настоящее время насчитывается около 400 арбовирусов.
Клещевой энцефалит
В соответствии с видом переносчика различают два основных типа вируса клещевого энцефалита: персулькатный, восточный (переносчик Ixodes persukatus) и рици-нусный, западный (переносчик Ixodes ricinus)
Примерно в 80 % случаев заражение происходит трансмиссивным путем при укусе клещей и в 20 % случаев алиментарным путем при употреблении сырого козьего, коровьего или овечьего молока.
Различают три основные формы клещевого энцефалита лихорадочную, менингеальную и очаговую.

Японский энцефалит. Японский энцефалит природно-очаговое заболевание, передающееся комарами рода Сиleх и других родов подсемейства Culicinae.Заболевания японским энцефалитом выявляются исключительно в летне-осенний период. Это одно из самых тяжелых заболеваний с наиболее высокой летальностью, составляющей от 20 до 70 и даже 80 %. Основу патогенетических механизмов составляют поражения сосудистой системы как в ЦНС, так и во всех органах и тканях, где вирус интенсивно размножается. Инкубационный период от 4 до 14 дней.
диагностика, лечение профилактика как и при клещевом.


18. Возбудители желтой лихорадки, омской, крымской геморрагических лихорадок. Механизм заражения. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
Желтая лихорадка острое тяжелое инфекционное заболевание, для которого характерны сильная интоксикация, двухволновая лихорадка, выраженный геморрагический синдром, поражение почек и печени.
Возбудитель желтой лихорадки вирус, относится к семейству Flaviviridae. Переносчиками заболевания являются комары. Источником и резервуаром инфекции служат дикие животные, а также больной человек.
Желтая лихорадка существует в двух эпидемиологических формах: лихорадки джунглей и лихорадки населенных пунктов.
Лабораторная диагностика включает использование вирусологического, биологического и серологического методов. Вирус из крови может быть выделен путем заражения куриных эмбрионов или культур клеток. Для идентификации вируса используют реакцию нейтрализации. Биологическая проба заключается в заражении кровью больных внутримозговым путем мышей-сосунков, у которых вирус вызывает смертельный энцефалит.
Основным методом борьбы с желтой лихорадкой является активная иммунизация в эпидемических очагах с помощью живой вакцины. Вакцинируют детей с первого года жизни и взрослых в дозе 0,5 мл подкожно. Поствакцинальный иммунитет развивается через 10 дней после прививки и сохраняется в течение 10 лет.

Омская геморрагическая лихорадка эндемическое заболевание, передающееся через укусы клещей рода Dermacentor.
Лабораторная диагностика. Для диагностики альфа-вирусных и флавивирусных инфекций могут быть использованы вирусологический, биологический и серологический методы. Материал от больного человека - кровь (в период вирусемии), ликвор (при развитии признаков менингоэнцефалита), секционный материал (ткань головного мозга) используется для заражения культур клеток почек и фибробластов куриных эмбрионов, заражения куриных эмбрионов в аллантоисную полость и внутримозгового заражения белых мышей. В культурах тканей вирус обнаруживают по цитопатическому эффекту, бляшкообразованию, реакциям гемадсорбции и гемагглютинации. Для профилактики некоторых флавивирусных инфекций используют вакцины.

Крымская (Конго) геморрагическая лихорадка встречается на юге нашей страны и во многих других странах. Заражение наступает при укусах клещей родов Hyalomma, Rhipicephalus, Dermacentor, а также контактным путем.
Лабораторная диагностика. Буньявирусы могут быть выделены из патологического материала (кровь, секционный материал) при внутримозговом заражении мышей-сосунков, у которых наступают параличи и смерть. Типируют вирусы в реакции нейтрализации, РСК, РПГА и РТГА.

19.Вирусные гепатиты человека, особенности их эпидемиологии. Основные свойства возбудителей. Принципы лабораторной диагностики.

Острая инфекционная болезнь, с лихорадкой, поражением печени. Антропоноз.
Таксономия, морфология, антигенная струк¬тура: Семейство Picornaviridae род Hepatovirus. Типовой вид имеет один серотип. Это РНК-содержащий вирус, просто организо¬ванный, имеет один вирусоспецифический антиген.
Культивирование: Вирус выращивают в культурах клеток. Цикл репродукции более длительный, чем у энтеровирусов, цитопатический эффект не выражен.
Резистентность: Устойчивос¬тью к нагреванию; инактивируется при кипячении в течение 5 мин. Относительно устойчив во внешней среде (воде).
Эпидемиология. Источник-больные. Механизм заражения фекально-оральный. Вирусы выделяются с фекалиями в начале клинических проявлений. С появлением желтухи интенсив¬ность выделения вирусов снижается. Вирусы передаются через воду, пищевые продукты, руки.
Болеют преимущественно дети в возрасте от 4 до 15 лет.
Микробиологическая диагностика. Материа¬л для исследования - сыворотка и испражнения. Диагностика основана глав¬ным образом на определении в крови IgM с помощью ИФА, РИА и иммунной электрон¬ной микроскопии. Этими же методами можно обнаружить вирусный антиген в фекалиях. Вирусологическое исследование не прово¬дят

20. Герпесвирусы человека, состав семейства, основные свойства, вызываемые заболевания.
Герпесвирусы (герпесвириде, Herpesviridae) это большое семейство ДНК-содержащих вирусов, вызывающее разнообразные болезни не только у человека и других млекопитающих, но и у птиц , рептилий, амфибий, рыб.
Семейство Herpesviridae (греч. herpes ползучий) по современной классификации подразделяют на 3 подсемейства. Alphaherpesvirinae К ним относятся вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов (соответственно ГВЧ-1* и ГВЧ-2 род Simplexvirus), вирус ветряной оспы опоясывающего лишая, или вирус VZV.
Betaherpesvirinae включают вирусы цитомегалии человека и мышей
Gammaherpesvirinae: вирус Эпстайна-Барр, вирус саркомы Капоши, вирус болезни Марека и некоторые герпесвирусы обезьян.
Вирус простого герпеса
Инфекция, вызванная вирусом простого герпеса, может иметь несколько клинических форм, но чаще всего бессимптомна. Обычными клиническими проявлениями бывают везикулярные высыпания на коже и слизистых оболочках. Иногда может быть тяжелый кератит, менингоэнцефалит.
Вирус герпеса типа 1 может вызвать развитие следующих клинических форм заболевания:
1) острый герпетический (афтозный) стоматит развивается чаще у первично инфицированных детей, инкубационный период 35 дней, повреждения слизистой заживают через 23 нед.;
2) герпетическая экзема (сыпь Капоши, сходная с сыпью при ветряной оспе) сопровождается лихорадкой и пузырьковыми высыпаниями на большей части поверхности тела, иногда наблюдается летальный исход;
3) кератоконъюнктивит; при частых рецидивах может наблюдаться необратимое помутнение роговицы и слепота;
4) менингоэнцефалит; летальность довольно высокая, в случае выздоровления стойкие остаточные неврологические изменения;
5) герпес губной (лабиалис) наиболее частая форма
Вирус ветряной оспы может вызывать высококонтагиозное легкое заболевание у детей ветряную оспу, проявляющуюся в развитии везикулезной сыпи на коже и слизистых. У взрослых (и крайне редко у детей) этот же вирус вызывает опоясывающий лишай
Цитомегаловирус человека. Заболевание характеризуется возникновением крупных внутриядерных включений в слюнных железах, легких, печени, поджелудочной железе, почках, железах внутренней секреции и иногда в мозге.




21. Возбудитель ВИЧ-инфекции. Строение вируса, особенности организации генома.
ВИЧ шаровидной формы, его диаметр 110 нм. Оболочка вируса имеет форму многогранника, составленного из 12 пятиугольников и 20 шестиугольников. В центре и углах каждого шестиугольника расположена молекула гликозилированного протеина gpl20
Всего на по¬верхности вириона располагаются в виде своеобразных шипов 72 молекулы gpl20, каждая из которых связана с внутримембранным белком gp41. Эти белки вместе с двойным липидным слоем образуют суперкапсид (мембрану) вириона.
В центральной части вириона белок р24 образует конусообразный капсид. Су¬женная часть капсида при участии белка р6 связана с оболочкой вириона. Внутри капсида заключены две идентичные молекулы вирусной геномной РНК.
РНК-геном в клетке с помощью обратной транскриптазы превращается в ДНК-геном. Геном ВИЧ состоит из 9 генов, часть из которых перекрывается концами (имеет несколько рамок считывания) и имеет экзон-интронную структуру. Они контролируют синтез 9 структурных и 6 регуляторных белков.



22-23. Эпидемиология и патогенез ВИЧ-инфекции. ВИЧ-ассоциированные инфекции.
Источником ВИЧ-инфекции является только человек больной или вирусоно-ситель. Вирус содержится в крови, сперме, цервикальной жидкости; у кормящих матерей в грудном молоке. Заражение происходит половым путем, через кровь и ее препараты, а также от матери к ребенку до родов, во время и после родов.
Вирус обладает очень высокой скоростью размножения, определяемой его регуляторными элементами (за 5 мин в активной стадии синтезируется до 5000 вирионов). Благодаря наличию белка слияния (gp41) вирус индуцирует образование обширных синцитиальных структур за счет слияния инфицированных и неинфицированных Т-хелперов, следствием чего является их массовая гибель. Образующиеся в большом количестве молекулы белка gpl20 свободно циркулируют в крови и связываются с рецепторами неинфицированных Т-хелперов, в результате чего они также распознаются и уничтожаются Т-кил-лерами. Вирус может распространяться по межклеточным каналам из клетки в клетку, в этом случае он становится мало доступен антителам.


Гноеродные кокки
1. Стафилококки. Общая характеристика свойств. Факторы патогенности. Токсины, образуемые стафилококками, генетический контроль их синтеза. Современная классификация стафилококков и ее принципы.
Стафилококки грамположительные, правильной гео¬метрической формы шаровидные клетки диаметром 0,51,5 мкм, располагающиеся обычно в виде гроздьев, каталазопозитивны, восстанавливают нитраты в нитриты, активно гидролизуют белки и жиры, сбраживают в анаэробных условиях глюкозу с образованием кислоты без газа. Обычно могут расти в присут¬ствии 15 %-ного NаС1 и при температуре 45 °С. Не имеют жгутиков, не образуют спор. Стафило¬кокки факультативные анаэробы. Стафилококки не требовательны к питательным средам, хорошо растут на обычных средах, температурный оптимум для роста 3537 °С, рН 6,2-8,4 Колонии круглые, 24 мм в диаметре, с ровными краями, выпуклые, непрозрачные, окрашены в цвет образуемого пигмента. Рост в жидкой культуре сопровождается равномерным помутнением, со временем выпадает рыхлый осадок. При росте на обычных средах стафилококки не образуют капсулы, при посеве уколом в полужидкий агар с плазмой или сывороткой большинство штаммов S. aureus образует капсулу.

Факторы патогенности стафилококков. Стафилококки могут поражать любую ткань, любой орган. Это свойство стафилококков обусловле¬но наличием у них большого комплекса факторов патогенности.
Факторы адгезии прикрепление стафилококков к клеткам тканей обусловле¬но их гидрофобностью (чем она выше, тем сильнее проявляются адгезивные свой¬ства), а также адгезивными свойствами полисахаридов, возможно также белка А, и способностью связывать фибронектин (рецептор некоторых клеток).
Разнообразные ферменты, играющие роль факторов «агрессии и защиты»: плазмокоагулаза (главный фактор патогенности), гиалуронидаза, фибринолизин, ДНКаза, лизоцимоподобный фермент, лецитиназа, фосфатаза, протеиназа и т. д.
Комплекс секретируемых экзотоксинов:
а) мембраноповреждающие токсины а, b, d и у.
б) эксфолиативные токсины А и В различают по антигенным свойствам, отноше¬нию к температуре (А термостабилен, В термолабилен), локализации генов, контролирующих их синтез (А контролируется хромосомным геном, В плазмидным). Нередко у одного и того же штамма синтезируются оба эксфолиатина, С этими токсинами связана способность стафилококков вызывать пузырчатку у новорожденных, буллезное импетиго, скарлатиноподобную сыпь;
в) истинный лейкоцидин токсин, отличающийся от гемолизинов по антиген¬ным свойствам, избирательно действует на лейкоциты, разрушая их;
г) экзотоксин, вызывающий синдром токсического шока (СТШ). Он обладает свойствами суперантигена. Для СТШ характерны повышение температуры, снижение артериального давления, кожные высыпания с последующим шелу¬шением на кистях и стопах, лимфоцитопения, иногда диарея, поражение почек и др.
Сильные аллергизирующие свойства. Аллергены способны вызывать реакции ги¬перчувствительности как замедленного типа (ГЧЗ), так и немедленного типа (ГЧН).
Перекрестно реагирующие антигены (с изоантигенами эритроцитов А и В, почек и кожи индукция аутоантител, развитие аутоиммунных заболеваний).
Факторы, угнетающие фагоцитоз. Фагоцитоз угнетают капсула, белок А, пептидогликан, тейхоевые кислоты, ток¬сины.
Митогенное действие стафилококков в отношении лимфоцитов (этим действием обладают белок А, энтеротоксины и другие продукты, секретируемые стафилокок¬ками).
Энтеротоксины А, В, С1, С2, СЗ, D, Е. Они характеризуются антигенной специ¬фичностью, термостабильностью, устойчивостью к действию формалина (не пре¬вращаются в анатоксины) и пищеварительных ферментов (трипсина и пепсина), устойчивы в диапазоне рН от 4,5 до 10,0.

Классификация. Род Staphylococcus включает в себя более 20 видов, которые под¬разделяются на две группы коагулазоположительные и коагулазоотрицательные ста¬филококки. Для дифференциации видов используют различные признаки.
Патогенными для человека являются, главным образом, коагулазоположительные стафилококки, но многие коагулазоотрицательные также способны вызывать заболевания, S. aureus в зависимости от того, кто является его основным носителем, разделяется на 10 эковаров (hominis, bovis, jvis И др.).

Штаммы S. aureus различаются по чувствительности к стафилококковым фагам. Для типирования S. aureus используют международный набор из 23 умеренных фа¬гов, которые разделены на четыре группы.
Отношение стафилококков к фагам своеобразное: один и тот же штамм может лизироваться либо одним фагом, либо одновременно несколькими. Но поскольку чувствительность их к фагам является признаком относительно стабильным, фаготипирование стафилококков имеет важное эпидемиологическое значение. Недоста¬ток этого метода состоит в том, что типированию поддается не более 6570 % S. aureus. В последние годы получены наборы специфических фагов и для типирова¬ния S. epidermidis.


3. Стрептококки. Характеристика морфологических, культуральных свойств, анти¬генное строение. Серологическая классификация. Факторы патогенности стреп¬тококков. Особенности патогенеза стрептококковых болезней. Характеристика свойств пневмококков.
Стрептококки грамположительные, цитохромнегативные, каталазонегативные клетки шаровидной или овоидной формы диаметром 0,61,0 мкм, растут в виде цепочек различной длины или в виде тетракокков; неподвижны. Спор не образуют. Патогенные стрептококки образуют капсулу. Стрептококки факуль-тативные анаэробы, но имеются и строгие анаэробы. Температурный оптимум 37 °С, оптимальная рН 7,27,6. На обычных питательных средах патогенные стрептокок¬ки или не растут, или растут очень скудно. Для их культивирования обычно исполь¬зуют сахарный бульон и кровяной агар, содержащий 5 % дефибринированной кро¬ви. Среда не должна содержать восстанавливающих cахаров, так как они угнетают гемолиз. На бульоне рост придонно-пристеночный в виде крошковатого осадка, буль¬он прозрачен. Стрептококки, образующие короткие цепочки, вызывают помутнение бульона. На плотных средах стрептококки серогруппы А образуют колонии трех типов:
а) мукоидные
б) шероховатые
в) гладкие - невирулентные культуры.

Классификация стрептококков. Род стрептококков включает около 50 видов. Среди них выделяют 4 патогенных (S. pyogenes, S. pneumoniae, S. agalactiae и S. equi)
Cерологическая классификация. Стрептококки имеют сложное антигенное строение: у них имеется общий для всего рода антиген и различные другие антигены. Среди них особое значение для класси¬фикации имеют группоспецифические полисахаридные антигены, локализованные в клеточной стенке. По этим антигенам стрептокок¬ки разделены на серологические группы, обозначаемые буквами А, В, С, D, F, С и т. д. Сейчас известны 20 серологических групп стрептококков (от А до V). Патогенные для человека стрептококки относятся к группе А, к группам В и D, реже к С, F и G. В связи с этим определение групповой принадлежности стрептококков является ре¬шающим моментом в диагностике вызываемых ими болезней.

У гемолитических стрептококков обнаружены типоспецифические антигены. У стрептококков группы А ими являются белки М, Т и R.
R-антиген обнаружен также у стрептококков серогрупп В, С и D. Он чувствителен к пепсину, но не к трипсину, разрушается при нагревании в присутствии кислоты, но устойчив при умеренном нагревании в слабом щелочном растворе.
По М-антигену гемолитические стрептококки серогруппы А подразделяют на большое количество серовариантов (около 100), их определение имеет эпидемиологическое значение.
По Т-белку стрептококки серогруппы А также подразделяют на несколько десятков серовариантов. В группе В различают 8 серовариантов.
Стрептококки имеют перекрестно реагирующие антигены.

Основные факторы патогенности стрептококков.
1)Белок М главный фактор патогенности. М-белки стрептококка - фибриллярные молекулы, образуют фимбрии на поверхности клеточной стенки стрептококков группы А. М-белок определяет адгезивные свой-ства, угнетает фагоцитоз, определяет антигенную типоспецифичность и обладает свойствами суперантигена.
2)Капсула. Она состоит из гиалуроновой кислоты, аналогичной той, которая входит в состав ткани, поэтому фагоциты не распознают стрептококки, имеющие капсулу, как чужеродные антигены.
3)Эритрогенин скарлатинозный токсин, суперантиген, вызывает СТШ. Раз¬личают три серотипа (А, В, С). Обладает пирогенным, аллерген¬ным, иммуносупрессивным и митогенным действием, разрушает тромбоциты.
4)Гемолизин (стрептолизин) О разрушает эритроциты, обладает цитотоксическим, в том числе лейкотоксическим и кардиотоксическим, действием.
5)Гемолизин (стрептолизин) 5 обладает гемолитическим и цитотоксическим действием.
6)Стрептокиназа фермент, который превращает преактиватор в активатор, а он плазминоген в плазмин, последний и гидролизует фибрин. Таким образом, стрептокиназа, активируя фибринолизин крови, повышает инвазивные свойства стрептококка.
7)Фактор, угнетающий хемотаксис (аминопептидаза), подавляет подвижность нейтрофильных фагоцитов.
8)Гиалуронидаза фактор инвазии.
9)Фактор помутнения гидролиз липопротеидов сыворотки крови.
10)Протеазы разрушение различных белков; возможно, с ними связана ткане¬вая токсичность.
11)ДНКазы (А, В, С, D) - гидролиз ДНК.
11)Способность взаимодействовать с Fс-фрагментом IgG с помощью рецепто¬ра II - угнетение системы комплемента и активности фагоцитов.
13)Выраженные аллергенные свойства стрептококков, обусловливают сенсибилизацию организма.

Особенности патогенеза и клиники. Стрептококки являются обитателями слизистых оболочек верхних дыхательных путей, пищеварительного и мочеполово¬го трактов, поэтому вызываемые ими заболевания могут быть эндогенного или экзогенного характера, т. е. вызываются либо собственными кокками, либо в ре¬зультате заражения извне. Проникнув через поврежденную кожу, стрептококки рас¬пространяются из местного очага через лимфатическую и кровеносную системы. Заражение воздушно-капельным или воздушно-пылевым путем приводит к пораже¬нию лимфоидной ткани (тонзиллиты), в процесс вовлекаются регионарные лимфа¬тические узлы, откуда возбудитель распространяется полимфатическим сосудам и гематогенно.

ПНЕВМОКОККИ
Кокки имеют форму, напоминающую пламя свечи: один конец клетки заострен, другой уплощен; располагаются обычно парами (плоские концы обращены друг к другу), иногда в виде коротких цепочек. Жгутиков не имеют, спор не образуют. В организме человека и животных, а также на средах, содержащих кровь или сыворотку, образуют капсулу. Грамположительны, но в молодых и старых культурах нередко грамотрицательны. Факультативные анаэробы. Температурный оптимум для роста 37 °С, при температуре ниже 28 °С и выше 42 °С не растут. Оптимальная рН для роста 7,27,6. Пневмококки образуют перекись водорода, но у них нет каталазы, поэтому для рос¬та они требуют добавления субстратов, содержащих этот фермент (кровь, сыворот¬ка). На кровяном агаре мелкие круглые колонии окружены зеленой зоной, обра-зующейся в результате действия экзотоксина гемолизина (пневмолизина). Рост на сахарном бульоне сопровождается помутнением и выпадением небольшого осадка.
4. Этиология и патогенез скарлатины. Работы Г. Н. Габричевского и И. Г.Савченко по изучению этиологии скарлатины. Микробиологическая диагностика стрептококковых заболеваний.
Скарлатина острое инфекционное заболевание, которое клинически проявляется ангиной, лимфаденитом, мелкото¬чечной ярко-красной сыпью на коже и слизистой оболочке с последующим шелуше-нием, а также общей интоксикацией организма и наклонностью к гнойно-септичес¬ким и аллергическим осложнениям.
Возбудителями скарлатины являются бета-гемолитические стрептококки группы А, имеющие М-антиген и продуцирующие эритрогенин. Решающий вклад в выяснение истинной причины скарлатины был сделан русскими учеными Г. Н. Габричевским, И. Г. Савченко, еще в 1905-1906 гг. показал, что скар¬латинозный стрептококк вырабатывает токсин, а полученная им антитоксическая сыворотка обладает хорошим лечебным действием.

Заражение при скарлатине происходит в основном воздушно-капельным путем, однако входными воротами могут быть и любые раневые поверхности. Инкубаци¬онный период 37, иногда 11 дней. В патогенезе скарлатины находят свое отраже¬ние 3 основных момента, связанные со свойствами возбудителя:
1. действие скарлатинозного токсина, который обусловливает развитие токсико¬за первый период болезни. Он характеризуется поражением периферических кро¬веносных сосудов, появлением мелкоточечной сыпи ярко-красного цвета, а также повышением температуры и общей интоксикацией. Развитие иммунитета связано с появлением и накоплением в крови антитоксина;
2. действие самого стрептококка. Оно неспецифично и проявляется в развитии различных гнойно-септических процессов (отиты, лимфадениты, нефриты появля¬ются на 23-й нед. болезни);
3. сенсибилизация организма. Она находит свое отражение в виде различных ос¬ложнений типа нефрозонефритов, полиартритов, сердечно-сосудистых заболеваний и т. п. на 23-й нед. болезни.

Лабораторная диагностика. Основным методом диагностики стрептококко¬вых заболеваний является бактериологический. Материалом для исследования слу¬жат кровь, гной, слизь из зева, налет с миндалин, отделяемое ран. Решающим этапом исследования выделенной чистой культуры является определение ее серогруппы. Для этой цели используют два метода.
А. Серологический определение группового полисахарида с помощью ре¬акции преципитации. Для этой цели используют соответствующие группоспецифические сыворотки.
Б. Метод группирования основан на способности аминопептидазы (фер¬мент, который продуцируют стрептококки серогрупп А и D) гидролизовать пирролидин-нафтиламид. С этой целью выпускают коммерческие наборы необходимых реагентов, предназначенных для определения стрептококков группы А в кровяных и бульонных культурах. Однако специфичность этого метода составляет менее 80 %.
Серотипирование стрептококков серогруппы А производят с помощью реакции либо преципитации (определяют М-серотип), либо агглютинации (определяют Т-серотип) только в эпидемиологических целях.
5. Менингококки. Характеристика морфологических, культуральных и биохимических свойств. Серогруппы. Патогенез менингококковых инфекций. Специфическая про¬филактика.
N. meningitidis возбудитель гнойного цереброспинального менингита был впервые обнаружен в 1884 г. Е. Маркиафавой и Е. Челли, а выделен в 1887 г. А. Вей- ксельбаумом.
Менингококки грамотрицательные шаровидные клетки диаметром 0,6 0,8 мкм. В мазках, приготовленных из материала, взятого от больного, они имеют форму кофейного зерна, часто располагаются парами или тетрадами, или беспоря¬дочно, нередко внутри лейкоцитов незавершенный фагоцитоз. В мазках из куль¬тур менингококки имеют правильную круглую форму, но разные размеры, распола¬гаются беспорядочно или тетрадами, наряду с грамотрицательными могут быть и грамположительные кокки. Спор не образуют, жгутиков не имеют. Все менинго¬кокки, кроме группы В, образуют капсулу. Содержание Г + Ц в ДНК 50,5 51,3 мол %. Менингококки строгие аэробы, на обычных средах не растут. Для их роста требуется добавление сыворотки, оптимальная для роста рН 7,27,4, темпера¬тура 37 °С, при температуре ниже 22 °С не растут. Колонии на плотных средах нежные, прозрачные, размером 23 мм. На сывороточном бульоне образуют помут¬нение и небольшой осадок на дне. На поверхности через 23 дня появляется плен¬ка.
Биохимическая активность менингококков невелика. Они ферментируют глюко¬зу и мальтозу с образованием кислоты без газа, не разжижают желатин, оксидазоположительны.

Серогруппы.
Капсульные полисахаридные антигены; в зависимости от их специфичности менингококки делятся на следующие группы: А, В, С, У, X, Z, D, N. 29Е, W35, Н, I, К, L.

Особенности патогенеза и клиники. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Входными воротами инфекции является носоглотка, откуда менингококки проникают в лимфатические сосуды и в кровь. Менингококки могут вызывать сле¬дующие клинические формы болезни: назофарингит (наиболее легкая форма болез¬ни); менингококцемия (менингококковый сепсис); в результате преодоления гематоэнцефалического барьера менингококки могут проникнуть в спинномозговую жидкость и вызвать наиболее тяжелую форму болезни эпидемический церебро¬спинальный менингит гнойное воспаление мозговых оболочек спинного и голов¬ного мозга. У таких больных ликвор мутный, содержит много лейкоцитов и при пункции вытекает струей вследствие высокого давления. В некоторых случаях раз-вивается менингококковый эндокардит. При менингококцемии поражаются надпо¬чечники и свертывающая система крови. Многообразие клинических проявлений болезни определяется, по-видимому, состоянием специфического иммунитета, с од¬ной стороны, и степенью вирулентности менингококка, с другой. Летальность при тяжелых формах менингита до применения сульфаниламидных препаратов и анти-биотиков достигала 6070 %. Она остается достаточно высокой до сих пор, в нема¬лой степени это зависит от появления у менингококков резистентности к сульфанил¬амидным препаратам и антибиотикам.

Специфическая профилактика. Для создания искусственного иммунитета против менингита предложены вакцины, получаемые из высокоочищенных полиса¬харидов серогрупп А, С, У и W135, но каждая из них формирует лишь группоспецифический иммунитет.

6. Патогенез менингококковых заболеваний. Бактериологическая диагностика. Ме¬тоды обнаружения менингококковых антигенов (коагглютинация, латекс-агглютинация) и антител (РИМ, ИФМ, метод эритроиммуноадсорбции).
Особенности патогенеза и клиники. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Входными воротами инфекции является носоглотка, откуда менингококки проникают в лимфатические сосуды и в кровь. Менингококки могут вызывать сле¬дующие клинические формы болезни: назофарингит (наиболее легкая форма болез¬ни); менингококцемия (менингококковый сепсис); в результате преодоления гематоэнцефалического барьера менингококки могут проникнуть в спинномозговую жидкость и вызвать наиболее тяжелую форму болезни эпидемический церебро¬спинальный менингит гнойное воспаление мозговых оболочек спинного и голов¬ного мозга. У таких больных ликвор мутный, содержит много лейкоцитов и при пункции вытекает струей вследствие высокого давления. В некоторых случаях раз-вивается менингококковый эндокардит. При менингококцемии поражаются надпо¬чечники и свертывающая система крови. Многообразие клинических проявлений болезни определяется, по-видимому, состоянием специфического иммунитета, с од¬ной стороны, и степенью вирулентности менингококка, с другой. Летальность при тяжелых формах менингита до применения сульфаниламидных препаратов и анти-биотиков достигала 6070 %. Она остается достаточно высокой до сих пор, в нема¬лой степени это зависит от появления у менингококков резистентности к сульфанил¬амидным препаратам и антибиотикам.

Лабораторная диагностика. Используются следующие методы.
Бактериологический выделяют чистую культуру возбудителя и проверяют ее чувствительность к сульфаниламидным препаратам и антибиотикам. Материалом для исследования служат ликвор, кровь, экссудат, слизь из зева и носоглотки.
Выделить возбудителя от больного человека удается не всегда, поэтому большое значение имеют серологические реакции, с помощью которых у больных обнаружи¬вают либо специфические менингококковые антигены, либо антитела к ним.
Для обнаружения антигенов могут быть использованы следующие серологичес¬кие реакции: коагглютинации, латекс-агглютинации, реакция встречного иммуноэлектрофореза, иммуноферментный метод и микрометод эритроиммуноадсорбции.
Для обнаружения антител в крови больных и переболевших применяют РПГА и ИФМ, в которых в качестве антигенов используют группоспецифические полиса¬хариды.

8. Гонококки, характеристика морфологических, культуральных и биохимических свойств. Методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых го¬нококками.
Гонорея инфекционное заболевание человека, вызываемое гонококком и характеризующееся воспалительным пораже¬нием преимущественно слизистых оболочек мочеполовых органов.
Возбудитель Neisseria gonorrhoeae - кокк, имеющий сходство с кофейным зерном или почкой, располагается парами, вогнутые стороны клеток обращены друг к другу. Размеры 0,70,8, иногда 1,251,60 мкм. При электронно-микроскопическом исследовании вокруг гонококка обнаруживают слизистое капсулоподобное образование толщиной 0,350,40 мкм, благодаря ему кокки не соприка¬саются между собой: между ними сохраняется щель. Гонококки грамотрицательны, они хорошо воспринимают основные анилиновые красители. Для окрашивания препаратов из гонорейного гноя чаще используют метиленовый синий, так как при этом лучше выявляется бобовидная форма гонококков, а для отличия от других сходных диплококков обязательна окраска по Граму. Гонококки не имеют жгутиков, капсул, спор и пигмента не образуют.
На мясо-пептонном агаре они растут плохо, лучше размножаются на средах, содержащих сыворотку, асцитическую жидкость или кровь. Гемолиза не вызывают. Для роста гонококков необходимо наличие в среде железа. Добавление к плотным питательным средам крахмала, холестерола, альбумина или частичек угля способствует росту, а добавление ионов Са++ повышает жизнеспособность. Оптимальная температура для роста 3536 С, оптимальная рН 7,27,6. Гонококки строгие аэробы, но при первичных посевах лучше вырастают при некотором повы¬шении содержания С02.
Вирулентные для человека гонококки, выде¬ленные от больных острой гонореей, обладают пилями и образуют мелкие, в виде капель, блестящие колонии, обозначаемые как Т1 и Т2. Колонии больших размеров, плоские и тусклые (Т3 и Т4), образуют невирулентные и не содержащие пилей гоно¬кокки.
Из углеводов гонококки ферментируют только глюкозу с образованием кис¬лоты без газа.

Методы диагностики: бактериоскопический материалом для исследования является гнойное отделяемое уретры, влагалища, шейки матки, предстательной железы и других органов, пораженных, гонококком, а также осадок и нити мочи. Как правило, мазки окрашивают по Граму и метиленовым синим. Гонококки обна¬руживают по трем характерным для них признакам: грамотрицательная окраска, бобовидные диплококки, внутриклеточное расположение.
Для обна¬ружения гонококков в мазке применяют также метод прямой и непрямой иммуно¬флуоресценции.

(на педфаке нет). Клебсиеллы и вызываемые ими заболевания. Лабораторная диагностика, профилактика.

Клебсиеллы. Это условно-патогенные грамотрицательные бактерии. Относятся к отделу Gracilicutes, семейству Entero-bacteriaceae, роду Klebsiella, виду K.pneumoniae.
Клебсиеллы, род капсульных неспороносных бактерий. Характерный представитель Klebsiella pneumoniae (палочка Фридлендера), имеет форму палочки (0,30,5 ? 5 мк), располагается одиночно или попарно, неподвижна, грамотрицательна, образует слизистую капсулу. Хорошо растет на обычных питательных средах. На плотных средах образует круглые, выпуклые, блестящие, слизистые колонии. Сбраживает глюкозу, сахарозу, лактозу с образованием кислоты и газа, желатину не разжижает, молоко подкисляет, но не свёртывает, сероводорода и индола не образует, восстанавливает нитраты. Факультативный аэроб; оптимальная температура роста 37 °С. Обитает на слизистой оболочке носа, рта и кишечника здоровых людей. Условно патогенна, может вызывать воспаление лёгких у человека. Др. К. вызывают риносклерому и озену. У многих сельскохозяйственных животных К. вызывают клебсиеллёз.
Клебсиеллёз, инфекционное заболевание разных видов животных. Возбудитель капсульные бактерии рода Klebsiella.
Один из возбудителей пневмонии, также ассоциирована с инфекциями мочеполовой системы, нозокомиальных инфекций человека. K. pneumoniae является одним из возбудителей пневмонии, а также урогенитальных инфекций, гнойных абсцессов печени, селезёнки. Вызывает гнойные и фиброзные плевриты, перикардиты, гаймориты, эндофтальмиты. Важный возбудитель нозокомиальных инфекций. Микроорганизм также патогенен и для некоторых животных.
Микробиологическая диагностика. Выбор материала для исследования зависит от локализации процесса. Выделяется чистая культура и идентифицируется по морфологическим, тинкториальным, биохимическим и антигенным свойствам.
Лечение. Для лечения используют антибиотики широкого спектра действия.
Профилактика. Специфическая профилактика не разработана.



Особоопасные инфекции

1. Возбудитель чумы, характеристика его свойств. Резервуары микроба в природе. Пути и способы заражения человека.
Y. pestis имеет длину 12 мкм и толщину 0,30,7 мкм. В мазках из организма больного и из трупов погибших от чумы людей и грызунов выглядит как короткая овоидная (яйцевидная) палочка с биполярной окраской. В мазках из бульонной
культуры палочка располагается цепочкой, в мазках из агаровых культур беспорядочно. по Граму окрашивается отрицательно.спор не образует, жгутиков не имеет. Оптимальная для роста температура 2728 °С
на жидких и плотных питательных средах: на бульоне он проявляется образованием рыхлой пленки, от которой спускаются нити в виде сосулек, напоминающих сталактиты, на дне рыхлый осадок, бульон остается прозрачным. Развитие колоний на плотных средах проходит через три стадии: через 1012 ч под микроскопом рост в виде бесцветных пластинок (стадия «битого стекла»); через 1824 ч стадия «кружевных платочков», при микроскопи-ровании заметна светлая кружевная зона, расположенная вокруг выступающей центральной части, желтоватой или слегка буроватой окраски. Через 4048 ч наступает стадия «взрослой колонии» -буровато-очерченный центр с выраженной периферической зоной. На средах с кровью колонии У. pestis зернистые со слабо выраженной периферической зоной.
Для У. pestis характерно наличие капсуль-ного антигена (фракция I), антигенов Т, VW, белков плазмокоагулазы, фибрино-лизина, белков наружной мембраны и рН6-антигена.
Основным источником чумы в природе являются грызуны и зайцеобразные.Чумной микроб размножается в просвете пищеварительной трубки блох. В ее переднем отделе образуется пробка («чумной блок»), содержащая большое количество микробов. При укусе млекопитающих с обратным током крови в ранку с пробки смывается часть микробов, что и ведет к заражению.
Заражение человека происходит через укус блох, при прямом контакте с заразным материалом, воздушно-капельным, редко алиментарным путем (например, при употреблении мяса верблюдов, больных чумой)
2. Микробиологический диагноз чумы. Правила работы с возбудителем чумы. Выде¬ление и идентификация возбудителя. Подвиды и варианты чумной палочки. Спе¬цифическая профилактика чумы.
Лабораторная диагностика. Используются бактериоскопический, бактериологический, серологический и биологический методы, а также аллергическая проба с пе-стином (для ретроспективной диагностики). Материалом для исследования служат: пунктат из бубона (или его отделяемое), мокрота, кровь, при кишечной форме - испражнения. У. pestis идентифицируют на основании морфологии, культуральных, биохимических признаков, пробы с чумным фагом и с помощью биологической пробы.
Простым и надежным методом определения антигенов чумной палочки в иссле-дуемом материале является применение РПГА, особенно с использованием эритро-цитарного диагностикума, сенсибилизированного моноклональными антителами к капсульному антигену, и ИФМ. Эти же реакции могут быть использованы для об-наружения антител в сыворотке больных.
Биологический метод диагностики заключается в заражении исследуемым мате-риалом (когда он очень загрязнен сопутствующей микрофлорой) морской свинки накожно, подкожно или, реже, внутрибрюшинно.
При работе с материалом, содержащим возбудителя чумы, требуется соблюдение строгого режима, поэтому все исследования проводятся только хорошо обученным персоналом в специальных противочумных учреждениях.
Профилактика. Постоянный контроль за природными очагами чумы и органи-ция мероприятий по предупреждению заболеваний людей в стране осуществляет-ся специальной противочумной службой. Она включает в себя пять противочумных иститутов и десятки противочумных станций и отделений.
Несмотря на наличие природных очагов, с 1930 г. на территории России в них не было ни одного случая заболевания людей чумой. Для специфической профилактики чумы используется живая ослабленная вакцина из штамма EV. Она вводится накожно, внутрикожно или подкожно. Кроме того, предложена сухая таблетированная вакцина для перорального применения. Поствакцинальный иммунитет формируется к 56-му дню после прививки и сохраняется в течение 1112 мес.

3(повт.). Возбудитель сибирской язвы, характеристика его свойств, дифференциация от антракоидов.
Возбудитель - Bacillus anthracis относится к семейству Bacillaceae (класс Bacilli). Это крупная палочка длиной 58, иногда до 10 мкм, диаметром 1,01,5 мкм. Концы у живых палочек слегка закруглены, у убитых они как бы обрублены и слегка вогнуты. Палочки в мазках располагаются парами и очень часто цепочками, особенно длинными на питательных средах, напоминая бамбуковую трость. Сибиреязвенная палочка хорошо красится всеми анилиновыми красителями, грамположительна. Жгутиков не имеет, образует споры, но только вне организма человека или животного при наличии кислорода и определенной влажности. Температурный оптимум для спорообразования 3035 °С Споры располагаются центрально. Возбудитель сибирской язвы образует капсулу, но только в организме животного или человека, на питательных средах она наблюдается редко. Возбудитель сибирской язвы аэроб или факультативный анаэроб. Температурный оптимум для роста 37-38 °С, рН среды 7,2-7,6. К питательным средам нетребователен. На плотных средах образует характерные крупные матовые шероховатые колонии R-формы. Структура колоний, благодаря цепочечному расположению палочек, которые образуют нити, отходящие от центра, имеет сходство с локонами или львиной гривой (рис. 98). На агаре, содержащем пенициллин (0,05-0,5 ЕД/мл), через 3 ч роста бациллы распадаются на отдельные шарики, располагающиеся в виде цепочки, образуя феномен «жемчужного ожерелья». В бульоне палочка, находяша-яся в R-форме, растет на дне, образуя осадок в виде комочка ваты, бульон при этом остается прозрачным. ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, образует H2S, свертывает молоко и пептонизирует его, каталазопо-зитивна, имеет нитратредуктазу.


4. Микробиологический диагноз сибирской язвы. Выделение возбудителя, его иден¬тификация. Реакция Асколи. Специфическая профилактика сибирской язвы.
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: при кожной форме содержимое пузырьков, отделяемое карбункула или язвы; при кишеч-ной испражнения и моча; при легочной мокрота; при септической кровь. Ис-следованию могут подвергаться различные объекты внешней среды (почва, вода), пищевые продукты, сырье животного происхождения и прочий материал. Для обнаружения возбудителя используют бактериоскопический метод: обнаружение грам-положительных палочек, окруженных капсулой (в материале от животных или человека) или содержащих споры (объекты внешней среды). Основной метод диагностики бактериологический выделение чистой культуры и ее идентификация, с обязательной проверкой на патогенность для лабораторных животных. В случаях, когда исследуемый материал сильно загрязнен сопутствующей, особенно гнилост-иой, микрофлорой, используют биологическую пробу: подкожно заражают белых мышей или морских свинок. При наличии В. anthracis мыши и морские свинки поги-бывают через 2426 ч, кролики через 23 сут., при явлениях общего сепсиса; селезенка резко увеличена, в месте введения материала инфильтрат. В препаратахмазках из крови и органов капсульные палочки.
Из числа серологических реакций с диагностической целью применяется главнымобразом реакция термопреципитации Асколи. Ее используют в тех случаях, когда трудно рассчитывать на выделение чистой культуры возбудителя (в частности, при исследовании шерсти, шкур, щетины и прочих предметов). Реакция Асколи основана на обнаружении термостабильных антигенов возбудителя, которые сохраняются гораздо дольше, чем жизнеспособные вегетативные клетки и споры сибиреязвенной палочки. Для ретроспективной диагностики сибирской язвы используют аллергическую пробу с антраксином.
В настоящее время в России для профилактики сибирской язвы у людей и животных применяют живую споровую бескапсульную вакцину СТИ, которая готовится из авирулентного штамма сибиреязвенной палочки. Вакцина высоко эффективна. Прививки проводят однократно накожно или вну-трикожно тем лицам, у которых в силу их профессии существует возможность заражения сибирской язвой. Ревакцинацию проводят через год.

5. Возбудитель туляремии. Характеристика его свойств. Резервуары в природе. Пути и способы заражения туляремией. Типы природных очагов. Варианты туляремийных бактерий и их отличия.
Francisella tularensis. К этому же роду относится F. novicida.
Это очень маленькие, размерами 0,20,7 мкм кокковидные или эллипсоидные полиморфные палочки, которые очень часто при специальных методах окрашивания дают биполярную окраску; йеподвижны, грамотрицательны, спор не образуют; каталазонегативны, образуют HjS, строгие аэробы, температурный оптимум для роста 37 °С. рН 6,77,2. Вирулентные штаммы имеют капсулу, образуют кислоту без газа при ферментации некоторых углеводов (глюкоза, мальтоза, манноза, фруктоза, декстрин)
Э. Френсис предложил для выращивания туляремийной палочки питательный агар, содержащий 0,050,1 % цистина, 1 % глюкозы и 510 % крови. На такой среде рост более пышный и грубый: колонии круглые с гладкой поверхностью, молочного цвета, влажные, со слизистой консистенцией, окружены характерным зеленым ореолом.
F. tularensis в S-форме (вирулентный) имеет два антигена О и Vi (капсульный антиген)
Основным резервуаром туляремии в природе являются грызуны, среди которых в естественных условиях наблюдаются эпизоотии. Человек заражается только от животных, от человека к человеку возбудитель не передается. Возбудитель обнаружен у 82 видов грызунов и зайцеобразных, наиболее часто встречается у представителей 4 семейств: мышевидных (Muridae), заячьих (Leporidae), беличьих (Sciuridae) и тушканчиковых (Dipodidae).
Заражение человека происходит всеми возможными способами: прямым и непрямым контактом с больными грызунами, их трупами или с предметами, зараженными грызунами; алиментарным (при употреблении пищевых продуктов и воды, инфицированных грызунами), воздушно-пылевым и трансмиссивным путем.




6. Методы микробиологической диагностики туляремии. Аллергическая проба, ее постановка и оценка результатов. Серологические реакции. Специфическая про¬филактика туляремии.
Лабораторная диагностика. В связи с полиморфной клинической картиной ту-ляремии в ее диагностике решающее значение имеют лабораторные методы: бакте-риологический, биологический, серологические реакции и аллергическая проба. Бактериологический метод имеет существенную особенность: выделить возбудителя от больного человека непосредственно не удается. Поэтому исследуемым материалом (пунктат бубона, гной из конъюнктивы, пленка из зева, мокрота, испражне-ния, кусочки органов из трупов грызунов) вначале заражают подкожно белых мышей или морских свинок, а затем уже делают посев крови или материала из органов для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологичес-ким, культуральным (не растет на обычных средах) свойствам, по реакции агглютинации со специфической сывороткой и окончательно биологической пробой на белых мышах.
F. tularensis можно выделить также путем заражения в желточный мешок кури- ных эмбрионов. Возбудитель легко в нем обнаруживается с помощью метода им-
мунной флуоресценции. Однако биологические пробы и бактериологические иссле-
дования по туляремии возможно проводить только в специальных лабораториях. В обычных клинических условиях для диагностики туляремии применяют только серологические реакции (со 2-й нед. развернутая пробирочная агглютинация, РПГА.)
и аллергическую пробу с тулярином. Последняя является наиболее ранним
методом специфической диагностики. При внутрикожной постановке она бывает положительной с 35-го дня болезни, при накожной с 68-го дня. В природных очагах туляремии для контроля эпизоотии среди грызунов используют РПГА и ее варианты (РНАг, РТПГА), а также ИФМ с целью обнаружения антигенов туляре-мийной палочки в трупах грызунов, погадках хищных птиц, помете хищников.
Специфическая профилактика. Основным методом предупреждения заболевания людей, проживающих на территории природных очагов туляремии, является вакцинация, осуществляемая с помощью живой (ослабленной) сухой накожной вакцины. Вакцину вводят однократно, иммунитет не менее 57 лет.

9. Методы микробиологической диагностики бруцеллеза. Выделение возбудителя и его идентификация. Специфическая профилактика бруцеллеза. Борьба с бруцеллезом.

Лабораторная диагностика бруцеллеза осуществляется с помощью биологической пробы, бактериологического метода, серологических реакций, аллергической пробы Бюрне и метода ДНКДНК гибридизации. Материалом для исследования служат кровь, костный мозг, конъюнктивальный секрет, моча, грудное молоко (у кормящих матерей), реже испражнения, околосуставная жидкость. Поскольку основным местом пребывания возбудителя в организме являются клетки гемо- или лимфопоэтической систем, предпочтение следует отдавать выделению гемо- или миелокультуры. При бактериологическом исследовании необходимо обеспечить условия для роста В. abortus (потребность в СО2). Идентификацию выделенных культур бруцелл проводят на основании указанных в табл. 30 признаков. К биологической пробе (заражение морских свинок) прибегают в том случае, когда материал сильно загрязнен посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. Серологические реакции могут быть использованы либо для обнаружения антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для обнаружения бруцеллезных антигенов, которые могут циркулировать в крови либо в свободном виде, либо в виде комплексов антиген + антитело (ЦИК циркулирующие иммунные комплексы), используют следующие реакции: РПГА (особенно с использованием эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл); реакцию агрегат-гемагглю-тинации (РАГА); эритроциты несут антитела к бруцеллезным антигенам; реакции коагглютинации, преципитации и ИФМ. Для обнаружения антител в сыворотке больного используют: реакцию агглютинации Райта, реакцию Кумбса (для выявления неполных антител), реакцию иммунофлуоресценции в непрямом варианте, рПГА, ИФМ, РСК, ОФР, а также ускоренные реакции на стекле: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинации, непрямую реакцию гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные ЛПС бруцелл, в присутствии антител и комплемента лизируются).
Специфическая профилактика осуществляется с помощью живой вакцины, приготовленной из штамма В. abortus (живая бруцеллезная вакцина ЖБВ), только в очагах козье-овечьего бруцеллеза. Вакцина применяется накожно, однократно. Ревакцинацию проводят только лицам, у которых проба Бюрне и серологические реакции отрицательны

10. Серологические методы диагностики бруцеллеза, экспресс-методы. Аллергиче¬ская проба Бюрне, методика ее постановки, оценка результатов. Реакции агрегат-гемагглютинации (РАГА) и непрямого гемолиза (РНГ).
Серологические реакции могут быть использованы либо для обнаружения антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для обнаружения бруцеллезных антигенов, которые могут циркулировать в крови либо в свободном виде, либо в виде комплексов антиген + антитело (ЦИК циркулирующие иммунные комплексы), используют следующие реакции: РПГА (особенно с использованием эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл); реакцию агрегат-гемагглю-тинации (РАГА); эритроциты несут антитела к бруцеллезным антигенам; реакции коагглютинации, преципитации и ИФМ. Для обнаружения антител в сыворотке больного используют: реакцию агглютинации Райта, реакцию Кумбса (для выявления неполных антител), реакцию иммунофлуоресценции в непрямом варианте, рПГА, ИФМ, РСК, ОФР, а также ускоренные реакции на стекле: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинации, непрямую реакцию гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные ЛПС бруцелл, в присутствии антител и комплемента лизируются).



Кишечные инфекции

1. Острые диарейные заболевания. Их возбудители. Плазмиды, определяющие адгезивные и токсигенные свойства диареегенных кишечных палочек. Программа ВОЗ по борьбе с острыми диарейными заболеваниями, основные принципы их терапии.
Острые бактериальные кишечные инфекции диареи относятся к числу наиболее распространенных болезней. Их возбудителями являются многие виды бактерий, но наиболее часто представители семейства Enterobacteriaceae.
Семейство насчитывает более 30 родов и более 100 видов. Наиболее важными для человека являются роды: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Salmonella, Erwinia, Serratia, Edwardsiella, Shigella. Yersinia, Proteus, Morganella, Providencia.

Факторы адгезии и колонизации. Они необходимы для прикрепления к клет¬кам ткани и их колонизации. Обнаружено три варианта фактора колонизации:
а) CFA/I-CFA/VI (англ. colonization factor) они имеют фимбриальную структуру;
б) EAF (англ. enteropathogenic Е. coli adherence factor) интимин белок наружной мембраны.
в) Adhesion Henle-407 фимбриальные структуры, выявляются по способности бактерий прикрепляться к клет¬кам Henle-407. Все они кодируются плазмидными генами.
Факторы патогенности Е. coli контролируются не только хромо¬сомными генами клетки-хозяина, но и генами, привносимыми плазмидами или уме¬ренными конвертирующими фагами. Все это свидетельствует о возможности воз¬никновения патогенных вариантов Е. coli в результате распространения среди них плазмид и умеренных фагов.

2.Микрофлора воды. Роль воды в распространении возбудителей инфекционных болезней. Понятие о коли-титре и коли-индексе.

Вода, как и почва, является естественной средой обитания для многих видов микро¬организмов всех царств жизни. Разнообразные микроорганизмы обитают как в воде от¬крытых водоемов, так и в грунтовых водах: палочки, кокки, вибрионы, спириллы, спи¬рохеты, различные фотосинтезирующие бактерии, грибы, простейшие, вирусы и плаз¬миды. Многие виды галофильных бактерий обитают в морских водах. Численность микроорганизмов в воде определяется главным образом содержанием в ней органичес¬ких веществ, которые под влиянием микроорганизмов подвергаются совершенно таким же превращениям, как и в почве. В 1 мл воды количество микробов может превышать несколько миллионов. Грунтовые подземные воды чище, так как, просачиваясь через почву, вода подвергается своеобразной фильтрации, в результате которой большинство микробов задерживается в фильтрующем слое. Численность микроорганизмов в воде открытых водоемов подвержена колебаниям и зависит от климатических условий, времени года, а главным образом, от степени загрязнения рек, озер и морей сточными и ка¬нализационными водами и отходами промышленных, агропромышленных и других предприятий. В реки, озера, моря из прибрежных городов и других населенных пунктов выбрасывается такое количество сточных вод, несущих милиариады микробов и содержа¬щих огромное количество органических веществ, что вода не успевает самоочищаться. В результате возникла и сохраняется серьезная глобальная экологическая проблема.
Питьевая вода считается хорошей, если общее количество бактерий в 1 мл не более 100; сомнительной 100150; загрязненной, если содержание бактерий в 1 мл 500 и более. Количество микроорганизмов в придонном слое ила озер и рек варьирует в пределах от 100 до 400 млн на 1 г.
Вода играет исключительно важную роль в эпидемиологии многих инфекционных заболеваний, особенно кишечных (брюшного тифа, дизентерии, сальмонеллезов, холе¬ры, вирусных гепатитов, полиомиелита и т. п.), возбудители которых выделяются вме¬сте с испражнениями от больных и носителей и вместе со сточными водами поступают в воду открытых водоемов, а оттуда нередко и в питьевую воду. Хотя патогенные бак¬терии слабо приспособлены к существованию в воде, где на них оказывают неблагопри-ятное действие солнечный свет и различные другие факторы, включая конкурентную водную микрофлору, многие из них могут достаточно длительное время сохраняться в воде. Более того, в летнее время при наличии в воде органических веществ, щелочной рН и благоприятной температуры некоторые из них, в том числе холерный вибрион, могут даже размножаться. Заразиться можно и через лед, в котором патогенные бакте¬рии могут сохраняться в течение нескольких недель и даже месяцев.
Загрязненная вода главный источник заражения холерой, дизентерией, брюш¬ным тифом и другими кишечными инфекциями, а также лептоспирозом и, нередко, туляремией.
Микробиологические методы исследования воды сводятся к определению общего количества микроорганизмов в 1 мл воды и выявлению тех или иных видов патоген¬ных бактерий (особенно холерного вибриона). Кроме того, поскольку прямое выделе¬ние патогенных бактерий из воды требует специальных исследований, существуют косвенные методы, позволяющие дать количественную оценку степени фекального загрязнения.

Нормативы микробиологических показателей питьевой воды таковы:
1. Общее микробное число (количество микроорганизмов в 1 мл воды) не бо¬лее 100.
2. Число бактерий группы кишечной палочки (коли-индекс) количество БГКП в 1000 мл воды не более
3. Эшерихии (показатель свежего фекального загрязнения) количество эшерихий в 1000 мл воды отсутствие.
4. Колифаги количество бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1000 мл воды отсутствие.


3. Семейство кишечных бактерий. Общая характеристика семейства, состав, прин¬ципы классификации. Использование тест-систем для ускоренной идентификации возбудителей кишечных инфекций.
Острые бактериальные кишечные инфекции диареи относятся к числу наиболее распространенных болезней. Их возбудителями являются многие виды бактерий, но наиболее часто представители семейства Enterobacteriaceae.
1) единство морфологии короткие, не образующие спор палочки с закруглен¬ными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, не образующие или об¬разующие капсулы;
2) отрицательная окраска по Граму;
3) ферментация глюкозы (и ряда других углеводов) с образованием кислоты и газа или только кислоты;
4) отсут¬ствие, как правило, протеолитических свойств;
5) факультативные анаэробы или аэробы;
6) хорошо растут на обычных питательных средах;
7) место обитания ки¬шечный тракт и дыхательные пути;
8) фекально-оральный (в некоторых случаях - воздушно-капельный) путь заражения;
9) отсутствие цитохромоксидазы;
10) каталазопозитивны;
11) восстанавливают нитраты в нитриты;
12) хемоорганотрофы;

Семейство насчитывает более 30 родов и более 100 видов. Наиболее важными для человека являются роды: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Salmonella, Erwinia, Serratia, Edwardsiella, Shigella. Yersinia, Proteus, Morganella, Providencia.

Для дифференциации родов используют в основном биохимические признаки. Каждый род представляет собой компактную группу бактерий со сходны¬ми биохимическими свойствами. В свою очередь деление на виды внутри родов так¬же производят по биохимическим признакам и с учетом степени гомологии ДНК между представителями данного вида и у бактерий, представляющих разные виды.
В общей сложности для дифференциации родов и видов семейства используют бо¬лее 40 различных признаков, в том числе: ферментация глюкозы, маннита, лактозы, сахарозы, рамнозы, образование H2S, индола, рост на голодной среде с цитратом на¬трия, гидролиз мочевины, декарбоксилирование орнитина, дегидрирование аргини¬на, дезаминирование фенилаланина, подвижность, образование ацетоина при фер-ментации глюкозы (реакция ФогесаПроскауэра), проба с метиловым красным (MR) и др.
Большое значение для классификации внутри родов и видов имеет изучение ан¬тигенного строения.
В основу серологической классификации энтеробактерий поло¬жено изучение их О-, Н- и К-антигенов.

Лучше всего для идентификации и дифференциации возбудителей ОКЗ (всех категорий) использовать тест-системы ПЦР (Полимеразная цепная реакция)
ПЦР имитирует естественный процесс репликации (размножения) ДНК, в результате чего, в течение нескольких часов из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в крошечных количествах.
4. Кишечная палочка, ее характеристика. Антигенное строение. Заболевания, вы¬зываемые кишечной палочкой. Санитарное значение кишечной палочки.
Основной представитель рода Escherichia Е. coli - перитрихи (или неподвижные), ферментируют лак¬тозу с образованием кислоты и газа (или лактозонегативны), на голодной среде с цитратом не растут, реакция ФогесаПроскауэра отрицательна, проба с MR поло¬жительна, не имеют фенилаланиндезаминазы, не растут на среде с KCN.
Культуральные свойства. Е. coli факультативный анаэроб, хорошо растет на обычных питательных средах колонии на агаре круглые, выпуклые, полупрозрач¬ные. Рост на бульоне в виде диффузного помутнения. Температурный оптимум для роста 37 С, растет в диапазоне от 10 до 45 °С, оптимальная рН 7,27,5. На всех дифференциально-диагностических средах колонии Е. coli. разлагающей лактозу, окрашены в цвет индикатора (на среде Эндо - темно-малиновые с металлическим блеском).
Биохимические свойства. Кишечная палочка способна ферментировать следующие углеводы с образованием кислоты и газа: глюкозу, лак¬тозу, маннит, арабинозу, галактозу, иногда сахарозу и некоторые другие углеводы; образует индол; как правило, не образует H2S; восстанавливает нитраты в нитриты, не разжижает желатин, не растет на голодной среде с цитратом, дает положительную реакцию с MR и отрицательную Фогеса-Проскауэра.

Антигенное строение.
Существует 164 группы по О-антигену и 55 серовариантов по Н-антигену.
Антигенная характеристика диареегенных E.coli включает в себя номера О- и Н-антигенов, на¬пример, 055:116; 0157:Н7; О-антиген означает принадлежность к определенной серо- группе, а Н-антиген ее серовариант. Всего в список диареегенных Е. coli включено 43 О-серогруппы и 57 ОН-серовариантов.

Е. coli используется в международных стандартах как показатель степени фекального загрязнения воды, особенно питьевой, и пищевых продуктов.
5. Диареегенные серотипы кишечной палочки, их категории (группы). Особенности антигенного строения. Факторы патогенности, их генетический контроль. Бактериологическом диагностики заболеваний, вызываемых диареегенными серотипами кишечной палочки.
Антигенное строение.
Существует 164 группы по О-антигену и 55 серовариантов по Н-антигену.
Антигенная характеристика диареегенных E.coli включает в себя номера О- и Н-антигенов, на¬пример, 055:116; 0157:Н7; О-антиген означает принадлежность к определенной серогруппе, а Н-антиген ее серовариант. Всего в список диареегенных Е. coli включено 43 О-серогруппы и 57 ОН-серовариантов.

Факторы патогенности Е. coli. Способность Е. coli вызывать различные заболе¬вания обусловлена наличием у нее следующих факторов патогенности:
1) Факторы адгезии и колонизации. Они необходимы для прикрепления к клет¬кам ткани и их колонизации.
Все они кодируются плазмидными генами.
2) Экзотоксины. У патогенных Е. coli обнаружены экзотоксины, повреждающие мембраны (гемолизин), угнетающие синтез белка (токсин Шига).
а) Гемолизин порообразующий токсин.
б) Токсин Шига (STX) Синтез цитотоксинов STX-1 и STX-2 контролируется у Е. coli генами умеренных конвертирующих профагов.
Эндотоксины-липополисахариды. Они определяют антигенную специфич¬ность бактерий (которая детерминируется повторяющейся боковой цепочкой сахаров) и форму колоний (утрата боковых цепочек приводит к превращению S-колоний в R-колонии).
Таким образом, факторы патогенности Е. coli контролируются не только хромо¬сомными генами клетки-хозяина, но и генами, привносимыми плазмидами или уме¬ренными конвертирующими фагами. Все это свидетельствует о возможности воз¬никновения патогенных вариантов Е. coli в результате распространения среди них плазмид и умеренных фагов.

ЕТЕС включает 17 серогрупп.
EIEC включает 9 серогрупп,
ЕРЕС. Группа включает 9 серогрупп класса 1 и четыре серогруппы класса 2.
ЕНЕС.
Микробиологическая диагностика. Основной метод бак¬териологический. Определяют вид чистой культуры (грамотрицательные палочки, оксидазоотрицательные, ферментирующие глю¬козу и лактозу до кислоты и газа, образующие индол, не образую¬щие сероводород) и принадлежность к серогруппе, что позволяет, отличить условно-патогенные кишечные палочки от диареегенных. Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологичес¬кое значение, заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных иммунных сывороток.
6. Возбудители брюшного тифа и паратифом А и В. Характеристики их свойств, антигенное строение. Патогенез брюшного тифа.

Брюшной тиф тяжелое острое инфекционное заболевание, характеризующее¬ся глубокой общей интоксикацией, бактериемией и специфическим поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника. Интоксикация проявляется сильной головной болью, помрачением сознания, бредом.
Возбудитель брюшного тифа Salmonella typhi . Возбудители паратифов А и В S. paratyphi А и S. paratyphi В.
Морфологически они неразличимы короткие грам¬отрицательные палочки с закругленными концами, длиной 13,5 мкм, диаметром 0,50,8 мкм; спор и капсул не образуют, обладают активной подвижностью (перитрихи), факультативные анаэробы, темпера¬турный оптимум для роста 37 °С, рН 6,87,2; не требовательны к питательным средам. Рост на бульоне сопровож¬дается помутнением, на МПА образуются нежные круглые, гладкие, полупрозрач¬ные колонии диаметром 24 мм. Однако колонии S. typhi, имеющие Vi-антиген, мутные. Колонии S. paratyphi В более грубые, через несколько дней у них по пери¬ферии формируются своеобразные валики. На средах Эндо колонии всех трех сальмонелл бесцветны, на висмут-сульфит-агаре черного цвета.
Из¬бирательной средой для возбудителей брюшного тифа и паратифов является желчь или желчный бульон.
Биохимические свойства. Возбудители брюшного тифа и паратифов дают поло¬жительную реакцию с MR, не образуют индола, не разжижают желатин, восстанав¬ливают нитраты в нитриты, не образуют ацетоина. S. typhi не растет на голодном ага¬ре с цитратом. Основные биохимические различия между возбудителями брюшного тифа и паратифов заключаются в том, что S. typhi ферментирует глюкозу и некото¬рые другие углеводы с образованием только кислоты, a S. paratyphi А и S. para¬typhi В с образованием и кислоты, и газа.

Антигенное строение. Сальмонеллы имеют О- и Н-антигены, По О-антигенам они разделяются на большое количество серогрупп, а по Н-антигенам на серотипы. S. typhi, S. paratyphi А и S. paratyphi В отличаются друг от друга как по О-антигенам (относятся к разным серогруппам), так и по Н-антигенам..
S. typhi помимо О- и Н-антигенов имеет еще один поверхностный антиген, который они назвали антигеном вирулент¬ности (Vi-антигеном). По химической природе Vi-антиген отличается от О- и Н-ан¬тигенов, он состоит из трех различных фракций, но его основу составляет сложный полимер N-ацетилгалактозаминоуроновая кислота с м, м. 10 МД.

Особенности патогенеза и клиники. Инкубационный период при брюшном тифе 15 дней. Это зависит от заражающей дозы, вирулентности возбудителя и иммунного статуса больного. Патогенез и кли¬ническая картина брюшного тифа и паратифов А и В очень сходны. В развитии бо¬лезни четко выявляются следующие стадии:
1) стадия вторжения. Возбудитель через рот проникает в тонкий кишечник;
через лимфатические пути сальмонеллы проникают в лимфоидные образова¬ния подслизистой оболочки тонкого кишечника (пейеровы бляшки и солитарные фолликулы) и, размножаясь в них, вызывают лимфангоит и лимфаденит (своеоб¬разные брюшно-тифозные гранулы);
2) бактериемия выход возбудителя в большом количестве в кровь. Стадия бак¬териемии начинается в конце инкубационного периода и может (в отсутствие эф¬фективного лечения) продолжаться в течение всей болезни;
3) стадия интоксикации наступает вследствие распада бактерий под действием бактерицидных свойств крови и высвобождения эндотоксинов;
4) стадия паренхиматозной диффузии. Из крови сальмонеллы поглощаются мак¬рофагами костного мозга, селезенки, лимфатических узлов, печени и других орга¬нов. В большом количестве возбудитель брюшного тифа накапливается в желчных ходах печени и в желчном пузыре, где он находит благоприятные условия для свое¬го размножения и где бактерицидные свойства крови ослаблены влиянием желчи;
5) выделительно-аллергическая стадия. По мере формирования иммунитета начи¬нается процесс освобождения от возбудителя. Этот процесс осуществляют все железы: слюнные, кишечника, потовые, молочные (во время кормления ребенка), мочевыде- лительная система и особенно активно печень и желчный пузырь.
6) стадия выздоровления. Процесс заживления язв происходит без возникнове¬ния обезображивающих рубцов на местах, очистившихся от некротических налетов
На 89-й день болезни, а иногда и позднее, у многих больных появляется розеолезная сыпь на коже живота, груди и спины. Появление сыпи (мелких красных пя¬тен) является следствием местных продуктивно-воспалительных процессов аллер¬гической природы в поверхностных слоях кожи около лимфатических сосудов, ко¬торые в изобилии содержат возбудителя болезни.

7. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифом. Фаготипирование их возбудителей и его значение. Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

Лабораторная диагностика. Самым ранним и основным методом диагностики брюшного тифа и паратифов является бактериологический получение гемокультуры или миелокультуры. С этой целью исследуют кровь или пунктат костного моз¬га. Кровь лучше засевать на среду Рапопорт (желчный бульон с добавлением глюко¬зы, индикатора и стеклянного поплавка) в соотношении 1: 10 (на 10 мл среды 1 мл крови). Посев следует инкубировать при температуре 37 СС не менее 8 дней, а с уче¬том возможного наличия L-форм до 34 нед.
Для идентификации выделенной культуры сальмонелл используют (с учетом их биохимических свойств) диагности¬ческие адсорбированные сыворотки, содержащие антитела к антигенам 02 (S. para¬typhi А), 04 (S. paratyphi В) и 09 (S. typhi). Если выделенная культура S. typhi не аг¬глютинируется 09-сывороткой, ее необходимо проверить с Vi-сывороткой.
Бактериологическое исследование испражнений, мочи и желчи проводят для подтверждения диагностики, контроля бактериологического выздоровления при выписке реконвалесцентов и для диагностики бактерионосительства. В этом случае материал предварительно засевают на среды обогащения (среды, содержащие хими¬ческие вещества, например селенит, которые угнетают рост Е. coli и других предста-вителей микрофлоры кишечника, но не угнетают роста сальмонелл), а затем со сре¬ды обогащения на дифференциально-диагностические среды (Эндо, висмут-суль¬фит-агар) с целью выделения изолированных колоний и получения из них чистых культур, идентифицируемых по указанной выше схеме. Для обнаружения О- и Vi- антигенов в сыворотке крови и испражнениях больных могут быть использованы РСК, РПГА с антительным диагностикумом, реакции коагглютинации, агрегат-гем- агглютинации, ИФМ. Для ускоренной идентификации S. typhi перспективно приме¬нение в качестве зонда фрагмента ДНК, несущего ген Vi-антигена (34 ч).
Наиболее надежной и специфической является последняя реакция (Vi-гемагглютинации).

Обнаружены 3 необычных мутанта S. typhi: Vi-I R-форма, клетки лишены Н- и О-антигенов. но стойко сохраняют Vi-антиген; 0-901 - лишен Н- и Vi-антигенов; Н-901 содержит О- и Н-антигены, но лишен Vi-антигена, Все три антигена: О-, Н- и Vi имеют выраженные иммуногенные свойства. Наличие Vi-антигенов позво¬ляет подвергать культуры S. typhi фаготипированию. Чувствительность их к соответствующим фагам является стабильным признаком, поэтому фаготипирование имеет важное эпидемиологическое значение.
Разработаны также схемы фаготипирования S. paratyphi А и S. paratyphi В, по ко¬торым они разделяются на десятки фаготипов. Существенно, что фаготипы сальмо¬нелл могут ни по каким другим признакам не отличаться друг от друга.
Серологический ме¬тод обнаружения 0- и Н- антител в РПГА.


8. Бактерионосительство при брюшном тифе и методы ого выявлении. Особенности антигенного строении возбудители брюшного тифа и его фаготипирование.

Примерно 5 % переболевших становятся хроническими носителями сальмонелл тифа или паратифов. Известное значение в формировании носительства играют местные воспалительные процессы в желчевыводящих (иногда в мочевыводящих) путях, которые часто возникают в связи с тифо-паратифозными инфекциями или обостряются в результате этих инфекций. Однако не менее важную роль в формиро¬вании длительного носительства сальмонелл брюшного тифа и паратифов А и В играет L-трансформация их. L-формы сальмонелл утрачивают Н-, частично 0- и Vi-антигены, располагаются, как правило, внутриклеточно (внутри макрофагов костного мозга), поэтому становятся не доступными ни для химиопрепаратов, ни для антител и могут длительно персистировать в организме переболевшего человека. Возвращаясь в исходные формы и полностью восстанавливая свою антигенную структуру, сальмонеллы вновь становятся вирулентными, вновь проникают в желч¬ные ходы, вызывают обострение процесса бактерионосительства, выделяются с ис¬пражнениями, а такой носитель становится источником заражения для окружаю¬щих. Не исключено также, что формирование бактерионосительства зависит от ка¬кого-то дефицита иммунной системы.

Антигенное строение. Сальмонеллы имеют О- и Н-антигены, По О-антигенам они разделяются на большое количество серогрупп, а по Н-антигенам на серотипы. S. typhi, S. paratyphi А и S. paratyphi В отличаются друг от друга как по О-антигенам (относятся к разным серогруппам), так и по Н-антигенам..
S. typhi помимо О- и Н-антигенов имеет еще один поверхностный антиген, который они назвали антигеном вирулент¬ности (Vi-антигеном). По химической природе Vi-антиген отличается от О- и Н-ан¬тигенов, он состоит из трех различных фракций, но его основу составляет сложный полимер N-ацетилгалактозаминоуроновая кислота с м, м. 10 МД.

Обнаружены 3 необычных мутанта S. typhi: Vi-I R-форма, клетки лишены Н- и О-антигенов. но стойко сохраняют Vi-антиген; 0-901 - лишен Н- и Vi-антигенов; Н-901 содержит О- и Н-антигены, но лишен Vi-антигена, Все три антигена: О-, Н- и Vi имеют выраженные иммуногенные свойства. Наличие Vi-антигенов позво¬ляет подвергать культуры S. typhi фаготипированию. Чувствительность их к соответствующим фагам является стабильным признаком, поэтому фаготипирование имеет важное эпидемиологическое значение.
Разработаны также схемы фаготипирования S. paratyphi А и S. paratyphi В, по ко¬торым они разделяются на десятки фаготипов. Существенно, что фаготипы сальмо¬нелл могут ни по каким другим признакам не отличаться друг от друга.

9. Микроорганизмы - возбудители пищевых отравлений. Пищевые отравлении, обусловленные стафилококками. Типы энтеротоксинов, их свойства, способы выявления.
Пища нередко является причиной отравлений, природа которых может быть са¬мой различной.
Наиболее простая классификация пищевых отравлений такова: различают пище¬вые отравления немикробного и микробного происхождения.
Пищевые отравления микробного происхождения подразделяют на 2 группы: пищевые интоксикации и пищевые токсикоинфекции.
Пищевые интоксикации отравления, обусловленные исключительно токсина¬ми микроорганизмов. Они могут возникать и в тех случаях, когда живые возбудите¬ли в пищевом продукте, подвергнутом термической обработке, отсутствуют.
Пищевые токсикоинфекции возникают только в связи с употреблением в пищу продуктов, обильно зараженных бактериями.
Токсикоинфекции являются следствием массивного обсеменения пищевого про¬дукта живыми возбудителями. Для пищевых токсикоинфекций существует только один путь передачи через пищу.
Пищевые токсикоинфекции могут вызывать представители по крайней мере пя¬ти семейств бактерий:
Enterobacteriaceae (роды - Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus, Serratia, Hafnia, Enterobacter, Citrobacter и др.),
Vibrionaceae (V. parahaemolyti- cus),
Pseudomonadaceae,
Streptococcaceae (протеолитические варианты стрептококков серогруппы D),
Bacillaceae роды Bacillus (В. cereus),
Clostridium (С. perfringens, cepo- типы A, D, F; C. botulinum, серотипы А, В, С, E, F).
Инфицирование стафилококками пи¬щевых продуктов частая причина пищевых отравлений.

Основным методом диагностики пищевых токсикоинфекций является бактерио¬логический. Он применяется с учетом биологии возможного возбудителя (грамот¬рицательные и грамположительные палочки, стрептококки, бациллы, клостридии). Материалом для исследований служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, продукты, послужившие причиной отравления. Обращают внимание на обнаружение большого количества бактерий в продукте, таких же бактерий в выделениях из кишечника и желудка, в том числе от нескольких человек при групповом отравлении.
Подтверждением диагноза являет¬ся обнаружение в сыворотке крови переболевших людей (через 12 нед.) антител к возбудителю.

11. Возбудители дизентерии. Характеристика свойств. Факторы патогенности. Антигенное строение шигелл. Классификации дизентерийных бактерий.
Дизентерия инфекционное заболевание, характеризующееся общей интокси¬кацией организма, поносом и своеобразным поражением слизистой оболочки тол¬стого кишечника. Возбудителями собственно дизентерии является большая группа биологически сходных бактерий, объединенных в род Shigella.
В настоящее время род Shigella включает более 40 серотипов. Все они представля¬ют собой короткие неподвижные грамотрицательные палочки, не образующие спор и капсул, которые хорошо растут на обычных питательных средах, не растут на го¬лодной среде с цитратом или малонатом в качестве единственного источника угле¬рода; не образуют H2S, не имеют уреазы; реакция ФогесаПроскауэра отрицатель¬на; глюкозу и некоторые другие углеводы ферментируют с образованием кислоты без газа (кроме некоторых биотипов Shigella flexneri: S. manchestern S. newcastle); Шигеллы факультативные анаэробы, температурный оптимум для роста 37 С, оптимальная рН среды 6,77,2.

Международная классификация шигелл построена с учетом их биохимических признаков (маннит-неферментирующие, маннит-ферментирующие, медленно фер¬ментирующие лактозу шигеллы) и особенностей антигенной структуры.
У шигелл обнаружены различные по специфичности О-антигены: общие для се¬мейства Enterobacteriaceae, родовые, видовые, групповые и типоспецифические, а также К-антигены; Н-антигенов у них нет.

В классификации учитываются только групповые и типоспецифические О-антигены. В соответствии с этими признаками род Shigella подразделяется на 4 подгруп¬пы, или 4 вида, и включает 44 серотипа.
В подгруппу А (вид Shigella dysenteriae) включены шигеллы, не ферментирующие маннита. Вид включает в себя 12 сероти¬пов (112).
К под¬группе В (вид Shigella flexnen) относятся шигеллы, обычно ферментирующие маннит.
К подгруппе С (вид Shigella boydii) относятся шигеллы, обычно ферментирующие маннит.
В подгруппу D (вид Shigella sonnei) включены шигеллы, обычно ферментирующие маннит и способные медленно (через 24 ч инкубации и позже) ферментировать лак¬тозу и сахарозу.
Для внутривидовой классифика¬ции шигелл Зонне предложено два метода:
1) деление их на 14 биохимических типов и подтипов по способности ферменти¬ровать мальтозу, рамнозу и ксилозу;
2) деление на фаготипы по чувствительности к набору соответствующих фагов.
12. Клебсиеллы и вызываемые ими заболевания. Лабораторная диагностика, профилактика.

Клебсиеллы. Это условно-патогенные грамотрицательные бактерии. Относятся к отделу Gracilicutes, семейству Entero-bacteriaceae, роду Klebsiella, виду K.pneumoniae.
Клебсиеллы, род капсульных неспороносных бактерий. Характерный представитель Klebsiella pneumoniae (палочка Фридлендера), имеет форму палочки (0,30,5 ? 5 мк), располагается одиночно или попарно, неподвижна, грамотрицательна, образует слизистую капсулу. Хорошо растет на обычных питательных средах. На плотных средах образует круглые, выпуклые, блестящие, слизистые колонии. Сбраживает глюкозу, сахарозу, лактозу с образованием кислоты и газа, желатину не разжижает, молоко подкисляет, но не свёртывает, сероводорода и индола не образует, восстанавливает нитраты. Факультативный аэроб; оптимальная температура роста 37 °С. Обитает на слизистой оболочке носа, рта и кишечника здоровых людей. Условно патогенна, может вызывать воспаление лёгких у человека. Др. К. вызывают риносклерому и озену. У многих сельскохозяйственных животных К. вызывают клебсиеллёз.
Клебсиеллёз, инфекционное заболевание разных видов животных. Возбудитель капсульные бактерии рода Klebsiella.
Один из возбудителей пневмонии, также ассоциирована с инфекциями мочеполовой системы, нозокомиальных инфекций человека. K. pneumoniae является одним из возбудителей пневмонии, а также урогенитальных инфекций, гнойных абсцессов печени, селезёнки. Вызывает гнойные и фиброзные плевриты, перикардиты, гаймориты, эндофтальмиты. Важный возбудитель нозокомиальных инфекций. Микроорганизм также патогенен и для некоторых животных.
Микробиологическая диагностика. Выбор материала для исследования зависит от локализации процесса. Выделяется чистая культура и идентифицируется по морфологическим, тинкториальным, биохимическим и антигенным свойствам.
Лечение. Для лечения используют антибиотики широкого спектра действия.
Профилактика. Специфическая профилактика не разработана.


13. Холерный вибрион. Характеристика основных свойств. Экзотоксин (холероген), структура, молекулярный механизм действия. Методы определения токсигонности холерного вибриона (прямые и косвенные).
По определению ВОЗ, холера это болезнь, для которой типичен острый тяжелый обезвоживающий понос с испражнениями в виде рисового отвара, являющийся следствием заражения Vibrio cholerae.
V. cholerae относится к семейству Vibrionaceae, которое включает в себя несколько родов (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium). Род Vibrio насчитыва¬ет более 25 видов, из которых наибольшее значение для человека имеют V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus и V.fluvialis.
Короткие, не образующие спор и капсул, изогнутые или прямые грамотрицательные палочки, диаметром 0,5 мкм, длиной 1,53,0 мкм, подвижные; хорошо и быстро растут на обычных средах, хемоорганотрофы, ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа. Оксидазоположительны, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты, расщепляют жела¬тин, часто дают положительную реакцию ФогесаПроскауэра (т. е. образуют ацетилметилкарбинол), уреазы не имеют, не образуют H2S, имеют декарбоксилазы ли¬зина и орнитина, но не имеют аргининдигидролазы.
Вибрионы аэробы и факультативные анаэробы, температурный оптимум для роста 1837 °С, рН 8,69,0.
Экзо¬токсин холероген (СТХ АВ). Мо¬лекула холерогена состоит из двух фрагментов А и В. Фрагмент А состоит из двух пептидов A1 и A2, он обладает специфическим свойством холерного токсина и на¬деляет его качествами суперантигена.
Фрагмент В состоит из 5 одинаковых субъединиц. Он выполняет две функции:
1) распознает рецептор (моносиалоганглиозид) энтеро- цита и связывается с ним;
2) формирует внутримембранный гидрофобный канал для прохождения субъединицы А. Пептид А2 служит для связывания фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептид A1 (АДФ-рибозилтрансфераза) Он взаимодействует с НАД, вызывает его гидролиз; образующаяся при этом АДФ-рибоза связывается с регуляторной субъединицей аденилатциклазы. Это ведет к угнетению гидролиза ГТФ. Возникающий комплекс ГТФ + аденилатциклаза вызы¬вает гидролиз АТФ с образованием цАМФ.

Для обнаружения способности V. cholerae продуцировать холероген можно ис¬пользовать различные методы.
1) Биологическая проба на кроликах. При внутримышечном введении холерных вибрионов кроликам-сосункам (возраст не более 2 нед.) у них развивается типич¬ный холерный синдром: диарея, обезвоживание и гибель кролика.
2) Непосредственное обнаружение холерогена с помощью ПЦР, ИФМ или реак¬ции пассивного иммунного гемолиза. Однако обнаружения только способности продуцировать токсин недостаточно для опреде¬ления эпидемической опасности таких штаммов. Для этого необходимо выявить на¬личие гена hap, поэтому лучше и надежнее всего дифференцировать токсигенные и эпидемические штаммы холерных вибрионов серогрупп 01 и 0139 с помощью ПЦР с применением специфических праймеров для обнаружения всех 4 генов пато-генности: ctxAB, tcp, toxR и hap.


15. Микробиологический диагноз холеры. Правила взятия материала для исследования. Выделение возбудителя и его идентификация, определение биовара. Основные принципы терапии холеры.
Лабораторная диагностика.
Основным и решающим методом диагностики холеры является бактериологический.
Материалом для исследования - испражнения и рвотные массы; на вибриононосительство исследуют испражнения; у лиц, погибших от холеры, для исследования берут лигированный от¬резок тонкого кишечника и желчный пузырь; из объектов внешней среды чаще всего исследуют воду открытых водоемов и сточные воды.
При проведении бактериологического исследования необходимо соблюдать сле¬дующие три условия:
1) как можно быстрее произвести посев материала от больного (холерный виб¬рион сохраняется в испражнениях короткий срок);
2) посуда, в которую берут материал, не должна обеззараживаться химическими веществами и не должна содержать их следы, так как холерный вибрион к ним очень чувствителен;
3) исключить возможность загрязнения и заражения окружающих.
Выделение культуры проводят по схеме: посев на ПВ, одновременно на щелоч¬ной МПА. С ПВ делают пересев на щелочной МПА. Подозрительные колонии (стекло¬видно-прозрачные) пересевают для получения чистой культуры, которую иденти¬фицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, по¬движности и окончательно типируют с помощью диагностических агглютинирую¬щих сывороток О-, QR-, Инаба и Огава и фагов (ХДФ).
Для ускоренного обнаружения холерного предложен набор бумажных индикаторных дисков, состоящих из 13 биохимических тестов (оксидаза, индол, уреаза, лактоза, глюкоза, сахароза, манноза, арабиноза, маннит, инозит, аргинин, орнитин, лизин), которые позволя¬ют дифференцировать представителей рода Vibrio от родов Aeromonas, Plesiomortas, Pseudomonas, Comamonas и от семейства Enterobacteriaceae.

Лечение больных холерой должно заключаться прежде всего в регидратации и восстановлении нормального водно-солевого обмена. С этой целью рекомендует¬ся использовать солевые растворы, например такого состава: NaCl 3,5; NaHC03 2Д КС1 - 1,5 и глюкоза - 20,0 г на 1 л воды. Такое патогенетически обоснованное лечение в сочетании с рациональной антибиотикотерапией позволяет снизить ле¬тальность при холере до 1 % и менее.



Патогенные анаэробы



1. Микрофлора почвы. Роль почвы в распространении возбудителей инфекционных болезней. Значение почвы в распространении столбняка в условиях Краснодарского края.
Почва среда обитания многочисленных видов микроорганизмов и крупнейший резервуар их в природе. Количество микробов в 1 г почвы измеряется обычно сотнями и тысячами миллионов клеток. Оно варьирует от 200 млн в глинистой почве до 5 млрд в черноземной почве. В 1 г пахотного слоя почвы содержится 110 млрд бактерий, а в слое ее толщиной 15 см на площади в 1 га может содержаться от 1 до 56 тонн микроб-ной массы. Даже в песках пустынь, где почти отсутствует влага, содержится до 100000 микробов в 1 г. Численность и видовой состав их в почве зависят от содержания в ней органических веществ и влаги, структуры почвы, способа ее сельскохозяйственной обработки, климатических условий, характера растительного покрова, степени загряз¬нения почвы отходами хозяйственной деятельности человека и многих других факто- ров. Состав микрофлоры почвы складывается из различных комбинаций бактерий (сот¬ни и тысячи видов), грибов, простейших и вирусов. Фактически она содержит предста¬вителей всех царств жизни вирусов, архебактерий, эубактерий и эукариот во всем их многообразии, которое зависит от действия многих факторов.
Самый поверхностный слой почвы содержит ограниченное число микробов из-за действия солнечных лучей и высушивания. Главная масса микробов содержится на глу¬бине 1020 см, в нижележащих ее горизонтах количество микроорганизмов уменьша¬ется, и на глубине 56 метров почва может быть уже стерильной, так как распростра¬нению микробов в глубину препятствует высокая поглотительная способность почвы.
Почва постоянно загрязняется различными отбросами, выделениями человека и животных, мертвыми растениями и животными. Огромная роль в процессах само¬очищения почвы и в круговороте веществ в природе принадлежит микроорганиз¬мам. В превращении органических веществ, поступающих в почву и образующихся в ней, принимают участие различные группы микробов: гнилостные, нитрифициру¬ющие, азотфиксирующие, денитрифицирующие и др.
Патогенные микроорганизмы попадают в почву с испражнениями, мочой, гноем, мокротой, слюной и другими выделениями, с трупами людей и животных, погибших от инфекционных заболеваний. Попадая в почву, значительная часть патогенных микроорганизмов, не образующих спор, рано или поздно погибает. Сроки выжива¬ния в почве возбудителей кишечных инфекций (дизентерии, брюшного тифа, холе¬ры), чумы, бруцеллеза, туляремии, туберкулеза широко варьируют и составляют от нескольких часов до нескольких месяцев. Отмирание патогенных бактерий в почве зависит от ряда причин: высушивания; отсутствия необходимых питательных суб¬стратов; действия антибиотических веществ, вырабатываемых почвенными бакте¬риями и грибами; солнечных лучей; бактериофагов и т. п. Значительно дольше в почве сохраняются спорообразующие патогенные бактерии аэробные и анаэробные возбудители столбняка, газовой гангрены, ботулизма (их споры также сохраняются в почве многие годы, а при благоприятных условиях прорастают и бактерии размножаются, поддер¬живая тем самым свое существование в почве). Поэтому почва играет основную роль в эпидемиологии столбняка, газовой гангрены (особенно в военных условиях) и боту¬лизма, она является основным резервуаром возбудителей этих заболеваний.

3. Возбудители газовой анаэробной инфекции. Характеристика их свойств. Патогенез заболевания. Микробиологический диагноз. Специфическая профилактика и терапия.
Газовая гангрена является полимикробной инфекцией. К ее возбудителям относят: С. perfringens, С. novyi, С. septicum, С. histolyticum, С. sordellii, С. difficile и С. sporogenes. Первое место в этиологии газовой гангрены принадлежит С. perfringens, второе С. novyi. Нормальный обитатель кишечника человека и животных, в почве в виде спор сохраняется годами и обнаруживается почти в 100 % ее образцов. Представляет собой толстую неподвижную грамположитель-ную палочку со слегка закругленными концами, длиной 3,09,0 мкм и диаметром 0,91,3 мкм. Споры овальные, располагаются субтерминально или, чаще, центрально, образуются лучше в щелочной среде. В материале из ран и на среде с сывороткой образуют капсулу.
Газовая гангрена это своеобразный патологический процесс, который дает различные клинические проявления в зависимости от места локализации. Различают следующие формы этой болезни: анаэробная инфекция мягких тканей конечностей и туловища; анаэробная инфекция мозга; послеродовая или послеабортная анаэробная инфекция; анаэробная инфекция органов брюшной полости и брюшины; анаэробная инфекция органов грудной полости и анаэробный остеомиелит.
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат кусочки пораженных тканей (некротизированная и пограничные с ней участки) и отечная жидкость. Кроме того, исследованию в случае необходимости подвергают перевязочный и шовный материал (шелк, кетгут), одежду, образцы почвы; при пищевых интоксикациях, вызванных клостридиями, испражнения и продукты. Микробиологическая диагностика заключается в выделении из исследуемого материала возбудителя и его идентификации, основанной на изучении морфологических, культуральных, биохимических свойств и определении токсигенности. Исследование состоит из нескольких этапов:
1) бактериоскопия отделяемого раны или экссудата;
2) выделение возбудителя и его идентификация;
3) заражение белых мышей исследуемым материалом, фильтратом бульонной культуры или кровью больных для обнаружения токсина;
4) идентификация токсина клостридий с помощью реакций нейтрализации специфическими антитоксическими сыворотками в биологических пробах на белых мышах или культурах клеток (С. difficile).
Главный метод предупреждения газовой гангрены своевременная и правильная хирургическая обработка ран. В случае особо тяжелых ранений, которые могут повлечь развитие газовой гангрены, больному с профилактической целью вводят по 10 000 ME антитоксических сывороток против наиболее частых возбудителей С. perfringem, С. novyi и С. septicum. С лечебной целью вводят те же сыворотки по 50 000 ME. При отсутствии эффекта сыворотки вводят повторно. Серотерапия должна обязательно сочетаться с эффективной антибиотикотера-пией и соответствующим общеукрепляющим лечением.
Специфическая профилактика. Для создания искусственного иммунитета против анаэробной инфекции созданы препараты из различных анатоксинов, однако широкого применения они не получили.
4. Возбудитель столбняка, характеристика его свойств. Столбнячный токсин, его функции, механизм действия. Анатоксин. Специфическая профилактика и терапия столбняка.
С. tetani прямая палочка длиной 2,45,0 мкм, диаметром 0,51,1 мкм, иногда образующая длинные нити. Большинство штаммов подвижно (перитрихи). Споры круглые, располагаются терминально, придавая возбудителю вид булавки или барабанной палочки Грамположительна, но в старых культурах становится грамотри-цательной. Капсулы не образует
Главным фактором патогенности С. tetani, определяющим патогенез и клинику столбняка, является вырабатываемый им сильнейший экзотоксин. Смертельная доза его для человека составляет менее 2 нг/кг массы тела. Экзотоксин состоит из двух фракций тетаноспазмина (нейротоксина) и тетаноли-зина (разрушает эритроциты).
Тетанолизин выделяется из клеток с первых дней развития культуры с помощью механизма активного транспорта. Тетаноспазмин через клеточную стенку клостридий не проходит, а выделяется в культуральную жидкость лишь при распаде микробных клеток, главным образом в фазе их ускоренной гибели, поэтому он накапливается в бульонной культуре к 57-му дню инкубации.
Тетаноспазмин синтезируется внутриклеточно в виде неактивного протоксина одноцепочечного полипептида. Превращение протоксина в активный нейротоксин происходит после лизиса микробной клетки и осуществляется бактериальной протеазой, которая разрезает полипептид на две части. Активный внеклеточный нейротоксин («разрезанный» токсин) состоит из двух связанных между собой дисульфидными связями цепей: легкой L (около 50 кД) и тяжелой -Н (около 100 кД).
Специфическое лечение и плановая профилактика столбняка.
Лечение. Для специфического лечения столбняка применяют противостолбнячную антитоксическую сыворотку, получаемую путем гипериммунизации лошадей столбнячным анатоксином и токсином. Сыворотка применяется в дозе 350 МЕ/кг веса больного. Сыворотку вводят после десенсибилизации внутримышечно (или внутривенно, это должно быть указано в инструкции). Лечение начинают при появлении первых симптомов столбняка, сыворотку вводят повторно до исчезновения рефлекторных судорог. Получен иммунохимически чистый столбнячный антитоксин, который, благодаря более высокой удельной активности и более длительной персистенции в организме, обеспечивает терапевтический эффект лучше, чем антитоксическая сыворотка, очищенная методом Диаферм-3. Хороший терапевтический эффект дает и гомологичный иммуноглобулин, т. е. иммуноглобулин людей, иммунизированных против столбняка. Серотерапию необходимо сочетать с антибиотикотерапией (пенициллины, цефалоспорины).
Специфическая профилактика столбняка включает два вида мероприятий.
1. Проведение плановой активной иммунизации детей и взрослых против столбняка.
2. Экстренная иммунопрофилактика в связи с травмами.

5. Микробиологический диагноз столбняка. Выделение возбудителя, биологическая проба. Специфическая профилактика столбняка, ее значение в условиях Краснодарского края. Проблема столбняка новорожденных в развивающихся странах мира и пути его предупреждения.
Микробиологическая диагностика включает в себя следующие этапы:
1) бактериоскопия исходного материала;
2) посев для выделения возбудителя и его идентификации;
3) обнаружение столбнячного токсина.
Выделение С. tetani из патологического материала или других образцов проводят по обычной для строгих анаэробов схеме, используя различные плотные и жидкие среды, а идентификацию на основе морфологических, культуральных, биохими¬ческих и токсигенных свойств. Специально для выделения С. tetani П. Филдсом предложен следующий метод: исследуемый материал засевают в каплю конденсаци¬онной жидкости на дне пробирки с косячком из кровяного или сывороточного агара. Обычно через 1824 ч инкубации при температуре 37 °С в анаэробных условиях С. tetani благодаря своему ползучему росту, обусловленному жгутиками, образуют тонкую пленку по всей скошенной поверхности среды. Для получения чистой куль¬туры производят 35 таких пересевов.
Наиболее простым и эффективным методом микробиологической диагностики столбняка является биологическая проба на белых мышах.
Для обнаружения столбнячного токсина может быть ис¬пользована РПГА с антительным эритроцитарным диагностикумом.

Специфическая профилактика столбняка включает два вида мероприятий.
Проведение плановой активной иммунизации детей и взрослых против столбняка.
Экстренная иммунопрофилактика в связи с травмами.



6. Возбудитель ботулизма, характеристика основных свойств. Условия роста. Токсин, его особенности, типы. Продукция токсина у протеолитических и непротеолитических вариантов возбудителя. Действие на организм человека. Методы определения токсина и его типа. Профилактика ботулизма.

С. botulinum довольно крупные полиморфные палочки с закругленными концами, длиной 49 мкм, диаметром 0,51,5 мкм, иногда образуются укороченные формы; располагаются беспорядочно, иногда парами или в виде коротких цепочек; в старых культурах могут образовывать длинные нити; грамположительны, подвижны, имеют перитрихиальные жгутики. Капсулы не образуют, споры овальные, располагаются субтерминально, придавая палочке форму, напоминающую теннисную ракетку (рис. 106). Споры в культурах появляются через 2448 ч от начала инкубации. С. botulinum не размножается в продуктах при кислой реакции (рН 3,04,0) и при концентрации NaCl выше 10 %.
С. botulinum образует 8 типов токсинов: А, В, Cl, C2, D, E, F, G, различающихся по антигенной специфичности.
Структура, активация, механизм действия ботулотоксина.
С. botulinum может продуцировать несколько типов токсических комплексов. Функции нетоксических негемагглю-тинирующих, как и гемагглютинирующих белков (их идентифицировано три типа: 15 кД, 35 кД и 70 кД), пока не установлены.
Нейротоксические компоненты любого серотипа ботулинических токсинов и любого типа токсического комплекса имеют сходную структуру и биологические свойства. Они синтезируются в виде единой полипептидной цепи с м. м. 150 кД (7S-токсин), которая не обладает значительной токсической активностью. Эта полипептидная цепь превращается в активный нейротоксин только после ее разрезания бактериальной протеазой или протеазами кишечного тракта человека. В результате точечного гидролиза возникает структура, состоящая из двух связанных между собой дисульфидными связями цепей тяжелой, с м. м. 100 кД (Н-цепь), и легкой, с м. м. 50 кД (L-цепь). Н-цепь ответственна за прикрепление нейротоксина к рецепторам мембраны клеток, а L-цепь осуществляет специфическое блокирующее действие нейротоксина на холинергическую передачу возбуждения в синапсах.
7. Ботулизм, патогенез, микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и терапия ботулизма.

Особенности патогенеза и клиники. Ботулизм протекает как токсикоинфекция. Организм поражается не только токсином, содержащимся в пищевом продукте, но и токсином, который образуется в пищеварительном тракте и тканях в связи с проникновением туда возбудителя. Люди чрезвычайно чувствительны к ботулиническим токсинам типов А, В, С, Е и F. Заболевания наблюдались даже тогда, когда человек брал в рот зараженный продукт, но не проглатывал его. Смертельная доза токсина для человека составляет 1 нг/кг массы тела. Ботулинический токсин быстро всасывается в желудке и кишечнике, проникает в кровь и избирательно действует на ядра продолговатого мозга и ганглиозные клетки спинного мозга. Следует отметить, что, попадая в пищеварительный тракт человека или животного, клостридии ботулизма размножаются, проникают в кровь и оттуда во все органы, продуцируя при этом токсины. Инкубационный период у людей варьирует от двух часов до 10 дней, но чаще всего он составляет 1824 ч. Чем больше инфицирующая доза, тем короче инкубационный период и тем тяжелее протекает заболевание.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: от больного промывные воды желудка, испражнения, кровь, моча, рвотные массы; от трупа содержимое желудка, тонких и толстых кишок, лимфатические узлы, а также головной и спинной мозг. Исследованию подвергают и продукт, послуживший причиной отравления. Исследования проводят с целью обнаружения и идентификации С. botulinum или, чаще всего, с целью обнаружения ботулинического токсина и установления его серотипа.
Для выделения культуры С. botulinum материал засевают на плотные среды и накопительную среду КиттаТароцци. Из жидких культур после инкубирования делают посевы на плотные среды с целью получения изолированных колоний, а затем и чистых культур, которые идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим и токсигенным свойствам.
Профилактика. Соблюдение правил приготовления продуктов, домашних консервов. Для специфической актив¬ной профилактики ботулизма разработаны и применяются по показаниям тетра- и трианатоксины, в состав которых входят ботулинические анатоксины типов А, В и Е. Для экстренной пассивной профилактики используют противоботулинические антитоксические сыворотки.

"Капельные" инфекции

1. Возбудитель дифтерии. Характеристика морфологических, культуральных и биохимических свойств. Типы дифтерийной палочки. Токсин, структура, механизм действия, генетический контроль синтеза токсина. Патогенез дифтерии. Специфическая профилактика.

Возбудитель дифтерии Corynebacterium diphtheriae Возбудитель дифтерии относится к роду Corynebacterium (класс Actinobacteria). В морфологическом отношении характеризуется тем, что клетки булавовидно утол¬щены на концах, образуют ветвление, особенно в старых культурах, и содержат зернистые включения.
С. diphtheriae прямые или слегка изогнутые неподвижные палочки длиной 1,0-8,0 мкм и диаметром 0,3-0,8 мкм, спор и капсул не образуют. Очень часто они имеют вздутия на одном или обоих концах, часто содержат метахроматические гра¬нулы зерна волютина (полиметафосфаты), которые при окрашивании метилено- вым синим приобретают голубовато-пурпурный цвет. Для их обнаружения предло¬жен особый метод окрашивания по Нейссеру. При этом палочки окрашиваются в со¬ломенно-желтый, а зерна волютина в темно-коричневый цвет, и располагаются обычно по полюсам. С. diphtheriae хорошо окрашивает ся анилиновыми красителями, грамположительна, но в старых культурах нередко обесцвечивается и имеет отрицательную окраску по Граму. Для нее характерен вы¬раженный полиморфизм, особенно в старых культурах и под влиянием антибиоти¬ков.
Дифтерийная палочка является аэробом или факультативным анаэробом, темпе¬ратурный оптимум для роста 3537 °С (границы роста 1540 °С), оптимальная рН 7,67,8. К питательным средам не очень требовательна, но лучше растет на сре¬дах, содержащих сыворотку или кровь. Избирательными для дифтерийных бакте¬рий являются свернутые сывороточные среды Ру или Леффлера. С. diphtheriae ферментируют глюкозу, мальтозу, галактозу с образованием кислоты без газа, но не ферментируют (как правило) сахарозу, имеют цистиназу, не имеют уреазы и не образуют индола. По этим признакам они отличаются от тех коринеформ- ных бактерий (дифтероидов), которые чаще других встречаются на слизистой обо¬лочке глаза (С. xerosus) и носоглотки (С. pseudodiphtheriticum) и от других дифтероидов.
В природе существуют три основных варианта (биотипа) дифтерийной палочки: gravis, intermedins и mitis. Они различаются по морфологическим, культуральным, биохимическим и другим свойствам.

Экзотоксин синтезируется в виде неактивного предшественника - единой поли¬пептидной цепи с м. м. 61 кД. Его активация осуществляется собственной бактери¬альной протеазой, которая разрезает полипептид на два связанные между собой ди- сульфидными связями пептида: А (м. м. 21 кД) и В (м. м. 39 кД). Пептид В выполняет акцепторную функцию он распознает рецептор, связывается с ним и формирует внутримембранный канал, через который проникает в клетку пептид А и реализует биологическую активность токсина.

Особенности патогенеза и клиники. К дифтерии восприимчивы люди любого возраста. Возбудитель может проникнуть в организм человека через слизистые обо¬лочки различных органов или через поврежденную кожу. В зависимости от локали¬зации процесса различают дифтерию зева, носа, гортани, уха, глаза, половых органов и кожи. Возможны смешанные формы, например дифтерия зева и кожи и т. п. Инку-бационный период 210 дней. При клинически выраженной форме дифтерии в месте локализации возбудителя развивается характерное фибринозное воспаление слизистой оболочки. Токсин, вырабатываемый возбудителем, сначала поражает эпителиальные клетки, а затем близлежащие кровеносные сосуды, повышая их проницаемость. В выходящем экссудате содержится фибриноген, свертывание кото¬рого приводит к образованию на поверхности слизистой оболочки серовато-белого Цвета пленчатых налетов, которые плотно спаяны с подлежащей тканью и при отры¬ве От нее вызывают кровотечение. Следствием поражения кровеносных сосудов мо¬жет быть развитие местного отека. Особенно опасной является дифтерия зева, так как она может стать причиной дифтерийного крупа вследствие отека слизистой обо¬лочки гортани и голосовых связок, от которого раньше погибало в результате ас- фиксии 5060 % больных дифтерией детей. Дифтерийный токсин, поступая в кровь, вызывает общую глубокую интоксикацию. Он поражает преимущественно сердечно-сосудистую, симпатико-адреналовую системы и периферические нервы, аким образом, клиника дифтерии складывается из сочетания местных симптомов, зависящих от локализации входных ворот, и общих симптомов, обусловленных от¬равлением токсином и проявляющихся в виде адинамии, вялости, бледности кож¬ных покровов, понижения кровяного давления, миокардита, паралича перифериче¬ских нервов и других нарушений. Дифтерия у привитых детей, если и наблюдается, протекает, как правило, в легкой форме и без осложнений. Летальность в период до применения серотерапии и антибиотиков составляла 5060 %, ныне 36 %.

Специфическая профилактика. Основным методом борьбы с дифтерией является массовая плановая вакцинация населения. С этой целью используют раз¬личные варианты вакцин, в том числе комбинированные, т. е. направленные на од¬новременное создание иммунитета против нескольких возбудителей. Наибольшее распространение в России получила вакцина АКДС. Она представляет собой ад¬сорбированную на гидроокиси алюминия взвесь коклюшных бактерий, убитых формалином или мертиолятом (20 млрд в 1 мл), и содержит дифтерийный анаток¬син в дозе 30 флоккулирующих единиц и 10 единиц связывания столбнячного ана¬токсина в 1 мл. Вакцинируют детей с 3-месячного возраста, а затем проводят ре¬вакцинации: первую через 1,5
2 года, последующие в возрасте 9 и 16 лет, а далее через каждые 10 лет

2. Возбудитель дифтерии, характеристика его свойств. Дифтерийный токсин, его структура и механизм действия на организм человека. Методы определения токсигенности дифтерийных бактерий. Проблема бактерионосительства. Специфическая профилактика дифтерии.
Дифтерия острое инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, которое проявляется глубокой интоксикацией организма дифтерийным токсином и характерным фибринозным воспалением в месте локализации возбу¬дителя. В месте размножения возбудителя образуется плотная, серовато-белого цвета пленка.
Возбудитель дифтерии Corynebacterium diphtheriae. Возбудитель дифтерии относится к роду Corynebacterium (класс Actinobacteria). В морфологическом отношении характеризуется тем, что клетки булавовидно утол¬щены на концах, образуют ветвление, особенно в старых культурах, и содержат зернистые включения. С. diphtheriae прямые или слегка изогнутые неподвижные палочки длиной 1,0-8,0 мкм и диаметром 0,3-0,8 мкм, спор и капсул не образуют. Очень часто они имеют вздутия на одном или обоих концах, часто содержат метахроматические гра¬нулы зерна волютина (полиметафосфаты). С. diphtheriae хорошо окрашивается анилиновыми красителями, грамположительна, но в старых культурах нередко обесцвечивается и имеет отрицательную окраску по Граму. Для нее характерен вы¬раженный полиморфизм, особенно в старых культурах и под влиянием антибиоти¬ков.
Дифтерийная палочка является аэробом или факультативным анаэробом, темпе¬ратурный оптимум для роста 3537 °С (границы роста 1540 °С), оптимальная рН 7,67,8. К питательным средам не очень требовательна, но лучше растет на сре¬дах, содержащих сыворотку или кровь. Избирательными для дифтерийных бакте¬рий являются свернутые сывороточные среды Ру или Леффлера.
С. diphtheriae ферментируют глюкозу, мальтозу, галактозу с образованием кислоты без газа, но не ферментируют (как правило) сахарозу, имеют цистиназу, не имеют уреазы и не образуют индола. По этим признакам они отличаются от тех коринеформ-ных бактерий (дифтероидов).
В природе существуют три основных варианта (биотипа) дифтерийной палочки: gravis, intermedins и mitis. Они различаются по морфологическим, культуральным, биохимическим и другим свойствам.

Экзотоксин синтезируется в виде неактивного предшественника - единой поли¬пептидной цепи с м. м. 61 кД. Его активация осуществляется собственной бактери¬альной протеазой, которая разрезает полипептид на два связанные между собой дисульфидными связями пептида: А (м. м. 21 кД) и В (м. м. 39 кД). Пептид В выполняет акцепторную функцию он распознает рецептор, связывается с ним и формирует внутримембранный канал, через который проникает в клетку пептид А и реализует биологическую активность токсина. Пептид А представляет собой фермент АДФ- Рибозилтрансферазу, который обеспечивает перенос аденозиндифосфатрибозы из НАД на один из аминокислотных остатков (гистидина) белкового фактора элонга¬ции EF-2. В результате модификации EF-2 утрачивает свою активность, и это приводит подавлению синтеза белка рибосомами на стадии транслокации.

Особенности патогенеза и клиники. Возбудитель может проникнуть в организм человека через слизистые обо¬лочки различных органов или через поврежденную кожу. В зависимости от локали¬зации процесса различают дифтерию зева, носа, гортани, уха, глаза, половых органов и кожи. Возможны смешанные формы, например дифтерия зева и кожи и т. п. Инку¬бационный период 210 дней. При клинически выраженной форме дифтерии в месте локализации возбудителя развивается характерное фибринозное воспаление слизистой оболочки. Токсин, вырабатываемый возбудителем, сначала поражает эпителиальные клетки, а затем близлежащие кровеносные сосуды, повышая их проницаемость. В выходящем экссудате содержится фибриноген, свертывание кото¬рого приводит к образованию на поверхности слизистой оболочки серовато-белого Цвета пленчатых налетов, которые плотно спаяны с подлежащей тканью и при отры¬ве От нее вызывают кровотечение. Следствием поражения кровеносных сосудов мо¬жет быть развитие местного отека. Особенно опасной является дифтерия зева, так как она может стать причиной дифтерийного крупа вследствие отека слизистой обо¬лочки гортани и голосовых связок, от которого раньше погибало в результате асфиксии 5060 % больных дифтерией детей. Дифтерийный токсин, поступая в кровь, вызывает общую глубокую интоксикацию.

Специфическая профилактика. Основным методом борьбы с дифтерией является массовая плановая вакцинация населения. С этой целью используют раз¬личные варианты вакцин, в том числе комбинированные, т. е. направленные на од¬новременное создание иммунитета против нескольких возбудителей. Наибольшее распространение в России получила вакцина АКДС. Она представляет собой ад¬сорбированную на гидроокиси алюминия взвесь коклюшных бактерий, убитых формалином или мертиолятом (20 млрд в 1 мл), и содержит дифтерийный анаток¬син в дозе 30 флоккулирующих единиц и 10 единиц связывания столбнячного ана¬токсина в 1 мл. Вакцинируют детей с 3-месячного возраста, а затем проводят ре¬вакцинации: первую через 1,52 года, последующие в возрасте 9 и 16 лет, а далее через каждые 10 лет.


3. Коринебактерии дифтерии. Патогенез болезни. Лабораторная диагностика. Имму¬нитет. Специфическая профилактика и терапия. Проблема ликвидации дифтерии.
Возбудитель дифтерии Corynebacterium diphtheria. Возбудитель дифтерии относится к роду Corynebacterium (класс Actinobacteria). В морфологическом отношении характеризуется тем, что клетки булавовидно утол¬щены на концах (греч. согупе булава), образуют ветвление, особенно в старых культурах, и содержат зернистые включения.
С. diphtheriae прямые или слегка изогнутые неподвижные палочки длиной 1,0-8,0 мкм и диаметром 0,3-0,8 мкм, спор и капсул не образуют. Дифтерийная палочка является аэробом или факультативным анаэробом, темпе¬ратурный оптимум для роста 3537 °С (границы роста 1540 °С), оптимальная рН 7,67,8. К питательным средам не очень требовательна, но лучше растет на сре¬дах, содержащих сыворотку или кровь.
Особенности патогенеза и клиники. Возбудитель может проникнуть в организм человека через слизистые обо¬лочки различных органов или через поврежденную кожу. В зависимости от локали¬зации процесса различают дифтерию зева, носа, гортани, уха, глаза, половых органов и кожи. Возможны смешанные формы, например дифтерия зева и кожи и т. п. Инку¬бационный период 210 дней. При клинически выраженной форме дифтерии в месте локализации возбудителя развивается характерное фибринозное воспаление слизистой оболочки. Токсин, вырабатываемый возбудителем, сначала поражает эпителиальные клетки, а затем близлежащие кровеносные сосуды, повышая их проницаемость. В выходящем экссудате содержится фибриноген, свертывание кото¬рого приводит к образованию на поверхности слизистой оболочки серовато-белого Цвета пленчатых налетов, которые плотно спаяны с подлежащей тканью и при отры¬ве От нее вызывают кровотечение. Следствием поражения кровеносных сосудов мо¬жет быть развитие местного отека. Особенно опасной является дифтерия зева, так как она может стать причиной дифтерийного крупа вследствие отека слизистой обо¬лочки гортани и голосовых связок, от которого раньше погибало в результате асфиксии 5060 % больных дифтерией детей. Дифтерийный токсин, поступая в кровь, вызывает общую глубокую интоксикацию. Он поражает преимущественно сердечно-сосудистую, симпатико-адреналовую системы и периферические нервы, аким образом, клиника дифтерии складывается из сочетания местных симптомов, зависящих от локализации входных ворот, и общих симптомов, обусловленных от¬равлением токсином и проявляющихся в виде адинамии, вялости, бледности кож¬ных покровов, понижения кровяного давления, миокардита, паралича перифериче¬ских нервов и других нарушений. Дифтерия у привитых детей, если и наблюдается, протекает, как правило, в легкой форме и без осложнений. Летальность в период до применения серотерапии и антибиотиков составляла 5060 %, ныне 36 %.

Лабораторная диагностика. Единственным методом микробиологической ди¬агностики дифтерии является бактериологический, с обязательной проверкой выде¬ленной культуры коринебактерий на токсигенность. Бактериологические исследова¬ния на дифтерию проводят в трех случаях:
для диагностики дифтерии у детей и взрослых с острыми воспалительными процессами в области зева, носа, носоглотки;
по эпидемическим показаниям лиц, находившихся в контакте с источником возбудителя дифтерии;
лиц, вновь поступающих в детские дома, ясли, школы-интернаты, другие спе¬циальные учреждения для детей и взрослых, с целью выявления среди них возмож¬ных бактерионосителей дифтерийной палочки.
Материалом для исследования служат слизь из зева и носа, пленка с миндалин или других слизистых оболочек, являющихся местом входных ворот возбудителя. Посевы производят на теллуритовые сывороточные или кровяные среды и одновре¬менно на свернутые сывороточные среды Ру (свернутая лошадиная сыворотка) или Леффлера (3 части бычьей сыворотки + 1 часть сахарного бульона), на которых рост коринебактерий появляется уже через 812 ч. Выделенную культуру идентифици¬руют по совокупности морфологических, культуральных и биохимических свойств, по возможности используют методы серо- и фаготипирования. Во всех случаях обязательна проверка на токсигенность одним из указанных выше методов. Морфо¬логические особенности коринебактерий лучше изучать, используя три метода ок¬рашивания препарата-мазка: по Граму, Нейссеру и метиленовым синим (или толуи- диновым синим).

Постинфекционный иммунитет прочный, стойкий, фактически пожизнен¬ный, повторные случаи заболевания наблюдаются редко у 57 % переболевших. Иммунитет носит главным образом антитоксический характер, меньшее значение имеют антимикробные антитела.
Для оценки уровня противодифтерийного иммунитета ранее широко применя¬лась проба Шика.

Специфическая профилактика. Основным методом борьбы с дифтерией является массовая плановая вакцинация населения. С этой целью используют раз¬личные варианты вакцин, в том числе комбинированные, т. е. направленные на од¬новременное создание иммунитета против нескольких возбудителей. Наибольшее распространение в России получила вакцина АКДС. Она представляет собой ад¬сорбированную на гидроокиси алюминия взвесь коклюшных бактерий, убитых формалином или мертиолятом (20 млрд в 1 мл), и содержит дифтерийный анаток¬син в дозе 30 флоккулирующих единиц и 10 единиц связывания столбнячного ана¬токсина в 1 мл. Вакцинируют детей с 3-месячного возраста, а затем проводят ре¬вакцинации: первую через 1,52 года, последующие в возрасте 9 и 16 лет, а далее через каждые 10 лет.

Лечение. Специфическим средством лечения дифтерии является применение противодифтерийной антитоксической сыворотки, содержащей не менее 2000 МЬ в 1 мл. Сыворотку вводят внутримышечно в дозах от 10 000 до 400 000 ME в зависи¬мости от тяжести течения болезни. Эффективным методом лечения является приме¬нение антибиотиков (пенициллины, тетрациклины, эритромицин и др.) и сульфаниламидных препаратов. С целью стимулирования выработки собственных антитокси¬нов можно использовать анатоксин. Для освобождения от бактерионосительства следует использовать те антибиотики, к которым данный штамм коринебактерий высокочувствителен.
4. Возбудители коклюша и паракоклюша. Характеристика их свойств. Патогенез коклюша. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика.

Коклюш острое инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, характеризующееся циклическим течением и приступообразным спазматическим кашлем.
Возбудитель Bordetella pertussis - относятся к классу Betaproteobacteria, грамотрицательны, хорошо ок-рашиваются всеми анилиновыми красителями. Иногда выявляется биполярная ок¬раска за счет зерен волютина на полюсах клетки. Возбудитель коклюша имеет форму °воидной палочки (коккобактерии) размером 0,20,5 х 1,01,2 мкм. Паракоклюшная палочка имеет такую же форму, но несколько крупнее (0,6 х 2 мкм). Расположе¬ны чаще поодиночке, но могут располагаться попарно. Спор не образуют, у молодых культур и у бактерий, выделенных из макроорганизма, обнаруживается капсула. Бордетеллы неподвижны, за исключением В. bronchiseptica, которая является пери- трихом. Содержание Г + Ц в ДНК составляет 6170 мол %, Относятся к гемофиль- ным бактериям. Бордетеллы строгие аэробы, хемоорганотрофы. Оптимальная температура роста 3536 °С.
Бордетеллы не ферментируют углеводов, не образуют индола, не восстанавлива¬ют нитраты в нитриты (за исключением В. bronchiseptica). Паракоклюшные бакте¬рии выделяют тирозиназу, образуя пигмент, окрашивающий среду и культуру в ко¬ричневый цвет.

Патогенез и клиника. Инкубационный период при коклюше от 3 до 14 дней, чаще 58 дней. Возбудитель, попавший на слизистую оболочку верхних дыхательных путей, размножается в клетках цилиарного эпителия и далее бронхогенным путем распростра¬няется в более низкие отделы (бронхиолы, альвеолы, мелкие бронхи). При действии эк¬зотоксина эпителий слизистой оболочки некротизируется, в результате чего раздража¬ются кашлевые рецепторы и создается постоянный поток сигналов в кашлевой центр продолговатого мозга, в котором формируется стойкий очаг возбуждения. Это приводит к возникновению спазматических приступов кашля. Бактериемии при коклюше не бы¬вает. Вторичная бактериальная флора может приводить к осложнениям.

Лабораторная диагностика. Основными методами диагностики являются бак¬териологический и серологический; для ускоренной диагностики, особенно на ран¬ней стадии болезни, может быть использована реакция иммунофлуоресценции. Для выделения чистой культуры в качестве материала используют слизь из носоглотки или мокроту, которые высевают на КУА или среду БордеЖангу. Посев также может быть сделан методом «кашлевых пластинок». Выросшую культуру идентифи¬цируют по совокупности культуральных, биохимических и антигенных свойств. Се¬рологические реакции агглютинации, связывания комплемента, пассивной гемаг¬глютинации ставятся в основном для ретроспективной диагностики коклюша или в тех случаях, когда не выделена чистая культура. Антитела к возбудителю появля¬ются не ранее 3-й нед. заболевания, диагноз подтверждается возрастанием титра антител в сыворотках, взятых с 12-недельным интервалом. У детей первых двух лет жизни серологические реакции часто бывают отрицательными.

Специфическая профилактика и лечение. Для плановой профилактики коклюша у детей используют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину (АКДС), содержащую 20 млрд убитых коклюшных бактерий в 1 мл. На этом же компоненте основана выпускаемая отдельно убитая коклюшная вакцина, применяемая в детских коллективах по эпидемиологическим показаниям. Этот ком¬понент реактогенен (нейротоксическое свойство), поэтому сейчас активно изучаются бесклеточные вакцины, содержащие от 2 до 5 компонентов (коклюшный анатоксин, филаментозный гемагглютинин, пертактин и 2 агглютиногена фимбрий). Для лечения применяют антибиотики (гентамицин, ампициллин), эффективные в ка¬таральном и бесполезные в судорожном периоде заболевания.


6.Микобактерии и их характеристика. Классификация микобактерий. Палочка ту¬беркулеза, ее основные свойства, факторы патогенности. Бактериоскопическая диагностика туберкулеза.
Возбудитель туберкулеза Mycobacterium tuberculosis Морфологически характеризуются способностью образовывать нитевидные и ветвящиеся формы, особенно в старых культурах. Кроме того, они отличаются от других микроорганизмов более высокой устойчивостью к кислотам, щелочам и спирту.

Классификация микобактерий.
По патогенным свойствам род Mycobacterium подразделяют на две группы:
1) па¬тогенные и условно-патогенные (потенциально патогенные)
2) сапрофита. Для их ускоренной предварительной дифференциации учитывают прежде всего три при¬знака: а) скорость и условия роста; б) способность к пигментообразованию; в) спо¬собность синтезировать никотиновую кислоту (ниацин).
По скорости роста род Mycobacterium подразделяют на три группы:
1) Быстрорастущие крупные видимые колонии появляются ранее 7-го дня инкубации (18 видов).
2) Медленнорастущие крупные видимые колонии появляются после 7-ми и бо¬лее дней инкубации (20 видов).
3) Микобактерии, которые требуют специальных условий для роста или не растут на искусственных питательных средах. К этой группе относятся два вида: М. leprae и М. lepraemurium.
По способности к пигментообразованию микобактерии также делят на 3 группы:
1) Фотохромогенные образуют пигмент лимонно-желтого цвета при росте на свету.
2) Скотохромогенные образуют пигмент оранжево-желтого цвета при инкуби¬ровании в темноте.
3) Нефотохромогенные пигмента не образуют (независимо от наличия света), иногда культуры имеют светло-желтоватую окраску.
К патогенным и потенциально патогенным относится 24 вида.

М. tuberculosis имеет форму тонких, стройных, коротких или длинных, прямых или искривленных палочек, длиной 1,04,0 мкм и диаметром 0,30,6 мкм; непо¬движны; спор, капсул не образуют, грамположительны; обладают большим поли¬морфизмом. В старых культурах наблюдаются нитевидные, ветвящиеся формы, не-редко зернистые формы (зерна Муха), как в виде свободно лежащих зерен, так в виде зерен, содержащихся внутриклеточно. В организме больных под влиянием химиопрепаратов часто образуются ультрамалые формы, способные проходить через мелкопористые бактериальные фильтры («фильтрующиеся формы»), М. tuberculosis аэроб, оптимальная температура для роста 37 °С, оптимальная рН - в пределах 6,47,0. Рост при температуре 37 °С стимулируется инкубацией в воздухе, содержащем 510 % С02, и добавлением к среде 0,5 % глицерина. Микобактерии туберкулеза способны синтези¬ровать ниацин.
Многие биологические свойства микобактерий объясняются высоким содержа¬нием липидов, составляющих до 40 % сухого остатка клеток.
Высокое содержание липидов определяет следующие свойства туберкулезных палочек.
1)Устойчивость к кислотам, щелочам и спирту.
2)Трудная окрашиваемость красителями. Для их окрашивания применяют интенсивные методы. Например, по способу ЦиляНильсена окрашивают кон¬центрированным раствором карболового фуксина при подогревании.

С липидами, состоящими из нейтральных жиров, восков, стеринов, фосфатидов, сульфатидов и содержащими такие жирные кислоты, как фтиоидная, миколовая, туберкулостеариновая, пальми¬тиновая и др., связаны патогенные свойства туберкулезной палочки и те биологиче¬ские реакции, которыми ткани отвечают на их внедрение. Главным фактором пато¬генности является токсический гликолипид (корд-фактор), который располагается на поверхности и в толще клеточной стенки.

Для диагностики туберкулеза применяют все ме¬тоды: бактериоскопический, бактериологический, серологический, биологический, аллергические пробы, ПЦР.
При бактериоскопическом исследовании исходного материала (мокрота, моча, гной, спинномозговая жидкость, испражнения) необхо¬димо учитывать, что содержание в нем микобактерий может быть незначительным, выделение их эпизодическим и в нем могут быть измененные варианты возбудителя, в том числе L-формы. Поэтому для повышения вероятности обнаружения микобак¬терий туберкулеза используют методы концентрирования их с помощью центрифу¬гирования или флотации, а также фазово-контрастной (для обнаружения L-форм) и люминесцентной микроскопии (в качестве флуорохромов используют аурамин, аурамин-родамин, акридиновый оранжевый и др.).

7. Пути и способы заражения туберкулезом. Патогенез туберкулеза. Специфическая гранулема. Особенности иммунитета при туберкулезе. Организация борьбы с туберкулезом в России.
Особенности патогенеза. В зависимости от двух основных способов заражения первичный туберкулезный очаг локализуется или в легких, или в мезентеральных лимфатических узлах. Однако некоторые специалисты считают, что вначале проис¬ходит лимфогематогенное распространение возбудителя в обоих случаях зараже¬ния, а потом он избирательно поражает легкие или другие органы и ткани. При по¬падании через дыхательные пути (или другим способом) в альвеолы и бронхиаль¬ные железы туберкулезные палочки вызывают образование первичного аффекта в виде бронхопневмонического фокуса, из которого они по лимфатическим сосудам проникают в регионарный лимфатический узел, вызывая специфическое воспале-ние. Все это вместе: бронхопневмонический фокус + лимфангоит + лимфаденит и образует первичный туберкулезный комплекс (первичный очаг туберкулеза).

Туберкулезная палочка, благодаря наличию в ее клетках различных жирных кислот и других антигенов, вызывает в тканях определенную биологическую реакцию, ко¬торая приводит к формированию специфической гранулемы бугорка. В центре его обычно располагаются гигантские клетки ПироговаЛангганса со множеством ядер. В них обнаруживаются туберкулезные палочки. Центр бугорка окружен эпите- лиоидными клетками, которые составляют главную массу бугорка. По периферии его располагаются лимфоидные клетки. Судьба первичного очага может быть раз¬личной. В тех случаях, когда общая резистентность ребенка в силу ряда причин сни¬жена, очаг может увеличиваться и подвергаться творожистому (казеозному) распаду в результате действия токсических продуктов туберкулезной палочки и отсутствия в бугорках кровеносных сосудов. Такая казеозная пневмония может стать причиной тяжелой первичной легочной чахотки, а при попадании возбудителя в кровь гене¬рализованного туберкулеза, приводящего ребенка к смерти. В большинстве же слу¬чаев при наличии достаточно высокой естественной резистентности организма пер¬вичный очаг через некоторое время окружается соединительнотканной капсулой, сморщивается и пропитывается солями кальция (обызвествляется), что рассматри¬вается как завершение защитной реакции организма на внедрение туберкулезной палочки и означает формирование уже приобретенного нестерильного (инфекцион¬ного) иммунитета к туберкулезу, так как микобактерии могут сохранять жизнеспо¬собность в первичном очаге многие годы.
В случае заражения алиментарным путем туберкулезные палочки попадают в ки¬шечник, захватываются фагоцитами слизистой оболочки и заносятся по лимфатиче¬ским путям в регионарные кишечные лимфатические узлы, вызывая их характерные поражения. По мнению некоторых специалистов, туберкулезные палочки в этом случае через ductus thoracicus и правые отделы сердца также могут проникнуть в лег¬кие и стать причиной туберкулеза легких.
Туберкулезная палочка может поражать практически любой орган и любую ткань с развитием соответствующей клиники заболевания.

Особенности иммунитета. Организм человека обладает высокой естественной резистентностью к возбудителю туберкулеза. Она и является причиной того, что в большинстве случаев первичное заражение приводит не к развитию заболевания, а к формированию очага, его отграничению и обызвествлению. Естественная рези¬стентность во многом определяется социально-бытовыми условиями жизни, поэтому у детей, находящихся в тяжелых бытовых условиях, она может быть легко подорва¬на, и тогда первичное заражение приведет к развитию тяжелого туберкулезного про¬цесса. Ухудшение условий жизни взрослых людей также может привести к ослабле¬нию и естественной резистентности, и приобретенного иммунитета. С 1991 по 1996 г. показатель заболеваемости туберкулезом в России вырос с 30,6 до 42,2, а смертность возросла с 7,9 до 15,0 на 100 ООО населения.
Приобретенный постинфекционный иммунитет при туберкулезе имеет ряд осо¬бенностей. Хотя у больных и переболевших обнаруживаются антитела к различным антигенам туберкулезной палочки, не они играют решающую роль в формировании приобретенного иммунитета. Для понимания его природы при туберкулезе очень важными были следующие наблюдения Р. Коха. Он показал, что если ввести здоровой морской свинке туберкулезные палочки, в месте заражения через 1014 дней форми¬руется отграниченный инфильтрат, а затем упорно не заживающая до самой смерти свинки язва. Одновременно идет распространение возбудителя по лимфатическим пу¬тям, которое и приводит к генерализованному процессу и гибели животного. Если же ввести живые туберкулезные палочки морской свинке, зараженной за неделю до это¬го туберкулезом, то реакция развивается быстрее: воспаление появляется через 2 3 дня, приводит к некрозу, а образующаяся язва быстро заживает.

Большую роль в общей системе мер борьбы с туберкулезом в стране сыграло создание специализированной противотуберкулезной службы, включающей раз¬личные лечебные учреждения, в том числе диспансеры, санатории и т. п., а также проведение массового флюорографического обследования населения.

8. Методы микробиологической диагностики туберкулеза. Метод микрокультур.

Лабораторная диагностика. Для диагностики туберкулеза применяют все ме¬тоды: бактериоскопический, бактериологический, серологический, биологический, аллергические пробы, ПЦР.
Биологический метод заражение морских свинок является одним из на¬иболее чувствительных.
Из числа серологических реакций для диагностики туберкулеза предложены РСК, РПГА, реакции преципитации, методы иммуноферментного анализа (в том числе точечного), радиоиммунный метод, иммуноблотинг, реакция агрегатгемагглютинации (для обнаружения ЦИК) и др.
Среди всех методов микробиологической диагностики туберкулеза решающим все же остается бактериологический.
Для обнаружения L-форм используют культуральный, биологический и иммунофлуоресцентный методы. Биологический способ обнаружения L-форм заключается в серии последователь¬ных пассажей на морских свинках.
Для иммунофлуоресцентного метода используют диагностические сыворотки, содержащие меченные флуорохромом антитела к антигенам L-форм.

Для более быстрого выделения возбудителя туберкулеза предложен метод мик¬рокультур. Суть его состоит в том, что на предметное стекло наносят исследуемый материал, обрабатывают его серной кислотой, отмывают, стекло помещают в цит- ратную лизированную кровь и инкубируют при температуре 37 "С. Уже через 3 4 сут. рост микобактерий на стекле проявляется в виде микроколоний, которые к 710-му дню достигают максимального развития, а микобактерии хорошо выявля¬ются при микроскопии. При этом вирулентные микобактерии образуют змеевидные колонии, а невирулентные растут в виде аморфных скоплений.
9. Бактериологическая диагностика туберкулеза. Схема дифференцирования мико¬бактерий в ходе их выделения. Специфическая профилактика туберкулёза. Вакцина БЦЖ, состав, способы применения. Химиотерапия туберкулеза.
Среди всех методов микробиологической диагностики туберкулеза решающим все же остается бактериологический. Он необходим не только для постановки диа¬гноза болезни, но и для контроля эффективности химиотерапии, своевременной оценки чувствительности микобактерий к антибиотикам и химиопрепаратам, диа¬гноза рецидивов туберкулеза, степени очищения больного организма от возбудителя и выявления его измененных вариантов, особенно L-форм. Исследуемый материал перед посевом необходимо обрабатывать слабым раствором серной кислоты (6 12 %) для устранения сопутствующей микрофлоры. Выделение чистых культур ми¬кобактерий ведут с учетом скорости их роста, пигментообразования и синтеза ниа- цина. Дифференциацию между отдельными видами микобактерий осуществляют на основании их биологических свойств, как указано выше. Вопрос о вирулентности микобактерий решается с помощью биологических проб и на основании обнаруже¬ния корд-фактора. Для этой цели предложены цитохимические реакции. Они осно¬ваны на том, что вирулентные микобактерии (содержащие корд-фактор) прочно связывают красители нейтральный красный или нильский голубой и при до¬бавлении щелочи сохраняют цвет краски, а раствор и невирулентные микобактерии изменяют свою окраску.

Классификация микобактерий.
По патогенным свойствам род Mycobacterium подразделяют на две группы:
1) па¬тогенные и условно-патогенные (потенциально патогенные)
2) сапрофита. Для их ускоренной предварительной дифференциации учитывают прежде всего три при¬знака:
а) скорость и условия роста;
б) способность к пигментообразованию;
в) спо¬собность синтезировать никотиновую кислоту (ниацин).
По скорости роста род Mycobacterium подразделяют на три группы:
1) Быстрорастущие крупные видимые колонии появляются ранее 7-го дня инкубации (18 видов).
2) Медленнорастущие крупные видимые колонии появляются после 7-ми и бо¬лее дней инкубации (20 видов).
3) Микобактерии, которые требуют специальных условий для роста или не растут на искусственных питательных средах. К этой группе относятся два вида: М. leprae и М. lepraemurium.
По способности к пигментообразованию микобактерии также делят на 3 группы:
1) Фотохромогенные образуют пигмент лимонно-желтого цвета при росте на свету.
2) Скотохромогенные образуют пигмент оранжево-желтого цвета при инкуби¬ровании в темноте.
3) Нефотохромогенные пигмента не образуют (независимо от наличия света), иногда культуры имеют светло-желтоватую окраску.
К патогенным и потенциально патогенным относится 24 вида.

Профилактика. Помимо проведения широких социально-экономических меро¬приятий, направленных на улучшение жизни населения, раннего и своевременного выявления больных туберкулезом и оказания им эффективной лечебной помощи, большое значение имеет плановая массовая вакцинация против туберкулеза. Она осуществляется вакциной БЦЖ, полученной А. Кальметтом и Ш. Гереном из ослаб-ленного многолетними пересевами штамма М. bovis. Вакцинации подлежат все ново¬рожденные дети на 57-й день жизни. Вакцину, содержащую 0,05 мг сухих живых бактерий в объеме ОД мл, вводят внутрикожно. Ревакцинацию проводят в возрасте 7121722 и 2730 лет только лицам, отрицательно реагирующим на внутри- кожную пробу Манту (5 ТЕ/0,1 мл).

Лечение. Консервативное лечение туберкулеза проводят с помощью антибиоти¬ков и химиопрепаратов. Препараты I ряда (более ранние) включают производные парааминосалициловой кислоты (ПАСК), гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) изотиазид (тубазид), фтивазид и др. и препараты группы стрептомицина. Препараты II ряда циклосерин, канамицин, флоримицин, рифампицин и другие антибиотики. У микобактерий к химиопрепаратам, в особенности I ряда, часто на¬блюдается устойчивость, поэтому лечение должно сопровождаться контролем сте¬пени чувствительности их к применяемым препаратам.


10. Возбудитель лепры. Морфологические и культуральные особенности. Лабораторная диагностика. Аллергические пробы и их диагностическое значение. Химиотерапия лепры.
Лепра высококонтагиозное и одновременно низкопатогенное хроническое заболевание, при котором субклиническая инфекция обычное явление, в то время как клинические проявления отмечаются только у небольшого числа инфицированных лиц. Характеризуется длительным течением, специфическим поражением кожи, слизистых оболочек, периферических нервов и различных внутренних органов. Возбудитель Mycobacterium leprae был открыт в 1874 г. А. Хансеном. До сих пор никому не удавалось получить рост возбу¬дителя проказы на искусственных питательных средах. Палочка лепры является строгим внутриклеточным паразитом тканевых макрофагов (гистиоцитов), моно- нуклеарных фагоцитов и других клеток. Ее удается культивировать только в орга¬низме мышей, крыс и особенно при внутривенном заражении большими дозами (до 108 клеток) броненосцев (армадиллов), у которых она вызывает специфический ге¬нерализованный процесс и накапливается в огромном количестве в пораженных тканях (лимфатические узлы, печень, селезенка). В связи с этим морфологические свойства возбудителя лепры описаны по его картине в лепрозных тканях.
М. leprae прямая или слегка изогнутая палочка с закругленными концами, диаметром 0,30,5 мкм и длиной 1,08,0 мкм. Спор, капсул не образует, жгутиков не имеет, грамположительна. По химическому составу сходна с М. tuberculosis, облада¬ет спирто- и кислотоустойчивостью, поэтому ее окрашивают по методу ЦиляНильсена. М. leprae обладает большим полиморфизмом: в лепромах (лепрозных бу¬горках) встречаются зернистые, кокковидные, булавовидные, нитевидные, ветвя¬щиеся и другие необычные формы. В пораженных клетках они образуют шаровид¬ные плотные скопления, в которых микобактерии располагаются параллельно друг другу, напоминая расположение сигар в пачке.
Главные особенности болезни во многом определяются следующими свойствами возбудителя:
1) Очень медленное размножение в организме является причиной продолжитель¬ного инкубационного периода (в среднем 37 лет, иногда до 1520 и более лет) и хронического течения болезни у людей и подопытных животных.
2) М. leprae регулярно вовлекает в процесс нервную ткань и приводит к инвалид¬ности, а это имеет большое экономическое значение для эндемичных регионов.
3) Оптимальная температура для размножения возбудителя менее 37 °С. Следо¬вательно, наиболее поражаемы охлаждаемые ткани человека и подопытных живот¬ных (у броненосцев температура тела 3035 °С).
4) М. leprae способны вызывать иммунологическую толерантность у людей с лепроматозной формой болезни, и такие больные являются главным источником заражения людей лепрой.

Определяющим фактором формирования типа болезни и исхода первичного за¬ражения служит степень напряженности естественного иммунитета против лепры, которая выявляется с помощью лепроминовой пробы. Положительная реакция на лепромин свидетельствует о наличии достаточно высокого естественного иммуните¬та к М. leprae. Нарушение клеточного иммунитета при лепроматозном типе болезни проявляется прежде всего в том, что фагоцитоз имеет незавершенный характер: ми¬кобактерии лепры не только не разрушаются макрофагами, но именно в них они ак¬тивно размножаются. Кроме того, лимфоциты у таких больных не подвергаются бласттрансформации и не подавляют миграции макрофагов (у больных туберкуло- идным типом эти реакции положительны). Иммунитет к лепре зависит от многих факторов, и при его снижении возможно обострение процесса и отягощение течения болезни.

Лабораторная диагностика. Из всех микробиологических методов диагностики используется главным образом бактериоскопический. Материалом для исследова¬ния являются слизь или соскобы со слизистой оболочки носа, скарификаты из пора¬женного участка кожи, кусочки пораженного органа или ткани, из которых готовят гистологические срезы. Мазки и срезы окрашивают по ЦилюНильсену. Для диф-ференциации №. leprae от М. tuberculosis используют биологическую пробу на белых мышах, для которых М. leprae не патогенна.

Лечение. Больные лепрой, в зависимости от ее типа, подвергаются лечению или в специальных противолепрозных учреждениях (лепрозориях), или в амбулаториях по месту жительства. В лепрозории госпитализируют первично выявленных боль¬ных, у которых имеются распространенные кожные высыпания, возбудитель обна¬руживается бактериоскопически; а также больных, находящихся на постоянном учете, в случае обострения или рецидива болезни. Амбулаторно можно лечить боль¬ных с ограниченными кожными проявлениями, у которых при бактериоскопии воз¬будитель не обнаруживается.
Лечение должно носить комплексный характер с одновременным использованием 23 различных антилепрозных химиопрепаратов, а также общеукрепляющих и стимулирующих иммунную систему средств. Наиболее активными химиопрепара- тами являются: производные сульфонового ряда диафенилсульфон, солюсульфон, диуцифон и др.; рифампицин, лампрен, этионамид и др. Курс химиотерапии должен быть не менее 6 мес., при необходимости проводят несколько курсов, чередуя препараты.


Риккетсии

1. Риккетсиозы, их классификация. Эндемические риккетсиозы, резервуары возбу¬дителей в природе и их переносчики. Методы диагностики риккетсиозов.

Заболевания, вызываемые риккетсиями, делят на следующие 3 группы: сыпного тифа, клещевой пятнистой лихорадки и тифа джунглей. Жизненный цикл риккетсий зависит от жизнедеятельности клетки-хозяина и складывается из 2 ста¬дий вегетативной и покоящейся. Риккетсии, находящиеся в вегетативной стадии, имеют палочковидную форму, активно размножаются путем бинарного деления и обладают активной подвижностью, обусловленной, очевидно, жгутиковыми струк¬турами. Риккетсии покоящейся стадии имеют сферическую форму и не размножа¬ются. Риккетсии, эрлихии, бартонеллы и хламидии прокариоты, у них имеется клеточная стенка и, как у всех грамотрицательных бактерий, наружная мембрана, цитоплазматическая мембрана, ядерный аппарат, не отграниченный от цитоплазмы никакими мембранами. Они обладают собственными системами биосинтеза белка и мобилизации энергии, однако их жизнедеятельность каким-то образом тесно связа¬на с метаболизмом клетки-хозяина, они не способны размножаться вне ее.


2. Риккетсии, характеристика основных свойств. Методы культивирования риккетсий, резервуары их в природе. Особенности эпидемиологии риккетсиозов.
Роды Rickettsia и Orientia, а также Erlichia и Bartonella отнесены к классу Alphaproteobacteria.
Большинство из этих микро¬организмов не растут на обычных питательных средах, имеют мелкие размеры, форму палочек, кокковидную, иногда нитевидную.
Риккетсии, находящиеся в вегетативной стадии, имеют палочковидную форму, активно размножаются путем бинарного деления и обладают активной подвижностью, обусловленной, очевидно, жгутиковыми струк¬турами. Риккетсии покоящейся стадии имеют сферическую форму и не размножа¬ются.

3. Риккетсии Провачека. Характеристика свойств. Патогенез сыпного тифа. Осо¬бенности эпидемиологии современного сыпного тифа.
К ней относятся: эпидемический сыпной тиф и эндемический (крысиный) сып¬ной тиф и соответственно два вида возбудителей: R. prowazekii и R. typhi. В эту же группу риккетсий включен еще один вид R. Canada, обнаруженный у клещей, па¬разитирующих на кроликах и зайцах. Серологическими методами были выявлены случаи заболевания людей, вызванные R. Canada, клинически не отличимые от лихо¬радки Скалистых гор, но R. canada не имеет антигенного родства с риккетсиями группы пятнистой лихорадки. Характерной особенностью риккетсий этой группы является то, что они размножаются в цитоплазме эукариотных клеток (см. цв. вкл., рис. 109.4), но не в вакуолях (R. canada также и в ядре) и имеют антигенное родство между собой. Содержание Г + Ц в ДНК « 30 мол %.
Сыпной тиф острое инфекционное заболевание, характеризующееся глубо¬кой интоксикацией, характерным поражением прекапиллярных разветвлений ар¬терий и сыпью. Возбудитель R. prowazekii палочки размером от 0,30,6 до 0,82,0 мкм, иногда до 4,0 мкм, располагающиеся одиночно или короткими це¬почками. Хорошо размножаются в желточном мешке куриного эмбриона, опти¬мальная температура для их размножения 35 °С. Эмбрион погибает через 6 13 дней после заражения (в зависимости от величины заражающей дозы). Хоро¬ший рост наблюдается и в культурах клеток различных линий с образованием через 8-10 дней бляшек диаметром « 1 мм. К возбудителю сыпного тифа очень чувстви¬тельны морские свинки, которые обычно используются для первичного выделе¬ния риккетсий. У свинок приблизительно через неделю появляется лихорадка и у самцов иногда наблюдается скротальный феномен (периорхит воспаление обо¬лочек яичек). Иногда у морских свинок риккетсиозная инфекция протекает бес¬симптомно. Риккетсии выделяются из крови, селезенки, надпочечников, почек, но особенно много их в мозге.
Патогенез и клиника. Восприимчивость к болезни близка к 100 %. Риккетсии попадают в кровь и разносятся по всему организму, избирательно поражая эндоте лиальные клетки прекапиллярных разветвлений артерий различных органов, что проявляется в виде деструктивно-пролиферативного эндопериваскулита. Форми¬рование своеобразных тромбоваскулитов приводит к резкому расстройству пери¬ферического кровообращения и глубоким нарушениям тканей; особенно тяжелые последствия наблюдаются при поражении мозговой ткани (продолговатый мозг), а также эндотелия капилляров надпочечников, сердечной мышцы и кожи. К этим нарушениям присоединяется сильная интоксикация, обусловленная эндотоксином и, особенно, токсическим белком с м. м. 100 кД. Инкубационный период составляет в среднем 1012 дней. После небольшого продромального периода болезнь начина¬ется сразу с повышения температуры до 3940 °С и сильной головной боли. Больной может впадать в состояние бреда, иногда развиваются явления менингоэнцефалита и психоза. На 46-й день на боковых поверхностях груди, на спине и сгибательных поверхностях рук появляется характерная розеолезно-петехиальная сыпь. Лихорад¬ка держится 1,52 нед., затем температура быстро снижается до нормы. Выздоров¬ление происходит медленно вследствие глубоких нарушений со стороны сердечно¬сосудистой и нервной систем. Летальность в прошлом составляла 2040 %, сейчас, благодаря антибиотикотерапии, не превышает 1 %.
Особенности эпидемиологии. Основным источником эпидемического (вши¬вого, европейского) сыпного тифа является человек. У него возбудитель находится в крови. Это было установлено опытом самозаражения в 1876 г. О. О. Мочутковским, а Г. Н. Минх еще в 1874 г. высказал предположение, что заражение сыпным и возвратным тифом происходит через укусы вшей и блох. Однако только в 1910 г. Ш. Николь окончательно доказал, что возбудитель сыпного тифа передается от больного человека здоровому через укусы вшей Pediculus corporis (= Pediculus humanus), причем эту роль выполняют в основном платяные вши. Головная и лобко¬вая вши также могут инфицироваться риккетсиями, но они реже покидают своего хозяина и их роль в эпидемиологии сыпного тифа гораздо меньше. Эта особенность передачи возбудителя делает сыпной тиф способным к широкому распространению всюду, где имеется вшивость. Вошь заражается при сосании крови больного, прояв¬ляя при этом одинаково высокую чувствительность к возбудителю во всех фазах своего метаморфоза после яйца. При этом вошь легче всего заражается при повтор¬ном сосании крови больного, особенно при тяжелых формах болезни и в первую не¬делю ее. Во время сосания вошь прокалывает кожу хоботком и потребляет около 1 мг крови сразу. Но для того чтобы ее всосать, она освобождает кишечник выде¬ляет экскременты. Кровь переваривается, а риккетсии проникают в эпителиальные клетки кишечника и размножаются в них в огромном количестве, так что клетки разрушаются, а риккетсии выделяются с экскрементами. Лишь после этого, через 45 дней, вошь способна заразить здорового человека. У вшей риккетсии вызывают смертельный риккетсиоз, они погибают через 22,5 нед. У зараженных вшей рик¬кетсии размножаются только в кишечнике, в слюнных железах их нет. Поэтому сам по себе укус не заразен, но слюна вшей вызывает в месте укуса раздражение, и чело¬век, почесывая, втирает риккетсии в ранку, нанесенную вошью. Являясь однохозя- инным паразитом, вошь обитает на белье человека, переходя на его кожу через каж¬дые 5 ч для питания. Оптимальная температура для ее существования 30 °С, по¬этому, когда у зараженного ею человека температура тела повышается до 3941 °С, вошь возбуждается, стремится покинуть хозяина и поселяется на белье другого че¬ловека. Таким образом, эпидемиологическая цепь при сыпном тифе такова: больной человек вошь здоровый человек. Ликвидация вшивости главное условие ли¬квидации эпидемии сыпного тифа.


Спирохеты, грибы, простейшие

1. Морфология и ультраструктура спирохет, классификация. Патогенные виды. Методы выявления.
спирохеты выделены в новый тип Spirochaetes с единственным одноименным классом и единственным порядком Spifochaetales с тремя семействами Spirochaetaceae (роды Borrelia, Treponema и др.), и Leptospiraceae (роды Leptospira). Для человека патогенны боррелии, трепонемы и лептоспиры.
Spirochaetes спиралевидной формы подвижные бактерии размером 0,13,0 х 5250 мкм; Все спирохеты грамотрицательны. Центральной структурой клетки является протоплазматический цилиндр. Протоплазматический цилиндр окружен комплексом цито-плазматическая мембрана + клеточная стенка, содержащая пептидогликан. вокруг целиндра располагается периплазматический жгутик (жгутики). Один конец каждого жгутика прикреплен к одному из полюсов прото-плазматического цилиндра, а другой к последнему примерно посередине клетки.По типу дыхания спирохеты анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэро-филы и аэробы. Хемоорганотрофы.
Leptospira, Treponema pallidum возбудитель сифилиса,
Borellia recurrentis возбудитель возвратного тифа,
Спирохеты встречаются в почве, воде, других организмах.

2. Лептоспиры, их характеристика. Методы культивирования. Лептоспирозы. Резер¬вуары лептоспир в природе: способы заражения лептоспирами. Патогенез лептоспирозов.

Лептоспиры имеют вид плотно закрученной пружины, состоящей из 12-18 завитков (завитки первого порядка). Осевую нить образуют два или большее число периплазматических жгутиков, каждый из которых одним своим концом прикреплен к одному из полюсов протоплазматического цилиндра. Средняя длина лептоспир от 7 до 15 мкм. но может варьировать от 3 до 30 мкм. Диаметр лептоспир 0,070,14 мкм. Живые лептоспиры очень подвижны.Спор и капсул не образуют. По РомановскомуГимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет. Растут лептоспиры сравнительно медленно, рост обнаруживается не ранее 58 сут. В полужидких средах образуются колонии округлой формы. В жидких средах культуры прозрачны, не имеют запаха, при пышном росте определяется опалесцен-Ция, заметная в проходящем свете при легком встряхивании пробирки.
Различают природные и антропоургические очаги лептоспи-роза. Источниками инфекции в природных очагах являются грызуны, насекомоядные, парнокопытные, хищные млекопитающие многих видов, реже птицы. Наибольшее значение имеют мыши, полевки, ондатры. В антропоургических очагах источники инфекции крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи, собаки, домовые мыши и крысы. Заражение людей происходит при купании и использовании для бытовых нужд воды из открытых водоемов, инфицированных мочой больных животных, при контакте с сырьем, употреблении продуктов, содержащих живые лептоспиры. Наиболее частыми в России возбудителями лептоспироза являются L. pomona, L. monijakov, L. grippotyphosa, L. tarassovi, L. canicola, L. icterohaemorrhagiae.
Возбудитель проникает в организм через слизистые оболочки и поврежденную кожу; с током крови попадает в печень, почки, селезенку, проникает через гематоэнцефалический барьер в ЦНС; в тканях этих органов лептоспиры размножаются. Затем они опять поступают в кровь, обусловливая генерализацию инфекции, лихорадку и интоксикацию. Бывают желтушные и безжелтушные формы лептоспироза. Инкубационный период в среднем 710 дней. Начало заболевания острое: озноб, высокая температура, характерны головная и мышечная боли, особенно в икроножных мышцах. Возможны сыпь, диспептические явления, признаки менингита. Позже или почти сразу начинают нарастать явления почечной (при безжелтушной форме) или почечно-печеночной (при желтушной форме) недостаточности. Летальность составляет 34 %.
3. Микробиологический диагноз лептоспирозов.
Лабораторная диагностика. Для диагностики лептоспироза используют микроскопический, бактериологический, серологический и биологический методы. Для микроскопии в начале заболевания (на фоне лихорадки) в качестве исследуемого материала используют кровь, при явлениях менингита - ликвор, в более поздние сроки заболевания (с 1012-го дня) центрифугат мочи. Эффективнее всего лептоспиры обнаруживаются в «раздавленной» капле при темнопольной микроскопии, реже препараты красят по РомановскомуГимзе или методом серебрения в фиксированном состоянии. Для выделения чистой культуры тот же материал засевают на жидкие и полужидкие питательные среды. Идентифицируют лептоспиры при помощи реакции агглютинации с типовыми сыворотками. При биологическом методе заражают свежей плазмой или мочой больного молодых кроликов или хомячков, которые при внутрибрюшинном заражении погибают через 1014 дней, во многих органах обнаруживаются геморрагические очаги, содержащие лептоспиры. Эти исследования должны проводиться только в специализированных лабораториях. Для обнаружения специфических антител проводят исследование парных сывороток крови больного в реакциях микроагглютинации и лизиса. Для постановки реакции микроагглютинации используют живые культуры лептоспир; агглютинацию выявляют при микроскопии. Перекрестная адсорбция сывороток позволяет производить определение типоспеци-фических антител. При использовании живых лептоспир вслед за агглютинацией может произойти их лизис. Применяют также РПГА, в которой используют диагностикум из эритроцитов с адсорбированными на них лептоспирами.

4. Особенности патогенеза и иммунитета при сифилисе. Методы микробиологической диагностики сифилиса. Р-я Вассермана.
Возбудитель Treponema pallidum
Инкубационный период при приобретенном сифилисе варьирует от 2 до 10 нед., обычно 2028 дней. Входными воротами инфекции чаще всего являются слизистые оболочки половых органов, реже полости рта, а также поврежденная кожа. В месте внедрения возбудитель размножается, формируется первичная сифилома (твердый шанкр) - эрозия или язва с уплотненным основанием. Далее возбудитель попадает в лимфатическую систему, развивается лимфангоит и регионарный лимфаденит. Это типичная клиника первичного сифилиса, который продолжается 1,52 мес. Потом эти признаки исчезают.
Вторичный период сифилиса связан с генерализацией процесса, когда увеличиваются многие лимфатические узлы, а на коже и слизистых оболочках появляются высыпания; могут наблюдаться поражения внутренних органов и нервной системы. Различают вторичный свежий и вторичный рецидивирующий сифилис.Продолжительность вторичного сифилиса до 4 лет и более. Далее болезнь вступает в длительный бессимптомный период, по прошествии которого, через несколько лет, развивается третичный сифилис. При этом наблюдаются грубые органические поражения внутренних органов, сердечно-сосудистой системы, ЦНС, костей.
Иммунитет. Против сифилиса ни естественного, ни искусственного иммунитета не возникает; есть только инфекционный иммунитет, и пока он существует, человек практически не восприимчив к новому заражению. Инфекционный иммунитет развивается через 1011 дней после появления твердого шанкра
Лабораторная диагностика. Для диагностики сифилиса оптимален комплексный подход, предполагающий одновременное использование нескольких методов. Их традиционно подразделяют на прямые, позволяющие доказать наличие возбудителя в исследуемом материале (заражение животных, различные виды микроскопии и молекулярно-генетические методы детекции ДНК Т. pallidum ПЦР и ДНК-зондирование), и непрямые серологические тесты для выявления антител. Исследуемым материалом для обнаружения трепонем в прямых методах является отделяемое твердого шанкра или его пунктатСерологические тесты можно использовать на различных стадиях заболевания, кроме серонегативного первичного сифилиса. Обычно применяют комплекс серологических реакций. К нетрепонемным тестам с визуальным определением результатов относятся: реакция связывания комплемента (реакция Вассермана = РСКк = RW) с кардиолипиновым антигеном сердечной мышцы быка (перекрестно реагирующий антиген), реакция микропреципитации (МР, или РМП) микрореакция с плазмой и инактивированной сывороткой; RPR тест быстрых плазменных реагинов, и другие реакции.


5. Возбудители возвратных тифов. Формы возвратного тифа и переносчики возбуди¬телей. Патогенез возвратного тифа.
Различают эпидемический и эндемический возвратные тифы.
Возбудителем эпидемического возвратного тифа является В. recurrentis.
Эпидемический возвратный тиф - антропоноз. Специфические переносчики - платяная, головная вши. Человек заражается возврат¬ным тифом при втирании гемолимфы раздавленных вшей в кожу при расчесывания места укуса.
Эндемический возвратный тифзооноз. Возбудители - В. duttoni и В. persica. Резервуар - грызуны, клещи. Человек заражается через укусы клещей.
Патогенез: Попав во внутреннюю среду организма, боррелии внедряются в клет¬ки лимфоидно-макрофагальной системы, где размножаются и поступают в кровь, вызывая лихорадку, головную боль, озноб. Взаимодействуя с АТ, боррелии образуют агрегаты, которые нагружаются тромбоцитами, вызывая закупорку капилляров, следствием чего является нарушение кровообращения в органах.

6. Микроскопические грибы (Мукор, Аспергилл, Пеницилл, Кандида). Морфология, способы размножения, культуральные свойства. Заболевания, вызываемые ими у человека и лабораторные методы их диагностики.
Грибы, паразитирующие в организме человека, вызывают микозы, протекающие с поражениями кожи, ее придатков или внутренних органов.
Клетки грибов покрыты плотной клеточной оболочкой, состоящей из полисаха¬ридов, близких к целлюлозе, и азотистых веществ, подобных хитину. У большинства грибов вегетативное тело (мицелий) состоит из системы тонких ветвящихся нитей, называемых гифами. Переплетаясь, мицелий образует грибницу. Гифы способны расти в длину и развиваются на поверхности или внутри питательного субстрата. Соответственно различают мицелий субстратный (вегетативный), врастающий в пи¬тательную среду, и воздушный. Концы нитей мицелия могут быть закручены в виде спиралей,завитков и т. д.
Грибы размножаются с помощью различных структур. При образовании поло¬вых спор имеет место мейоз, а конидии являются неполовыми репродуктивными органами. Половые стадии обнаружены у многих патогенных грибов, принадлежа¬щих к классам Ascomycetes и Zygomycetes.
Почти все патогенные грибы аэробы: широкий приток кислорода способствует развитию грибницы и накоплению продуктов жизнедеятельности. Для питания гри¬бов необходимы азотистые и углеродсодержащие вещества (а также минеральные со¬единения). Этим объясняется свойство многих патогенных грибов легко развиваться в организме человека и животных. Патогенные грибы способны размно¬жаться в диапазоне рН от 3,0 до 10,0; Споруляции грибов способствует понижение влажности питательной среды и уменьшенное содержание в среде белков и углеводов.

На жидких питательных средах многие грибы растут в виде войлоковидного осадка, вначале на дне, а затем в виде пристеночного кольца или сплошной пленки. По характеру роста на плотных питательных средах колонии грибов подразделяют¬ся на несколько типов (8)
Заболевания, вызываемые патогенными грибами, условно можно разделить на две группы: системные, или глубокие, микозы и поверхностные микозы.
Аспергиллез. Больные аспергиллезом люди не заразны для окружающих. Инфицирование происходит почти исключительно ингаляторным и реже алиментарным путем, из¬редка контактным путем при повреждении кожи и слизистых оболочек и попадании на них спор гриба.
Кандидоз (кандидомикоз) инфекционное заболевание кожи, слизистых оболочек и внутренних органов, вызываемое дрожжеподобными грибами рода Candida. Распространен повсеместно, чаще встречается в тропиках и субтропиках.
Возбудителями фикомикоза являются различные виды грибов родов Rhizopus, Mucor, Absidia, объединенных в семейство Мисоrасеае класса Phycomycetes (Zygo¬mycetes).


8. Виды малярийных плазмодиев. Микробиологический диагноз малярии. Методы борьбы с малярией. Успехи в борьбе с малярией в России.
В организме человека паразитируют четыре вида плазмодиев: P. vivax возбудитель чрезвычайно широко распространенной трехдневной малярии, P. malariae - возбудитель четырехдневной малярии; P.falciparum тропической малярии и P. ovate тропической трехдневной малярии.
Лабораторная диагностика. Важнейшим методом является микроскопическое исследование препаратов крови: толстой капли и мазка, окрашенных по РомановскомуГимзе. Кровь берут из пальца, начиная со стадии предвестников приступа. Толстая капля обладает значительным преимуществом перед мазком: за одно и то же время можно просмотреть в 2050 раз большее количество крови. Толстую каплю окрашивают в нефиксированном состоянии, при этом эритроциты разрушаются, а плазмодии деформируются. Ядро плазмодия окрашивается в вишнево-рубиновый цвет, цитоплазма в сине-голубой. При всех видах малярии, кроме тропической, в толстой капле и мазке обнаруживаются все стадии развития возбудителя. При не-осложненной тропической малярии в периферической крови обнаруживаются лишь юные шизонты в форме перстней (иногда одновременно 2-3 в одном эритроците) и через 810 дней после начала заболевания гаметоциты полулунной, или серповидной, формы.
Серологические реакции (РИФ, ИФМ и др.) имеют ограниченное применение, так как дают положительную реакцию лишь со второй недели заболевания; чаще используются при обследовании доноров или в серологических эпидемиологических исследованиях. Разработан новый метод диагностики ДНК-зонды с различными метками. Метод чувствительный, основан на обнаружении в лизированной крови высокоспецифических для возбудителя фрагментов ДНК.
ВОЗ проводятся изыскания по созданию антиспорозоитной, антимерозоитной и антигаметной вакцин с использованием генно-инженерных методов. Вакцины уже созданы в Колумбии, США и Швейцарии, их эффективность изучается.
Для лечения используют многочисленную группу противомалярийных препара-в: производные 4-аминохинолина (хлорохин, плаквенил), 8-аминохинолина ^примахин), хинин, пириметамин, сульфаниламиды

9. Токсоплазмоз. Возбудитель, его морфология, особенности культивирования. Способы заражения, патогенез болезни. Методы микробиологической диагностики токсоплазмоза.
В органах экспериментально зараженных мышей токсоплазмы имеют форму полумесяца или дольки апельсина размерами 24 х 4-7 мкм или чуть крупнее до 10 мкм
В жизненном цикле токсоплазм различают несколько морфологических форм: ооцисты, псевдоцисты, цисты, тахизоиты.
Токсоплазмы можно культивировать только в присутствии живых клеток в тканевых культурах или в эмбрионах, где они и размножаются внутриклеточно при температуре 3739 С.
Токсоплазмоз для человека является природно-очаговой зооантропонозной инфекцией. Восприимчивость людей к токсоплазмам высока. Заражение происходит либо плацентарным путем от больной матери плоду, либо алиментарным путем при попадании цист с пищей, водой, через грязные руки.
Гибель клеток хозяина связана непосредственно с эндодиозоитами (трофозоита-ми), которые обладают тропизмом в отношении паренхиматозных клеток и клеток системы мононуклеарных фагоцитов. Люди относительно резистентны к инвазии, поэтому клиника может быть весьма вариабельной: от незаметных форм до поражений лимфатических узлов, пневмонии, энтероколита, хориоретинита, гепатита, нефрита.
Для исследования используют костный мозг, кровь, ликвор, различные экссудаты, биоптаты тканей, кусочки плаценты, соскоб полости матки, пунктат лимфатического узла. В этих материалах возбудитель обнаруживается в мазках и срезах тканей при окраске по РомановскомуГимзе. При биологическом методе здоровым животным вводится исследуемый
материал (внутрибрюшинно или в головной мозг)
Для диагностики и эпидемиологических целей используется серологическая
реакция с красителем СебинаФельдмана


10. Лейшмании, их характеристика. Лейшманиозы: формы болезни, эпидемиология и микробиологическая диагностика.

Лейшмании. внутриклеточные паразиты, развивающиеся в макрофагах или клетках ретикулоэндотелиальной системы. Размножаются простым делением, проходят два цикла бесполого развития: жгутиковый и безжгутиковый. В жгутиковом цикле паразиты развиваются на питательных средах или в кишечнике москита, зараженного при сосании крови больных людей или животных. Заглоченные москитом амастиготы превращаются в кишечнике в промастиготы, делятся и на 6е-сутки накапливаются в глотке москита. Возбудитель имеет удлиненную веретенообразную форму.
Различают два возбудителя кожного лейшманиоза: L. tropica возбудитель антропонозного лейшманиоза и L. major возбудитель зоонозного кожного лейшманиоза.
Антропонозный кожный лейшманиоз характеризуется длительным инкубационным периодом несколько месяцев. На месте укуса москитом появляется бугорок, который увеличивается и через 3 месяца изъязвляется. Язвы чаще располагаются на лице и верхних конечностях, рубцуются к концу года. Зоонозный кожный лейшманиоз (рано изъязвляющийся лейшманиоз, пендинская язва, сельская форма) протекает более остро. Инкубационный период составляет 24 недели. Мокнущие язвы чаще локализуются на нижних конечностях.
Микробиологическая диагностика. В мазках (из бугорков, содержимого язв, пунктатов из органов), окрашенных по Романовскому Гимзе, обнаруживают внутриклеточно расположенные мелкие, овальной формы лейшмании (амастиготы). Для выделения чистой культуры возбудителя делают посев на среду NNN: инкубация 3 недели. Серологические методы недостаточно специфичны. Возможно применение РИФ, ИФА.
Кожно-аллергический тест на ГЗТ к лейшманину применяют при эпидемиологических исследованиях лейшманиоза.

11. Патогенная (дизентерийная) амеба, вегетативные формы и циста. Патогенез амёбиаза. Микробиологический диагноз амёбиаза.
Вегетативная стадия имеет не¬сколько форм: большая вегетативная (тканевая), малая вегетативная; предцистная форма, сходная с просветной, образующая цисты.
Циста (покоящаяся стадия) имеет овальную форму. Зрелая циста содержит 4 ядра. Просветная форма малоподвижна, обитает в просвете верхнего отдела толстой кишки как безвредный комменсал, питаясь бактериями и детритом.
Большая вегетативная форма образуется, при определенных условиях, из малой вегетативной формы. Она наиболее крупная, образует псевдоподии и обладает движением. Может фаго¬цитировать эритроциты. Обнаруживается в свежих испражнениях при амебиазе.
Цисты, попавшие в кишечник, и образовавшиеся затем из них просветные формы амеб могут обитать в тол¬стой кишке, не вызывая заболевания. При снижении резистентности организма амебы внедряются в стенку кишки и размножаются. Развивается кишечный амебиаз.
Трофозоиты тканевой формы подвижны за счет формирования псевдоподий. Они проникают в стенку толстой кишки, вызывая некроз; способны фагоцитировать эритроциты; могут обнаруживаться в фекалиях человека. При некрозе образуются язвы.
Основным методом является микроскопическое исследование испражнений больного, а также содержимого абсцессов внутренних органов. Мазки окрашивают раствором Люголя или гематоксилином. Серологические исследования (РНГА, ИФА, РСК): наиболее высокий титр антител в сыворотке крови выявляют при внекишечном амебиазе.




Приложенные файлы

  • doc 17903742
    Размер файла: 1 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий