mikra_10

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
«Новосибирский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
(ГБОУ ВПО НГМУ Минздрава России)














МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ


Практическое занятие №10

Тема: Реакции иммунного лизиса. Реакция связывания комплемента (РСК).
Иммуноферментный анализ (ИФА). Иммуноблоттинг (ИБ).
Полимеразная цепная реакция (ПЦР).



Дисциплина 2.Б.10 «Микробиология, вирусология»

Направление подготовки 060101 Лечебное дело

Квалификация (степень) дипломированный специалист

Форма обучения очная

Курс 2

Регистрационный №______

Экземпляр №______





Электронная версия методических указаний
находится на сайте университета [ Cкачайте файл, чтобы посмотреть ссылку ] ,
web – страница кафедры ____________________________________________
и доступна только зарегистрированным пользователям


Методические указания для студентов составлены на основании требования Федерального государственного образовательного стандарта высшего профессионального образования утвержденного приказом Министерства образования и науки Российской Федерации от «8» ноября 2010 г. № 1118.

Методические указания разработал(и):

Фамилия И.О.
Должность
Ученая степень,
ученое звание
Кафедра

1
2
3
4

Бурова Л.Г.
ассистент
К.м.н.
Микробиологии, вирусологии и иммунологии







Рецензент(ы)

Фамилия И.О.
Должность
Ученая степень,
ученое звание
Кафедра

1
2
3
4












Методические указания рассмотрены и утверждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Протокол №____ от «___» _________________20__ г.
Зав. кафедрой профессор _____________________________ А.Н. Евстропов

Методические указания рассмотрены и одобрены на заседании цикловой методической комиссии по микробиологии, иммунологии, инфекционным болезням и дерматовенерологии
Протокол №_____ от «___» ________________20__ г.
Председатель ЦМК профессор___________________________ Е.И. Краснова





















Введение

Знание механизмов и этапов проведения иммунохимических. реакций, таких как РСК, ИФА, ИБ, необходимо для понимания их роли в диагностике инфекционных заболеваний.
Знание механизма и этапов проведения ПЦР, как молекулярно-генетического метода диагностики необходимо для понимания ее необходимости в современных подходах к идентификации возбудителей инфекционных заболеваний.
Знания и умения, полученные на этом практическом занятии, необходимы для изучения последующих тем частного курса дисциплины и будут контролироваться на уровне промежуточной аттестации – на экзамене по дисциплине.


2. Подготовка к занятию

Для подготовки к занятию студенту необходимо:
№ п/п
Содержание

Форма контроля


2.1.
Повторить



Правила работы и техники безопасности в бактериологической лаборатории.

Самоконтроль, текущий тестовый контроль

2.2.
Изучить материал лекций по дисциплине «Иммунология» № 8, 9 Тема: «Диагностические реакции антиген-антитело. Принципы применения диагностических иммунологических реакций»
Самоконтроль, текущий тестовый контроль, устный опрос

2.3.
Прочитать учебник:
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : учебник для студентов медицинских вузов [Рекомендовано отраслевым министерством] / ред. А. А. Воробьев. -2-е изд., испр. и доп. -М.: Мед. информ. агентство, 2008. -704 с.: ил., стр.283-294, 114-115
или
Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учебник для студентов вузов [Рекомендовано Министерством образования] / Л. Б. Борисов. -4-е изд., доп. и перераб. . -М.: Мед. информ. агентство, 2005. -736 с.: ил., стр.223-225, 335-337
или
Поздеев О.К. Медицинская микробиология : учебное пособие для студентов медицинских вузов [Рекомендовано отраслевым министерством] / О. К. Поздеев ; ред. В. И. Покровский. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005, 2008. -768 с.: ил., стр. 137-139, 243-250

Самоконтроль, текущий тестовый контроль, устный опрос

2.4.
Быть готовым ответить на контрольные вопросы (приложение 1)
Самоконтроль, текущий тестовый контроль, устный опрос

2.5.
Решить тестовые задания (приложение 2)
Самоконтроль текущий тестовый контроль

2.6.
Решить ситуационные задачи (приложение 3)
Самоконтроль, устный опрос

2.7.
Для ответа на контрольные вопросы и тестовые задания использовать дополнительные информационные ресурсы:
1.Научная электронная библиотека
[ Cкачайте файл, чтобы посмотреть ссылку ]
2. Единое окно доступа к образовательным ресурсам
[ Cкачайте файл, чтобы посмотреть ссылку ]
Самоконтроль текущий тестовый контроль, устный опрос.


3. Требования к форме одежды: халат, шапочка, бахилы (сменная обувь), перчатки нестерильные.




4. Цели и задачи (результат занятия)

После практического занятия по теме студент должен:
Код компетенции
.обладать следующими компетенциями:
способностью и
готовностью:
Краткое содержание и структура компетенции.
Характеристика обязательного порогового уровня
сформированности компетенции
у обучаемого по данному занятию

Форма
контроля
обученности


Профессиональные компетенции (ПК)


ПК -№5
способность и готовность проводить и интерпретировать результаты современных лабораторно-инструментальных исследований у больных детей и подростков
Пороговый уровень:




Знать (Зн.):




Зн.1 – правила техники безопасности и работы в биологических лабораториях с реактивами, приборами, животными;
Зн.2 – методы микробиологической диагностики;
Текущий тестовый контроль, устный опрос



Уметь (Ум.):




Ум.3 – проводить микробиологическую диагностику
Контроль правильности учета реакций (поверка протокола)

ПК -№9
способность и готовность получать информацию из различных источников, работать с информацией в глобальных компьютерных сетях
Пороговый уровень:




Уметь (Ум.):




Ум.4 – пользоваться учебной, научной, научно-популярной литературой, сетью Интернет для профессиональной деятельности

Текущий тестовый контроль, устный опрос

ПК -№11
способность и готовность .. осуществлять профилактические мероприятия по предупреждению инфекционных болезней патологических процессах
Пороговый уровень:




Знать (Зн.):




Зн.3 – применение основных антибактериальных, противовирусных и биологических препаратов;

Текущий тестовый контроль, устный опрос






5. Хронокарта занятия и аудиторная деятельность студента

№ п/п
Этап практического занятия
Время

1.
Организационная часть.
10

1.1
Приветствие.
1

1.2
Регистрация присутствующих в журнале.
1

2.
Введение.


2.1
Озвучивание темы и ее актуальность, цели и плана практического занятия.
3

2.2
Ответы на вопросы студентов, возникшие при подготовке к занятию.
5

3.
Разбор теоретического материала
30

3.1.
Текущий письменный контроль
15

3.2.
Решение ситуационных задач
10

3.3
Обсуждение основных положений темы, необходимых для выполнения лабораторной работы (устный разбор теоретического материала – «вопрос-ответ», обсуждение)
15

4.
Проведение текущего инструктажа по технике безопасности при работе с исследуемым материалом, ингредиентам и объектами результатов реакций, соблюдению асептики и антисептики
1

5.
Самостоятельная практическая работа студентов (последовательность действий и схема протокола исследования изложены в слайдах презентации, которые демонстрируются в течение всего времени выполнения работы)
70

5.1
Учесть и оценить результаты основного опыта РСК.
Изучить препараты: комплемент, гемолитическая сыворотка, антиген для РСК.
Изучить ингредиенты и схемы постановки ИФА, ИБ, ПЦР, зарисовать.
Учесть и оценить результаты ИФА.
45

5.2.
Оформление протокола работы.
15

5.3
Индивидуальное и групповое консультирование при выполнении заданий.
10

5.4.
Контроль выполнения лабораторной работы (проверка протокола исследования) с анализом полученных результатов, выставлением оценки освоения практических навыков в журнал.
10

6.
Заключительная часть.
14

6.1.
Подведение итогов занятия. Анализ результатов. Ответы на вопросы.
6

6.2.
Информация для студентов, получивших неудовлетворительные оценки.
1

6.3
Сообщение темы следующего занятия, вопросов для самостоятельной подготовки, рекомендуемой литературы.
5

6.4
Завершение занятия, оформление учебного журнала.
2


6. Внеаудиторная самостоятельная работа студента по теме «Реакции иммунного лизиса.
Реакция связывания комплемента (РСК). Иммуноферментный анализ (ИФА). Иммуноблоттинг.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)»
Самоподготовка по контрольным вопросам к практическим занятиям
Проработка учебного материала по конспектам лекций
Поиск материала в Internet

7. Критерии оценок деятельности студента при освоении учебного материала представлены в приложении 3 к данным методическим указаниям.

8. Рекомендации для студентов, пропустивших практическое занятие.
Студент, пропустивший практическое занятие, обязан отработать его в форме и сроки, установленные кафедрой (см. информационный стенд кафедры).
Для подготовки студенту необходимо выполнить все пункты раздела 2 («Подготовка к занятию») данных методических указаний.
9. Приложения для самостоятельной работы студентов




Приложение 1
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
по теме «Реакции иммунного лизиса. Реакция связывания комплемента (РСК).
Иммуноферментный анализ (ИФА). Иммуноблоттинг (ИБ).
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)»

Реакции иммунного лизиса (гемолиз, бактериолиз) – механизм реакций, их практическое использование.
Гемолизины, получение гемолитических сывороток.
Комплемент и его получение.
Ингредиенты, необходимые для постановки реакции РСК, их предварительная подготовка. Постановка основного опыта РСК и практическое использование реакции.
Иммуноферментный анализ: механизм реакции, особенности постановки реакции, использование для диагностики инфекционных заболеваний.
Иммуноблоттинг: сущность, особенности проведения и диагностические возможности реакции.
Полимеразная цепная реакция: сущность и схема проведения реакции, диагностические возможности ПЦР.




Приложение 2.
Тестовые задания по теме
«Реакции иммунного лизиса.
Реакция связывания комплемента (РСК). Иммуноферментный анализ (ИФА).
Иммуноблоттинг. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).»

Выберите один или несколько правильных ответов, закончите фразу

1. Комплемент, используемый для постановки РСК – это лиофилизированная сыворотка
А – кролика
Б – морской свинки
В – барана
Г – человека

2. Признаки классического пути активации комплемента:
А – не связан с образованием комплекса антиген-антитело, активация начинается с фракции С3
Б – запускается при взаимодействии антигенов и антител, активация начинается с фракции С1
В – не связан с образованием комплекса антиген-антитело, активация начинается с фракции С1
Г – запускается при взаимодействии антигенов и антител, активация начинается с фракции С3


3. Литическое действие комплемента обусловлено фракциями:
А – С1 – С 3
Б – С3 – С4
В – С5 – С9

4. Для учета РСК применяется гемолитическая система, состоящая из Эритроциты барана и антитела против них..

5. Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации кролика эритроцитами
А – барана
Б – кролика
В – морской свинки

6. Если комплемент остается свободным в первой стадии РСК и связывается затем с гемолитической системой, происходит реакция гемолиз(реакция отрицательная)

7. При оценке РСК в опытной пробирке гемолиз отсутствует, следовательно реакция
А – отрицательная
Б – положительная

8. Для выявления антигенов методом ИФА применяют антитела, меченые ферментами:
А – щелочной фосфатазой
Б – пероксидазой хрена
В - галактозидпермеазой

9. При проведении ИФА образование в лунке иммунного комплекса и добавление хромогена, который расщепляется ферментом, приводит к изменению цвета раствора хромогена(изменяется цвет продукта реакции)
10. ИФА используют для:
А - обнаружения антигенов
Б - обнаружения антител
В - обнаружения мутаций в геноме
Г - идентификации генома
Д - оценки биохимической активности микробов

11. При проведении конкурентного метода ИФА в лунку одновременно вносится исследуемая сыворотка и меченные антитела к адсорбированному антигену.
12. В основе ПЦР лежит принцип амплификации (увеличения) количества:
А – определяемых белков (антигенов)
Б – определяемой ДНК
В – определяемых антител



13. Установите правильную последовательность этапов ПЦР
А - амплификация 2
Б – пробоподготовка 1
В - детекция результатов 3

14. Установите последовательность этапов амплификации
А – денатурация ДНК 1
Б – комплементарное достраивание (элонгация) цепей ДНК 3
В – гибридизация (отжиг) праймеров 2

15. Роль ДНК-полимеразы:
А – катализирует удлинение цепей праймеров
Б – катализирует удлинение цепей матрицы ДНК
16. Синтетические олигонуклеотиды, комплементарные концам определяемого фрагмента ДНК, называются..



17. Для анализа амплифицированной ДНК в наиболее достоверным методом является
А – электрофорез в геле
Б – гибридизация с ДНК-зондом
В – метод флуоресцентной детекции
18. Для количественной оценки накопленных в цикле продуктов ПЦР (ампликонов) используется метод:
А – праймерной ПЦР
Б – гнездовой ПЦР
В – ПЦР в реальном времени


19. С помощью иммуноблотинга определяют:
А – суммарные антитела к антигенам
Б – антитела к отдельным антигенам
20. Установите порядок проведения иммуноблотинга:
А – электрофорез белков возбудителя 1
Б – перенос на активированную бумагу 2
В – добавление антивидовой меченой сыворотки 4
Г – добавление сыворотки исследуемой 3
Д – добавление субстрата-хромогена5

















Приложение 3

Ситуационные задачи.


Ситуационная задача №1.
В РСК в опытной пробирке и в контроле антигена наблюдается задержка гемолиза.
Задание:
Дайте заключение по реакции.


Ситуационная задача №2.
В лабораторию поступила проба крови ВИЧ-инфицированного пациента М. ВИЧ-инфекция диагностирована 3 года назад.
Задание:
Какие диагностические реакции позволят установить стадию развития инфекции и почему?


Ситуационная задача №3.
В лабораторию поступила сыворотка крови больного хроническим гепатитом В. При анализе результатов ПЦР, проведенной в режиме «real time», отмечено пересечение уровня порогового цикла на 20 раунде.
Задание:
Сделайте заключение: в стадии рецидива или ремиссии находится пациент?


Приложение 4
КРИТЕРИИ ОЦЕНОК ДЕЯТЕЛЬНОСТИ СТУДЕНТА
при освоении учебного материала

Критерии оценки текущего тестового контроля:

«Отлично» – 90-100% выполненных заданий,
«Хорошо» – 80-89% выполненных заданий,
«Удовлетворительно» – 70-79% выполненных заданий,
«Неудовлетворительно» – менее 70% выполненных заданий.

Критерии оценки устного ответа:
«Отлично» – студент глубоко знает учебный материал; последовательно, логично и исчерпывающе отвечает на поставленные вопросы, правильно использует ранее известные и новые биологические (микробиологические) термины;

«Хорошо» – студент твердо знает учебный материал; отвечает без наводящих вопросов и не допускает при ответе серьезных ошибок, используя в ответе новые понятия;

«Удовлетворительно» – студент знает лишь основной материал; на заданные вопросы отвечает недостаточно четко и полно, что требует дополнительных и уточняющих вопросов преподавателя, допускает в ответе существенные ошибки;

«Неудовлетворительно» – студент имеет отдельные представления об изученном материале; не может полно и правильно ответить на поставленные вопросы, в ответе допускает грубые ошибки.

Критерии оценки решения ситуационных задач:

«отлично» – комплексно оценены предложенные ситуации; показано знание особенностей проведения и учета реакций серологического и молекулярно-генетического методов диагностики, правильно интерпретированы результаты реакций, правильно выбраны подходы к решению задач; сделаны грамотные заключения; получены исчерпывающие ответы на вопросы к ситуационным задачам.

«хорошо» – комплексная оценка предложенных ситуаций проведена с незначительными затруднениями, показано знание особенностей проведения и учета реакций серологического и молекулярно-генетического методов диагностики, с комментариями педагога интерпретированы результаты реакций, правильно выбраны подходы к решению задач; сделаны грамотные заключения; получены правильные ответы на вопросы к ситуационным задачам.
.

«удовлетворительно» – студент затрудняется в комплексной оценке предложенных ситуаций, показаны недостаточные знания особенностей проведения и учета реакций серологического и молекулярно-генетического методов диагностики, интерпретация результатов реакций возможна с помощью педагога, студент дает неполные ответы на вопросы к ситуационным задачам.

«неудовлетворительно» – не проведена оценка предложенных ситуаций; интерпретация результатов реакций не возможна, студент не дает верных ответов на вопросы к ситуационным задачам.

Критерии оценки освоения практических навыков
«Отлично» – студентом правильно учтены результаты основного опыта РСК, логично и аргументированно сделано заключение; последовательно и грамотно описаны схемы проведения ИФА, иммуноблоттинга, ПЦР; правильно учтены результаты ИФА, сделано аргументированное заключение; соблюдены правила асептики и антисептики.

«Хорошо» - студентом правильно учтены результаты основного опыта РСК, с незначительными недочетами сделано заключение; последовательно с незначительными затруднениями описаны схемы проведения ИФА, иммуноблоттинга, ПЦР; правильно учтены результаты ИФА, сделано аргументированное заключение; соблюдены правила асептики и антисептики.

«Удовлетворительно» - студент нарушает последовательность в оценке РСК, нарушает правила асептики и антисептики; допускает ошибки при учете и (или) интерпретации результатов , схемы проведения ИФА, иммуноблоттинга, ПЦР описаны с ошибками, испытывает затруднения в оценке результатов ИФА, не проявляет логику, не приводит аргументы в рассуждениях.

«Неудовлетворительно» - грубо нарушает последовательность в оценке реакций, нарушает правила асептики и антисептики; неправильно учитывает и (или) неправильно интерпретирует результаты, не проявляет логику, не приводит аргументы в рассуждениях.



Использованные сокращения и условные обозначения

Зн.
- уровень усвоения «знать»

Ум.
- уровень усвоения «уметь»

Вл.
- уровень усвоения «владеть»

Пр.
- уровень усвоения «представлять»

ЦМК
- цикловая методическая комиссия



















13PAGE 15


13PAGE 14715



УТВЕРЖДАЮ
Заведующий кафедрой
микробиологии, вирусологии и иммунологии_______________________
(наименование)
Евстропов А.Н.____________________
(подпись)
«___» _________________20__ г.


13 EMBED Visio.Drawing.11 1415



Root Entry

Приложенные файлы

  • doc 17903112
    Размер файла: 1 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий