rk


\\\1.Основные принципы систематики бактерий. Таксономические категории. Критерии вида. Систематика – это специальная наука которая строго систематизирует бактерии в определенном порядке по их сходству, различиям и взаимоотношениям между собой. Раздел систематики, изучающий принципы классификации, называется таксономией (от греч. taxis — расположение, порядок). Таксон — группа организмов, объединенная по определенным однородным свойствам в рамках той или иной таксономической категории. Для бактерий рекомендованы следующие таксономические категории: класс, отдел, порядок, семейство, род, вид. По классификации Берджи, бактерии составляют царство прокариот и делятся на 4 отдела: грациликуты — бактерии с тонкой клеточной стенкой, грамотрицательные; фирмикуты — бактерии с толстой клеточной стенкой, грамположительные; тенерикуты — бактерии «мягкие», «нежные» без ригидной клеточной стенки, включающие микоплазмы; мендозикуты, отличающиеся дефектной клеточной стенкой, особенностями строения рибосом, мембран и рибосомных РНК (рРНК). Критерии вида: величина, форма, агрегация, наличие капсулы, эндоспор, жгутиков, пигментов и способность окрашиваться красителями (наиболее распространена окраска по Граму).
2.Рикке́тсии (лат. Rickettsiae) — семейство бактерий. Представители семейства Rickettsia представлены полиморфными, чаще кокковидными или палочковидными, неподвижными клетками. Грамотрицательны. Не имеют жгутиков,не образуют спор и капсул Клетки содержат клеточную стенку, ЦПМ, цитоплазму с нуклеоидом и рибосомами. Клеточная стенка рыхлая и проницаема для различных веществ. Вызывают риккетсиозы (эпидемический сыпной тиф и др.).. 1. Род Rickettsia, виды делят на две группы:
1) группу тифов: возбудитель эпидемического сыпного тифа;воз-ль эндемического (крысино-блошиного) тифа;
2) группу клещевых риккетсиозов: возбудитель лихорадки скалистых гор; возбудитель геморрагической лихорадки;
Хламидии (Chlamidiales) – грамотрицательные кокковидные прокариоты. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Инфекционной формой хламидий являются небольшие спороподобные сферические клетки, называемые элементарными тельцами Они имеют ригидную клеточную стенку и ЦПМ. В цитоплазме – нуклеоид и рибосомы. Вызывают трахому, орнитоз, специфический конъюнктивит, венерическийлимфогранулематоз.
Микоплазмы (Mycoplasmatales) – грамотрицательные микроорганизмы, лишённые клеточнойстенки. Морфологически неоднородны. Имеют вид очень мелких сферических или овоидных клеток, более крупных шаровидных клеток и нитевидных, способных к ветвлению клеток. .К-ки микоплазм не способны синтезировать компоненты клеточной стенки (причина паразитизма), окружены ЦПМ. Снаружи ЦПМ обнаруживается капсулоподобный слой. В цитоплазме – нуклеоид, рибосомы, кольцевые внутриклеточные мембранные структуры Вызывают микоплазма-пневмонию, воспалительные заболевания МПС.
ГРИБЫ царство Микота (Mycota). Грибы являются эукариотами. Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами,цитоплазматическую мембрану и многослойную, ригидную клеточную стенку, состоящую из нескольких типов полисахаридов, а также белка, липидов. Грибы являются грамположительными микробами, вегетативные клетки — некислотоустой­чивые. Тело гриба называется талломом.
Различают два основных типа грибов: гифальный и дрожжевой. Гифальные (плесневые) грибы образуют ветвящиеся тонкие нити (гифы), сплетающиеся в или мицелий. Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представлены многоядерными клетками. Гифы высших грибов разделены перегородками с отверстиями. Мицелий состоит из двух частей: верхней плодоносящей и нижней, которая служит для прикрепления к питательной среде -субстрату — и питания гриба. Грибы видны невооруженным глазом. Клетки мицелия имеют клеточную стенку, которая обладает защитными свойствами.определяет форму клетки.
Размножение. грибы размножаются в основном двумя способами: бесполым (вегетативно) и половым. При бесполом размножении формируются споры. При половом размножении сначала происходит слияние двух близлежащих клеток. Затем процесс размножения протекает у различных видов грибов по-разному. У одних образуется клетка, называемая зиготой, грибы для своего развития требуют наличия кислорода, т. е. являются аэробами и размножаются только при доступе воздуха!
Дрожжевые грибы имеют вид отдельных овальных клеток. Одноклеточные грибы, которые по типу полового размножения распределены среди высших грибов — аскомицет и базидиомицет. При бесполом размножении дрожжи образуют почки или делятся, что приводит к одноклеточному росту.
Среди грибов, имеющих медицинское значение, выделяют 3 типа: зигомицеты (Zygomycota), acкомицеты (Ascomycota) и базидиомицеты (Basidiomycota). Зигомицеты: низшие грибы, вызывают зигомикоз легких, головного мозга.Аскомицеты: высшие совершенные грибы, к ним относится возбудитель эрготизма, Микозы, дерматомикозы, пневмония, кератоз, аспергиллез. Дейтеромицеты: несовершенные грибы, род Candida, поражающие слизистые оболочки и внутренние органы. Заболевания:
1. Поверхностные микозы (кератомикозы) — поражения поверхностных слоев кожи и волос:Malassezia furfur, Cladosporium.
2.Эпидермофитии (эпидермомикозы) — поражения эпидермиса, кожи и волос:Epidermophyton floccosum,Microsporum canis.
3.Подкожные, вовлекающие в процесс дерму, подкожные ткани, мышцы: Sportrichum schenckii.
4. Аллергии, вызванные грибами (пневмоаллергии и дермоаллергии).
5. Микотоксикозы — пищевые интоксикации, вызванные
3,Питание и дыхание бактерий. Типы питания и дыхания.Пищей принято называть любое вещество, которое, попав в организм, служит источником энергии или пластическим материалом для синтеза молекул, используемых для нужд организма. Большинство животных, включая человека, способно заглатывать и переваривать плотные частички пищи в основном за счет их гидролиза. Типы питания: голозойный, а организм- голозои. Бактерии не способны захватывать твердофазные объекты, поэтому утилизируют питательные вещества в виде относительных простых молекул из водных растворов. Подобный тип питания ,присущий также всем растениям, известен как голофитный, то есть бактерии галофиты. Тем не менее многие бактерии способны утилизировать твердую пищу с помощью так называемого внешнего питания, реализуемого вне клеток, то есть бактериям также присущи голозойный тип питания. Для этого они имеют мощный ферментативный потенциал, хотя иногда секретируемые ферменты могут полностью инактивировать в результате разведения, под действием конвекционных токов и других факторов. Наиболее часто бактерии получают энергию в результате окисления органических субстратов до CO2 и Н2О-это процесс дыхания. Типы дыхания 1)Аэробное дыхание- наиболее распространенный процесс получения энергии среди комменсалов и патогенных для человека бактерий. 2)Анаэробное дыхание осуществляют факультативно анаэробные бактерии и строгие анаэробы .Многие факультативные анаэробы при отсутствии кислорода в качестве акцептора электронов используют нитраты- нитратное дыхание. При этом образуются характерные продукты восстановления-нитриты и другие восстановленные формы азота, что используют на практике для идентификации бактерий.
4,. К поверхностным структурам бактерий(необязательным, как и клеточная стенка), относятся капсула, жгутики, микроворсинки. Капсула или слизистый слой окружает оболочку ряда бактерий. Выделяют микрокапсулу, выявляемую при электронной микроскопии в виде слоя микрофибрилл, и макрокапсулу, обнаруживаемую при световой микроскопии. Капсула является защитной структурой (прежде всего от высыхания), у ряда микробов- фактором патогенности, препятствует фагоцитозу, ингибирует первые этапы защитных реакций- распознавание и поглощение. У сапрофитов капсулы образуются во внешней среде, у патогенов- чаще в организме хозяина. Существут ряд методов окраски капсул в зависимости от их химического состава. Капсула чаще состоит из полисахаридов (наиболее распространенная окраска- по Гинсу), реже- из полипептидов. Жгутики. Подвижные бактерии могут быть скользящие (передвигаются по твердой поверхности в результате волнообразных сокращений) или плавающие, передвигающиеся за счет нитевидных спирально изогнутых белковых (флагеллиновых по химическому составу) образований- жгутиков. По расположению и количеству жгутиков выделяют ряд форм бактерий. 1.Монотрихи- имеют один полярный жгутик. 2.Лофотрихи- имеют полярно расположенный пучок жгутиков. 3.Амфитрихи- имеют жгутики по диаметрально противоположным полюсам. 4.Перитрихи- имеют жгутики по всему периметру бактериальной клетки. Способность к целенаправленному движению (хемотаксис, аэротаксис, фототаксис) у бактерий генетически детерминирована. Фимбрии или реснички- короткие нити, в большом количестве окружающую бактериальную клетку, с помощью которых бактерии прокрепляются к субстратам (например, к поверхности слизистых оболочек). Таким образом, фимбрии являются факторами адгезии и колонизации.
Споры бактерий. Спорообразование. Клостридии и бациллы. Примеры.Споры- своеобразная форма покоящихся фирмикутных бактерий, т.е. бактерии с грамположительным типом строения клеточной стенки. Споры образуются лишь внутри вегетирующей бактериальной клетки, и каждая клетка образует одну эндоспор. Процесс спорообразования проходит ряд стадий, в течении которых часть цитоплазмы и хромосомы отделяется, окружаясь цитоплазматической мембраной; образуется проспора, затем формируется многослойная плохопронициаемая оболочка. Спорообразование сопровождается интенсивным потреблением проспорой,а затем формирующейся оболочкой споры депиколиновой кислоты и ионов кальций. После формирования всех структур спора преобретает термоустойчивость, кот.связывают с наличием дипиколината кальция. Форма спор может быть овальной, шаровидной, расположением в клетке – терминальное,т.е. на конце палочки(возбудитель столбняка),субтерминальное- ближе к концу палочки(возбудители ботулизма,газовой гангрены) и центральное(сибиреязвенная бацилла).
Клостридии- это также форма бактериальных клеток,у которых центрально расположенная спора имеет диамерт больший, чем диаметр самой клетки,из-за чего клетка «раздувается» и преобретает веретенообразную форму. Бациллы-обширный род грамположительных палочковидных бактерий,образующих внутриклеточные споры.Б. являются аэробами . По методу Грама окрашивается положительно
5,Структура клеточной стенки бактерий. Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий. Повреждение клеточной стенки бактерий (L-формы бактерий, протопласты, сферопласты).Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий. Повреждение клеточной стенки бактерий (L-формы бактерий, протопласты, сферопласты). Клеточная стенка — прочная, упругая структура, придающая бактерии определенную форму и сдерживающая высокое осмотическое давление в клетке. Она участвует в процессе деления клетки и транспорте метаболитов. У грамположительных бактерий клеточная стенка толще, чем у грамотрицательных, достигая 50 нм и более. В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов и белков. В клеточной стенке грамотрицательных бактерий пептидогликана содержится меньше E—10 %). В состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий входит наружная мембрана, связанная посредством липопротеина с подлежащим слоем пептидогликана. Наружная мембрана имеет вид волнообразной трехслойной структуры, сходной с внутренней мембраной, называемой цитоплазматической мембраной. Основной компонент этих мембран — бимолекулярный (двойной) слой липидов. Наружная мембрана является асимметричной мозаичной структурой, представленной липополисахаридами, фосфолипидами и белками. При нарушении синтеза клеточной стенки бактерий под влиянием фермента лизоцима или пенициллина, а также защитных факторов организма образуются клетки с измененной, часто шаровидной формой; протопласты — бактерии, полностью лишенные клеточной стенки, и сферопласты — бактерии с частично сохранившейся клеточной стенкой. Бактерии сферопластного или протопластного типа, утратившие способность к синтезу пептидогликана под влиянием антибиотиков или других факторов и способные к размножению, называются L-формами. L-формы могут возникать и в результате мутаций. Они представляют собой осмотически чувствительные, шаровидные, колбовидные клетки различной величины, в том числе и проходящие через бактериальные фильтры. L-формы могут образовывать многие бактерии — возбудители инфекционных болезней.
6,,Внутренние (цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид, рибосомы, включения) и поверхностные структуры бактериальной клетки.1.В центре бактериальной клетки находится нуклеоид- ядерное образование, представленное чаще всего одной хромосомой кольцевидной формы. Состоит из двухцепочечной нити ДНК. Нуклеоид не отделен от цитоплазмы ядерной мембраной. 2.Цитоплазма- сложная коллоидная система, содержащая различные включения метаболического происхождения (зерна волютина, гликогена, гранулезы и др.), рибосомы и другие элементы белоксинтезирующей системы, плазмиды (вненуклеоидное ДНК), мезосомы (образуются в результате инвагинации цитоплазматической мембраны в цитоплазму, участвуют в энергетическом обмене, спорообразовании, формировании межклеточной перегородки при делении). 3. Цитоплазматическая мембрана ограничивает с наружной стороны цитоплазму, имеет трехслойное строение и выполняет ряд важнейших функций- барьерную (создает и поддерживает осмотическое давление), энергетическую (содержит многие ферментные системы- дыхательные, окислительно- восстановительные, осуществляет перенос электронов), транспортную (перенос различных веществ в клетку и из клетки)
7.Морфология и химический состав бактерий, актиномицетов и спирохет. Методы окрашивания. Роль в патологии человека. В состав микроорганизмов входят вода, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы, липиды, минеральные вещества. Вода — основной компонент бактериальной клетки, составляющий около 80 % ее массы. Нуклеиновые кислоты бактерий выполняют функции, аналогичные нуклеиновым кислотам эукариотических клеток. Углеводы бактерий представлены простыми веществами (моно- и дисахариды) и комплексными соединениями. Липиды в основном входят в состав цитоплазматической мембраны и ее производных, а также клеточной стенки бактерий. Минеральные вещества бактерий обнаруживают в золе после сжигания клеток. В большом количестве выявляются фосфор, калий, натрий, сера, железо, кальций, магний, а также микроэлементы (цинк, медь, кобальт, барий, марганец и др.). Бактерии бывают шаровидные, палочковидные, извитые и ветвящиеся. Спирохеты — тонкие, длинные, извитые (спиралевидной формы) бактерии, отличающиеся от спирилл подвижностью, обусловленной «сгибательными» изменениями клеток. Спирохеты состоят из наружной мембраны (клеточной стенки), окружающей протоплазматический цилиндр с цитоплазматической мембраной и аксиальной нитью (аксистиль). Спирохеты представлены 3 родами, патогенными для человека: Treponema, Borrelia, Leptospira. Обычно спирохеты окрашивают по методу Романовского—Гимзы или серебрением. В живом виде их исследуют с помощью фазово-контрастной или темнопольной микроскопии. Актиномицеты — ветвящиеся грамположительные бактерии. Свое название (от греч. actis — луч, mykes — гриб) они получили в связи с возникновением в пораженных тканях друз-гранул из плотно переплетенных нитей в виде лучей, отходящих от центра и заканчивающихся колбовидными утолщениями. Актиномицеты, как и грибы, образуют мицелий — нитевидные переплетающиеся клетки (гифы). Актиномицеты могут делиться путем фрагментации мицелия на палочковидные или сферические клетки, похожие на палочковидные и кокковидные бактерии. На воздушных грифах актиномицетов могут образовываться споры, необходимые для размножения.). 8 Химический состав бактериальной клетки. Ферменты микроорганизмов. Выделение чистой культуры аэробов и анаэробов (этапы). В состав микроорганизмов входят вода, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы, липиды,минеральные вещества.Вода . основной компонент бактериальной клетки, составляющий около 80 % ее массы.Белки (40.80 % сухой массы)состоят обычно из сочетаний 20 аминокислот. В состав бактерий входит диаминопимелиновая кислота (ДАП), отсутствующая в клетках человека и животных. Бактерии содержат более 2000различных белков метаболизма. Большая часть белков обладает ферментативной активностью. Нуклеиновые кислоты бактерий выполняют функции, аналогичные нуклеиновым кислотам эукариотических клеток: молекула ДНК в виде хромосомы отвечает за наследственность,рибонуклеиновые кислоты (информационная, или матричная, транспортная и рибосомная) участвуют в биосинтезе белка. Полисахариды часто входят в состав капсул,являются запасными питательными веществами.Липиды бактерий представлены фосфолипидами, жирными кислотами и гли-церидами. Минеральные вещества бактерий обнаруживают в золе после сжигания клеток. В большом количестве выявляются фосфор, калий, натрий, сера, железо, кальций, магний, а также микроэлементы (цинк, медь, кобальт, барий, марганец и др.).Они участвуют в регуляции осмотического давления, рН среды, окислительно-восстановительного потенциала, активируют ферменты.
У грамположительных бактерий в состав клеточных стенок входят, кроме мукопептидов, полисахариды (сложные, высокомолекулярные сахара), тейхоевые кислоты (сложные по составу и структуре соединения, состоящие из сахаров, спиртов, аминокислот и фосфорной кислоты). Полисахариды и тейхоевые кислоты связаны с каркасом стенок — муреином Стенки грамотрицательных бактерий более сложные по химическому составу, в них содержится значительное количество липидов (жиров), связанных с белками и сахарами в сложные комплексы — липопротеиды и липополисахариды. Муреина в клеточных стенках грамотрицательных бактерий в целом меньше, чем у грамположительных бактерий.
Клеточная стенка проницаема: через нее питательные вещества свободно проходят в клетку, а продукты обмена выходят в окружающую среду. Крупные молекулы с большим молекулярным весом не проходят через оболочку.
Ферменты представляют собой органические катализаторы, вырабатываемые живыми клетками организм .Ферменты состоят из белков.Ферменты обладают расщепляющей и синтезирующей спо¬собностьюФерменты которые вызывают биохимические процессы внутри клетки, называются эндоферментами,вне ее экзоферментами .Одни ферменты действуют на белки, другие - на угле¬воды, третьи - на жиры.Ферменты, катализирующие превращения белков, называются протеазами, или протеолитическими ферментами. К ним относятся пепсин, разлагающий белки до более простых соеди¬нений - пептонов, трипсин, продолжающий распад белков до аминокислот.
Ферменты, катализирующие гидролиз и синтез углеводов, относятся к карбогидразам. В эту группу входят амилаза, мальтаза, сахараза, лактаза, пектиназа, целлюлаза.
Амилаза превращает крахмал в солодовый сахар – мальтозу. Этот фермент содержится в плесневых грибах, многих бакте¬риях, в растениях, а также в слюне и соке поджелудочной же¬лезы человека и животных. Амилаза образуется в проросших зернах ячменя (солод) и других злаковых. Она играет большую роль в производстве хлеба, спирта, пива и др.
Мальтаза расщепляет сахар мальтозу на две частицы глюкозы. Этот фермент вырабатывается бактериями и гриба¬ми.Сахараза разлагает сахарозу на глюкозу и фруктозу. Фер¬мент содержится в большинстве микроорганизмов и в расте¬ниях.
Лактаза расщепляет молочный сахар - лактозу - на галак¬тозу и глюкозу. Она выделяется многими микроорганизмами, а также животными организмами.
Пектиназа катализирует расщепление пектиновых веществ. Она содержится в плесневых грибах и бактериях и находит применение в пищевой промышленности.
Целлюлаза подвергает гидролизу очень устойчивое соеди¬нение - целлюлозу (клетчатку). Целлюлаза выделяется гри¬бами и некоторыми бактериями.
Жиры расщепляются липолитическими ферментами (липа¬зами). Липазы разлагают жиры на глицерин и жирные кислоты. Эти ферменты вырабатываются некоторыми бактериями и пле¬сенями, встречаются в растениях, а также образуются в жи¬вотных организмах.
3) Выделение отдельных видов бактерий из исследуемого материала .Для выделения чистой культуры аэробных применяют методы, основанные на: 1) механическом разобщении бактериальных клеток; 2) предварительной обработке исследуемого материала с помощью физических или химических факторов, оказывающих избирательное антибактериальное действие; 3) избирательном подавлении размножения сопутствующей микрофлоры физическими или химическими факторами во время инкубации посевов; 4) способности некоторых бактерий быстро размножаться в организме чувствительных к ним лабораторных животных (биопробы). ,'Для механического разобщения клеток бактерий исследуемый материал петлей или пипеткой наносят на поверхность питательного агара в чашку Петри и равномерно распределяют стерильным шпателем. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) материал растирают по поверхности питательного агара во второй чашке.B материала также делают бактериальной петлей Для этого в верхней части чашки густо заштриховывают зигзагообразными движениями петли небольшой участок агаровой среды, освободив таким образом петлю от излишнего материала. Затем наносят параллельные штрихи по остальной части среды. Иногда применяют метод пластинчатых разводок, который заключается в перемешивании различных разведений исследуемого материала с расплавленным и остуженным питательным агаром в колбе или пробирке. После этого его разливают в чашки Петри и инкубируют в термостате.
Выделение чистой культуры анаэробов, для их культивирования часто необходима специфическая микрофлора, а также определённые концентрации метаболитов. Применяется, например, при исследовании паразитов человеческого организма.Для культивирования анаэробов применяют особые методы, сущность которых заключается в удалении воздуха или замены его специализированной газовой смесью (или инертными газами) в герметизированных термостатах — анаэростатах[7].Другим способом выращивания анаэробов(чаще всего микроорганизмов) на питательных средах — добавление содержащих редуцирующие вещества (глюкозу, муравьинокислый натрий и др.), уменьшающие окислительно-восстановительный потенциал.
Общие питательные среды для анаэробных организмов
Среда Китта — Тароцци состоит из мясопептонного бульона, 0,5% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для поглощения кислорода из среды. Перед посевом среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 20 — 30 минут для удаления воздуха из среды. После посева питательную среду сразу заливают слоем парафина или
Данный метод был предложен Брюером и Олгаером в 1965 году. Разработчики представили одноразовый пакет, генерирующий водород, который был позднее усовершенствован ими до саше, генерирующих двуокись углерода и содержащих внутренний катализатор[9][10].
Метод Цейсслера применяется для выделения чистых культур спорообразующих анаэробов. Для этого производят посев на среду Китт-
Метод Фортнера — посевы производят на чашку Петри с утолщенным слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. Одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробной микрофлоры, а затем (после поглощения кислорода) — рост аэробной резко прекращается и начинается рост анаэробной.
\9.Методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний
Существует 5 основных методов диагностики:
1) микроскопический — позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в материале, взятом от больного. Для этого мазок окрашивают различными способами. Этот метод играет решающую роль при диагностике многих инфекционных заболеваний: туберкулеза, малярии, гонореи и др.;
2) бактериологический — заключается в посеве исследуемого материала на питательные среды. Этот метод позволяет выделить возбудителя в чистом виде и изучить его морфологические признаки, ферментативную активность и идентифицировать его;
3) биологический метод — осуществляют путем выделения возбудителя при заражении лабораторных животных, которые восприимчивы к данному заболеванию.
4) серологические методы исследования — основаны на выявлении специфических иммунных антител в сыворотке крови больного. Для этого используют различные иммунологические реакции: реакция Видаля (используется для выявления брюшного тифа);
5) аллергический метод — ставятся кожно-аллергические пробы, введение аллергена накожно или внутрикожно; используются для диагностики туберкулеза, туляремии, лепры и т. д.
азово-контрастная микроскопия основана на интерференции света: прозрачные объекты, отличающиеся по показателю преломления от окружающей среды, выглядят либо как темные на светлом фоне (позитивный контраст), либо как светлые на темном фоне (негативный контраст). Фазово-контрастная микроскопия применяется для изучения живых микроорганизмов и клеток в культуре ткани.
Темнопольная микроскопия позволяет наблюдать живые бактерии. Для темнопольной микроскопии используют темнопольный конденсор, выделяющий контрастирующие структуры неокрашенного материала. Перед началом работы свет устанавливают и центрируют по светлому полю, затем светлопольный конденсор удаляют и заменяют соответствующей системой.Препарат готовят по методу «раздавленной капли», делая его как можно более тонким (толщина покровного стекла не должна быть толще 1 мм). Наблюдаемый объект выглядит как освещенный на тёмном поле. При этом лучи от осветителя падают на объект сбоку, а в линзы микроскопа поступают только рассеянные лучи (рис. 11-2). В качестве иммерсионной жидкости пригодно вазелиновое масло.
Фазово-контрастная микроскопия. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объек¬та на темном фоне.
Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные осветители.Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно¬вана на явлении фотолюминесценции.
Люминесценция — свечение веществ, возникающее после воз¬действия на них каких-либо источников энергии: световых, элек-тронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесцен¬ция — люминесценция объекта под влиянием света. Если осве-щать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В ре-зультате возникает цветное изображение объекта.
Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способно¬сти светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмик¬роскопических объектов.
Разрешающая способность микроскопа — это способность микроскопа выдавать чёткое раздельное изображение двух близко расположенных точек объекта. Степень проникновения в микромир, возможности его изучения зависят от разрешающей способности прибора. Эта характеристика определяется прежде всего длиной волны используемого в микроскопии излучения (видимое, ультрафиолетовое, рентгеновское излучение). Предельная разрешающая способность достигается при увеличении микроскопа, равном около 1000.
Общее увеличение, даваемое микроскопом, определяется произведением увеличен;::! окуляра и объектива (например, если объектив дает увеличение 20х, а окуляр— 15х, то общее увеличение микроскопа — 300х). Общее увеличение окуляра повышается с уменьшением фокусного расстояния линз, его составляющих, поэтому более сильные окуляры будут короткими, а более слабые — длинными. Окуляры могут давать увеличение в 5, 7, 10, 12, 15 и 20 раз. Общее увеличение микроскопа зависит от увеличения, даваемого объективом и окуляром, и равно произведению увеличений объектива и окуляра.
10 .Виды и механизмы генетических рекомбинаций (конъюгация, трансдукция, трансформация).
Рекомбинация - обмен генетическим материалом между вирусами - возможна в виде обмена генами (межгенная рекомбинация) или участками одного и того же гена (внутригенная рекомбинация). 1) Трансформация-передача одной нити ДНК от бактерии донора к бактерии реципиенту. Клетка погибает, содержимое, в том числе и ДНК входит и попадает к реципиенту. Впервые явления трансформации описал Гриффитс. Путём трансформации могут перенесены различные признаки: капсулообразование, устойчивость к антибиотикам, синтез ферментов. 2) Трансдукция - передача фрагмента двунитчатой ДНК от донора к реципиенту с помощью мутанта умеренного фага. Разновидностью трансдукции является лизогенная конверсия. Трансдукция даёт резистентность к лек препаратам, образование капсулы. синтез ферментов, расщипляя их углево-ды. Виды трансдукции: генерализованная (умеренный фаг встраивается в донора в любом месте хромосомы, каждый раз захватывает разные участки и свойства), специфическая (есть фаг, который всегда встраивается в строго определ. ген. Например фаг, расщипляющий галактозу), абортивная форма (при делении клетки фаговая ДНК передаётся только первой клетке, то есть не происходит репликации участка и теряется признак. 3) Конъюгация-передача генетической информации от донора к реципиенту при непосредственном контакте. Значение: передача лек зависимости с помощью R-плазмиды, передача разнообразных факторов вирулентности, изменение агрегатных свойств и передача ферментов, расщепляющих углеводы.
Задачи:
Какими методами окраски можно определить в мазке-препарате наличие спор, зерен волютина, капсулы, кислотоустойчивых бактерий. Метод по Цилю Нильсона (На фиксированный мазок кладут кусочек фильтр. бумаги, наливают р-р фуксина и подогревают 3-5мин. до появления паров > снять бумагу промыть мазок водой > нанести 5% р-р серной к-ты на 1-2 мин. для обесцвечивания > промыть водой > докрасить мазок водным р-ром мети-ленового синего в течении 3-5 минут > промыть водой, высушить). Примеры: микобактерии туберкулеза, кислотоустойчивых бактерий и др. причины: повышенное количество липидов (окрашиваются в красный цвет).
Классификация питательных сред по назначению. Приведите примеры.Все среды делят на универсальные, диференциально-диагностич, специальные, селективные. На универсальн пит ср-х хорошо растут все бактерии (мясо-пептонный бульон) Диф-диагн среды позволяют отлич один вид от другого по их ферм ак-и и их культур св-вам(среды Гиса, Плоскерева). Селективные среды-отбирать опр виды бактерий, т.к. содерж в-ва угнетающ рост остальных бактерий, но при этом способст росту данного вида бактерий (1% пептонная вода, среда Мюллера)
В мазке, окрашенном по Цилью-Нильсену обнаружены красные тонкие палочки. Укажите название возбудителя. Чем обусловлена кислотоустойчивость данного возбудителя.Кислотоустойчив обусловлена наличием в клеточ стенке и цитопл-е бактерий повыш кол-ва липидов, миколовой к-ты(возбудит туберкулезн палочка)
Для выявления зерен волютина, исследователь использовал метод Ожешко. При микроскопии в клетках обнаружены красные включения. К каким методам окраски относится данный метод. Правильно ли выбран метод.Метод Нейссера исп для выявлен зерен волютина. Мазок окр уксуснокислым метиленовым синим 2-3 мин, при этом происх химич взаимодейств красителей и волютина. Зерна волютина окр в темно синий цвет, при промывке водой тело клетки обесцвеч и затем в теч-и 1 мин докрашив везувином в желто-коричневый цвет
В нативном мазке, при окраске метиленовой синькой, обнаружены синие округлые клетки, расположенные парами. К каким методам окраски относится данный метод. Укажите морфологию микробов. Приведите примеры.Простой метод окраски. Диплококи-парные коки, располаг парами (пневмакок, менингококк, гонококк)
При окраске смеси грамположительных и гармотрицательных бактерий по методу Грама студент забыл провести обработку препарата этиловым спиртом. Какую микроскопическую картину будет наблюдать студент?Все фиолетого цвета. Этиловый спирт у Гр+ бактерий вызывает суживание спор в пептидогликане и тем самым задержив краситель в клет стенке-темно фиолет цвет, в клет стенке наиболее выраж муреиновый, а Гр- после воздейств спиртом утрачив краситель, приобретают при обр фуксином красный цвет, студент не провел обр-ку спиртом поэтому Гр- не обесцветились и уже при окраске фуксином не окраш остаются фиолет ветомПри микроскопии препаратов, полученных из смеси S.aureus и E.coli, окрашенных по Граму, обнаружены красные клетки шаровидной и палочковидной формы. Укажите возможные причины однообразной картины.При окрашивании по Грамму препаратов полученных при смеш s. Aureuse.coli пропустили второй этап – нанесение р-ра Люголя являющ красителем
При приготовлении мазка-препарата исследователь на предметное стекло нанес каплю дистиллированной воды и инокулировал в ней суточную агаровую культуру, подсушил, зафиксировал, окрасил простым методом. При микроскопии с помощью сухого объектива бактерии не обнаружены. Укажите причины.Забыли эмирсионное масло
При приготовлении мазка-препарата исследователь на предметное стекло нанес каплю дистиллированной воды и инокулировал в ней суточную агаровую культуру, подсушил, зафиксировал в пламени спиртовки. При микроскопии бактерии не обнаружены. Укажите причину. Причиной является неокрашивание, поэтому при микроскопии ничего не обнаруживается. Виды окраски: по Грамму, по мет Циля нельсона, по мет Ожешки, по мет Нейссера, по мет бури гинсаПри приготовлении мазка-препарата студент на предметное стекло нанес каплю дистиллированной воды и инокулировал в ней суточную агаровую культуру, подсушил и окрасил мазок водным раствором фуксина. При микроскопии бактерии не обнаружены. Укажите причину.Студент не зафиксир мазок. Фиксация мазка производится при пламени горелки
1.Анаэробами называют микроорганизмы: B). получающие энергию без доступа кислорода, путем расщепления веществ
2.Анаэростат – это: емкость для совместного культивирования аэробов и анаэробов
3.Антисептика - это: В). Мероприятия, направленные па уничтожение микроорганизмов в ране
4.Асептика – это: А). Мероприятия по предотвращению попадания микроорганизмов в рану из окружающей среды
5.Аэробами называют микроорганизмы: A). нуждающиеся в свободном доступе кислорода
6.Бактериологический метод включает в себя: A). выделение возбудителя с последующей идентификацией
7.Бактериологический метод исследования - это: A). Выделение чистой культуры
8.Бактериофаги - это: Вирусы бактерий
9.В каждой бактериологической лаборатории должны быть предусмотрены: A). помещения для приготовления питательных сред и стерилизации посуды
10.В окрашенном мазке мокроты больного туберкулезом обнаружены красные слегка изо¬гнутые палочки на фоне нитей фибрина, других микроорганизмов, клеток синего цвета. Укажите метод окраски: Циля-Нильсена11.В устройстве светового микроскопа может быть выделена: B). оптическая система
12.Вирусы бактерий (фаги) были открыты:E).Д.Эрелем13.Вирусы культивируются на D). курином эмбрионе, культуре тканей, животных
14.Внехромосомный носитель генетической информации у бактерий: C). плазмиды15.Впервые бактериологический метод (выделение чистой культуры) применил: Р. Кох
16.Выбрать питательные среды, действие которых основано на различной сахаролитической активности: среды Гисса17.Выход зрелого фага из пораженной клетки происходит:E).путем отпочковывания18.Ген – это: C). фрагмент ДНK определенной протяженности, способный к перемещению с одного участка ДНК на другой
19.Дайте характеристику термину "лизогения": A). симбиоз фага и бактерии
20.Дифференциальные питательные среды: B). Позволяют отличить одни виды бактерий от других по биохимической активности
21.Для выделения неспорообразующих облигатных анаэробов можно использовать: D). культивирование в среде Вильсон-Блера E). культивирование в среде Китта-Тароцци22.Для идентификации вирусов в курином эмбрионе используется реакция:торможения гемагглютинации
23.Для изучения морфологии бактерий в окрашенном состоянии применяют: C). иммерсионный объектив
24.Для каких бактерий характерно терминальное расположение спор, придающее им вид барабанных палочек: D). Clostridium tetani25.Для расчета разрешающей способности светового микроскопа необходимо знать следующее: D). все перечисленные варианты
26.Изобретателем микроскопа является: D). А.Левенгук27.К дезинфицирующим растворам относится: А). Хлорамин.
28.К извитым формам бактерий относят: клостридии29.К какой группе микроорганизмов относятся фаги: E). вирусы
30.К палочковидным формам бактерий относят:D).бациллы
31.Какая из плазмид контролирует синтез половых ворсинок: С). F-плазмида32.Какие микроорганизмы являются перитрихами:Escherichia coli33.Какова роль умеренных фагов в генотипической изменчивости бактерий: участвуют в интеграции F-плазмид в состав хромосом
34.Какой метод используется для определения подвижности бактерий: "висячая" капля
35.Какой метод используется для определения подвижности бактерий: C). "раздавленная " капля
36.Какой метод окраски применяется для выявления капсулы: D). Бурри-Гинса37.Какой метод окраски применяется для выявления различий в структуре клеточной стенки: B). Грама38.Какой метод окраски применяется для выявления споры: C). Ожешко
39.Какую питательную среду используют для культивирования клостридий: C). Китта-Тароцци40.Клеточное строение имеют следующие микроорганизмы:A).бактерии
41.Клон: A).колония, развившаяся из одной родительской клетки совокупность всех колоний на поверхности питательной среды
42.Колония - это: E). видимая изолированная структура при размножении бактерий на плотных питательных средах
43.Конечным акцептором электронов при дыхании у облигатных аэробов является: кислород
44.Кто из ученых впервые (1923) предложил классифицировать бактерии по наиболее характерным признакам. Д.Берджи45.Культуральные свойства бактерий - это: A). Характер роста на питательных средах
46.Метод Циля-Нильсона применяется для окрашивания: C). микобактерий
47.Методы культивирования неспорообразующих анаэробных бактерий: A). культивирование на среде Китта-Тароцци48.Микроаэрофилами называют микроорганизмы:нуждающиеся в пониженных концентрациях кислорода
49.Микроаэрофильные бактерии: C). размножаются при содержании О2 5-10%
50.Микроорганизмы, лишенные клеточной стенки: B). микоплазмы
51.Микроорганизмы, потенциально патогенные для человека: C). хемогетеротрофы52.Молекулярно-генетический метод диагностики (ПЦР, ДНК-гибридизация) применяют для: B). выявления нуклеиновой кислоты возбудителя в клиническом материале
53.Облигатные анаэробы: A). вегетативные формы в присутствии кислорода погибают
54.Органелла бактерии, препятствующая фагоцитозу: B). капсула
55.Органелла бактерии, противостоящая внешним факторам: A). спора
56.Основной таксономической единицей в микробиологии является: A). вид
57.Основные признаки вирусов: A). содержание ДНК или РНК
58.Основными структурными компонентами вируса являются:нуклеиновая кислота и капсид59.Основоположник учения о вирусах: E). Д.И. Ивановский
60.Отличительной особенностью в структуре клеточной стенки грамположительных бактерий является: B).наличие многослойного пептидогликана и тейхоевых кислот
61.Пептидогликан бактерий: входит в состав клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий
62.Первичный посев крови проводят обычно на:D).щелочную 1%ю пептонную воду
63.Плазмидами являются: B). внехромосомные генетические элементы молекулы ДНК
64.Плотные питательные среды для культивирования бактерий предложил: B). Роберт Кох
65.Правила иммерсионной микроскопии предусматривают: E). использование иммерсионного масла
66.Предельная разрешающая способность светового микроскопа равна: A). 0,2 мкм
67.Предельная разрешающая способность электронного микроскопа равна: C). 0,1-0,2 нм68.Приоритет открытия микроорганизмов принадлежит: C). А. Левенгуку
69.Продуктивный вид взаимодействия вируса с клеткой заканчивается:интеграцией вирусной нуклеиновой кислоты в геном клетки
70.Прокариоты имеют следующие признаки: одна хромосома
71.Процесс адсорбции вируса на поверхности клеток: B). осуществляется за счет специфических рецепторов клетки и вируса
72.С помощью темнопольной микроскопии выявляются: D). жгутики
73.с размножаются: B). в чувствительных клетках микроорганизмов
74.Сложные методы окраски применяют для изучения: A). структуры бактериальной клетки
75.Среды, стимулирующие рост определенного микроорганизма, подавляя при этом рост других, называются:A).Элективные среды
76.Стадии репродукции вирусов:D).проникновение - репродукция - адсорбция - выход
77.Стафилококки располагаются в мазке: E). в виде гроздьев винограда
78.Стерилизация – это: Е). Физическая или химическая обработка любого неодушевленного объекта с целью полного уничтожения всех жизнеспособных форм микроорганизмов
79.Стерилизация - это: С). Полное уничтожение микроорганизмов.
80.Стрептококки располагаются в мазке: D). в виде цепи
81.Суперкапсид это: B). внешняя оболочка вирусов
82.Суперкапсид вирусов - это: A). Внешняя липопротеидная оболочка, окружающая нуклеокапсид некоторых вирусов
83.Сущность процесса конъюгации заключается в: E). передача плазмиды от донора к реципиенту через конъюгативный мостик
84.Сущность процесса трансдукции заключается в: B). передача генов при помощи бактериофага
85.Сущность процесса трансформации: передача молекулы ДНК от донора к реципиенту
86.Температурный оптимум у большинства патогенных микроорганизмов: C). 36-37 оС87.Термин "виропексис" означает:A).проникновение вирусной частицы в клетку в результате инвагинации мембраны и образования вакуоли
88.Термостат используется для: D). выращивания бактерий
89.У больного с подозрением на туберкулез взята мокрота на исследование. Какой метод окраски мазка Вы используете: B). Циля-Нильсена90.Укажите питательную среду для выделения анаэробов: A). Китта-Тароцци91.Укажите тип фага, вызывающий абортивную инфекцию:лизогенный
92.Укажите точное определение фагов: D). вирусы, паразиты бактерий
93.Фаготипирование применяется для: E). установление источников инфицирования
94.Физиологический период развития микробиологии в первую очередь связан с именем: B). Л. Пастера
95.Фиксация мазков из культур микробов проводится: A). в пламени горелки
96.Цель применения окраски по Граму: отличие грамотрицательных бактерий от грамположительных
97.Чистая культура микробов, выделенная из определенного источника и отличающаяся от других представителей вида, называется: B). штаммом
98.Чистая культура микробов, выделенная из определенного источника и отличающаяся от других представителей вида, называется: B). штаммом
99.Элективные среды: Позволяют выделить определенные виды бактерий при подавлении роста других
Эукариоты имеют следующие признаки: C) характерно бинарное деление

Приложенные файлы

  • docx 17408995
    Размер файла: 52 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий