Крафт, Бутакова Метод. Указ

Государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Алтайский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения и социального развития РФ




Методические указания
по медицинской микробиологии
для самостоятельной подготовки
студентов лечебного, педиатрического, медико-профилактического
факультетов


Часть 1. Общая микробиология
Часть 2. Частная микробиология








Барнаул – 2009
УДК 616 – 093/ – 098 : 616 – 08 : 616 – 053.2 : 614.4 (075.8)
ББК 52.64 + 51.1 (2) + 57.3


Печатается по решению Центрального
координационно-методического совета Алтайского
государственного медицинского университета

Кафедра микробиологии c вирусологией

Рекомендовано Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для студентов, обучающихся по специальностям: 060101(040100) – Лечебное дело, 060103(040200) – Педиатрия, 050104(040300) – Медико-профилактическое дело УМО 733 от 02.12.05.

Методические указания составил авторский коллектив кафедры микробиологии АГМУ: доцент Л.А. Крафт, доцент Л.Ю. Бутакова, доцент В.А. Юрова, доцент Н.В. Куклина, доцент А.А. Сазанская, к.м.н. Б.В. Илинская, к.б.н. Е.Б. Карабасова, к.м.н. В.В. Прокопьев

Рецензент: заведующий кафедрой педиатрии № 1 с курсом инфекционных болезней д.м.н., профессор А.С. Оберт


Методические указания по медицинской микробиологии для самостоятельной подготовки студентов лечебного, педиатрического, медико-профилактического факультетов. Ч. 1, Ч. 2 / Л.А. Крафт, Л.Ю. Бутакова, В.А. Юрова и др. – Барнаул : Издательство Алтайский государственный медицинский университет, 2009. – 132 с.

Методические указания рекомендованы студентам 2 и 3 курсов лечебного, педиатрического, медико-профилактического факультетов.




© ГОУ ВПО «Алтайский государственный
медицинский университет», 2009
© Коллектив авторов, 2009

ЧАСТЬ I. ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

План практических занятий для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов

1. Устройство и оборудование микробиологической лаборатории. Классификация микробов. Морфология бактерий. Простые методы окраски. Строение клеточной стенки бактерий. Окраска по Грамму
2. Строение прокариотической бактериальной клетки: споры, жгутики, пили, включения, рибосомы, мезосомы, методы их выявления. Особенности строения микоплазм, спирохет, хламидий, риккетсий и актиномицетов. Морфология и структура грибов. Микроскопический метод диагностики.
3. Питание и дыхание, рост и размножение бактерий. Ферменты бактерий, их классификация. Питательные среды, их классификация. Культуральные и биохимические свойства. Методы выделения чистых культур бактерий. Методы культивирования анаэробов.
4. Бактериологический метод диагностики, его этапы. Принцип идентификации бактерий.
5. Итоговое занятие по разделу: «Морфология и физиология микроорганизмов».
6. Инфекция, инфекционный процесс, инфекционная болезнь. Патогенность и вирулентность микробов. Критерии патогенности: инфективность, инвазивность и токсигенность.
7. Неспецифические факторы защиты макроорганизма: клеточные (фагоцитоз, естественные киллеры) и гуморальные (комплемент, лизоцим, трансферин, лактоферин, бета-лизины, интерфероны, С-реактивный белок, противовирусные ингибиторы).
8. Виды и формы иммунитета. Центральные и периферические органы иммунитета, клетки иммунной системы. Антигены, их классификация. Антитела, классы иммуноглобулинов. Реакция агглютинация и ее разновидности.
9. Реакция преципитации, ее варианты. Реакция нейтрализации токсина антитоксином, реакция флокуляции, реакция иммунофлюоросценции (прямая и непрямая), область их использования, диагностическая значимость.
10. Реакции иммунного лизиса: гемолиза и бактериолиза. Реакция связывания комплемента, компоненты реакции, область применения.
11. Итоговое занятие по разделу: «Инфекция и иммунитет».
12. Асептика и антисептика. Методы стерилизации и дезинфекции, применение в медицине. Основные группы дезинфектантов и антисептиков, механизм действия.
13. Бактериофаги, их морфология и структура. Умеренные и вирулентные фаги, механизм их взаимодействия с бактериями. Методы культивирования и титрования бактериофагов. Применение в медицине и бактериологии.
14. Генетика микроорганизмов. Мутации, их разновидности. Генетические рекомбинации (трансформация, трансдукция, коньюгация). Плазмиды бактерий, их разновидности. Колициногенность и колициночувствительность, их использование в бактериологии.
15. Антагонизм микробов. Антибиотики, их классификация по источнику получения, механизму действия, химическому составу. Генетические и биохимические механизмы антибиотикорезистентности. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам. Рациональная антибиотикотерапия.
16. Итоговое занятие по темам:13-16.
17. Итоговое тестирование и сдача практических навыков.


Раздел I. МОРФОЛОГИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ
МИКРООРГАНИЗМОВ

ЗАНЯТИЕ № 1
Тема: Устройство и оборудование микробиологической лаборатории. Классификация микробов. Морфология бактерий. Простые методы окраски. Строение клеточной стенки. Окраска по Граму

Вопросы для подготовки
Устройство и режим работы бактериологической лаборатории.
Цели и задачи бактериологической лаборатории.
Правила работы студентов на кафедре микробиологии.
Устройство и работа иммерсионного микроскопа. Правила ухода за иммерсионным микроскопом. Виды микроскопии.
Принцип классификации микроорганизмов. Классификационные категории (отдел, класс, порядок, семейство, род, вид). Вид как основная таксономическая единица.
Принцип бинарной номенклатуры. Классификация бактерий Берджи.
Основные морфологические группы бактерий.
Техника приготовления и фиксации мазка из культур бактерий.
Простые методы окраски, их преимущества и недостатки. Механизм окраски бактерий простым методом.
Окраска по Граму, его механизм и техника окраски. Особенности строения клеточной стенки у грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Задания для самостоятельной работы студентов
Задание №1
Микроскопия демонстрационных препаратов для определения морфологии бактерий.
Микроскопии с иммерсией подвергают: а) готовые окрашенные препараты из различных морфологических форм бактерий: стафилококки, стрептококки, сарцины, палочки, стрептобациллы, дрожжи.
Техника микроскопирования: нанести на высушенный мазок каплю иммерсионного масла, под контролем зрения погрузить иммерсионный объектив (90Х) (фронтальная линза не должна касаться предметного стекла) в каплю масла, установить освещение, с помощью макровинта фокусируют объект, тонкую фокусировку осуществляют с помощью микровинта. В качестве иммерсии используют: кедровое масло, вазелиновое масло и др.
При микроскопии необходимо обратить внимание на форму, размеры бактерий, их взаимное расположение. Каждый студент должен промикроскопироватъ и зарисовать все препараты. Рисунки рекомендуется выполнять в стандартных кружках, имитирующих поле зрения микроскопа. Обязательно на рисунках подписать формы бактерий.
Задание №2
Микроскопия препаратов, приготовленных из смеси двух видов бактерий, окрашенных по Граму.
При микроскопии определить форму бактерий и отношение их к окраске по Граму (тинкториальные свойства).

ЗАНЯТИЕ № 2
Тема: Структура бактериальной клетки. Методы
исследования капсул, спор, жгутиков,
цитоплазматических включений, кислотоустойчивых бактерий. Строение спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм, актономицетов и грибов.
Методы их исследования

Вопросы для подготовки
Строение и особенности прокариотов и эукариотов, их отличия.
Какие классы микроорганизмов относятся к прокариотам.
Капсула бактерий, химический состав и функции капсулы. Методы выявления (окраска по Бурри-Гинсу).
Особенности строения и химического состава клеточной стенки бактерий (грамположителъных, грамотрицательных и кислотоустойчивых), ее функции.
Тинкториальные свойства бактерий.
Строение, химический состав и функции цитоплазматической мембраны.
Строение, химический состав и функции цитоплазмы и цитоплазматических структур (нуклеоид, рибосомы, мезосомы, эписомы), их физиологическая роль.
Морфология протопластов, сферопластов, Л-форм бактерий, условия их формирования.
Морфология и структура спирохет. Методы исследования спирохет (негативный метод окраски, окраска по Романовскому-Гимза, темнопольная микроскопия), их роль в патологии человека.
Строение и риккетсий, хламидий и микоплазм, их роль в патологии человека, методы выявления.
Химический состав и методы исследования кислотоустойчивых бактерий, окраска по Циль-Нильсену.
Строение и химический состав спор, их биологическое значение. Бациллы и клостридии. Методы исследования спор.
Цитоплазматические включения и их роль в жизнедеятельности бактерий, методы выявления волютина (окраска по Нейссеру, по Леффлеру).
Строение и функции жгутиков, пилей, методы выявления.
Морфологические особенности актиномицетов, грибов, их классификация, микроскопические методы выявления. Роль грибов в патологии человека. Использование грибов в пищевой и микробиологической промышленности.
Микроскопический метод диагностики, его цель, достоинства и недостатки.

Задания для самостоятельной работы студентов
Задание №1
Приготовление препарата-мазка из культуры капсульной палочки, окраска по Бурри-Гинсу. Для этого каплю взвеси бактерий смешивают с каплей туши на предметном стекле и при помощи стекла со шлифованным краем готовят мазок, высушивают и фиксируют в этиловом спирте. Затем окрашивают водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой, высушивают и приступают к микроскопии. При микроскопии обращают внимание на бесцветную капсулу вокруг двойных или одиночно расположенных палочек. Сами палочки окрашены в красный цвет, фон темно-коричневый или черный. Препарат зарисовать.
Задание №2
Исследование готовых окрашенных препаратов, приготовленных из мокроты больного туберкулезом (окраска по Циль-Нильсену). Демонстрационный препарат необходимо промикроскопировать и определить наличие кислотоустойчивых бактерий туберкулеза среди элементов мокроты (лейкоциты, слизь, некислотоустойчивые бактерии). При этом учитываются окраска, форма бактерий и их взаимное расположение. Препарат зарисовать.
Задание № 3
Изучить демонстрационные мазки, приготовленные из культуры спорообразующих бактерий, окрашенных по Граму и Шефферу-Фултону. При микроскопии препарата обратить внимание на расположение спор, характер их окраски, диаметр спор по отношению к диаметру тела бактерии. Определить форму и взаимное расположение спорообразующих бактерий, а также характер окраски вегетативных форм бактерий. Препарат зарисовать.
Задание № 4
Изучить зерна волютина в демонстрационных мазках из культуры дифтерийных бактерий, окрашенных по Леффлеру. В мазке при микроскопии определить форму бактерий, их взаимное расположение, наличие и количество зерен волютина. Препарат зарисовать.
Задание № 5
Изучить подвижность бактерий в препарате « раздавленная капля» из подвижных форм бактерий. Микроскопия проводится с объективами 8х и 40х, вогнутом зеркале, при опущенном конденсоре. При исследовании живых микробов следует отличать активную подвижность бактерий от пассивного броуновского движения.
Задание № 6
Изучить морфологию плесневых грибов рода Mucor, Aspergillus, Penicillium. Исследование проводят с помощью объектива 8х. Для этого чашки с посевами устанавливают на предметном столике так, чтобы часть плесени была видна в просвет. Затем фокусируют препарат.
Задание № 7
Промикроскопировать препарат «раздавленная капля» из культур плесневых грибов. Препарат зарисовать простым карандашом. При микроскопии обратить внимание на наличие септированного или несептированного мицелия, экзо или эндоспор, спорангиеносца или конидиеносца.
Задание № 8
Изучить морфологию дрожжевых грибов в препаратах, окрашенных фуксином и по Нейссеру. При просмотре препаратов обратить внимание на крупные размеры клеток, их форму и наличие включений в цитоплазме. Препараты зарисовать.


ЗАНЯТИЕ № 3
Тема: Питание, рост и размножение бактерий. Питательные среды. Методы выделения чистых культур аэробных
и анаэробных бактерий. Ферменты бактерий.
Пигменты бактерий

Вопросы для подготовки
Химический состав микробной клетки.
Классификация микробов по типам питания. Прототрофы и ауксотрофы.
Основные механизмы питания бактерий (пассивное проникновение и активный транспорт).
Рост и размножение бактерий.
Кривая роста бактерий в жидких питательных средах. Система проточного культивирования бактерий, ее использование в промышленной микробиологии.
Общие требования, предъявляемые к питательным средам. Факторы роста бактерий. Классификация питательных сред по составу, назначению, физическому состоянию.
Методы выделения чистых культур аэробных бактерий. Определение колония, чистая культура, штамм, клон бактерий. Культуральные свойства бактерий.
Ферменты бактерий, их классификация. Среды для изучения биохимической активности бактерий, механизм их действия, цель изучения.
Классификация пигментов по химическому составу и растворимости в различных растворителях. Биологический смысл пигментообразования у бактерий.

Задания для самостоятельной работы студентов
Задание №1
Составить схему-классификацию предложенных питательных сред по их составу и цели использования.
Задание №2
Изучить физический метод выделения чистой культуры: на чашке Петри сделан посев смеси споровых и неспоровых бактерий до и после нагревания смеси при 100 град. Описать результат посева и дальнейший ход исследования.
Задание № 3
Изучить культуральный метод выделения чистой культуры: в пробирке с МПА сделан посев по Шукевичу. Описать результат и дальнейший ход исследования.
Задание № 4
Изучить культуральные свойства разных видов бактерий на твердых и жидких питательных средах.: на чашках Петри с кровяным , желточно-солевым, простым агаром и в пробирках с сахарным бульоном сделаны посевы разных видов бактерий . Описать характер их роста. С какой целью изучаются культуральные свойства у бактерий.
Задание № 5
Изучить биохимические свойства у 4-х разных видов бактерий.
Для этого даны посевы этих бактерий на дифференциально- диагностических средах и в МПБ.
Какие среды используют для изучения биохимической активности, механизм их действия?
Занести полученные сведения в таблицу и идентифицировать бактерии по ним.
Задание № 6
Изучить характер пигмента у бактерий разных видов по цвету, их растворимости в воде и других растворителях. Полученные данные занести в таблицу.

Справочный материал

Другие методы выделения чистых культур бактерий.
А) Культуральный способ
Этот способ используется для выделения бактерий рода Протеус, которые растут как правило, на обычных питательных средах сплошной пленкой (ползучий рост). Для выделения чистой культуры протея исследуемый материал засевают по методу Шукевича у основания скошенной части агара в конденсационную воду. Через сутки на всей поверхности скошенной части агара отмечается рост протея, в то время как другие ассоцианты остаются на месте нанесения материала.
Б) Физический способ выделения чистой культуры бактерий
Он используется для выделения споровых бактерий. Для этого смесь бактерий, содержащих споровые микроорганизмы, подвергают кипячению в течение 5 минут для уничтожения неспоровых бактерий. После этого кипяченый материал засевается штрихом в чашки Петри на одну ее половину, а на другую засевается смесью до кипячения.
В) Химический способ выделения бактерий
Этот метод используется для выделения кислотоустойчивых бактерий. Исследуемый материал обрабатывается 5% серной кислотой, все некислотоустойчивые микробы погибают. После этого материал засевают на питательную среду.
С) Биологический способ выделения чистой культуры
Этот способ заключается в том, что исследуемым материалом заражают лабораторное животное, чувствительное к какому-то микробу, содержащемуся в этом материале. У животных возникает типичный инфекционный процесс с накоплением соответствующего возбудителя во внутренних органах, из которых легко выделяется чистая культура.


ЗАНЯТИЕ № 4
Тема: Бактериологический метод диагностики. Дыхание бактерий. Культивирование анаэробных бактерий

Вопросы для подготовки
Бактериологический метод диагностики, его этапы, цель.
Дыхание бактерий. Аэробный и анаэробный типы дыхания. Классификация микроорганизмов по типам дыхания (строгие аэробы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы, микроаэрофилы).
Методы выделения анаэробов. Питательные среды.

Задания для самостоятельной работы студентов
Задание №1
Бактериологический метод исследования.
Выделить из смеси бактерий чистые культуры бактерий и провести их идентификацию.
Изучаемый объект – смесь бактерий. По готовым демонстрациям провести бактериологическое исследование по дням. Полученные данные занести в таблицу:

День
исследования
Исследуемый
материал
Ход
исследования
Результат







1 день исследования – изучить мазок, приготовленный из смеси и окрашенный по Граму. При микроскопии мазка установить, какие морфологические виды микробов присутствуют в мазке, определить их тинкториальные свойства. Произвести условный посев смеси штрихом на МПА для получения изолированных колоний.
2 день исследования – в посевах на чашках Петри изучить макроскопические и микроскопические особенности каждой колонии (см. справочные материалы).
Изучить мазок, приготовленный из части изучаемых колоний. Убедиться, что в колонии содержатся одинаковые по морфологии бактерии. Мазки окрашены по Граму.
Из оставшейся части колоний делают посев на скошенный агар для накопления чистой культуры.
3 день исследования – изучить характер роста бактерий на скошенном агаре. Проверить чистоту культур. Сделать высев с агара на пестрый ряд и в МПБ с целью изучения биохимических свойств бактерий.
4 день исследования – провести идентификацию чистых культур бактерий.
Учесть результаты посевов на средах Гиса и на МПБ:
а) На средах с углеводами отметить наличие кислых продуктов расщепления углеводов и газообразование.
б) На МПБ обратить внимание на характер роста, отметить наличие продуктов гидролиза белка (сероводорода и индола).
Проанализировать все полученные свойства микробов (морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические) и установить видовую принадлежность выделенных бактерий, пользуясь справочными таблицами
Задание №2
Изучить приборы и способы культивирования анаэробов.
Приборы: Анаэростат, эксикатор
Способы: Виньяль-Вейона, Аристовского, Фортнера, Перетца
Питательные среды: высокий столбик сахарного агара, молоко, среда Китта-Тароцци, среда Вильсон-Блера, среда Цейслера.
Составить таблицу, классифицирующую способы культивирования анаэробов.

Справочный материал
Макроскопические признаки колоний
В проходящем свете:
1. величина колоний (мелкие, средние, крупные)
2. форма колоний (круглая, неправильная)
3. прозрачность (прозрачная, непрозрачная)
В отраженном свете:
1. высота колонии (плоская, плосковыпуклая, куполообразная)
2. поверхность колоний (гладкая, блестящая, шероховатая, матовая)
3. цвет колоний (бесцветная, пигментная, цвет пигмента)

Микроскопические признаки колоний
Изучаются под микроскопом с увеличением объектива 8х, со слегка опущенным конденсором. Эмульгируемость колоний в физиологическом растворе (хорошо или плохо эмульгируется) проверяется при приготовлении из колоний мазков с целью микроскопии их.

1. край колонии (правильно закругленный, волнистый, фестончатый, зубчатый, бахромчатый, петлеобразный)
2. структура колоний (гомогенная, негомогенная, аморфная, зернистая)
3. консистенция колоний (мягкая, слизистая, хрупкая).
ЗАНЯТИЕ №5
Контрольное занятие по разделу:
«Морфология и физиология микроорганизмов»

Вопросы для подготовки
Бактерии – общая характеристика, положение в системе микроорганизмов. Основные принципы классификации микроорганизмов.
Иммерсионный микроскоп, разрешающая способность, техника микроскопии. Иммерсионное масло, значение для микроскопии.
Техника приготовления мазка из культур бактерий.
Простые и сложные методы окраски бактерий, их информативность, область применения.
Негативные способы окраски мазков, область применения.
Окраска бактерий по Граму, химизм окраски.
Микроскопический метод диагностики инфекций, его достоинства и недостатки.
Характеристика прокариотной и эукариотной клетки.
Клеточная стенка грамотрицательных и грамположительных бактерий, особенности строения, функции. Медицинские препараты, изготавливаемые из клеточных стенок микроорганизмов, их свойства, применение.
Основные формы бактерий- кокки, палочковидные и извитые, их морфологические и тинкториальные свойства.
Кислотоустойчивые бактерии, особенности химического состава, методы окраски.
Ядро бактерий, строение, функции, способы выявления.
Цитоплазматическая мембрана, строение и функции.
Цитоплазма бактерий, цитоплазматические включения, их роль в жизнедеятельности бактерий, методы выявления зерен волютина.
Капсула бактерий, строение, функции, методы выявления.
Прото-, сферопласты и L-формы бактерий, их биологические особенности.
Бактериальные мезосомы, рибосомы, их строение и функции. Значимость сравнительного изучения рибосом бактерий и клеток человека.
Жгутики, строение, значение, методы выявления у бактерий.
Ворсинки бактерий, их виды, роль в жизнедеятельности, факторы адгезии.
Споры бактерий, строение, химический состав. Бациллы и клостридии, методы выявления.
Принцип люминисцентной, фазово-контрастной, темнопольной и электронной микроскопии, область применения. Достоинства и недостатки разных видов микроскопий.
Морфология хламидий, особенности их культивирования.
Особенности биологии риккетсий, методы культивирования.
Строение спирохет, методы выявления.
Классификация микроорганизмов по типам питания (гетеротрофы, фототрофы, хемотрофы). Прототрофность и ауксотрофность у бактерий.
Основные механизмы питания бактерий (пассивное и активное проникновение питательных веществ).
Основные питательные среды для выращивания бактерий, этапы приготовления МПА и МПБ, требования, предъявляемые к питательным средам.
Классификация питательных сред по составу, консистенции, назначению и источнику получения.
Фазы размножения бактериальной популяции в жидкой питательной среде. Влияние проточного культивирования и аэрации на фазы размножения, область применения.
Методы выделения чистых культур аэробных бактерий (методы механического разобщения бактерий, химический, физический, биологический, культуральный).
Способы культивирования анаэробов, питательные среды.
Бактериологический метод диагностики инфекций, его цель, этапы. Принципы идентификации бактерий.
Культуральные свойства бактерий, их изучение, значение.
Пигменты бактерий, их виды, классификация по химическому составу, роль в жизнедеятельности бактерий.
Классификация бактерий по типам дыхания (аэробы, анаэробы,
факультативные анаэробы, микроаэрофилы). Сущность аэроб ного и анаэробного дыхания.
Ферменты бактерий, их классификация по механизму действия, химическому составу. Конститутивные и адаптивные ферменты.
Сахаролитические и протеолитические свойства бактерий, методы и цель их изучения.
Понятия чистая культура, колония, клон, штамм бактерий.
Общая характеристика грибов, классификация их, методы выявления. Морфология плесневых грибов рода Mucor, Aspergillus, Penicillium.
Особенности строения микоплазм, метод культивирования, роль в патологии человека.

ЗАНЯТИЕ № 6
Тема: Инфекция, инфекционный процесс, инфекционная болезнь. Патогенность и вирулентность микроорганизмов

Вопросы для подготовки
Инфекция, инфекционный процесс, инфекционная болезнь, определение понятий
Виды симбиоза между микробами и макроорганизмом (мутуализм, комменсализм, паразитизм). Паразиты факультативные и облигатные. Условно-патогенные микроорганизмы, их роль в патологии человека.
Факторы, определяющие течение инфекционного процесса (свойства микроба, состояние макроорганизма, условия внешней среды, социальные факторы).
Патогенность и вирулентность микроорганизмов – определение понятия, критерии патогенности (инфективность, инвазивность и токсигенность). Методы измерения вирулентности.
Факторы патогенности бактерий (капсула, адгезины, агрессины, полисахариды, ферменты, токсины), их характеристика и значение в инфекционном процессе.
Этапы инфекционного процесса (адгезия, колонизация, инвазия, пенетрация, генерализация процесса), характеристика этих стадий.
Тропизм микробов к определенным клеткам и тканям. Виды адгезинов у грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Стадии инфекционной болезни (инкубация, продрома, стадия выраженных клинических проявлений, исход болезни).
Пути передачи возбудителей и распространения их по организму.
Формы инфекционных болезней по их распространению в человеческой популяции (спорадические заболевания, эпидемии, пандемии), по остроте процесса (острая, подострая, хроническая), по распространению в организме (локальная и генерализованная).
Формы инфекционного процесса по происхождению (экзогенная, эндогенная), по числу инфекционных агентов (моно- и микст-инфекция), по характеру встреч с возбудителем (первичная, вторичная, рецидив, реинфекция, суперинфекция).
Бактерионосительство, его характеристика (транзиторное, постоянное, «злостное») Причины микробного носительства.

Задания для самостоятельной работы студентов
Задание №1
Действие бактериальных токсинов на макроорганизм
На белых мышах воспроизводят эндотоксиновый шок. Для этого взвесь в физиологическом растворе суточной культуры протея вводят внутрибрюшинно белой мыши. Вторую мышь оставляют незараженной для контроля. В течение всего занятия ведут наблюдение за развитием симптомов эндотоксиновой интоксикации. Объяснить механизм освобождения токсина, его действие на организм. Можно ли назвать данный инфекционный процесс инфекционной болезнью?
Задание №2
Промикроскопировать мазки-отпечатки, приготовленные из внутренних органов мыши, погибшей спустя 24 часа после заражения внутрибрюшинно взвесью капсульной палочки (грамотрицательные бактерии). При микроскопии отметить наличие микробов, их морфологию, количество, наличие у него капсулы. Сделать вывод о форме инфекционного процесса (токсинемия или сепсис)?
Задание №3
Определить факторы патогенности 3-х видов стафилококков:
а) на цитратной плазме изучить характер роста стафилококков – отсутствие или наличие свертывания плазмы (плазмокоагулазную активность)
б) определить гиалуронидазную активность стафилококков (учесть готовую реакцию).
Схема постановки опыта
Готовую взвесь исследуемой культуры бактерий на дистиллированной воде разливают в ряд пробирок с 0,5 до 0,1. В каждую пробирку с разведенной культурой добавляют одинаковое количество гиалуроновой кислоты. После инкубации в термостате – 15 минут и 5 минут на холоде добавляют уксусной кислоты.
Если исследуемая культура не обладает гиалуронидазной активностью, то при добавлении уксусной кислоты наблюдается коагуляция гиалуроновой кислоты и выпадение ее в осадок в виде сгустка муцина.
При наличии гиалуронидазной активности и достаточной концентрации фермента происходит расщепление гиалуроновой кислоты, что не ведет к образованию сгустка. Титром гиалуронидазы считается то наименьшее количество взвеси бактерий, которое еще препятствует появлению сгустка муцина под действием уксусной кислоты.
в) на кровяном агаре отметить наличие или отсутствие зон гемолиза вокруг колоний стафилококков (зона просветления агара вокруг колоний).
г) на желточно-солевом агаре отметить наличие или отсутствие вокруг посева культур зоны просветления или помутнения среды (расщепление или преципитация лецитина), по наличию которых делается вывод о лецитиназной активности микробов. Полученные данные по изучению факторов патогенности 3-х видов стафилококков внести в таблицу:

N
культуры
Гемолиз
Плазмокоагулаза
Лецитиназа
Гиалуронидаза

1






2






3







Сделать вывод о выраженности патогенных свойств у исследуемых культур.

ЗАНЯТИЕ № 7
Тема: Виды и формы иммунитета. Врожденный
иммунитет. Факторы неспецифической
защиты организма

Вопросы для подготовки
Понятие «иммунитета».
Классификация видов и форм иммунитета, их характеристика.
Врожденный видовой и индивидуальный иммунитет, механизмы
Неспецифические факторы защиты: лихорадочная реакция, арреактивность клеток и тканей, барьерная функция кожных покровов и слизистых, воспаление, выделительная функция органов, нормальная микрофлора кожи и слизистых.
Клеточные факторы неспецифической резистенции (фагоцитоз, виды фагоцитирующих клеток, стадии фагоцитоза, функции фагоцитов, естественные киллеры).
Гуморальные факторы неспецифической защиты (система комплемента, его строение, функции, пути активации, лизоцим, бета-лизины, трансферрин, лактоферрин, С-реактивный белок, противовирусные ингибиторы, интерфероны, нормальные антитела, механизмы и спектр их действия).

Задания к практической работе студентов
Задание №1
Определить лизоцим в слюне качественным методом.
Для обнаружения лизоцима к расплавленному и остуженному агару добавляют густую взвесь суточной культуры Micrococcus lyzodeikticus в физиологическом растворе, перемешивают и пастеровской пипеткой готовят агаровые пластины на предметных стеклах. На застывшие пластины наносят каплю слюны и оставляют на 10-20 минут. Затем промывают пластины водой и рассматривают в проходящем свете. При наличии лизоцима в слюне на месте ее нанесения наблюдается просветление агара, вследствие растворения микрококка.
Задание №2
Определить лизоцимную активность куриного белка.
Для этого готовят десятикратные разведения белка физиологическим
раствором и к каждому разведению добавляют 2-млрд. взвесь микрококка по 2 капли. Ставят в термостат на 20 минут. Результат учитывают по наличию просветления в среде (полный лизис микрококка). Учесть полученные результаты и данные занести в таблицу. Определить титр лизоцима.
Титр лизоцима – то наибольшее разведения белка, при котором еще происходит полный лизис микрококка.
Задание №3
Определить титр комплемента в сыворотках морской свинки и человека по реакции иммунного гемолиза.
Для этого сыворотки разводят с 0,5 до 0,1 мл в физиологическом растворе. К каждому разведению сыворотки добавляют 3% взвесь эритроцитов барана и инактивированную гемолитическую сыворотку. Пробирки ставят в термостат на инкубацию. Учет производят по наличию полного гемолиза. Сыворотка человека используется неразведенная, а сыворотка морской свинки предварительно разводится в 10 раз.
Титром комплемента называется его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз.
Учесть результаты реакций, определить титры комплемента в сыворотке человека и морской свинки, сделать заключение. Полученные данные занести в таблицу.
Задание №4
Определить фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови.
Готовые окрашенные мазки микроскопируют с иммерсией. В разных полях зрения находят не менее 25 лейкоцитов и считают количество микробов, поглощенное каждым лейкоцитом. Для характеристики фагоцитарной активности крови подсчитывают фагоцитарное число и фагоцитарный показатель.
Фагоцитарный показатель – это процент активно фагоцитирующих лейкоцитов в расчете на 100 лейкоцитов.
Фагоцитарное число – среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (для этого общее число поглощенных микробов делят на количество подсчитанных клеток-25).
Сделать заключение о проделанной работе.

ЗАНЯТИЕ № 8
Тема: Приобретенный иммунитет. Антигена, антитела. Гуморальный иммунный ответ. Реакция агглютинации
и ее варианты

Вопросы для подготовки
Приобретенный иммунитет, его разновидности.
Лимфоидная ткань, центральные и периферические органы иммунитета, их строение и функции.
Клетки иммунной системы: Т- и В-лимфоциты, субпопуляции этих клеток, их функции.
Понятие об антигене, свойства антигенов, классификация антигенов. Гаптены, полугаптены.
Микробная клетка как комплекс антигенов, их свойства. Антигенная мимикрия.
Антитела, классы иммуноглобулинов, их характеристика.
Типы иммунного ответа: гуморальный, клеточный, иммунологическая толерантность, иммунологическая память.
Гуморальный иммунный ответ, клеточная кооперация в гуморальном иммунном ответе.
Динамика образования антител. Первичный и вторичный иммунный ответ.
Иммунологические методы диагностики: собственно иммунный, серологический, аллергический.
Реакция агглютинации, ее особенности, варианты постановки, механизм, практическое применение.
Нагрузочная реакция иммунитета (реакция непрямой гемагглютинации – РНГА).
Реакция Кумбса для определения неполных антител.
Агглютинирующие иммунные сыворотки (комплексные и монорецепторные), способы получения, практическое применение.
Микробные диагностикумы.

Задания к практической работе студентов
Задание №1
Поставить ориентировочную реакцию агглютинации с целью определения видовой принадлежности выделенного микроорганизма по схеме:

Ингредиенты




Капля
1
2
3

0,85% р-р NaCl
+
+
+

агглют. Сыв-ка А
-
+
-

агглют. Сыв-ка Б
-
-
+

исследуемая культура бактерий
+
+
+


Наличие агглютинации оценить знаком (+), а ее отсутствие – ( _ ). Сделать заключение. В каком методе диагностики ставят данную реакцию агглютинации и с какой целью?
Задание №2
Учесть развернутую реакцию агглютинации, поставленную с целью определения титра антител в сыворотке больного с клиническим диагнозом «Бруцеллез?». Для этого готовят ряд последовательных разведений сыворотки физиологическим раствором, к которым добавляют бруцеллезный диагностикум. Результат занести в таблицу:

Разведения сыв-ки больного
1:10
1, 0
1:20
1, 0
1:40
1, 0
1:80
1, 0
1:160
1, 0
К.сыв-ки 1,0
К.антигена –

Бруцеллезный диагностикум
2 к
2 к
2 к
2 к
2 к

2 к

Результат










Сделать заключение, ответив на поставленные вопросы.
Какой это метод диагностики?
Что такое титр антител? Какой он в данном случае?
Зачем ставят контроли сыворотки и антигена?
Как интерпретировать полученные результаты?
Задание №3
Учесть реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации, поставленную с целью определения титра антител в парных сыворотках больного с клиническим диагнозом « дизентерия?». Сыворотки больного разводят физиологическим раствором с 1:10 до 1:320. К каждому разведению сыворотки добавляют эритроцитарный дизентерийный диагностикум. Результат занести в таблицу и сделать заключение.


Разведения сыв-ок
больного
1:10
1,0
1:20
1,0
1:40
1,0
1:80
1,0
1:160
1,0
1:320
1,0
К. сыв-ки 1,0
К. антигена

Дизентерийный
диагностикум
2 к
2 к
2 к
2 к
2 к
2 к
__
2 к

Результат на
3 день болезни









Результат на
10 день болезни











Какой метод диагностики?
Что такое титр антител? Каковы титры антител на 5 и 10 день болезни?
Зачем исследуют парные сыворотки больного?
Как интерпретировать полученные результаты?

ЗАНЯТИЕ № 9
Тема: Реакция преципитации, ее варианты. Реакция
флокуляции, нейтрализации токсина антитоксином,
иммунофлюоресценции

Вопросы для подготовки
Реакция преципитации. Характеристика антигенов, вступающих в реакцию, механизм реакции, варианты постановки, практическое применение.
Характеристика токсинов, анатоксинов, антитоксической сыворотки. Их получение, единицы измерения активности, титрование, практическое применение.
Реакция флокуляции, ее особенности, практическое применение.
Реакция нейтрализации токсина антитоксином, практическое применение.
Реакция иммунофлюоресценции – прямая и непрямая, механизмы, практическое применение.
Преципитирующие, флюоресцирующие иммунные сыворотки, их получение, практическое применение.
Иммунные лечебно-профилактические сыворотки (антимикробные, антивирусные, антитоксические), их получение, практическое применение.

Задания к практической работе студентов
Задание №1
Учесть реакцию флокуляции, поставленную с целью определения титра антитоксина по схеме:


1
2
3
4
5

Антитоксическая сыворотка
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1

Анатоксин ( 280 И Е/мл)
2 мл
2 мл
2 мл
2 мл
2 мл

Результат







Отметить наличие инициальной флокуляции и рассчитать титр антитоксина.
Задание №2
Поставить реакцию кольцепреципитации с целью определения видовой принадлежности белка по схеме:

Объем ингредиентов/мл
1
2
3

0,2
Преципитирующая сыворотка против белка
человека
Нормальная сыворотка
Физиологический раствор


0,2
Экстракт кровяного пятна
Экстракт кровяного пятна
Экстракт кровяного пятна


Учесть результаты, сделать заключение.
Задание №3
Учесть реакцию преципитации в агаре с целью определения токсигенности дифтерийных палочек.
Какой применен метод диагностики?
Какой используется диагностический препарат?
Определите токсигенные и нетоксигенные штаммы?
Задание №4
Индикация и идентификация ботулинического токсина в пищевом продукте в реакции нейтрализации токсина антитоксином на мышах. Результаты этого эксперимента представлены в таблице:

Ингредиенты/ мыши
1
2
3
4
5
6
7

1. Экстракт пищевого продукта
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5

2. Смесь антитоксических противоботулинических сывороток
__
0,5
__
__
__
__
__

3. Сыворотка типа А

__
__
0,5
__
__
__
__

4. Сыворотка типа В

__
__
__
0,5
__
__
__

5. Сыворотка типа С

__
__
__
__
0,5
__
__

6. Сыворотка типа Е

__
__
__
__
__
0,5
__

7. Сыворотка типа Д

__
__
__
__
__
__
0,5

Результаты эксперимента на мышах
Погиб
жива
Погиб
жива
Погиб
Погиб
Погиб


Какой метод диагностики?
Какая поставлена реакция?
3. Определить наличие и тип ботулинического токсина.

ЗАНЯТИЕ № 10
Тема: Клеточный иммунный ответ. Реакции иммунного
лизиса. Реакция связывания комплемента (РСК).
Иммуноферментный анализ

Вопросы для подготовки
Клеточный иммунный ответ, клетки, механизм.
Клеточные медиаторы (лимфокины и монокины), их роль в иммунном ответе.
Аллергический метод диагностики инфекционных болезней. Аллергены, их действующее начало, механизм действия.
Реакции иммунного лизиса: бактериолиза и гемолиза. Компоненты реакций, практическое использование.
Комплемент, его строение, функции, пути активации, механизм присоединения комплемента к комплексу Аг-Ат.
Реакция связывания комплемента, механизм реакции, варианты использования при диагностике инфекционных заболеваний.
Подготовка к постановке основного опыта РСК: определение титра и рабочей дозы антигена, комплемента, гемолитической сыворотки.
Иммуноферментный анализ, механизм реакции, ее особенности, варианты использования для диагностики инфекционных заболеваний.


Задания к практической работе студентов
Задание №1
Подготовка к постановке основного опыта РСК: учесть реакции гемолиза для определения титра и рабочей дозы гемолитической сыворотки, комплемента и антигена.
Что такое титр и рабочая доза гемолитической сыворотки, комплемента, антигена? Полученные сведения занести в тетрадь.
Задание №2
Учесть РСК, поставленную с целью идентификации возбудителя по следующей схеме:

Компоненты
опыт
К сыворотки
К антигена

1. Исследуемый возбудитель

0,5
_
0,5

2. Противоэнцефалитная сыворотка
0,5
0,5


3. Комплемент в рабочей дозе

0,25
0,25
0,25

4. Гемолитическая система
1,0
1,0
1,0

Результат




Какой метод диагностики?
Зачем ставятся контроли антигена и сыворотки?
Что установили в результате этой реакции?
Сделать заключение по результатам этой работы.
Задание №3
Учесть РСК, поставленную с парными сыворотками больного с клиническим диагнозом «клещевой энцефалит?». Полученные сведения занести в таблицу:

Компоненты/ развед. сыворотки б-го
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
К. сыв.
К. антигена

Диагностикум клещевого энцефалита








Результат на 5 день








Результат на 15 день









Какой метод диагностики использован?
Перечислить компоненты реакции.
Что такое титр антител в РСК?
Какой титр антител определили на 5 и на 15 день болезни?
Зачем исследуют парные сыворотки больного?
Сделать заключение по проделанной работе.
ЗАНЯТИЕ № 11
Контрольное занятие по разделу «Инфекция и иммунитет»

Вопросы для подготовки
Понятие «инфекция», «инфекционный процесс», «инфекционная болезнь». Условия, необходимые для возникновения инфекционных болезней.
Роль микроба-возбудителя в возникновении инфекции. Критерии патогенности. Вирулентность, методы ее определения.
Факторы адгезии, ее механизмы.
Факторы инвазии микроорганизмов. Ферменты бактерий как факторы инвазии и агрессии.
Антропонозы, зоонозы, сапронозы. Пути проникновения микробов в организм больного, тропизм микробов.
Формы инфекции: экзогенная, эндогенная, очаговая, генерализованная, моно- и смешанная, вторичная инфекция. Реинфекция, суперинфекция.
Динамика развития инфекционного процесса. Периоды: инкубационный, продромальный, разгар инфекции и исход. Этапы инфекционного процесса (адгезия, колонизация, инвазия, пенетрация, генерализация).
Понятие об иммунитете. Классификация различных видов и форм иммунитета. Характеристика врожденного и приобретенного иммунитета.
Неспецифические факторы защиты организма: гуморальные и клеточные
Центральные и периферические органы иммунитета. В- и Т- лимфоциты, их субпопуляции, функции.
Фагоцитоз, фагоцитирующие клетки, их характеристика. Функции фагоцитов. Основные стадии фагоцитоза, завершенный и незавершенный фагоцитоз. Методы определения фагоцитарной активности фагоцитов. Значение антител в фагоцитозе.
Гуморальные факторы неспецифической защиты: пропердин, комплемент, лизоцим, бета-лизины, трансферин, лактоферин, С-реактивный белок. Их краткая характеристика, механизм действия. Значение оценки этих показателей в клинической практике.
Комплемент, его характеристика и функции. Классический и альтернативный пути активации комплемента, его значение в иммунологических реакциях. Определение титра комплемента.
Антигены, их свойства. Классификация антигенов. Полноценные антигены, гаптены и полугаптены.
Антигенная структура бактериальной клетки. Основные свойства бактериальных антигенов. Микробная мимикрия.
Антитела, основные классы иммуноглобулинов, их строение и функции. Защитная роль антител в приобретенном антиинфекционном иммунитете.
Местный антиинфекционный иммунитет. Роль секреторных антител в местном иммунитете.
Гуморальный иммунный ответ, характеристика клеток, участвующих в этом процессе. Клеточная кооперация в гуморальном иммунном ответе.
Динамика антител при инфекционных заболеваниях. Первичный и вторичный иммунный ответ.
Клеточный иммунный ответ, клетки и механизмы. Способы его выявления. Аллергический метод диагностики.
Цитокины, их роль в иммунном ответе.
Методы иммунологической диагностики инфекционных болезней (собственно иммунный, серологический, аллергический), их цель, интерпретация полученных результатов.
Иммунологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний. Реакция агглютинации, ее варианты, механизм. Нагрузочные реакции иммунитета (РНГА). Агглютинирующие сыворотки, диагностикумы, их действующее начало, механизм действия, область применения.
Реакция преципитации, ее варианты, механизм, область применения. Преципитирующие сыворотки, их получение и титрование.
Реакции иммунного лизиса (бактериолиза, гемолиза). Компоненты реакций, практическое применение.
Реакция связывания комплемента, компоненты реакции. Определение титра и рабочей дозы комплемента, гемолитической сыворотки и антигена. Практическое применение РСК.
Неполные антитела, их характеристика. Обнаружение неполных антител к резус-фактору у беременных женщин (реакция Кумбса прямая и непрямая).
Иммунофлюоресценция (прямая и непрямая) в диагностике инфекционных болезней. Компоненты реакции и необходимое оборудование.
Реакция нейтрализации токсина антитоксином, практическое применение. Анатоксины, антитоксические сыворотки, их получение, титрование, применение.
Реакция флокуляции, компоненты реакции, практическое применение.
Иммуноферментный анализ в диагностике инфекций (выявление микробных антигенов или антител), компоненты реакций.
Индикация микробных антигенов в патологическом материале с помощью иммунологических реакций.
Теории иммунитета: Эрлиха, Ерне, Бернета.
Иммунологическая толерантность, ее виды, механизмы. Иммунологический паралич Фелтона.
Иммунологическая память, клетки, механизм.
Вакцины живые, убитые, химические, анатоксины, синтетические вакцины. Современные рекомбинантные вакцины. Принципы получения каждого вида вакцин, механизмы создаваемого иммунитета. Адъюванты в вакцинах.
Препараты, содержащие антитела (гипериммунная плазма, антитоксические, антимикробные сыворотки, гамма-глобулины и иммуноглобулины), их характеристика, получение, титрование. Серотерапия и серопрофилактика.

ЗАНЯТИЕ № 12
Тема: Асептика и антисептика. Методы стерилизации
и дезинфекции

Вопросы для подготовки
Определение асептики и антисептики.
Стерилизация и дезинфекция, их отличия. Методы стерилизации и дезинфекции (физические, химические, механические, биологические).
Устройство и принцип работы парового стерилизатора и воздушного стерилизатора.
Стерилизация шприцев, металлических инструментов, бактериальных петель, бумаги, марли, ваты, резиновых изделий, патогенных культур, питательных сред с углеводами и без них, сывороток, витаминов, антибиотиков, оптических приборов, применяемых для эндоскопических методов исследования.
Термическая стерилизация (сухим жаром, паром под давлением, текучим паром, дробная стерилизация, пастеризация, тиндализация), механизм действия, режим стерилизации при каждом из этих методов, область применения.
Подготовка к стерилизации лабораторной посуды.
Методы контроля стерилизации в паровых и воздушных стерилизаторах (физический, химический, биологический).
Механическая стерилизация (фильтры Зейтца, фарфоровые свечи Шамберлена и мембранные фильтры), объекты стерилизации.
Физическая стерилизация (УФЛ, ультразвук, гамма- и рентгеновские лучи), механизм действия, область применения.
Химическая стерилизация (газовая и погружной метод), механизм действия, область применения. Недостатки этого метода.
Основные группы дезинфектантов и антисептиков, механизм действия, способы и цель использования.

Задания к практической работе студентов
Задание №1
Изучить действие УФЛ на жизнедеятельность бактерий. Разные виды бактерий (кишечная палочка, золотистый стафилококк, бациллы) засеваются газоном в чашки Петри с МПА. Затем чашка наполовину открывается и ставится под кварцевую лампу на 5 и 15 минут.
Учесть результаты опыта и проанализировать их (для этого подсчитывается число колоний, выросших на разных половинках чашек). Все полученные данные оформить в виде таблицы.
Как действуют УФЛ на бациллы и бактерии, на пигментные и непигментные бактерии, при прямом действии на микробы и через стекло?
Механизм действия УФЛ?
Задание №2
Учесть результаты посевов на стерильность резиновых пробок и тампонов, проведенные в аэробных и анаэробных условиях.
Необходимо проанализировать полученные результаты и сделать заключение об эффективности проведенной стерилизации.
При наличии роста в посевах проанализировать возможные варианты нарушения режима стерилизации, а также сделать рекомендации для предотвращения этих нарушений.
Задание №3
Определить клиническую устойчивость штаммов-возбудителей гнойно-септических заболеваний, выделенных от больных в стационаре к дезинфектантам и антисептикам.
Для этого микробы, выделенные из больничной среды и от больных данного отделения, помещают на 10 минут в растворы дезинфектантов и антисептиков. Затем отмывают и помещают в МПБ. Если отмечается рост микроба – это клинически устойчивый штамм и применять данные препараты в отделении нецелесообразно.
Даны для исследования 5 клинических штаммов – возбудителей гнойно-септических заболеваний и 5 антисептиков и дезинфектантов. Определить к каким препаратам наиболее часто определяется устойчивость. Все сведения по данной работе внести в общую таблицу и проанализировать.
Задание №4
Определить чувствительность различных видов бактерий к нескольким антисептикам. Для этого микроб-возбудитель засевается на чашку Петри с МПА газоном. На посев наносят по капле исследуемые антисептики. Если микроб чувствителен к данному антисептику, то в месте его нанесения образуется стерильная зона – отсутствие роста бактерий.
Даны культуры кишечной, синегнойной палочки, капсульной палочки и золотистого стафилококка и 5 антисептиков. Учесть результаты чувствительности и занести их в таблицу. Полученные данные проанализировать.
Задание №5
Проведение бензидиновой пробы. Она ставится для выявления следов белка в иньекционных аппаратах после проведения предстерилизационной подготовки и стерилизации. Для этого игла промывается дистиллированной водой (1мл) и капля воды наносится на фильтровальную бумагу. Сюда же наносят 3 капли бензидина 0,3% и 3 капли 3% перекиси водорода. При наличии белка на месте нанесения капель появляется пятна синего или зеленого цвета.

ЗАНЯТИЕ № 13
Тема: Бактериофаги, их природа, строение, формы
существования, механизмы взаимодействия
с бактериальными клетками

Вопросы для подготовки
Бактериофаги, их природа, строение, формы существования.
Типы взаимодействия бактериофагов с бактериальной клеткой. Лизогения, лизогенная конверсия.
Методы культивирования и титрования бактериофагов (по Грациа и Аппельману).
Практическое использование бактериофагов в диагностике:
а) для индикации бактерий
б) для идентификации бактерий
в) для установления идентичности культур бактерий, выделенных из разных источников, при эпидемиологическом анализе ситуации.
5. Лечебно-профилактическое использование бактериофагов.

Задания к практической работе студентов
Задание №1
Провести индикацию и титрование дизентерийного бактериофага.
Для приготовления биопрепаратов из бактериофагов используют в основном три источника:
лизогенные культуры бактерий
фекалии выздоравливающих больных
сточные воды
Допустим, необходимо выделить дизентерийный бактериофаг из сточных вод. На первом этапе проводят индикацию дизентерийного бактериофага в сточных водах методом фаговой дорожки:
а) на чашку Петри с МПА засевают газоном культуру дизентерийных бактерий, затем на поверхность посева закапывают фильтрат сточной воды стекающей каплей. Посевы инкубируют в термостате в течение 18 часов. Учесть результаты по готовым демонстрационным посевам.
При положительном ответе проводят определение исходного титра бактериофага по Аппельману.
б) Для титрования фага готовят его десятикратные разведения, в которые добавляют эталонную культуру дизентерийных бактерий (2 млрд. м.т. в 1 мл). Пробирки помещают в термостат на сутки.
Учесть исходный титр бактериофага.
в) Если титр недостаточен (необходимый титр для лечебных бактериофагов должен быть не менее 10-8), бактериофаги несколько раз пассируются на дизентерийных клетках, а затем вновь титруются. Учесть титр бактериофага после пассирования, сделать заключение.
Примечание: при достижении необходимого титра бактериофаг стерилизуется фильтрованием через бактериальные фильтры, проходит контроль на стерильность и расфасовывается в стерильные ампулы или флаконы.
Задание №2
По готовым посевам определить титр дизентерийного бактериофага по Грациа. Для этого готовят десятикратные разведения фага, которые смешивают со стандартной культурой дизентерийных бактерий в объеме 0,1 мл каждое разведение бактериофага и расплавленным и слегка остуженным агаром. Полученную смесь выливают на чашку Петри с МПА вторым агаровым слоем и после застывания смеси инкубируют в термостате 24 часа. Подсчитать количество «негативных колоний» бактериофага, умножить на степень разведения фага и объем из расчета на 1мл. Это и будет титр бактериофага по Грациа.
Задание №3
Провести идентификацию холерных бактерий по фаголизабельным свойствам. Для этого выделенную чистую культуру бактерий засевают газоном на чашку Петри с щелочным агаром и закапывают на поверхность посева разные холерные батериофаги (С4 и Эль-Тор2). Посевы инкубируют в термостате сутки. Учесть результаты посева и сделать заключение.
Задание №4
В отделении возникла вспышка стафилококковой инфекции. При бактериологическом исследовании больных и сотрудников (врач К., санитарка Л., медсестра А.) был выделен гноеродный стафилококк. Провести фаготипирование гноеродного стафилококка с помощью типовых стафилококковых бактериофагов и установить источник инфекции для больных. Результаты зарисовать и ответить на следующие вопросы:
Какой применен метод диагностики?
Что такое типовые бактериофаги?
Кто явился источником инфицирования больных?
ЗАНЯТИЕ № 14
Тема: Генетика бактерий

Вопросы для подготовки
Генетические детерминанты бактерий (нуклеоид, плазмиды, транспозоны, инсерционные последовательности), особенности их строение и функции. Генотип и фенотип бактерий.
Классификация видов изменчивости.
Фенотипическая (модификационная) изменчивость, ее суть и особенности.
Генотипическая изменчивость, ее суть, особенности, разновидности.
Мутации, их виды. Мутагены, основные группы. Механизм развития мутаций. Репаративные механизмы, их биологическая значимость.
Виды генетических рекомбинаций: трансформация, трансдукция, коньюгация, их механизмы биологическая значимость.
Плазмиды, их характеристика. Основные виды плазмид, характеристика, биологическая значимость.
Использование бактериоциногении и бактериоциночувствительности бактериальных культур как эпидемиологического маркера для установления идентичности культур различного происхождения.

Задания к практической работе студентов
Задание № 1
Учесть результаты готового опыта по индукции мутаций.
Постановка опыта по индукции мутаций у стафилококка с помощью УФЛ как мутагена. На две чашки Петри с питательной средой, в которую добавлен пенициллин засеяли шпателем 0,1 мл 1 млрд/мл суспензии стафилококка, чувствительного к пенициллину. Одна чашке оставляется в качестве контроля и подписана «контроль». Вторая подвергается УФ-облучению в течение 4-х секунд и подписана «опыт». Чашки ставят в термостат на сутки.
При учете результатов опыта определить наличие роста в контрольной и опытных чашках, подсчитать число выросших колоний. При оценке опыта ответить на следующие вопросы:
Удался ли опыт?
Какая мутация получается в опыте, а какая в контроле?
Что является мутагеном? Каков его механизм действия?
Какой признак микроба подвергся изменению?
Что является фактором селекции, обнаруживающим данный мутант?
6. Вычислить частоту спонтанных и индуцированных мутаций.
Задание № 2
Учесть результаты опыта по трансдукции.
Постановка опыта по трансдукции. Реципиентная культура кишечной палочки, не сбраживающей лактозу (Е.соli lac -), засевается на чашку Петри со средой Эндо-«контроль». Фаголизат (продукт лизиса E.coli lac+ умеренным бактериофагом) смешивают с реципиентом, выдерживают в термостате 15 минут и засевают на среду Эндо – «опыт». Посевы ставят в термостат на сутки.
При учете результатов определяют наличие и характер роста микробов на опытной и контрольной чашках. При оценке опыта ответить письменно на следующие вопросы:
Почему в опыте использовалась среда Эндо?
Зачем был сделан посев на контрольную чашку и как нужно оценить характер роста?
Как следует назвать всех выросших микробов в опытной чашке?
Почему в опытной чашке выросло микробов намного меньше?
Отчего в опытной чашке колонии неоднородные? Как это расценить?
Задание №3
Учесть результаты опыта по трансформации.
Постановка опыта по трансформации. Культура стафилококка ауксотрофного по триптофану, засевается на половину чашки с минимальной по Триптофану средой (контроль). После этого часть данной культуры смешивается с равным количеством раствора ДНК, выделенного из прототрофного по триптофану штамма стафилококка. Смесь выдерживается 20 минут в термостате, после чего делается высев петлей на вторую половину чашки (опыт).
При оценке результатов ответить письменно на следующие вопросы:
Удался ли опыт?
Отчего нет роста в контрольной части чашки и есть в опытной?
Какой микроб был донором, какой реципиентом?
Какой признак подвергся изменению?
Какова характеристика рекомбинанта?
Как был обнаружен рекомбинант?
Задание №4
Результаты опыта по коньюгации.
Постановка опыта по коньюгации. В пробирке смешивают два штамма кишечной палочки: №1E. Coli Hfr Thy– (штамм ауксотрофный по Тимину), №2-E. coli F–T–L– (штамм ауксотрофный по Треонину и Лейцину). После этого производится посев исходных культур №1 и №2, а также смеси этих культур на минимальную питательную среду (не содержит тимина, лейцина, треонина). Посев ставится в термостат.
При оценке результатов опыта по коньюгации ответить письменно на следующие вопросы:
Удался ли опыт и почему?
Какой признак микроба подвергся изменению?
Отчего нет роста на секторах с посевами культур №1 и №2?
Какой микроб был донором, а какой реципиентом?
Что передал донор реципиенту?
Какова характеристика рекомбинанта и как он был обнаружен?
Задание №5
Определить колициночувствительность культур бактерий, выделенных из разных источников для определения источника инфекции. Для этого колициногенные музейные культуры, выделяющие разные типы колицинов, засеяны уколом в чашку Петри, после чего они убиты хлороформом. Сверху сплошным газоном засеяны исследуемые микробы, выделенные от больных и носителей (каждый на отдельной чашке). Учет проводится после суточной инкубации в термостате. При наличии колициночувствительности вокруг колициногенного штамма отмечается стерильная зона. Определить колицинотипы изучаемых культур, обозначив буквами (соответственно типам колицинов, выделяемых набором колициногенных штаммов). Сделать вывод о возможном источнике инфекции.

ЗАНЯТИЕ № 15
Тема: Микробный антагонизм. Антибиотики.
Принцип рациональной антибиотикотерапии

Вопросы для подготовки
Микробный антагонизм, механизмы, его эволюционная значимость. Практическое использование микробного антагонизма.
Понятие «антибиотик», основные источники получения антибиотиков. Природные, полусинтетические и синтетические антибиотики.
Требования, предъявляемые к антибиотикам, классификация антибиотиков по происхождению, химическому составу, спектру действия.
Механизмы действия антибиотиков на микроорганизмы.
Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам (диско-диффузионный метод, метод серийных разведений).
Рациональные пути профилактики формирования резистентных штаммов и преодоления сформировавшейся микробной устойчивости.
Осложнения антибиотикотерапии.

Задания к практической работе студентов
Задание №1
Изучить демонстрационный набор препаратов антибиотиков и распределить их в зависимости от механизма действия.
Задание №2
Изучить микробный антагонизм в опыте «микробная ловушка» по Перетцу.
В середине чашки Петри с МПА делается посев петлей вульгарного протея, после чего полукругом вокруг посева засевается культура антракоида. Чашки инкубируют в термостате сутки.
Определить наличие антагонизма между протеем и антракоидом по характеру роста протея на питательной среде, учитывая культуральные особенности этого микроба.
Задание №3
Определить по демонстрационным посевам чувствительность микробов к антибиотикам диско-диффузионным методом.
Для этого на плотных питательных средах сплошным газоном произведен посев изучаемой культуры, на поверхность которой наложены диски с антибиотиками. Результаты оцениваются после
суточной инкубации в термостате. При наличии антибиотикочувствительности вокруг диска есть зона задержки роста не менее 15 мм в диаметре.
Полученные данные занести в таблицу.
Задание №4
Определить чувствительность эпидермального стафилококка к ампициллину методом серийных разведений.
Были приготовлены серийные разведения антибиотика в пробирках с МПБ. В каждую пробирку внесено определенное количество стафилококка. После суточной инкубации в термостате определить наличие или отсутствие роста бактерий по степени прозрачности бульона. Определить минимально подавляющую концентрацию (МПК) и рассчитать терапевтическую дозу. Данные внести в таблицу:

Концентрация
антибиотика ЕД/мл
0,4
0,2
0,1
0,05
0,025
Контроль

Рост бактерий








«+» - рост бактерий, «--« - отсутствие роста
МПК – наименьшая концентрация антибиотика, в присутствии которого угнетается видимый рост микробов. Терапевтическая доза в 2-4 раза выше МПК.
Задание №5
Определение содержания антибиотика в сыворотке крови больного.
Методика: берется два ряда пробирок. В первом ряду разводится исследуемая сыворотка, к которой добавляют среду с глюкозой и индикатором феноловым красным и стандартизованную взвесь стафилококка в концентрации 1000 м.к./ мл для определения наибольшего разведения сыворотки, задерживающее рост тест-микроба. Во втором ряду готовят разведения стандарта антибиотика (ампициллина), к которому добавляют те же ингредиенты, что и в первый ряд с целью определения наименьшей концентрации антибиотика, дающего отсутствие роста стафилококка.
Для установления концентрации антибиотика в сыворотке больного необходимо умножить полученную МПК ампициллина на наибольшее разведение сыворотки, задерживающее рост тест-микроба.
Задание №6
Учесть чувствительность микроорганизмов к антибиотикам экспресс-методом по Роджерсу.
Методика основана на качественной реакции на нитриты. Патологический материал от больного, содержащий возбудителя, выдерживается 1-2 часа в МПБ с добавлением нитрата калия (0,1%), затем он разливается в лунки, в каждую из которых кладут диски с антибиотиками. При росте микробов увеличивается количество дегидраз, образуется нитратредуктаза, которая восстанавливает нитрат калия в нитрит. В лунки добавляют иодистый калий, 5% серную кислоту, 1% р-р крахмала по 0,1 мл каждого компонента. При этом нитраты в присутствии серной кислоты выделяют из йодистого калия йод, который, воздействуя на крахмал, дает синее окрашивание.

ЗАНЯТИЕ № 16
Тема: Контрольное занятие по темам № 12-15

Вопросы для подготовки
Асептика и антисептика. Стерилизация и дезинфекция. Определение понятий, методы, область применения.
Влияние и механизм действия физических факторов на жизнедеятельность бактерий: высокие температуры, высушивание, ультразвук, УФ-лучи, ионизирующее излучение. Практическое применение.
Газовая стерилизация, область применения.
Механические методы стерилизации, область применения.
Стерилизация текучим паром и паром под давлением. Аппаратура, правила работы, механизм действия стерилизующих факторов. Режим стерилизации, область применения. Физический, химический и биологический контроли стерилизации.
Пастеризация, тиндализация. Режим работы, область применения.
Дезинфектанты, основные группы дезинфектантов, механизм действия, область применения.
Антисептики, требования, предъявляемые к ним, основные группы, механизм их действия, область применения, определение чувствительности к ним микробов.
Бактериофаги, их природа, строение, формы существования (вегетативный фаг, зрелый фаг, профаг).
Классификация фагов по характеру взаимодействия с бактериальной клеткой (умеренные и вирулентные). Лизогения и лизогенная конверсия.
Методы культивирования и титрования бактериофагов (по Грациа и Аппельману).
Лечебно-профилактическое и диагностическое использование бактериофагов в медицине.
Понятие о генотипе и фенотипе. Генетические детерминанты бактерий (нуклеоид, плазмиды, транспозоны, Is-последовательности), особенности строения, функции.
Фенотипическая и генотипическая изменчивости, их суть, отличительные черты.
Мутации, их виды. Мутагены, основные группы. Репарации, их разновидности, биологическая значимость.
Генетические рекомбинации (трансформация, трансдукция, коньюгация), их механизмы, биологическая значимость.
Плазмиды, их основные виды, характеристика.
Использование бактериоциногении и бактериоциночувствительности культур как эпидемиологического маркера для установления идентичности культур различного происхождения.
Микробный антагонизм, его эволюционная значимость.
Понятие «антибиотик», основные источники получения антибиотиков, природные, полусинтетические и синтетические антибиотики.
Классификация антибиотиков по химическому составу, механизму действия, спектру действия на микроорганизмы.
Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам (диско-диффузионный метод, метод серийных разведений). Определение МПК и расчет терапевтической концентрации антибиотика.
Резистентность микробов к антибиотикам,генетические и биохимические механизмы резистентности, методы их выявления.
Условия селекции устойчивых штаммов и формирования полирезистентных микробных популяций.
Рациональная антибиотикотерапия. Осложнения при антибиотикотерапии.

ЗАНЯТИЕ № 17
Тема: Итоговое тестирование и сдача практических навыков

Вопросы для подготовки к сдаче практических навыков
Техника приготовления мазка из культур бактерий и патологического материала. Микроскопия мазков, окрашенных простыми и сложными методами окраски (фуксином, по Граму, по Бурри-Гинсу, по Цилю-Нильсену.
Бактериологический метод диагностики, его цель, этапы,
принципы идентификации бактерий.
Методы получения чистых культур бактерий (механического разобщения, культуральный биологический, химический, физический).
Определение культуральных свойств бактерий по характеру роста на питательных средах.
Определение биохимических свойств бактерий: протеолитических и сахаролитических. Используемые питательные среды (среды Гисса, МПБ), механизм действия.
Определение источника инфекции с помощью эпидемиологических маркеров: фаготипирование, колицинотипирование.
Выявление факторов патогенности у стафилококков: плазмокоагулазы, лецитиназы, гемолотической активности. Используемые питательные среды.
Методы культивирования облигатных анаэробов: физические, химические, биологические, питательные среды.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам: диско-диффузионный, метод серийных разведений
Учесть реакцию агглютинации, поставленную с целью определения титра антител в сыворотке больного при серологическом методе диагностики.
Учесть реакцию преципитации в агаре, поставленную с целью определения токсигенности у бактерий.
Определение титра антитоксической сыворотки с помощью реакции флокуляции.
Учесть РНГА, поставленную с парными сыворотками больного.
Учесть РСК, поставленную с целью идентификации вируса или с парными сыворотками больного.
Определение типа токсина с помощью реакции нейтрализации токсина антитоксином с учетом по биопробе.
Учесть ИФА, поставленную с целью выявления микробных антигенов в патологическом материале больного.
Определение титра бактериофагов по Аппельману и по Грациа.


ЧАСТЬ II. ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

План практических занятий по частному курсу
микробиологии для студентов 3 курса лечебного,
педиатрического, медико-профилактического
факультетов

Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
Условно-патогенные грамотрицательные микроорганизмы – возбудители гнойно-септических инфекций (протеи, синегнойная палочка, капсульная палочка, кишечная палочка и др.).
Стафилококки и стрептококки – возбудители гнойно-септических инфекций, их диагностика.
Возбудители туберкулеза и микобактериозов, менингококковой инфекции, методы их диагностики.
Возбудители дифтерии и раневой анаэробной инфекции (газовая гангрена, столбняк). Методы микробиологической диагностики этих инфекций.
Урогенитальные инфекции (сифилис, гонорея, микоплазмоз, хламидиоз, гарднереллез).
Итоговое занятие по темам № 1-6.
Кишечная палочка – нормальный обитатель кишечника. Диареегенные кишечные палочки – возбудители коли-инфекций, их диагностика. Возбудитель дизентерии, диагностика острой и хронической форм дизентерии.
Сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, их диагностика. Возбудители холеры, кампилобактериозов, их диагностика.
Возбудители пищевых бактериальных отравлений (стафилококковый токсикоз, ботулизм, пищевые токсикоинфекции).
Итоговое занятие по темам № 8-10.
Вирусы, общая характеристика. Индикация вирусов при культивировании их в курином эмбрионе, культуре клеток, в организме чувствительных лабораторных животных. Методы диагностики вирусных инфекций.
Респираторные вирусы (грипп, аденовирусы). Вирусы кори и паротита.
Пикорнавирусы. Вирусы гепатитов А, В, С, Д, Е.
Рабдовирусы. Арбовирусы. Вирус клещевого энцефалита, бешенства. Герпесвирусы. Ретровирусы.
Итоговое занятие по темам № 12-15
Итоговое тестирование и сдача практических навыков.
Нормальная микрофлора организма человека.
Санитарная микробиология.

ЗАНЯТИЕ № 1
Тема: Методы микробиологической диагностики
инфекционных заболеваний

Актуальность темы занятия
Методы исследования инфицированного организма составляют основу диагностики инфекционных заболеваний и состояний бактерионосительства. Выбор метода зависит от нозоологической формы инфекции, ее стадии. Правильный вывод нередко может быть сделан при оценке результатов лишь нескольких методов диагностики, в особенности при доказательстве роли условно-патогенных микробов в развитии гнойно-септических заболеваний.
Врач должен знать, какой материал подлежит исследованию, уметь выбрать метод диагностики в зависимости от стадии и патогенеза инфекции, правильно оценить результаты этих исследований.

Вопросы для подготовки
Микроскопический метод диагностики, его цель и сущность. Достоинства и недостатки этого метода.
Бактериологический метод диагностики, его цель и сущность. 3 этапа исследования (получение изолированных колоний, накопление чистой культуры, идентификация). Достоинства и недостатки метода.
Цель и сущность биологического метода диагностики.
Иммунологический метод диагностики, его виды.
Суть серологического метода диагностики (определение наличия антител, титров антител и исследование парных сывороток).
Методы индикации микробного антигена в исследуемом клиническом материале (собственно иммунный метод).
Аллергический метод диагностики, его сущность. Способы определения клеточного иммунного ответа.
Молекулярная гибридизация и ее использование в генетических методах диагностики (ДНК и РНК-зондирование, полимеразная цепная реакция).

Практическая работа
Задание № 1
Больной А., 30 лет. Клинический диагноз: сепсис. Выбрать метод диагностики, указать материал и методику его забора, примерную схему исследования.
Задание № 2
Больной К. Клинический диагноз: инфицированное термическое поражение правой голени. Выбрать метод диагностики, указать материал и методику его забора, примерную схему исследования.
Задание № 3
Больной М. Клинический диагноз: брюшной тиф, 12 день болезни. Выделить чистую культуру не удалось. Выбрать метод диагностики. Указать материал и методику забора, примерную схему исследования.
Задание № 4
Больной Л. Клинический диагноз: «Острый гонорейный уретрит». Выбрать метод диагностики, указать методику его забора, примерную схему исследования.
Задание № 5
Оценить предлагаемые диагностические препараты: их состав, механизм действия, назначение. Результаты внести в таблицу:

№ /п
Название
препарата
Активное начало
Механизм
действия
Назначение








Справочный материал для оформления протоколов
и выполнения практической работы

Схема бактериологического исследования патологического материала

1 день исследования
Микроскопия исследуемого материала, окраска по Граму. Посев на плотную питательную среду или на среду накопления методом механического разобщения, с целью выделения изолированных колоний.
2 день исследования
Изучение микро-и макроскопических признаков изолированных колоний, пересев колоний на скошенный агар с целью накопления чистой культуры.
3 день исследования
Оценка чистоты культуры по морфологическим и тинкториальным свойствам, посев на среды «пестрого» ряда и в МПБ для изучения сахаролитических и протеолитических свойств. Посев чистой культуры с целью изучения чувствительности к антибиотикам и антисептикам.
4 день исследования
Идентификация чистой культуры по совокупности свойств: морфологических, тинкториальных, культуральных, фаголизабельных, биохимических, антигенных. Изучение чувствительности к антибиотикам и антисептикам. Оценка полученных результатов.

Серологический метод диагностики

Материалом для исследования является сыворотка крови или секреты. Необходимый компонент – специфический антиген (микробные диагностикумы). Сыворотка крови разводится с кратностью 2 (от 1:5 до 1:640 и выше) или с кратностью 10 (от 1:100 до 1:1600). При постановке РСК, РНГА и др. используются дополнительные ингредиенты. Учет результатов производится через 2-3 часа, окончательно – на следующий день. Результат реакции: указывается титр антител как разведение сыворотки, давшее положительную реакцию с антигеном.
Метод парных сывороток – реакция ставится с сыворотками больного в начале заболевания и спустя 7-10 дней для обнаружения нарастания титра антител. Об инфекционной природе антител свидетельствует рост титра антител во втором образце сыворотки не менее чем в 4 раза, при анамнестической и прививочной реакции такого роста антител не наблюдается. Об инфекционном характере антител при однократном обследовании больного можно судить и по наличию антител класса М.

Биологический метод диагностики

Материалом, взятым от больного, заражают чувствительных лабораторных животных (чувствительных к предполагаемому возбудителю) для воспроизведения клинических симптомов инфекционных болезней. На основании искусственного воспроизведения клинической картины инфекционных болезней ставится диагноз.

ЗАНЯТИЕ № 2
Тема: Условно-патогенные грамотрицательные бактерии – возбудители гнойно-воспалительных заболеваний
и госпитальных инфекций

Актуальность темы занятия
За последние 20 лет в клинике участились случаи гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами: грамположительными и в большей степени грамотрицательными. Большинство из них являются представителями нормальной микрофлоры организма человека. Отмечается как нарастание числа гнойных осложнений у больных, так и увеличение случаев первичных заболеваний, вызванных ими.
По статистическим данным в настоящее время в развитых странах у 5-12 % госпитализированных лиц развивалась внутрибольничная инфекция, а у 4-7 % умерших она является основной причиной смерти. Причиной этих заболеваний часто являются госпитальные штаммы.

Вопросы для подготовки
Понятие о внутрибольничной и «госпитальной инфекции», ее этиология. Пути заражения, условия возникновения и формирования госпитальной инфекции. Госпитальные штаммы, их характеристика, маркеры госпитальных штаммов.
Кишечная палочка, положение в системе микроорганизмов, общая характеристика, факторы патогенности, возможные заболевания.
Бактерии рода Протея, классификация, общая характеристика, факторы патогенности, роль в патологии человека.
Капсульная палочка, представители рода, классификация, общая характеристика, роль в патологии.
Синегнойная палочка – возбудитель тяжелой госпитальной инфекции, классификация, общая характеристика, факторы патогенности, особенности эпидемиологии.
Особенности бактериологического метода диагностики гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами.
Биопрепараты для диагностики, специфической терапии и профилактики оппортунистических инфекций, вызванных грамотрицательными микроорганизмами.
Принципы рациональной антибиотикотерапии в лечении гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенной группой микроорганизмов.

Практическая работа

Задание № 1
Больная А., 26 лет. Клинический диагноз: «Пневмония». Провести бактериологическое исследование мокроты больного с учетом количества возбудителя, идентифицировать до рода и вида. Оформить ход бактериологического исследования по дням (здесь и далее см. образец бактериологического исследования в занятии №1). Определить чувствительность к антибиотикам. Сделать заключение.
Задание № 2
Больной М., 5 месяцев. Клинический диагноз: «Острый пиелонефрит». Провести бактериологическое исследование мочи по представленным демонстрациям с учетом количества возбудителя, определить его род и вид. Определить чувствительность к антибиотикам.
Задание № 3
Больной С., 25 лет. Клинический диагноз: «Остеомиелит голени». Гной взят из свищевого хода. Описать бактериологическое исследование по дням, используя готовые демонстрационные посевы, дать заключение о виде выделенного возбудителя. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 4
Больной К., 30 лет. Клинический диагноз: «Гнойный отит». Провести бактериологическое исследование гнойного отделяемого из уха. Идентифицируйте возбудителя на основании изучения свойств, представленных в демонстрационном наборе. Оформить протокол по дням проведенного исследования. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.

Задания № 5, 6, 7
В ожоговом отделении больницы среди больных возникла вспышка гнойной инфекции (инфицирование ран). При лабораторном исследовании выяснилось, что у больных инфицирование ран вызвано одним и тем же возбудителем. В этом же отделении при обследовании сотрудников и объектов окружающей среды этот же микроорганизм был выделен из устья раковины.
Провести бактериологическое исследование отделяемого раны больного М., больного С. и устья раковины (по имеющимся демонстрациям). Сравнить результаты между собой и установить источник инфекции для больных ожогового отделения. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам (задание № 5 и 6), устья раковины (задание № 7). Идентифицировать микроорганизмы.
Задание № 8
Изучить биопрепараты, используемые для диагностики и специфической терапии заболеваний, вызванных условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами. Данные внести в таблицу:

Название
Активное начало
Механизм действия
Применение







Справочные материалы для оформления протоколов
и выполнения практической работы

Дифференциация грамотрицательных микроорганизмов

Род и вид
Escherichia coli
Proteus
vulgaris
Proteus
mirabilis
Klebsiella
pneumoniae
Pseudomonas
aeruginosa


Морфология
палочка
палочка
палочка
палочка
палочка

Окраска по
Граму
грам-
грам-
грам-
грам-
грам-

Рост по
Шукевичу
-
+
+
-
-

Капсула
-
-
-
+
+
-

Пигмент
-
-
-
-
+

Лактоза
кг
-
-
кг
-

Глюкоза
кг
кг
кг
кг
-
+

Сахароза
-
-
-
кг
-

Мальтоза
кг
кг
-
кг
-

Индол
+
-
+
-
-
-

H2S
+
+
+
-
-


Микробиологическое исследование мочи

Исследование мочи направлено на выделение возбудителя заболевания и на количественное определение степени бактериурии. Исследованию подлежит средняя порция мочи, взятой в стерильную посуду, после тщательного туалета наружных половых органов.
Материал для исследования следует брать до начала антибактериальной терапии или в интервалах между курсами лечения.
При бактериологическом исследовании мочи используют метод секторных посевов. Для этого платиновой петлей диаметром 2 мм (емкостью 0,005 мл) производят посев мочи на сектор 1 чашки Петри с 5 % кровяным агаром. После этого петлю прожигают и производят посев 4 штрихами из сектора 1 во 2-й, затем из 2-го в 3-й, и из 3-го в 4-й.
После суточной инкубации в термостате подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах. Определение степени бактериурии производят согласно таблице:

Количество колоний в секторах

I
II
III
IV
Количество бактерий в мл

1-6
-
-
-
менее 1 тыс.

8-20
-
-
-
3 тыс.

20-30
-
-
-
5 тыс.

30-60
-
-
-
10 тыс.

70-80
-
-
-
50 тыс.

100-150
5-10
-
-
100 тыс.

не сосчитать
20-30
-
-
500 тыс.

не сосчитать
40-60
-
-
1 млн

не сосчитать
100-140
10-20
-
5 млн

не сосчитать
не сосчитать
30-40
-
10 млн

не сосчитать
не сосчитать
60-80
единичные колонии
100 млн


Степень бактериурии менее 1 тыс. колониеобразующих единиц в 1 мл мочи (КОЕ/мл) свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса, равная 10 тыс. КОЕ/мл – сомнительный результат, равная 100 тыс. КОЕ/мл и выше указывает на наличие воспалительного процесса.

ЗАНЯТИЕ № 3
Тема: Стафилококки и стрептококки – возбудители
гнойно-воспалительных заболеваний

Актуальность темы занятия
Стафилококки и стрептококки – основные возбудители гнойно-воспалительных заболеваний. В последние годы широко распространились штаммы устойчивых к антибиотикам стафилококков, среди них описаны госпитальные штаммы, вызывающие внутрибольничные инфекции у хирургических больных, новорожденных и рожениц. Микробиологические исследования помогают выяснить этиологию, эпидемиологию гнойной инфекции, сделать выбор антибактериальной терапии, методов специфического лечения и профилактики.
Диагностика глубоких стафилококковых инфекций возможна на основании серологических исследований.
В детской патологии большую роль играют стрептококки как возбудители скарлатины, ревматизма и гнойно-воспалительных заболеваний.

Вопросы для подготовки
Стафилококки: классификация, общая характеристика, факторы патогенности, распространение в природе.
Заболевания, вызываемые стафилококками, пути и условия инфицирования организма.
Стрептококки, их классификация по Ленсфильд, общая характеристика, факторы патогенности, роль в патологии человека.
Бактериологическое исследование патологического материала при стафилококковых и стрептококковых инфекциях. Особенности бактериологического исследования при сепсисе. Диагностика глубоких стафилококковых инфекций.
Особенности иммунитета при стафило- и стрептококковых инфекциях.
Скарлатина, этиология, патогенез, методы диагностики.
Специфическая профилактика и лечение стафилококковых и стрептококковых заболеваний.

Практическая работа
Задание № 1
Больной А., 18 лет. Клинический диагноз: «Хронический фурункулез». Провести бактериологическое исследование гноя из фурункула. Описать ход исследования по дням и дать заключение о виде выделенного возбудителя, используя готовые демонстрации. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 2
Больной К., 25 лет. Клинический диагноз: «Пневмония», «Сепсис». Кровь из локтевой вены (5 мл) засеяна на сахарный бульон. Описать ход исследования по дням и дать заключение о виде выделенного возбудителя, используя демонстрационные посевы. Определить чувствительность к антибиотикам.
Задание № 3
Больной Б., 45 лет. Клинический диагноз: «Послеоперационный сепсис». Кровь в количестве 5 мл из локтевой вены засеяна на 50 мл сахарного бульона. Описать ход исследования по дням и дать заключение о виде выделенного возбудителя, используя демонстрации. Определить чувствительность к антибиотикам.
Задание № 4
Больная М., 23 года. Клинический диагноз: «Лактационный мастит». Молоко в количестве 5 мл направлено на исследование. Описать ход исследования по дням, дать заключение о виде возбудителя, используя готовые демонстрации. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 5
Больной С., 25 лет. Клинический диагноз: «Остеомиелит голени». Гной взят из свищевого хода. Описать ход исследования по дням и дать заключение о виде возбудителя, используя готовые демонстрационные посевы.
Задание № 6
Больная К., 34 года. Клинический диагноз: «Кольпит». В бактериологическую лабораторию доставлен мазок из цервикального канала. Провести исследование по дням с учетом количества возбудителя, используя готовые демонстрации. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 7
Больная З., 21 год. Клинический диагноз: «Фолликулярная ангина». Для исследования взят гной с миндалин стерильным тампоном. Описать ход исследования по дням и дать заключение о виде выделенного возбудителя по имеющимся демонстрациям.
Задание № 8
В отделении детской хирургии возникла вспышка гнойной инфекции, вызванной золотистым стафилококком. С целью выявления носителей золотистого стафилококка и определения источника инфекции проведено обследование медицинского персонала. Обнаружено, что врач и медсестра являются носителями золотистого стафилококка. Определить фаготип культур, выделенных от больных, медсестры и врача. Определить источник инфекции.
Задание № 9
Диагностика глубокой стафилококковой инфекции
У больного Р., с подозрением на абсцесс почки стафилококковой этиологии взята кровь на исследование. С кровью больного поставлена реакция нейтрализации токсина антитоксином для выявления гемотоксина. Для этого в три пробирки разливается сыворотка больного, в четвертую наливается гретая сыворотка больного. Во вторую пробирку добавляется стафилококковый антитоксин, в третью – нормальная сыворотка. Во все пробирки добавляется взвесь отмытых эритроцитов кролика. Учет проводится после часа инкубации при 37 (С и часа при комнатной температуре. Учет проводится по наличию или отсутствию гемолиза.

Справочные материалы для оформления протоколов
и выполнения практической работы

Дифференциация стафилококков

Род и вид
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophiticus

морфология
кокки, «грам+»
кокки, «грам+»
кокки, «грам+»

плазма
+



гемолиз
+
+


лецитиназа
+/-
+/-


Чувствительность к новобиоцину
<0,6 мг/мл
<0,6 мг/мл
>2,0 мг/мл


Для дифференциации условно-патогенных стафилококков от сапрофитных используют чувствительность их к новобиоцину. Золотистый и эпидермальный стафилококки не растут на среде с концентрацией новобиоцина < 0,6 мг/мл, сапрофитный дает рост. Для его подавления требуются большие концентрации новобиоцина – более 2 мг/мл.

Бактериологическое исследование молока
Перед сцеживанием молока тщательно обрабатывают соски и околососковую область молочных желез 70( этиловым спиртом. Молоко из каждой молочной железы исследуется отдельно. Первые порции сцеженного молока выливаются, последующие 3-4 мл сцеживаются в стерильные пробирки. Не более чем через 3 часа после забора пробы молока должны быть доставлены в бактериологическую лабораторию.
Молоко в количестве 0,2 мл засевают на селективные солевые среды для выделения стафилококков и на среду Эндо для представителей семейства энтеробактерий. На следующий день производится подсчет выросших колоний, число которых умножают на 5 (при посеве брали 0,2 мл), так как массивность обсеменения выражается количеством колониеобразующих единиц в 1 мл (КОЕ/мл). В случае наличия в 1 мл 250 КОЕ и более микробов обсемененность характеризуется как массивная, в случае менее 250 КОЕ – как не массивная. При неоднородном росте регистрируется каждая разновидность колоний отдельно.
В ответе необходимо указать вид, выделенного микроба, массивность обсеменения в КОЕ на 1 мл.
Оценка полученных результатов врачом-педиатром
Женщина не может быть донором, ей нельзя кормить, если она переболела любой формой мастита, а также различными воспалительными заболеваниями молочной железы или вне ее при обнаружении в молоке массивного роста золотистого стафилококка, при повторном выделении даже единичных колоний представителей энтеробактерий и псевдомонад.

Особенности исследования крови при сепсисе, бактериемии

Кровь для посева берут из локтевой вены, соблюдая все правила асептики.
Посев необходимо производить во время подъема температуры.
Кровь берут до начала лечения антибактериальными препаратами, через 12-24 часа после последнего приема препарата.
Необходимо засевать не менее 5-10 мл крови для результативного бактериологического исследования. Засевать в большие количества жидких питательных сред, чтобы преодолеть естественные бактерицидные свойства крови.
Кровь на посев берут у постели больного и засевают тут же в питательную среду.
Среды, засеянные кровью, инкубируют в течение 6 недель в термостате при 37 (С. Посевы просматривают ежедневно в течение 8 дней. При отсутствии видимого роста на 3, 5, 8 дни из всех сред делают высевы на чашки Петри с кровяным агаром и делают мазки с окраской по Граму.
Посевы продолжают выдерживать в термостате в течение 6 недель, проверяя появление роста 2-3 раза в неделю. При появлении видимого роста делают мазки, окрашивая по Грамму, и высевы на среды для дальнейшей идентификации бактерий и определения чувствительности к антибактериальным препаратам.

Бактериологическое исследование отделяемого
цервикального канала

Посев
Количество колоний
Степень обсемененности

Первичный посев
1-10
10І


11-30
10і


30 и выше
10

Из рассева
Любое количество
10№


ЗАНЯТИЕ № 4
Тема: Возбудители туберкулеза и микобактериозов,
менингококковой инфекции

Актуальность темы занятия
В настоящее время, несмотря на успехи в деле профилактики, лечения и диагностики туберкулеза, отмечается значительный рост этого заболевания, в особенности в нашей стране. Клиническая диагностика туберкулеза и микобактериозов сопровождается микробиологическими исследованиями, где врач должен четко представлять их место в каждом конкретном случае.
Патогенные нейссерии – возбудители менингококковых инфекций, в последние годы регистрируются довольно часто. Среди этиологических агентов гнойных менингитов в нашей стране до 80 % составляют менингококки. Диагностика менингококковых инфекций целиком основана на микробиологических исследованиях.

Вопросы для подготовки
Характеристика возбудителей туберкулеза и микобактериозов, их классификация, факторы патогенности.
Особенности патогенеза и эпидемиологии туберкулезной инфекции, иммунитет при туберкулезе.
Методы и цели микробиологической диагностики туберкулеза: микроскопический, бактериологический, биологический, аллергический.
Ускоренные методы диагностики туберкулеза: иммуноферментный анализ, иммунная флюоресценция.
Биопрепараты, применяемые для специфической профилактики и диагностики туберкулеза.
Характеристика возбудителей менингококковой инфекции, классификация, факторы патогенности, отличие от непатогенных нейссерий.
Эпидемиология и патогенез менингококковой инфекции. Методы микробиологической диагностики эпидемического менингита. Специфическая профилактика менингококковой инфекции

Практическая работа
Задание № 1
Промикроскопировать мазок, приготовленный из мокроты больного туберкулезом, определить наличие кислотоустойчивых бактерий.
Какой использован метод окраски мазка? Как окрашиваются микобактерии?
Является ли обнаружение этих бактерий основанием для постановки диагноза?
С какой целью микроскопируется мокрота больных с уже поставленным диагнозом «Туберкулез»?
Задание № 2
Даны пробирки со средой Левенштейна-Йенсена, на которые был произведен посев мокроты больных А. и В. с подозрением на туберкулез. С момента посева прошло 24 дня.
Какой применен метод диагностики?
Какой метод выделения чистой культуры применен?
Когда произведен посев мокроты?
Описать культуральные свойства выделенной культуры. Являются ли они характерными для туберкулезных микобактерий?
Закончено ли бактериологическое исследование?
Можно ли на основании полученных данных подтвердить диагноз «Туберкулез»?
Задание № 3
Определить чувствительность туберкулезных бактерий, выделенных от 2-х больных, к химиотерапевтическим препаратам. Соответствующие препараты в разных концентрациях были внесены в питательную среду, после чего был произведен посев выделенной культуры. Учет результатов производится спустя 3-4 недели при наличии роста в контрольных пробирках. Определить чувствительность культуры, результаты внести в таблицу:

Название препарата
1
2

Стрептомицин 5 ЕД
-//- 10 ЕД



ПАСК 5 ЕД
-//- 10ЕД



Циклосерин 30 ЕД



Канамицин 30 ЕД




«+» – рост есть; «–» – роста нет.
Задание № 4
Учесть результаты иммуноферментного анализа, проведенного со спинномозговой жидкостью двух больных с диагнозом «Туберкулезный менингит»?
Какой использован метод диагностики?
С какой целью используется спинномозговая жидкость?
Можно ли по результатам исследования подтвердить или снять клинический диагноз?
Сделать заключение.
Задание № 5
Промикроскопировать мазок, приготовленный из спинномозговой жидкости больного с подозрением на менингококковый менингит. Определить метод окраски и попытаться обнаружить характерные по морфологии возбудители.
Какой метод диагностики применен?
Можно ли только на основании микроскопии поставить диагноз?
Являются ли обнаруженные характерные микробы менингококками?
Задание № 6
По демонстрационным посевам описать схему исследования культур нейссерий, выделенных из носоглотки от 2-х больных.
Описать культуральные свойства бактерий, провести дифференцировку выделенных культур (патогенных нейссерий от условно-патогенных) на основании следующих свойств:


Характеристика среды
Ристомицин
Сывороточный агар
37 °С
Сывороточный агар
22 °С
МПА 37 °С

Результат






«+» – наличие роста; «–» – отсутствие роста.
Сделать заключение.
Как можно интерпретировать полученные результаты?
Задание № 7
Изучить биопрепараты, применяемые для диагностики и специфической профилактики туберкулеза и менингококкового менингита. Данные занести в таблицу (таблицу см. в занятиях выше).
ЗАНЯТИЕ № 5
Тема: Возбудители дифтерии, клостридиальных
и неклостридиальных раневых инфекций

Актуальность темы занятия
В 90-е годы произошло резкое ухудшение эпидемической обстановки по этой инфекции. Основной причиной возникновения эпидемии дифтерии в России явились серьезные недостатки организации и проведения иммунизации населения и, как следствие этого, низкий уровень коллективного иммунитета.
Врачам необходимо знать показания для микробиологических исследований при дифтерии, а также столбняке и газовой гангрене. Уметь правильно выбрать и взять материал для исследования, оценить полученные результаты, определить показания к применению биопрепаратов для специфической профилактики этих инфекций.

Вопросы для подготовки
Возбудитель дифтерии, классификация, биологические свойства, факторы патогенности. Патогенез и эпидемиология дифтерии. Особенности иммунитета при дифтерии.
Методы микробиологической диагностики дифтерии и дифтерийного носительства.
Методы оценки напряженности антитоксического иммунитета в эпидситуациях: РНГА и реакция Шика.
Специфическая профилактика и лечение дифтерии. Возможные осложнения при серотерапии и их предупреждение.
Возбудитель столбняка, классификация, биологические свойства, факторы патогенности. Патогенез и эпидемиология столбняка, иммунитет, методы микробиологической диагностики.
Возбудители газовой гангрены, классификация, биологические свойства, факторы патогенности. Патогенез и эпидемиология газовой гангрены. Методы микробиологической диагностики.
Специфическая профилактика и терапия столбняка и газовой гангрены.
Неклостридиальные анаэробы – возбудители гнойно-воспалительных процессов: пептококки, пептострептококки, бактероиды, фузобактерии, вейлонеллы. Их классификация, биологические свойства, факторы патогенности, методы микробиологической диагностики.
Практическая работа
Задание № 1
В приемный покой детской инфекционной больницы поступил ребенок с клиническим диагнозом «Дифтерия зева». Здесь же был взят мазок со слизистой зева больного и доставлен в лабораторию. Мазок окрасили по методу Леффлера. Промикроскопируйте мазок и дайте ответы на следующие вопросы.
Какой применен метод диагностики?
Чем берется мазок со слизистой зева обследуемого?
Какие морфологические и тинкториальные особенности присущи возбудителю дифтерии, и проявляются ли они в данном препарате?
Какова степень информативности мазка?
Можно ли на основании изученного мазка идентифицировать дифтерийную палочку?
Задание № 2
При обследовании детей, имевших контакт с больным дифтерией у двоих из них (В. и С.) были выделены из зева коринеформные бактерии. По представленным демонстрациям определите вид бактерий, выделенных из зева больных детей В. и С. Опишите ход исследования по дням и сделайте заключение. Все полученные результаты свести в следующую таблицу:

Название культуры
Морфология
Тинкториальные
свойства
Кровяно-теллуритовые
агар
Гемолиз
Среда Ру
Глюкоза

К-ра больного В.







К-ра больного С.








Сахароза
Крахмал
Мочевина
Проба Пизу
Токсигенность
















Сделать заключение.
Задание № 3
У двух детей Д. (10 лет) и Г. (5 лет) после проведения профилактических прививок поставили РПГА с сывороткой крови этих детей для выявления формирования антитоксического иммунитета. По готовым демонстрациям изучите и проанализируйте результаты РПГА и объясните полученные данные. Диагностический титр 1:20. Все сведения занесите в таблицу:

Разведения
сыворотки
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
К. сыв.
К. Aг
К.
Эр.

Сыв. б-го Д.










Сыв. б-го С.











Сделайте заключение о степени напряженности антитоксического иммунитета у этих детей.
Задание № 4
Изучить посевы анаэробных бактерий на среде Китта-Тароцци, Вильсон-Блера и молоке.
Задание № 5
Промикроскопировать мазок, приготовленный из Cl. Рerfringens, окраска по Граму. Обратить внимание на морфологию и тинкториальные свойства бактерий. Результаты зарисовать.
Задание № 6
Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, специфической профилактики и лечения дифтерии, столбняка и газовой гангрены. Данные внести в таблицу (таблицу см. в предыдущих занятиях).

Справочный материал для оформления протоколов
и выполнения практической работы
Ферментативная активность коринебактерий
Вид бактерий
Токсигенность
Уреаза
Цистиназа
Сахароза
Глюкоза
Крахмал

Corynebacterium
diphtheriae







gravis
+

+

+
+

mitis
+

+

+


C. pseudodiphtheriae

+





xerosis
(дифтероиды)

+

+
+



Схема идентификации дифтероидов

Дифтероиды
Мочевина
Сахароза
Глюкоза
Лактоза

C. xerosis
+

+
_

C. minutissimum





C. aquatiaum


+



ЗАНЯТИЕ № 6
Тема: Возбудители венерических заболеваний –
сифилиса и гонореи. Возбудители урогенитальной
патологии – микоплазмы и хламидии

Актуальность темы занятия
За последние 10 лет в РФ значительно возросло число случаев гонореи и сифилиса, в том числе и врожденного сифилиса среди детей. Кроме этих микробов половым путем могут передаваться около 30 различных инфекционных агентов, среди которых наибольшее распространение получили микоплазмы и хламидии. Все эти микроорганизмы вызывают острые и хронические заболевания разных отделов урогенитального тракта у мужчин и женщин, что нередко приводит к выкидышам, невынашиванию беременности, бесплодию, инфицированию и уродствам плода, смерти плода. Основой диагностики урогенитальных инфекций являются микробиологические методы исследования (микроскопические, бактериологические, иммунологические).
Врачи должны хорошо знать патогенез венерических и урогенитальных инфекций, уметь выбрать эффективный метод исследования на данном этапе заболевания, правильно осуществить забор и доставку материала в лабораторию и уметь грамотно трактовать полученные результаты.
Вопросы для подготовки
Возбудитель сифилиса, классификация, характеристика биологических свойств спирохет, факторы патогенности. Эпидемиология и патогенез сифилиса.
Методы микробиологической диагностики сифилиса: а) бактериоскопический (вид исследуемого материала, методы окраски спирохет); б) серологический – реакция Вассермана как разновидность РСК, особенности ее постановки при диагностике сифилиса, реакция иммобилизации трепонем.
Возбудитель гонореи, классификация, биологические свойства, факторы патогенности, эпидемиология и патогенез гонореи и бленореи новорожденных.
Методы диагностики острой и хронической гонореи: микроскопический, бактериологический, иммунологические. Провокация гоновакциной.
Хламидии, классификация, особенности структуры и биологических свойств, цикл развития хламидий, вызываемые заболевания, патогенез урогенитальной хламидийной инфекции, методы диагностики.
Микоплазмы, классификация, характеристика биологических свойств, факторы патогенности, вызываемые заболевания, патогенез урогенитального микоплазмоза, методы диагностики.

Практическая работа
Задание № 1
У больного с клиническим диагнозом «Острая гонорея» из гнойного отделяемого уретры приготовили мазок, окрашенный по методу Грама и метиленовой синью. Промикроскопировать мазок, обратить внимание на локализацию возбудителя, отметить особенности морфологии, зарисовать. Сделать заключение.
Какой метод диагностики применен?
Закончено ли исследование, и можно ли подтвердить клинический диагноз?
Задание № 2
У больного с клиническим диагнозом «Хроническое воспаление яичников гонококковой этиологии» проведена провокация специфическим биопрепаратом. Через 2 дня из отделяемого уретры сделан мазок (окраска по Граму).
Какой применен метод диагностики?
Какие морфологические и тинкториальные свойства возбудителя обнаружены в мазке?
Какой биопрепарат был использован для провокации, и каков механизм действия провокации?
Сделать заключение по результатам исследования.
Задание № 3
В серологическую лабораторию направляется сыворотка двух мужчин с подозрением на сифилис. Учесть результаты реакции Вассермана, поставленной с двумя различными антигенами (кардиолипидным и т
·репонемным). Для контроля реакция поставлена также с сыворотками нормальной и больного сифилисом.
1. Какой применен метод диагностики?
2. Какие ингредиенты участвуют в реакции Вассермана?
3. Каков механизм реакции?
4. Как ставится опыт?
5. Как ставятся контроли и для чего?
Сделать заключение по реакции Вассермана.
Задание № 4
Больная Р., госпитализирована в отделение патологии беременности с диагнозом: «Беременность 15 недель. Угроза прерывания беременности». В анамнезе 1 роды, 4 беременности, две из которых закончились выкидышами в ранние сроки.
Произведен посев отделяемого цервикального канала шейки матки на сложную питательную среду, приготовленную на основе экстракта из бычьих сердец с добавлением дрожжевого экстракта и лошадиной сыворотки. По готовым демонстрациям описать ход исследования и определить вид выделенного возбудителя.
Какой применен метод диагностики?
Какие особенности культуральных и биохимических свойств микроба выявлены, и для какого вида они характерны?
Закончено ли исследование?
Задание № 5
В женскую консультацию обратилась беременная К., по поводу угрозы прерывания беременности. Гинекологом было назначено обследование супружеской пары по диагнозу «Хламидиоз».
Учесть результаты обследования женщины (К.) и ее мужа (С.) иммуноферментным анализом. У женщин материал для исследования был взят из цервикального канала, а у мужчины – эякулят.
Какой был использован метод диагностики?
Как был поставлен ИФА?
Как можно трактовать результаты реакции?

Справочный материал для оформления протоколов
и выполнения практической работы

Дифференциация Mycoplasma pneumoniae
и Mycoplasma hominis

Тест
M. pneumoniae
M. hominis

Аэробная редукция тетразолия синего
+


Ферментация глюкозы
+


Гидролиз аргинина с образованием NH3

+


ЗАНЯТИЕ № 7
Тема: Контрольное занятие по пройденным темам
с № 1 по № 6

Вопросы для подготовки
Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней: бактериоскопический, бактериологический, биологический, серологический, аллергический и собственно иммунный. Их достоинства и недостатки.
Генетические методы диагностики инфекционных заболеваний (ДНК-зондирование, ПЦР). Их принцип, область применения.
Условно-патогенные микроорганизмы, их общая характеристика. Условия возникновения гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой. Методы микробиологической диагностики.
Синегнойная палочка, классификация ее свойства, факторы патогенности, токсины и ферменты. Заболевания, вызываемые синегнойной палочкой, лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и терапия, рациональная антибиотикотерапия.
Клебсиеллы, классификация, их характеристика, факторы патогенности. Роль в патологии человека. Микробиологическая диагностика. Специфическая терапия (фаго- и иммунотерапия).
Протеи, классификация, их общая характеристика, факторы патогенности, виды. Этиологическая роль при гнойно-воспалительных заболеваниях. Лабораторная диагностика, специфическая фаго- и иммунотерапия.
Эшерихии, классификация, их общая характеристика, факторы патогенности, роль в патологии человека. Лабораторная диагностика. Специфическая терапия, рациональная антибиотикотерапия.
Стафилококки, классификация, факторы патогенности. Заболевания, вызываемые стафилококками, эпидемиология, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и терапия.
Проблема госпитальной стафилококковой инфекции в педиатрии. Значение носительства стафилококков у работников в детских учреждениях. Принципы санации носителей. Методы эпидемиологического анализа госпитальных стафилококковых инфекций.
Стрептококки, их классификация (Ленсфильд). Общая характеристика стрептококков, факторы патогенности. Роль стрептококков группы А и В в патологии человека. Микробиологическая диагностика стрептококковых заболеваний.
Стрептококки пневмонии, их биологические свойства, факторы патогенности, роль в патологии человека, методы микробиологической диагностики.
Роль стрептококков при скарлатине. Патогенез заболевания, иммунитет, определение его напряженности (реакция Дика).
Менингококки, классификация, серологические группы, характеристика биологических свойств, факторы патогенности, патогенез инфекции. Лабораторная диагностика различных клинических форм менингококковой инфекции, бактерионосительство, специфическая профилактика.
Возбудители раневой анаэробной инфекции: клостридии и бактероиды. Их классификация, характеристика биологических свойств, факторы патогенности. Патогенез раневой инфекции, методы лабораторной диагностики, специфическая профилактика и терапия.
Клостридии столбняка, классификация, свойства микробов, факторы патогенности, столбняк новорожденных. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия столбняка.
Коринебактерии, классификация. Характеристика биологических свойств возбудителя дифтерии, факторы патогенности, патогенез дифтерии. Иммунитет и методы его выявления. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия.
Микобактерии, классификация, характеристика биологических свойств возбудителя туберкулеза, виды микобактерий, факторы патогенности. Иммунитет, его особенности, методы микробиологической диагностики, специфическая профилактика туберкулеза.
Микобактерии лепры, биологические свойства, факторы патогенности, лабораторная диагностика.
Трепонема сифилиса, классификация, характеристика биологических свойств, факторы патогенности, патогенез сифилиса, иммунитет, лабораторная диагностика.
Гонококки, их классификация, общая характеристика. Факторы патогенности, патогенез. Лабораторная диагностика острой и хронической гонореи, методы провокации. Бленорея новорожденных. Специфическая терапия и меры профилактики.
Хламидии, классификация. Характеристика биологических свойств, факторы патогенности, виды хламидий, формы существования и жизненный цикл. Заболевания, вызываемые хламидиями. Лабораторная диагностика.
Микоплазмы, классификация, характеристика биологических свойств, факторы патогенности, патогенные для человека виды. Заболевания, вызываемые микоплазмами. Методы микробиологической диагностики.
Внутрибольничные и госпитальные инфекции. Причины и условия возникновения госпитальных инфекций. Этиология и патогенез. Характеристика госпитальных штаммов. Эпидемиология. Методы диагностики, методы эпидемиологического анализа госпитальных инфекций.
Внутриутробные инфекции, их этиология. Источники и пути инфицирования плода. Поражения плода на разных стадиях его внутриутробного развития (гаметопатия, фетопатия ранняя и поздняя). Методы диагностики. Меры профилактики внутриутробных инфекций.

Дополнительные вопросы для студентов стоматологического факультета
Анаэробные грамположительные кокки: пептококки, пептострептококки, классификация. Биологические свойства, факторы патогенности, роль в патологии человека. Лабораторная диагностика.
Анаэробные грамотрицательные кокки: вейлонеллы. Их классификация, биологические свойства, факторы патогенности, роль в патологии человека. Лабораторная диагностика.
Фузобактерии, классификация, биологические свойства, патогенность для человека. Методы диагностики.

ЗАНЯТИЕ № 8
Тема: Микробиология кишечных заболеваний, вызванных эшерихиями и шигеллами

Актуальность темы
Коли-инфекции, вызываемые диареегенными кишечными палочками, распространены среди различных групп населения: среди детей грудного возраста, у которых не сформирована микрофлора кишечника и не совершенны механизмы защиты; среди детей старшего возраста и взрослых людей, у которых они вызывают дизентериеподобные и холероподобные заболевания.
Кроме того, нормальные кишечные палочки являются важнейшими представителями нормальной микрофлоры кишечника, санитарно-показательными микроорганизмами воды и почвы, а также условно-патогенными возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний.
Дифференциация и оценка значения эшерихий, а также диагностика колиинфекций невозможна без бактериологического исследования, при котором проводится идентификация и изучение патогенных свойств выделяемых эшерихий.
Бактериальная дизентерия – широко распространенное заболевание, характеризуюшееся сезонностью и склонностью давать вспышки. Тропизм возбудителя к слизистой толстого кишечника и способность пенетрировать в клетку определяют патогенез дизентерии. По клинической картине дизентерию трудно дифференцировать от других кишечных инфекций, поэтому микробиологические исследования необходимы для уточнения диагноза, выявления и предупреждения бактерионосительства и эпидемиологических наблюдений.

Вопросы для подготовки
Положение рода Эшерихий в системе микроорганизмов. Основной представитель – кишечная палочка, ее общая характеристика.
Банальная кишечная палочка – представитель нормальной микрофлоры кишечника, ее роль в жизнедеятельности организма человека.
Банальная кишечная палочка как условно-патогенный микроорганизм, роль в патологии человека.
Диареегенные кишечные палочки – возбудители коли-инфекций, отличия от банальной кишечной палочки, факторы патогенности, разновидности (5 групп), их роль в патологии человека.
Бактериологический метод диагностики коли-инфекций. Принципы идентификации диареегенных эшерихий (определение серогруппы и серовара). Диагностические иммунные сыворотки (комплексные и монорецепторные). Эпидемиология коли-инфекций, пути определения источников инфекции.
Дисбактериозы, условия и причины их возникновения. Препараты, используемые для восстановления нормальной микрофлоры (колибактерин, бификол, лактобактерин, бифидумбактерин, бактисубтил и др.).
Дифференциально-диагностические питательные среды (Эндо, Плоскирева, Левина), их использование.
Шигеллы, их классификация, общая характеристика, факторы патогенности, антигенная структура и ее отражение в международной классификации шигелл.
Эпидемиология и патогенез дизентерии. Значение колицинотипирования в установлении эпидемиологической цепи. Особенности иммунитета.
Методы микробиологической диагностики острой и хронической дизентерии (бактериологический, серологический, экспресс-диагностика), особенности забора патологического материала.
Специфическая профилактика и лечение дизентерии. Диагностические препараты.

Практическая работа
Задание № 1-4
В детском терапевтическом отделении среди группы детей от 6 месяцев до 1 года, госпитализированных по поводу пневмонии, возникла вспышка острого кишечного заболевания. Лабораторная диагностика показала, что у всех детей заболевание вызвано одним и тем же возбудителем.
Для выявления возможного носительства патогенных кишечных бактерий и установления источника инфекции обследованы 3 сотрудника отделения.
Задание № 1. Провести бактериологическое исследование фекалий ребенка А.
Задание № 2. Провести бактериологическое исследование фекалий сотрудника Б.
Задание № 3. Провести бактериологическое исследование фекалий сотрудника С.
Задание № 4. Провести бактериологическое исследование фекалий сотрудника Д.
Описать ход исследования по дням и сделать заключение о выделении диареегенных эшерихий.
Для проведения эпидемиологического анализа определить колициночувствительность выделенных диареегенных эшерихий. Результаты исследований оформить в таблицу:

Обследуемые
Серогруппа
Серовар
Колицинотип

Ребенок А.




Сотрудник В.




Сотрудник С.





Сделать заключение по установлению источника инфекции.
Задание № 5
Больному М. поставили диагноз «Дизентерия». Фекалии больного засеяны на среду Плоскирева. Провести бактериологическое исследование по готовым посевам и изучить антигенную структуру возбудителя. Описать ход исследования по дням по общепринятой схеме, сделать заключение.
Задание № 6
У больного Н. с диагнозом «Дизентерия» фекалии засеяны на среду Плоскирева. Провести бактериологическое исследование по готовым посевам и изучить антигенную структуру возбудителя. Описать ход исследования по дням по общепринятой схеме, сделать заключение.
Задание № 7
Больному А. поставлен диагноз «Дизентерия». Фекалии больного направлены в бактериологическую лабораторию, где посеяны на среду Плоскирева. Провести бактериологический анализ по готовым посевам и изучить антигенную структуру возбудителя. Описать ход исследования по дням по общепринятой схеме и сделать заключение.
Задание № 8
У двух больных с подозрением на бактериальную дизентерию взяли кровь и поставили РНГА с разведениями сывороток и эритроцитарным дизентерийным диагностикумом на 5 и 10 день болезни. Учесть результаты РНГА и занести их в таблицу:

Больные
День исследования
Разведения сыворотки больного






К.сыв
К.Аг



1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320



Б-й Д.
5 день










10 день









Б-й Т.
5 день










10 день










1. Какой метод диагностики использован?
2. Является ли он ведущим при диагностике дизентерии?
3. В каких случаях им можно воспользоваться?
4. Как готовится эритроцитарный диагностикум?
5. В чем особенности представленной реакции?
6. Подтверждается ли диагноз дизентерия у больных? Если да, то на основании чего?

Справочный материал для оформления протоколов
и выполнения практической работы

Идентификация диареегенных кишечных палочек по антигенному строению

2 день исследования
Проводится агглютинация на стекле красных колоний со среды Эндо с комплексной ОКА сывороткой (антитела к 22 серогруппам диареегенных кишечных палочек), причем "О" – антитела к «О» антигену, К – к «К» антигену, А – означает название набора антител). Колонию, давшую агглютинацию, отсевают на скошенный МПА.
3 день исследования
Агглютинация на стекле культуры со скошенного агара:
а) с ОКА сывороткой – убеждаемся в повторяемости результата 2 дня исследования;
б) с ОКВ сывороткой, в ней антитела к 4 серогруппам:
О20:К84, О26:К56, О55:К59, О111:К58;
в) с ОКЕ сывороткой, в ней антитела к 5 серогруппам:
О124:К72, О142:К86, О143:К, О144:К, О151:К;
г) с групповыми ОК – иммуноглобулинами в пределах тех серогрупп, которые обнаружены при агглютинации в пунктах «б» и «в».
Агглютинация на стекле с гретой культурой (для разрушения К-антигена) и адсорбированными О-сыворотками (О111, О124 и др.).
Вывод о серогруппе диареегенных эшерихий
4 день исследования
Определение серовара диареегенных кишечных палочек проводится в реакции иммобилизации по характеру роста в полужидком агаре с Н - сыворотками.
Иммобилизация – рост культуры по ходу укола при наличии соответствия сыворотки и жгутикового антигена культуры, отсутствие иммобилизации – рост культуры по всему столбику (диффузно).
Окончательное заключение: из фекалий больного (обследуемого) выделена диареегенная кишечная палочка ___________ (указывается серогруппа и серовар, причем серогруппа – характеристика по О и К антигенам, серовар – по Н-антигену, например: О55:К59:Н12).

В процессе выполнения практической работы постарайтесь ответить на следующие вопросы
Почему для выделения возбудителя при колиинфекциии используются среды Эндо и Левина, а не Плоскирева? Если делается дополнительный посев на среду Плоскирева, то с какой целью?
Почему нас интересуют выросшие на среде Эндо красные колонии, какие это могут быть микробы?
Как решить основную задачу 2-го дня исследования: возможно ли в этих колониях присутствие диареегенных эшерихий, как это доказать?
В каком случае мы можем выдать отрицательный результат на 2-ой день исследования?
Что содержат комплексы ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД, и ОКЕ, почему мы исследуем только 3 из них? Может ли возникнуть потребность в использовании комплексов ОКС и ОКД?
Подтверждает ли выделение диареегенных кишечных палочек ориентировочная агглютинация с групповым ОК-иммуноглобулином в пределах одного из комплексов (кроме ОКА). Если нет, то почему?
Что нужно предпринять, чтобы подтвердить выделение диареегенных эшерихий?
В каком случае мы можем выдать отрицательный результат на 3 день исследования?
Что такое реакция иммобилизации, какова техника постановки?
Что такое Col-фактор? Какие свойства кодирует этот фактор?
Как проводится определение колициночувствительности, и что такое колицинотип?
Установлен ли источник инфекции по заданиям 1-4?

ЗАНЯТИЕ № 9
Тема: Сальмонеллы – возбудители брюшного тифа
и паратифов А и В. Возбудители холеры
и кампилобактериозов, их диагностика

Актуальность темы занятия
Одним из самых тяжелых заболеваний кишечной этиологии является брюшной тиф, который встречается в виде вспышек и в виде спорадических случаев заболевания. Брюшной тиф протекает циклично, поэтому знание патогенеза этой инфекции необходимо для правильного выбора метода диагностики и характера исследуемого материала. После заболевания брюшным тифом и паратифами может формироваться стойкое бактерионосительство, а бактериологические исследования помогают предупредить и выявить бактерионосительство.
С 1961 года мир находится в состоянии 7 пандемии холеры, которая вызвана особым биоваром холерного вибриона – Эль-Тор. Холера – это особо опасная инфекция, при возникновении которой осуществляют комплекс противоэпидемических мероприятий, направленных на своевременное выявление и изоляцию больных в острой и атипичной форме, а также здоровых бактерионосителей. Основным и решающим методом диагностики при этом является бактериологический, при проведении которого необходимо знать правила забора и доставки материала от больного.

Вопросы для подготовки
Общая характеристика рода Сальмонелл, их классификация, биологические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов, факторы патогенности.
Антигенная структура сальмонелл по Кауфману-Уайту.
Патогенез и эпидемиология брюшного тифа и паратифов, особенности иммунитета.
Методы микробиологической диагностики брюшного тифа (бактериологический по выделению гемокультуры, копрокультуры; серологический: реакция Видаля инфекционная, анамнестическая и прививочная).
Бактерионосительство при брюшном тифе, его причины. Методы микробиологической диагностики брюшнотифозного носительства (бактериологический и серологический).
Биопрепараты, применяемые для специфической профилактики, терапии и диагностики брюшного тифа и паратифов.
Возбудители холеры, их классификация, общая характеристика, факторы патогенности, дифференцировка на биовары и серовары. Эпидемиология и патогенез холеры.
Методы микробиологической диагностики холеры: бактериологический, методы экспресс диагностики.
Биопрепараты, используемые для лечения, профилактики и диагностики холеры.
Кампилобактерии, их классификация, общая характеристика факторов патогенности, эпидемиология и патогенез, методы лабораторной диагностики.

Практическая работа
Задание № 1
Больной А., 28 лет. Заболел остро два дня назад, когда появились слабость, резкая головная боль, температура все дни 40(. У больного отмечается бред, иногда приступы возбуждения. Предварительный диагноз: «Брюшной тиф». Для подтверждения клинического диагноза в бактериологическую лабораторию направлена кровь больного для выявления гемокультуры.
Провести бактериологическое исследование крови по готовым посевам в соответствии со схемой:
1-й день исследования: кровь, в количестве 5-10 мл засевается в желчный бульон в соотношении 1:10, затем в термостат при 37 (С на 18-24 часа;
2-й день исследования: описать рост культуры в желчном бульоне (видимые изменения). Производится высев из бульона на среду Эндо. Посев помещается в термостат при 37 (С на 18-24 часа;
3-й день исследования: описать культуральные свойства возбудителя на среде Эндо, отметить способность ферментировать лактозу. Промикроскопировать готовые мазки из выросшей культуры и зарисовать. Производится отсев культуры на скошенный агар и короткий «пестрый ряд» (среды Гисса с глюкозой и лактозой). Посевы ставятся в термостат при 37 (М на 18-24 часа;
4-й день исследования: оценить характер роста культуры на скошенном агаре, определить сахаролитические свойства на средах Гисса. Учесть реакцию агглютинации на стекле, поставленную с чистой культурой выделенных бактерий по следующей схеме:
- с комплексной сальмонеллезной сывороткой;
- с групповыми О-сыворотками: О-2, О-4, О-9;
- с типовыми Н-сыворотками: Н-а, Н-в, Н-d (см. прилагаемые таблицы).
Все полученные в результате работы данные свести в таблицу:
Окраска по Граму
морфология
Рост на среде Эндо
Ферментация
Агглютинация



глюкоза
лактоза
О-сыв.
Н-сыв.






О-2
О-4
О-9
Н-а
Н-в
Н-d








Вывод: из крови больного выделена _______________________

Задание № 2
В терапевтическом отделении у больного ребенка В. внезапно появились симптомы, напоминающие по клинике брюшной тиф. В бактериологическую лабораторию отправлена кровь больного для исследования. Провести бактериологическое исследование крови больного и установить этиологию заболевания. Описать ход исследования крови по дням, используя демонстрационные посевы (схема исследования дана выше).
Задание № 3
Больной М., заболел остро. Сегодня 3 день болезни. Больного беспокоит слабость, сильная головная боль, высокая температура (40(), иногда появляется бред, галлюцинации. В бактериологическую лабораторию направляется кровь больного для постановки диагноза. Провести бактериологическое исследование крови больного и установить этиологию заболевания. Описать ход исследования крови по дням, используя демонстрационные посевы (схема исследования дана выше).
Задание № 4
У больного К. в конце второй недели заболевания взяты для исследования фекалии. Клинический диагноз: «Брюшной тиф». Провести бактериологическое исследование фекалий и определить вид выделенного возбудителя. Описать ход исследования фекалий по дням, используя демонстрационные посевы.

Схема выделения копрокультуры
1 день исследования: фекалии больного засеваются на среду Мюллера и помещаются в термостат при 37 (С на 18-24 часа.
2 день исследования: описать рост культуры на среде Мюллера.
Со среды Мюллера делается высев на агар Плоскирева, посевы ставятся в термостат при 37 (С на 18-24 часа.
3 день исследования: описать рост колоний на среде Плоскирева, отметить способность ферментировать лактозу. Промикроскопировать готовый мазок из выросшей культуры, зарисовать. Производится отсев лактозонегативной колонии на скошенный агар и на короткий «пестрый ряд» (среды Гисса с глюкозой и лактозой).
4 день исследования: оценить характер роста культуры на скошенном агаре, сахаролитические свойства культуры на средах Гисса. Учесть реакцию агглютинации на стекле с выделенной культурой по схеме (см. в задании № 1).
Полученные результаты занести в таблицу (см. задание № 1). Сделайте заключение.
Задание № 5
У двух больных М. и Р., поступивших в инфекционную клинику на 12 и 18 дни соответственно, был поставлен диагноз: «Брюшной тиф». В серологическую лабораторию направлена кровь больных, с которой поставлена реакция Видаля.
Учесть реакцию агглютинации по готовым демонстрациям и занести полученные данные в таблицу:


Ингредиенты
1:100
1:200
1:400
1:800
1:1600
К сыв.
К аg


О-Бр. диагностикум








Н-Бр. диагностикум








ОН-Паратиф. А диагностикум








ОН-Паратиф.В диагностикум









Определить характер реакции Видаля: инфекционный, анамнестический.
Какой метод диагностики?
Задание № 6
В детском учреждении возникла неблагополучная эпидемиологическая ситуация относительно брюшного тифа. Для решения о возможном источнике инфицирования были обследованы сотрудники А. и В., в прошлом перенесшие брюшной тиф. В серологическую лабораторию направлена кровь и поставлена РНГА с Vi диагностикумом.
Учесть реакцию, полученные данные занести в таблицу:

Разведения сывороток
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
К сыв.
К Ag

Сотрудник А








Сотрудник В








«+» – наличие агглютинации; «–» – отсутствие агглютинации.
Диагностический титр 1:40.
Задания № 7, 8, 9
У больных С., К., Р. поставлен диагноз «Холера». Произведен посев фекалий на щелочной агар и 1 % пептонную воду с целью выделения холерного вибриона. Провести бактериологическое исследование по готовым посевам и определить биовар и серовар возбудителя. Описать исследование по дням согласно общепринятой схеме и сделать заключение.
Задание № 10
Изучить биопрепараты, используемые для профилактики, лечения и диагностики брюшного тифа , паратифов, холеры. Данные внести в таблицу:

Название
Действующее начало
Механизм действия
Назначение







Справочный материал для оформления протоколов
и выполнения практической работы

Биохимическая активность сальмонелл

Вид бактерий
глюкоза
лактоза
индол
сероводород

S typhi
к


+

S paratyphi A
кг


+

S paratyphi B
кг


+

S typhimurium
кг


+


Классификация вибрионов по Хейбергу

Группа
Углеводы


сахароза
манноза
арабиноза

1
+
+
-

2
-
+
-

3
+
+
+

4
+
-
+

5
+
-
-


Дифференциация биоваров Vibrio choleraе
Признак

биовар «Классика»
биовар «Эль-Тор»

Рост на среде с полимиксином В (50 ед/мл)

(

(

Агглютинация куриных эритроцитов

(

(

Чувствительность к классическому фагу

(

(

Чувствительность к фагу «Эль-Тор»

(

(



ЗАНЯТИЕ № 10
Тема: Бактериальные пищевые отравления

Актуальность темы занятия
Бактериальные пищевые отравления различны по механизму их возникновения. Меньший удельный вес занимают токсикозы, вызываемые энтеротоксинами стафилококков и палочкой ботулизма. Эти токсины вызывают определенный симптомокомплекс. Наиболее часто пищевые отравления развиваются по типу токсикоинфекций, причем этиологический состав микробов многообразен. Выяснение причины бактериальных отравлений, их эпидемиологический анализ невозможен без микробиологических исследований. Только микробиологические исследования позволяют установить этиологию отравления, источник инфекции и предупредить пути повторных заражений.
Вопросы для подготовки
Пищевые отравления, классификация.
Пищевые токсикозы, патогенез, эпидемиология, методы диагностики.
Ботулизм, общая характеристика возбудителя, факторы патогенности, патогенез заболевания, специфическая терапия и профилактика.
Стафилококки – возбудители пищевых токсикозов, характеристика возбудителя, факторы патогенности (энтеротоксин), патогенез, особенности установления этиологической роли стафилококка при пищевых токсикозах.
Пищевые токсикоинфекции, этиология, патогенез и эпидемиология, методы микробиологической диагностики.
Салмонеллы – возбудители пищевых токсикоинфекций, общая характеристика, микробиологическая диагностика.
Установление этиологической роли условно-патогенных бактерий при пищевых токсикоинфекциях с помощью эпидемиологических маркеров.

Практическая работа

Задание № 1
Определить обсемененность эшерихиями 2-х пищевых продуктов, послуживших возможной причиной отравления. Картофельное пюре и котлеты петлей засеяны на среду Эндо в разведениях 10_6, 10_7, 10_8 по 0,1 мл. Отметить способность выросших колоний ферментировать лактозу. Результаты занести в таблицу.

Продукты
Разведения 10_6, 10_7, 10_8
Характер колоний

1. Картофельное пюре



2. Котлеты




Установить идентичность 2-х штаммов эшерихий, выделенных из пищевого продукта и рвотных масс больного.
Для этого сравнить чувствительность к колицинам и антибиотикограммы этих штаммов. Результаты занести в таблицу и сделать заключение.

Эшерихии
Маркеры идентичности


Антибиотики
Колицины

1. Из продукта















2. Из рвотных масс

















«+» – наличие чувствительности (зона задержки роста);
«–» – отсутствие чувствительности (рост бактерий).


Заключение. Из _________________ выделена _____________ в разведении ___________
идентична (или не идентична) штамму ________, выделенному из рвотных масс больного.
Задание № 2
Больному М. поставили клинический диагноз: «Сальмонеллез». Фекалии больного засеяны на среду Плоскирева. Провести бактериологическое исследование фекалий. Расписать исследование по дням, используя готовые демонстрационные посевы. Учесть реакцию агглютинации на стекле, поставленную с диагностическими сальмонеллезными сыворотками по следующей схеме:
- с комплексной сальмонеллезной сывороткой;
- с групповыми монорецепторными О-сыворотками – О-2, О-4, О-9;
- с монорецепторными типовыми Н-сыворотками – Нi, Нr, Нgm.
Все полученные результаты внести в таблицу и сделать заключение.


Окраска по Граму
Рост на среде Плоскирева
Углеводы
Агглютинация



глюкоза
лактоза
О2
О4
О9
Нi
Нr
Нgm


Задание № 3
У больного с подозрением на пищевую токсикоинфекцию из рвотных масс выделена кишечная палочка. Подозрительных продуктов не сохранилось. На 3 и 10 день болезни взята сыворотка больного и поставлена реакция агглютинации с диагностикумом, приготовленным из аутоштамма. Учесть реакцию агглютинации. Данные занести в таблицу.

3 день
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
К.сыв.
К.Аг

10 день










«+» – наличие агглютинации; «–» – отсутствие агглютинации.
Определить титры сывороток и сделать заключение.
Задание № 4
С выделенными из патологического материала, полученного от больных, стафилококками поставлена реакция преципитации в агаре с антиэнтеротоксической стафилококковой диагностической сывороткой. Определить энтеротоксигенные штаммы стафилококков, сравнивая исследуемые культуры с контрольными (заведомо токсигенными).
Задание № 5
Индикация и идентификация ботулинического токсина.
Индикация и идентификация ботулинического токсина в пищевом продукте проводится в реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой с учетом по биопробе. Схема постановки эксперимента и результаты внесены в таблицу. Учесть результаты и сделать заключение.
МЫШИ
Ингредиенты
1
2
3
4
5
6
7

1.Экстракт пищевого продукта
+
+
+
+
+
+
+

2.Смесь антитоксических противоботулинических сывороток
-
+
-
-
-
-
-

3.сыворотка типа А
-
-
+
-
-
-
-

4.сыворотка типа В
-
-
-
+
-
-
-

5.cыворотка типа С
-
-
-
-
+
-
-

6.сыворотка типа Е
-
-
-
-
-
+
-

7.сыворотка типа F
-
-
-
-
-
-
+

Результат
Поги-
бла
Жива
Поги-
бла
Жива
Поги-
бла
Поги-
бла
Поги-
бла


Вывод.

Задание № 6
Изучить биопрепараты, используемые для специфической профилактики, лечения и диагностики пищевых отравлений. Данные занести в таблицу (см. предыдущее занятие).

ЗАНЯТИЕ № 11
Тема: Контрольное занятие по кишечным инфекциям
и зоонозам

Вопросы для подготовки
Энтеробактерии, их классификация, общая характеристика семейства, антигенная структура, экология.
Эшерихии, классификация, их роль как нормального обитателя кишечника в жизнедеятельности организма человека. Банальная кишечная палочка как условно-патогенный микроорганизм, роль в патологии человека.
Диареегенные кишечные палочки – возбудители колиэнтеритов, дизентериеподобных и холероподобных заболеваний. Их биологические свойства, факторы патогенности, антигенная структура. Патогенез и эпидемиология, лабораторная диагностика, профилактика кишечных инфекций, вызванных диареегенными штаммами кишечной палочки.
Сальмонеллы, их классификация, антигенная структура по Кауфману-Уайту. Роль в инфекционной патологии человека. Возбудители брюшного тифа и паратифов, характеристика биологических свойств, факторы патогенности, патогенез и эпидемиология брюшного тифа. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Сальмонеллы – возбудители пищевых токсикоинфекций, возбудители внутрибольничных инфекций. Наиболее часто встречающиеся представители, классификация, биологические свойства, антигенная структура, патогенез, лабораторная диагностика, профилактика.
Шигеллы, классификация, характеристика возбудителей, антигенная структура и факторы патогенности. Эпидемиология и патогенез дизентерии, лабораторная диагностика (острой и хронической форм), специфическая профилактика и терапия.
Вибрионы, возбудители холеры, их классификация, биологические свойства, антигенная структура, факторы патогенности. Эпидемиология и патогенез холеры, иммунитет при холере. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Кампилобактерии, история открытия, классификация, характеристика возбудителей, вызываемые заболевания. Эпидемиология и патогенез, лабораторная диагностика.
Пищевые отравления, их классификация. Общее представление о пищевых бактериальных интоксикациях и токсикоинфекциях. Этиология, патогенез, лабораторная диагностика.
Пищевые бактериальные интоксикации стафилококковой природы. Характеристика возбудителя, энтеротоксины, патогенез, лабораторная диагностика. Профилактика.
Клостридии ботулизма, классификация, характеристика биологических свойств, ботулотоксины. Эпидемиология и патогенез, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия ботулизма.
Пищевые бактериальные токсикоинфекции, вызванные эшерихиями и анаэробами. Характеристика возбудителей. Эпидемиология и патогенез, лабораторная диагностика, профилактика.
Зоонозы, общее представление, значение зоонозов в патологии человека. Источники инфекции и механизмы передачи, этиология. Профессиональный характер и природная очаговость заболеваний. Общая и специфическая профилактика.
Иерсиниозы, возбудитель чумы, псевдотуберкулеза и иерсиниозного энтероколита, их биологические свойства, дифференциальная диагностика. Эпидемиология и патогенез чумы, псевдотуберкулеза и энтероколита, лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Бруцеллы. Классификация. Виды и свойства бруцелл, факторы патогенности. Эпидемиология и патогенез, иммунитет при бруцеллезе. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Возбудитель туляремии, классификация, общая характеристика, факторы патогенности. Эпидемиология и патогенез туляремии. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Возбудитель сибирской язвы, классификация, общая характеристика, факторы патогенности. Эпидемиология и патогенез, лабораторная диагностика различных форм сибирской язвы, специфическая профилактика.

ЗАНЯТИЕ № 12
Тема: Вирусы, их природа и классификация. Методы культивирования, титрования и обнаружения
их в патологическом материале

Актуальность темы занятия
Вирусные заболевания являются преобладающими в общей инфекционной патологии. Кроме того, некоторые вирусы являются причиной опухолей. Абсолютный внутриклеточный паразитизм, способность к интегративному взаимодействию с клеткой и длительному персистированию в организме, отличают вирусы от других инфекционных агентов.
Методы исследования при диагностике вирусных заболеваний преследуют те же цели, что и при бактериальных инфекциях, однако в связи с особенностями биологии вирусов имеют свою специфику.
Неспособность вирусов размножаться вне живой клетки полностью исключает использование для культивирования искусственных питательных сред и требует применения культур тканей, лабораторных животных или куриных эмбрионов.
Вопросы для подготовки
Основные свойства вирусов.
Критерии живой природы вирусов.
Морфология и структура вирусов, роль отдельных компонентов вириона.
Классификация вирусов, ее критерии.
Типы взаимодействия вирусов с клеткой: продуктивный, абортивный, интегративный.
Этапы вирусной репродукции при продуктивной инфекции.
Методы культивирования вирусов (в культуре ткани, в курином эмбрионе, в организме чувствительных лабораторных животных).
Индикация вирусов при разных методах культивирования: в курином эмбрионе, в культуре ткани, в организме чувствительных лабораторных животных.
Реакции гемагглютинации и гемадсорбции вирусов, их механизмы.
Методы идентификации вирусов на виды и типы.
Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций: вирусоскопический, вирусологический, иммунологические. Генетические методы диагностики вирусных инфекций.
Особенности вирусных инфекций и противовирусного иммунитета.

Практическая работа
Задание № 1
Поставить реакцию гемагглютинации с аллантоисной жидкостью, полученной после заражения куриного эмбриона патологическим материалом больного.
Техника постановки реакции.
Каплю вируссодержащего материала нанести на предметное стекло, добавить каплю 0,5 % взвеси эритроцитов курицы, перемешать. При наличии вируса в течение ближайших 5 минут наблюдается агглютинация эритроцитов.
1. Какой применен метод диагностики?
2. Каков механизм реакции?
3. О чем говорит результат реакции?
4 . Закончено ли исследование?
5. Что нужно предпринять дальше?
Задание № 2
Определить титр вируса в аллантоисной жидкости с помощью реакции гемагглютинации. Назвать метод диагностики. Составить таблицу, результаты титрования вируса внести в таблицу, сделать вывод.
Что называется титром вируса в реакции гемагглютинации?
Какой это метод диагностики?
Закончено ли исследование?
Что нужно предпринять дальше?

Исследуемая
аллантоисная
Разведение вируссодержащего материала

Контроль
эритроцитов

жидкость
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9


№ 1











№ 2













«+» – наличие гемагглютинации; «–» – отсутствие гемагглютинации.

Задание № 3
Идентифицировать вирус в реакции торможения гемагглютинации.
1. Какой использован метод диагностики?
2. Компоненты РТГА.
3. Какие необходимы диагностические препараты для идентификации вируса?
4. Закончено ли исследование?
Задание № 4
Провести индикацию вируса в культуре ткани, зараженной патологическим материалом, по цветной пробе. Материал получен от больных А. и С.
1. Какой использован метод диагностики?
2. Что можно сказать по результатам реакции?
3. Закончено ли исследование?
4. Что еще нужно предпринять?
Задание № 5
Определить титр вируса в культуре ткани, зараженной патологическим материалом больного, по цветной пробе. Назвать метод диагностики. Составить таблицу и результаты реакции занести в таблицу, сделать вывод.
Что называется титром вируса при титровании его в культуре ткани по цветной пробе?

Материал
от больного
Разведения вируссодержащего материала
Контроль
культуры


10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9
ткани

№ 1











№ 2












Задание № 6
Провести идентификацию вируса в реакции нейтрализации с учетом по цветной пробе.
1. Какой применен метод диагностики?
2. Какие биопрепараты используются для постановки этой реакции?
3. Закончено ли исследование?
Задание 7
Обнаружить вирус в культуре ткани, зараженной патологическим материалом, с помощью реакции гемадсорбции. Препарат зарисовать.
1. Назвать метод диагностики, сделать вывод.
2. Закончено ли исследование?
Задание № 8
Обнаружить вирус в культуре ткани по ЦПД. Промикроскопировать препарат культуры ткани, зараженный патологическим материалом, сравнить с контролем. Препарат зарисовать.
Назвать метод диагностики.
Сделать вывод об обнаружении вируса.
Закончено ли исследование?

ЗАНЯТИЕ № 13
Тема: Микробиология заболеваний, вызванных орто-,
парамиксовирусами, аденовирусами

Актуальность темы занятия
Возбудителями острых респираторных инфекций являются многие вирусы: прежде всего вирусы гриппа А, В, С, парагриппозные вирусы (4 типа), респираторно-сентициальный вирус (РС), риновирусы (более 100 типов), реовирусы (3 типа), коронавирусы (3 типа), отдельные энтеровирусы, а также респираторные аденовирусы. Все эти вирусы вызывают ОРВИ, трудно различимые между собой из-за сходства клинической симптоматики. Точная диагностика возможна лишь с помощью лабораторных методов диагностики.
ОРВИ характеризуются зимне-весенней сезонностью. По своей массивности суммарная пораженность детского населения ОРВИ не гриппозной этиологии значительно превышает цифры заболеваемости гриппом.

Вопросы для подготовки
Классификация и общая характеристика вирусов семейства Orthomyxoviridae.
Особенности строения и антигенного состава вирусов гриппа.
Изменчивость вирусов гриппа (шифт и дрейф).
Методы микробиологической диагностики гриппа (вирусоскопический, вирусологический, серологический).
Классификация и общая характеристика вирусов семейства Paramyxoviridae.
Патогенез кори, методы микробиологической диагностики.
Эпидемический паротит, характеристика возбудителя, патогенез заболевания и методы диагностики.
Характеристика вирусов семейства Adenoviridae, патогенез аденовирусных инфекций, методы диагностики.
Специфическая профилактика и терапия гриппа, кори, паротита: биопрепараты, их действующее начало, механизм действия.

Практическая работа
Задание № 1
Поставить реакцию гемагглютинации (РГА) с аллантоисной жидкостью на стекле с целью индикации вируса в патологическом материале от больного.
Техника постановки реакции
Каплю аллантоисной жидкости нанести на предметное стекло, добавить одну каплю 0,5 % взвеси эритроцитов курицы, перемешать. При наличии вирусов в течение 5 минут наблюдается агглютинация эритроцитов.
Задание № 2
Учесть реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) для определения вида вируса.
Какой метод диагностики?
Какой вирус обнаружен в РТГА?
С какой целью поставлены контроли?
Закончено ли исследование?
Реакция поставлена по схеме

Ингредиенты (мл)
Опыт 1
Опыт 2
К. вируса
К. эритр.
К. сыв.А
К. сыв.В

Аллантоисная жидкость
Противогриппозная
сыворотка типа А
сыворотка типа В
Физиологический р-р
0,2


0,2


0,2



0,2

0,2





0,2






0,4



0,2


0,2




0,2

0,2

Инкубация в термостате 15 минут

2 % взвесь эритроцитов курицы
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4

Инкубация в термостате 15 минут

Результаты









«+» – наличие гемагглютинации; «–» – отсутствие гемагглютинации.
Задание № 3
Учесть демонстрационный вариант РТГА.
Определить наличие и количество антител в парных сыворотках больного с клиническим диагнозом «Грипп».


№ пробирок
1
2
3
4
5
6
7


Разведения сывороток
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
Контроль

3 день









10 день










«+» – гемагглютинация; «–» – задержка гемагглютинации.
Титром сыворотки называется...
Какой метод диагностики?
Зачем исследовались парные сыворотки больного?
Какова природа выявленных антител?
Вывод.


Задание № 4
Провести идентификацию аденовирусов в культуральной жидкости, полученной при заражении культуры ткани материалом от больных. С культуральной жидкостью поставлена РСК.
Какой метод диагностики?
Какой антиген аденовирусов определили в РСК?
Можно ли определить тип вируса?
Закончено ли исследование?

Схема постановки РСК

Ингредиенты
1 опыт
2 опыт
К. сыв.
К.вирусосод..мат.б-го С
К.вируссод.мат.б-го М.

Аденовирусная сыворотка
0,25
0,25
0,25



Вируссод.мат.б-го С
0,25
-
-
0,25
-

Вируссод.мат.б-го М
-
0,25
-
-
0,25

Комплемент
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25

Физиологический р-р
-
-
0,25
0,25
0,25

Инкубация в термостате 30 минут

Гемолитическая система
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5

Результаты:







Задание № 5
Изучить биопрепараты, используемые для специфической профилактики, лечения и диагностики респираторных вирусных инфекций. Данные внести в таблицу:


Название
Действующее начало
Механизм действия
Назначение











ЗАНЯТИЕ № 14
Тема: Микробиология заболеваний, вызванных
пикорна- и поксвирусами. Вирусы гепатитов А, В, С, Д, Е

Актуальность темы занятия
Пикорнавирусы, являющиеся возбудителями обширной группы вирусных инфекций, включают в себя возбудителей полиомиелита, энтеровирусных заболеваний (вирусы Коксаки и Экхо, гепатита А) и риновирусных инфекций. Эти вирусы вызывают разнообразные поражения человеческого организма, а полиомиелит является калечащей инфекцией. Необходимость изучения этих инфекций диктуется их значительным удельным весом в структуре инфекционной патологии, а также тем, что вопросы их диагностики и особенно профилактики является важным звеном здравоохранения.
Основной представитель группы поксвирусов – вирус оспы, продолжает оставаться предметом изучения, несмотря на то, что 1982 год является годом ликвидации оспы. Это объясняется тем, что группа поксвирусов имеет целый ряд родственных вирусу оспы представителей, а вопросы изменчивости вируса являются пока нерешенной проблемой и не исключено, что в экологии вирусов этой группы место вируса натуральной оспы занимает один из родственных представителей поксвирусов.

Вопросы для подготовки
Классификация и общая характеристика семейства пикорнавирусов, распространение в природе.
Энтеровирусы (полиомиелит, Коксаки, Экхо, гепатит А): основные свойства, вызываемые заболевания, их патогенез и пути инфицирования человека. Методы лабораторной диагностики – вирусологичекий и иммунологические. Диагностические биопрепараты.
Специфическая профилактика и терапия полиомиелита: биопрепараты, их состав, механизм действия. Контроль эффективности вакцинации.
Риновирусы, свойства, вызываемые заболевания, лабораторная диагностика.
Поксвирусы, их классификация и общая характеристика. Лабораторная диагностика натуральной оспы, специфическая профилактика.
Вирусные гепатиты: А, В, С, Д, Е. Их классификация, характеристика и патогенез. Методы диагностики и специфической профилактики гепатитов А, В и С.

Практическая работа
Задание № 1
У ребенка 3 лет с клиническим диагнозом «Полиомиелит» взяты на исследование фекалии, засеяны на культуру ткани, проведена идентификация вируса. Учесть результаты.
Какой использован метод диагностики?
С какой целью исследуются фекалии больного?
Обнаружен ли вирус в культуре ткани?
Каким способом обнаруживается вирус?
Какая реакция и какой метод ее учета использованы при идентификации вируса?
Закончено ли исследование?
Сделать заключение.
Задание № 2
С сыворотками детей, привитых от полиомиелита, 3 недели спустя поставлена реакция нейтрализации с комплексным антигеном вируса полиомиелита. Учесть результаты реакции. Диагностический титр 1:8.
Какой метод исследования использован?
С какой целью исследованы сыворотки?
Эффективна ли проведенная вакцинация?
Сделать заключение.
Задание № 3
У больных А. и К. с подозрением на энтеровирусную инфекцию взяты парные сыворотки и поставлена реакция нейтрализации с антигенами вирусов Коксаки. Учесть результаты реакции.
Какой применен метод диагностики?
Зачем исследуют парные сыворотки?
Подтверждается ли у этих больных энтеровирусная инфекция?
Сделать заключение.
Задание № 4
В населенном пункте К. возникла вспышка заболеваний у взрослых и детей, использовавших для питья сырую воду. Продромальный период напоминал гриппоподобные заболевания, затем развились симптомы, характерные для желудочно-кишечных инфекций, моча стала темной, а кал светлый. Возникло подозрение, что вспышка вызвана вирусом гепатита А. С сыворотками трех заболевших поставлена ИФА для обнаружения Ig M к вирусу гепатита А. Учесть результаты реакции.
Какой использован метод диагностики?
Какова методика постановки ИФА на поиск антител?
Почему ищем Ig M?
Закончено ли исследование, и подтверждается ли подозрение на гепатитА?
Сделать заключение.
Задание № 5
В инфекционную клинику поступили больные В. и Д. с подозрением на вирусный гепатит В. С сыворотками крови этих больных поставлена ИФА для выявления HBs Ag и HBe Ag. Учесть эту реакцию и сделать заключение.
Какой метод диагностики использован?
Какие биопрепараты используются для постановки ИФА?
Как трактовать полученные результаты?
Сделать заключение.
Задание № 6
Изучить биопрепараты, используемые для профилактики, лечения и диагностики полиомиелита, вирусных гепатитов. Данные оформить в таблицу:


Название
Активное начало
Механизм действия
Назначение









ЗАНЯТИЕ № 15
Тема: Микробиология заболеваний, вызываемых
арбо-, рабдо- и герпесвирусами

Актуальность темы
Значение арбовирусов в патологии человека огромно: около 100 видов являются возбудителями различных заболеваний. Все арбовирусы передаются человеку при укусе членистоногих. Для арбовирусов характерна природная очаговость, вирус циркулирует между членистоногими и позвоночными. В Алтайском крае также имеются природные очаги этой инфекции и будущие врачи должны уметь решать вопросы лечения, диагностики и профилактики арбовирусных инфекций.
Вирусы бешенства также широко распространены в природе, причем актуальность изучения этой инфекции, вопросы ее эпидемиологии и профилактики в последние десятилетия не только не снижаются, но и возрастают.

Вопросы для подготовки
Тогавирусы: классификация, общая характеристика семейства, вызываемые заболевания.
Арбовирусы из семейства флавивирусов, их экология, эпидемиология и патогенез вызываемых заболеваний, общая характеристика, распространение в природе, патогенез клещевого энцефалита.
Методы микробиологической диагностики клещевого энцефалита: вирусологический и иммунологические. Диагностические биопрепараты.
Специфическая профилактика и терапия клещевого энцефалита: биопрепараты, их действующее начало, механизм действия.
Рабдовирусы, классификация, общая характеристика, распространение в природе.
Бешенство как зоонозная инфекция, эпидемиология и патогенез бешенства. Методы микробиологической диагностики: вирусоскопический, вирусологический, иммунологические, биологический.
Специфическая профилактика бешенства: антирабические вакцины типа Ферми и культуральная. История создания вакцины против бешенства Пастером, фиксированный и уличный вирус бешенства. Механизм действия вакцин.
Антирабический гамма-глобулин. Получение, показания к применению.
Семейство герпесвирусов, их классификация, патогенные для человека виды, общая характеристика, патогенез и эпидемиология герпесвирусной инфекции, методы микробиологической диагностики, специфическая профилактика герпетической инфекции.

Практическая работа
Задание № 1
У трех больных А., В., С. при подозрении на клещевой энцефалит в острый период инфекции на исследование взяли кровь, ею заразили мышей в мозг. Спустя 4 дня с мозгом заболевших мышей поставили реакцию гемагглютинации, которая оказалась положительной. После этого с мозгом мыши и сыворотками против клещевого энцефалита поставлена РСК. Учесть реакцию.
Какой использован метод диагностики?
Что искали в реакции гемагглютинации?
С какой целью поставлена РСК?
О чем говорят результаты РСК?
Сделайте заключение и оформите протокол.
Задание № 2
У больных М. и К., с подозрением на клещевой энцефалит выделить возбудителя не удалось. С сыворотками, взятыми у больных на 4 и 12 день болезни поставлена РСК. Оцените результаты реакции, сделайте выводы.
Какой использован метод диагностики?
Что выявляли в сыворотках больных в РСК?
Зачем исследовали парные сыворотки больных?
Можно ли на основании полученных результатов подтвердить диагноз?
Задание № 3
У больных Л. и С., с подозрением на клещевой энцефалит на 13 день болезни взяты на исследование сыворотки и проведен ИФА по схеме:
1) антиген вируса клещевого энцефалита в лунке;
2) сыворотка больного;
3) антиглобулин М к человеческому белку, меченный пероксидазой хрена;
4) субстрат для пероксидазы, дающий при разложении желто-коричневое окрашивание.
Оцените результаты реакции, сделайте выводы. Диагностический титр- больше 1:1000.
Какой применен метод диагностики?
Что определяли в сыворотках больных?
Какова роль иммуноглобулина М?
Можно ли на основании полученных результатов подтвердить диагноз?

Задание № 4
У ребенка с подозрением на цитомегаловирусную инфекцию на исследование взята моча. С центрифугатом мочи поставлена реакция по схеме в такой последовательности:
сыворотка к цитомегаловирусу в лунке;
центрифугат мочи;
сыворотка к цитомегаловирусу, меченная пероксидазой хрена;
субстрат к пероксидазе, который при разложении дает желто-коричневое окрашивание.
Определить:
Какой применен метод диагностики?
Что определяли в центрифугате мочи?
Можно ли на основании полученных результатов подтвердить диагноз?
Задание № 5
Изучить биопрепараты, используемые для специфической профилактики, лечения и диагностики клещевого энцефалита, бешенства и герпетической инфекции. Полученные данные внести в таблицу:


Название
Активное
начало
Механизм
действия
Назначение









ЗАНЯТИЕ № 16
Тема: Контрольное занятие по вирусологии

Вопросы для подготовки
Определение вирусов как особых форм организации живого. Принципы классификации и таксономии вирусов. Морфология и структура вирусов. Понятие о вирионе. Типы симметрии нуклеокапсида. Химический состав вирусов.
Размножение вирусов. Основные стадии взаимодействия вирусов с клеткой хозяина при продуктивном типе инфекции. Особенности репродукции ДНК- и РНК-содержащих вирусов. Типы взаимодействия вируса с клеткой: автономный и интегративный.
Методы культивирования вирусов. Методы индикации вирусов при различный способах культивирования. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций: микроскопический, вирусологический, иммунологические, генетические.
Поксвирусы: вирус натуральной оспы и осповакцины. Характеристика биологических свойств, патогенез оспы, специфическая профилактика.
Герпесвирусы, их классификация. Виды герпесвирусов, патогенных для человека. Характеристика биологических свойств, патогенез герпесвирусной инфекции. Онкогенные функции генома герпесвирусов. Специфическая профилактика.
Аденовирусы, общая характеристика и классификация. Патогенез заболевания, онкогенные типы. Лабораторная диагностика.
Вирусы – возбудители острых респираторных заболеваний. Парамиксовирусы, свойства, вызываемые заболевания. Характеристика вирусов парагриппа, паротита и кори. Патогенез этих инфекций, лабораторная диагностика, специфическая профилактика кори и паротита.
Вирусы гриппа, классификация, характеристика биологических свойств, антигены вирусов гриппа, изменчивость (дрейф и шифт). Патогенез и эпидемиология гриппа, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия гриппа.
Пикорнавирусы, классификация, характеристика вирусов полиомиелита, Коксаки и Экхо. Патогенез и эпидемиология заболеваний, лабораторная диагностика, специфическая профилактика полиомиелита.
Вирусы гепатитов А, В, С, Д, Е. Характеристика вирусов, классификация. Патогенез и эпидемиология гепатитов (источники и пути передачи, группы риска, проблема носительства). Исходы гепатита. Лабораторная диагностика гепатитов. Проблемы специфической профилактики. Современные вакцины против гепатита А и В.
Реовирусы, основные свойства, классификация, значение в патологии человека. Роль ротавирусов в кишечной патологии взрослых и детей. Патогенез заболеваний. Лабораторная диагностика.
Тогавирусы, общая характеристика, классификация. Патогенные для человека вирусы (альфавирусы и рубивирусы), вызываемые заболевания. Вирус краснухи, патогенез, последствия заболеваемости у беременных женщин, лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Группа арбовирусов, общая характеристика, этиология, патогенез и эпидемиология арбовирусных инфекций, природная очаговость, переносчики. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Флавивирусы, общая характеристика, основные представители, вызывающие заболевания у человека: вирусы желтой лихорадки, лихорадки денге, японского энцефалита, клещевого энцефалита, омской геморрагической лихорадки. Природная очаговость, переносчики. Патогенез и эпидемиология этих заболеваний, лабораторная диагностика, специфическая профилактика.
Буньявирусы, общая характеристика. Вирус геморрагической лихорадки с почечным синдромом (Хантавирус). Патогенез заболевания, лабораторная диагностика.
Вирус бешенства, классификация, характеристика вируса. Патогенез и эпидемиология бешенства, внутриклеточные включения. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика, фиксированный вирус бешенства.
Ретровирусы, история открытия, классификация, общая характеристика ретровирусов, роль в патологии человека. Особенности взаимодействия с клеткой, механизмы репликации вирусов.
Вирусы группы ВИЧ. История открытия, общая характеристика вирусов, патогенез и эпидемиология СПИДа (источники инфекции, пути передачи, группы риска, динамика заболеваемости). Клиника, иммунитет, лабораторная диагностика, проблемы профилактики, специфическая профилактика.
Медленные вирусные инфекции, история открытия, основные свойства медленных вирусных инфекций. Возбудители, механизмы развития медленных инфекций, патогенез и эпидемиология, характеристика заболеваний. Прионы, их свойства, роль в развитии медленных инфекций.
Онкогенные РНК-содержащие вирусы из семейства ретровирусов. Морфология и классификация. Роль в канцерогенезе человека и животных, эндогенные ретровирусы.
Онкогенные ДНК-вирусы. Общая характеристика, классификация. Вирусогенетическая теория возникновения опухолей Л.А. Зильбера. Современная теория канцерогенеза, онкогены, протоонкогены.

ЗАНЯТИЕ № 17
Итоговое тестирование и сдача практических навыков


ЗАНЯТИЕ № 18
Тема: Семинар по нормальной микрофлоре
организма человека


Вопросы для подготовки
Нормальная микрофлора организма человека, резидентная и транзиторная микрофлора
Функции нормальной микрофлоры
Становление микрофлоры кишечника новорожденных
Микрофлора кожи, участки колонизации, основные представители
Микрофлора полости рта, верхних дыхательных путей
Микрофлора урогенитального тракта мужчин и женщин
Микрофлора ЖКТ, основные представители
Дисбактериоз, условия и причины его возникновения. Стадии дисбактериоза кишечника. Лабораторная диагностика. Лечение и профилактика.


ЗАНЯТИЕ № 19
Тема: Санитарная микробиология

Актуальность темы занятия
Объекты внешней среды являются факторами передачи многих инфекционных заболеваний. Одна из основных задач санитарно-микробиологических исследований – оценка потенциальной опасности объекта внешней среды для здоровья человека.
Врач любой специальности должен знать, какие объекты внешней среды подлежат санитарно-микробиологическим исследованиям, знать основные группы санитарно-показательных микроорганизмов, ориентироваться в методах санитарно-микробиологических исследований, должен уметь правильно оценить результаты этих исследований.

Вопросы для подготовки
Основные задачи и принципы санитарно-микробиологических исследований.
Методы обнаружения патогенных микроорганизмов во внешней среде: прямые и косвенные.
Общее микробное число (ОМЧ): определение, методика определения ОМЧ, единицы измерения.
Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ): определение, титр и индекс СПМ.
Требования, предъявляемые к СПМ. Основные группы СПМ: показатели фекального загрязнения, показатели воздушно-капельного загрязнения, показатели загрязнения разлагающимися отбросами, показатели порчи пищевых продуктов, показатели промышленного загрязнения.
Микрофлора воздуха: резидентная и транзиторная; микрофлора воздуха атмосферного и воздуха закрытых помещений. Роль воздушной среды в распространении инфекционных заболеваний. Методы, направленные на снижение микробной контаминации воздуха закрытых помещений. СПМ воздуха, характеристика, необходимость их выявления.
Методы исследования воздуха: седиментационный и аспирационный, характеристика методов, достоинства и недостатки.
Санитарно-микробиологические показатели качества воздуха: ОМЧ, содержание золотистого стафилококка и грибов. Нормативы для лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ).
Микрофлора воды: автохтонная и аллохтонная. Факторы, влияющие на качественный и количественный состав микрофлоры воды. Роль воды в распространении инфекционных заболеваний. СПМ воды, характеристика, необходимость их выявления.
Санитарно-микробиологические показатели качества воды питьевой: ОМЧ, общие колиформные бактерии (ОКБ), термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ), сульфитредуцирующие клостридии (СРК), коли-фаги, наличие патогенных микроорганизмов, методы их выявления. Нормативы для воды питьевой.
Микрофлора почвы: резидентная и транзиторная. Факторы, влияющие на качественный и количественный состав микрофлоры почвы. Роль почвы в распространении инфекционных заболеваний. Индикаторные микроорганизмы для оценки санитарного состояния почвы: бактерии группы кишечных палочек (БГКП), энтерококки, Clostridium perfringens, термофильные бактерии, нитрифицирующие бактерии.
Исследования бактериального загрязнения поверхностей в лечебно-профилактических учреждениях, детских учреждениях, предприятиях пищевой промышленности: цель и объекты исследований. Методы исследования поверхностей: контактные методы и метод смывов.
Исследование смывов с рук, инвентаря, оборудования. Санитарно-микробиологические требования.
Микрофлора пищевых продуктов: специфическая и неспецифическая. Факторы, влияющие на качественный и количественный состав микрофлоры продуктов. Особенность продуктов как объектов санитарно-микробиологических исследований. Роль продуктов в возникновении инфекционных заболеваний.
Санитарно-микробиологические показатели качества пищевых продуктов: количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (МАФАнМ), титры бактерий группы кишечных палочек (БГКП), наличие сальмонелл, условно-патогенных бактерий (E. coli, St. aureus, Bac. cereus), СРК, дрожжей и грибов. Характеристика и методы их выявления.

Практическая работа
Задание №1. Санитарно-бактериологическое исследование воздуха.
См. приложения № 1, 2, 5, 6, 10, 11.
Провести санитарно-микробиологическое исследование воздуха процедурной аспирационным методом до начала работы (задание 1А) и после работы (задание 1Б).
При исследовании воздуха с помощью аппарата ПУ-1Б для определения ОМЧ прокачали 100 л воздуха, для выявления стафилококков и грибов - по 250 л. Произвести расчёт микроорганизмов в 1 кубометре воздуха.

Цель исследования (указать).
Определяемые показатели: (указать).
Метод исследования: (указать).
Использованные питательные среды: (указать).
Вопросы к заданию №1.
Какой метод выявления патогенных микроорганизмов был использован?
Какие СПМ были обнаружены в воздухе?
Укажите возможные источники контаминации воздуха.
Проанализируйте полученные результаты, соответствуют ли они существующим санитарно-микробиологическим требованиям?
Какие могут быть последствия?

Задание №2. Санитарно-бактериологическое исследование воды.
Санитарно-микробиологическое исследование воды питьевой.
См. приложения № 3, 4, 5, 6, 10, 11.

Цель: оценка качества и эпидемиологической безопасности воды питьевой.
Отбор проб воды питьевой. Пробы воды из водопроводной сети отбирают в стерильные флаконы ёмкостью более 500 мл с притёртыми пробками. Сверху пробки должны быть закрыты бумажным колпаком. Если предполагается отбор проб хлорированной воды, то до стерилизации во флакон помещают дехлоратор – 10 мг серноватистокислого натрия на 500 мл воды. Отбор проб проводится в период максимального расхода воды следующим образом:
кран обжигают на пламени тампона, смоченного спиртом;
снимают пробку вместе с бумажным колпаком, не касаясь пробки руками;
спускают воду 10-15 мин. при полностью открытом кране;
заполняют флакон водой с таким расчётом, чтобы не замочить пробку, объём пробы – 500 мл;
закрывают флакон стерильной пробкой с бумажным колпаком, маркируют флакон;
составляют сопроводительный документ, в котором должно быть указано точное место расположения крана, дата и время отбора пробы; особые обстоятельства (состояние водопроводной сети и т. д.); цель исследования: текущий санитарный надзор или особые показания (неблагоприятная эпидемическая ситуация, жалобы населения и т. д.); должность, место работы, фамилия, имя, отчество лица, проводившего отбор пробы.
Определяемые показатели (указать)
Ход исследования согласно МУК 4.2.1018-01.
1. Определение числа сапрофитных микроорганизмов:
1-й день: посев по 1 мл разведений исследуемой воды (10-1, 10-2) в расплавленный агар по Коху (по 2 чашки каждого разведения). Инкубация 24 часа при 37 0С и 48 часов при 20 - 22 0С.
2-й и 3-й дни: подсчет числа выросших колоний:

Количество колоний на чашке с посевом разведения воды
Количество
сапрофитов
в 1 мл (КОЕ/мл)

10-1
10-2







2. Определение ОКБ.
Определение ОКБ методом мембранных фильтров (основной метод):
1-й этап: фильтрация через фильтр №3 исследуемый объем воды. Фильтр помещают на среду Эндо. Инкубация при 37 0С 24 часа;
2 - 3-й этапы: подсчет числа выросших на фильтре колоний каждого типа и постановка дополнительных тестов для их идентификации:

Тесты
Типы колоний


1-го типа
2-го типа

1. Культуральные свойства
2. Количество колоний
3. Дополнительные тесты:
а). Мазок по Граму
б). Проба на оксидазу
в). Рост на среде с лактозой и индикатором ВР
4. Вывод о принадлежности данных колоний к ОКБ (да, нет)
5. Посев на ЛПС при 44,5 0С
6. Наличие газообразования на ЛПС при 44,5 0С
7. Вывод о принадлежности колоний данного типа к ТКБ (да, нет)




Вывод: ОКБ, ТКБ (обнаружены, не обнаружены).
3. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий
Определение методом прямого посева
Пробу воды 20 мл (две пробирки по 10 мл) прогревают на водяной бане в пробирках при температуре 75 оС в течение 15 мин. для исключения вегетативных форм (при исследовании хлорированной воды прогревание проб можно не производить). Посевы заливают горячим железо-сульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Посевы быстро охлаждают и инкубируют при 44 оС в течение 16-18 часов. Подсчитывают черные колонии, выросшие в толще питательной среды.
Результат анализа выражают в КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
Учет результатов.
Вывод: рост сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды (обнаружен, не обнаружен)
4. Определение колифагов.
Используемые методы: титрационный.
Наиболее часто содержание колифагов в питьевой воде определяют титрационным методом, включающим предварительное подращивание их в среде обогащения с культурой Escherichia coli и последующим выявлением на питательном агаре бляшек колифага на газоне кишечной палочки.
Вывод: количество бляшкообразующих единиц (БОЕ) фагов кишечных палочек в 100 мл воды (указать).
5. Обнаружение бактерий родов сальмонелла и шигелла.
Посев исследуемой воды в количестве 1 л на среды накопления: селенитовый бульон, магниевая среда. Инкубация при 37 0С 18 - 20 часов. Затем высев на элективно-дифференциальные среды и дальнейший ход исследования (такой же, как при диагностике кишечных инфекций).
Учет культуральных свойств на питательных средах (магниевая, селенитовый бульон, висмут-сульфит агар, среда Плоскирева).
Вывод: сальмонеллы, шигеллы (обнаружены, не обнаружены).
Общий вывод о качестве воды.

Вопросы к заданию №2.
Какой метод исследования воды закреплён ГОСТом (титрационный, фильтрационный)?
Перечислите СПМ воды?
Нормативы для воды питьевой?
Дайте оценку полученным результатам?
Какие могут быть последствия?

Задание № 3. Санитарно-бактериологическое исследование продуктов.
Провести санитарно-бактериологическое исследование пастеризованного молока.
См. приложения № 3, 5, 6, 8, 10, 11.
Цель: определение доброкачественности молока и молочных продуктов по микробиологическим критериям.
Определяемые показатели: в пастеризованном молоке (перечислить).
Определение общего количества бактерий: посев из разведений продукта 10-3 и 10-4 по 1 мл методом Коха, подсчет числа выросших колоний после инкубации при 37 оС в течение 48 часов.
Результат.
Вывод.
Определение коли-титра. В молоке и молочных продуктах определяют количество грамотрицательных палочек, не образующих спор, способных к росту на среде Кесслер при 44 оС, не использующих цитрат в качестве единственного источника углерода (отсутствие роста на среде Козера), расщепляющих лактозу до кислоты и газа.
Ход исследования пастеризованного молока:
Основные этапы исследования
Засеваемые объёмы, мл


1
1
1

1-й день
Посев на среду Кесслер
Инкубация при 44 оС
2-й день
Учет результатов
Отсев на среду Эндо
3-й день
Учет результатов
Мазок по Граму
Отсев:
в среду Козера
в среду Гисса с лактозой
4-й день
Учет результатов:
среда Козера
среда Гисса с лактозой





Примечание: «+» - есть рост, «-» - нет роста
Коли-титр исследуемого молока: (указать).
Вывод.
Вопросы к заданию №3.
Какой метод обнаружения СПМ был использован (фильтрационный, титрационный)?
Какие ещё показатели определяют в молоке пастеризованном?
Дайте оценку полученным результатам?
Какие могут быть последствия?

Задание №4. Микробиологическое исследование мяса.
Определить свежесть мяса методом микроскопии.
См. приложение № 9.

Цель: определение свежести мяса по степени микробной обсеменённости и выраженности распада мышечной ткани.
Отбор проб. Поверхность исследуемых мышц стерилизуют раскалённым металлическим шпателем или обжигают, после чего при помощи стерильных ножниц вырезают кусочки мяса размером 2 х 1,5 х 2,5 см. Поверхность срезов прикладывают к предметным стёклам.
Ход исследования: микроскопия мазка-отпечатка, окрашенного по Граму.
Критерии оценки: (мясо свежее, мясо сомнительной свежести, мясо несвежее).
Оценка результата исследования (вывод).

Вопросы к заданию №4.
Какие свойства микроорганизмов можно изучить в мазках-отпечатках, окрашенных по Граму?
Какие морфологические группы микроорганизмов присутствуют в мазках-отпечатках?
Можно ли определить вид микроорганизма, почему?
Дайте оценку полученным результатам?
Какие могут быть последствия?

Задание №5. Санитарно-бактериологическое исследование поверхностей.
Провести санитарно-бактериологическое исследование рук персонала и поверхностей объектов внешней среды.
См. приложения № 5, 6, 7, 10, 11.

Цель: контроль микробной обсеменённости оборудования и предметов, рук персонала на пищеблоках, в лечебно- профилактических и детских учреждениях, на предприятиях пищевой промышленности.
Метод исследования: (указать).
Определяемые микроорганизмы: (указать).
Исследование методом смывов на наличие кишечных палочек.
Правила взятия смывов.
Результаты исследования



смыва


Откуда
взят

Рост на
среде цитратом

Рост на
среде Эндо

Окраска
по Граму

Рост на среде
Гисса с лактозой

1
2
3
Руки повара






Вывод.

Исследование методом смывов на наличие стафилококков.

Результаты исследования


смыва

Откуда
взят

Рост на
солевом бульоне

Рост
на ЖСА

Окраска
по Граму

Плазмокоа-
гулазная активность

1.
2.
3.
Руки повара






Вывод.

Вопросы к заданию №5.
Какие виды микроорганизмов присутствуют в посевах?
Дайте оценку полученным результатам?
Какие могут быть последствия контаминации рук персонала, оборудования и предметов кишечной палочкой и золотистым стафилококком?

Справочные материалы для оформления протоколов
и выполнения практических работ
Приложение №1

Методы санитарно-микробиологическое исследование воздуха.
Цель: определение общей микробной обсемененности, воздушно-капельного и производственного загрязнения.
Определяемые показатели: ОМЧ, наличие СПМ, наличие производственных штаммов микроорганизмов, патогенных микроорганизмов.
Методы и исследования: седиментационный, аспирационный, фильтрационный.

Седиментационный метод (метод Коха)
Чашки с МПА, кровяным агаром (для стрептококков) и дифференциально-диагностическими средами Эндо (для энтеробактерий), ЖСА (для стафилококков), Сабуро (для грибов) выставляют в открытом виде на срок от 10 до 30 мин в различных помещениях, после чего закрывают и помещают в термостат на двое суток с последующим выдерживанием при комнатной температуре в течение 2 суток.
Расчет по модифицированной формуле Омелянского ведется на 1 м2 поверхности.
Х = n 104 / пr2 t,
где X - ОМЧ воздуха обследуемого помещения; n - количество колоний на чашке; t - время экспозиции чашки (мин); пr2 - площадь чашки Петри (см2); 104 - пересчет м2 в см2.
Формула Омелянского, даже модифицированная, имеет ряд существенных недостатков:
а) нельзя определить точный объем воздуха, из которого микробы оседают на чашку;
б) мелкодисперсная фаза аэрозоля (а с ним и микробы) практически не оседают и токами воздуха постоянно поддерживаются во взвешенном состоянии.
Результаты, получаемые с помощью этого метода, позволяют сравнить степень обсемененности разных помещений при проведении мероприятий по очищению воздушной среды.

Аспирационный метод
В этом методе используется принцип ударной струи воздуха, получаемый с помощью аппарата Кротова или других установок (ПУ-1Б). Порядок работы и механизм улавливания микрофлоры воздуха следующие:
1) Открывают крышку прибора и устанавливают на вращающийся столик чашу Петри с питательной средой. Закрывают крышку и включают прибор.
2) После установления поплавка ротаметра на заданной величине объема засеваемого воздуха начинают счет времени. Струя воздуха, проходя через узкую клиновидную щель, с большой скоростью ударяется о влажную поверхность питательной среды, и к ней прибиваются и прилипают частицы и капли, содержащие бактерии. Равномерное обсеменение поверхности чашек достигается вращением столика, на котором находится чашка с питательной средой. Скорость вращения столика устанавливают специальным винтом.
3) После посева необходимого объема воздуха, равного произведению показателя ротаметра на время, выключают прибор, открывают крышку, после остановки столика берут чашку со средой, закрывают крышку и помещают в термостат на двое суток с последующим выдерживанием при комнатной температуре в течение 2 суток.
4) На МПА определяют ОМЧ, на кровяном агаре - наличие стрептококков, на среде Эндо – бактерии кишечной группы, на ЖСА – стафилококки, на среде Сабуро – грибы.
5) Для определения ОМЧ исследуют 100 л воздуха, для выявления стафилококков, стрептококков, энтеробактерий и грибов – 250 л воздуха.
6) Расчет количества микроорганизмов в 1 м3 воздуха проводят по формуле:
К = N х 1000 / V х t,
где N – количество колоний на 1 чашке, V - скорость просасывания воздуха (м3/мин), t - время отбора пробы в минутах.


Приложение №2

Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости
от функционального назначения и класса чистоты
(Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03 «Гигиенические требования к размещению, оборудованию и эксплуатации больниц, родильных домов и других лечебных стационаров»)




Санитарно-микробиологические показатели


п/п
Класс
чистоты
Название
помещения
Общее количество микроорганизмов
в 1 м3 воздуха
(КОЕ/м3)
Количество колоний стафилококка
золотистого
в 1 м3 воздуха
(КОЕ/м3)

Количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 м3 воздуха
(КОЕ/м3)




до начала работы
во время работы
до
начала работы
во время работы
до
начала работы

во время работы

1.
Особо чистые
(А)
Операционные, родильные залы, асептические боксы для гематологических, ожоговых пациентов, палаты для недоношенных детей, асептический блок аптек, стерилизационная (чистая половина), боксы бактериологических лабораторий
Не более 200
Не более 200
не должно быть
Не должно быть
не должно быть
не должно быть

2.


Чистые
(Б)



Процедурные, перевязочные, предоперационные, палаты и залы реанимации, детские палаты, комнаты сбора и пастеризации грудного молока, ассистентские и фасовочные аптек, помещения бактериологических и клинических лабораторий, предназначенные для проведения исследований
Не более 500


Не более 750


Не должно быть
Не должно быть
Не должно быть
Не должно быть

3.
Условно чистые
(В)
Палаты хирургических отделений, коридоры, примыкающие к операционным, родильным залам, смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья
Не более 750
Не более 1000
Не должно быть
Не более 2
Не должно быть
Не должно быть

4.
Грязные
(Г)
Коридоры и помещения административных зданий, лестничные марши лечебно-диагностических корпусов, санитарные комнаты, туалеты, комнаты для грязного белья и временного хранения отходов
Не нормируется
Не нормируется
Не нормируется



Приложение №3
Методы определения количества бактерий
на жидких и плотных питательных средах

Определение количества бактерий в объектах внешней среды производится, как правило, путем количественного посева на среды. В случае незначительного микробного обсеменения объекта делается высев цельного материала. При массивном обсеменении необходимо делать разведения, из которых производится высев на среды. Для приготовления разведений берут ряд пробирок, в каждой из которых содержится 9 мл физиологического раствора. В первую пробирку вносят 1 мл исследуемого материала (получают разведение 10-1), тщательно перемешивают путем многократного заполнения пипетки и переносят 1 мл во вторую пробирку (получают разведение 10-2) и т. д.
Посев по Коху
Метод Коха используется для определения общего количества бактерий. В пустую стерильную чашку Петри наливают 1 мл исследуемого материала из соответствующего разведения и заливают 10 - 15 мл расплавленного и остуженного до 45 0С МПА, смешивают с жидкостью, вращая чашку на поверхности стола.
После культивирования посевов производится подсчет колоний, выросших на поверхности и в глубине агара. Для этого чашку кладут вверх дном на черный фон, каждую сосчитанную колонию отмечают маркером по стеклу. Оценивают только те чашки, на которых выросло от 30 до 300 колоний. Если на чашке выросло более 300 колоний, а анализ нельзя повторить, то допускается подсчет колоний при сильном боковом освещении при помощи лупы и специальной пластинки с сеткой.
Подсчитывается количество колоний не менее чем в 20 квадратах площадью 1 см2 в разных местах чашки. Рассчитывается среднее количество колоний в 1 см2, которое умножается на площадь чашки.
При подсчете колоний может быть использован специальный прибор счета бактерий – ПСБ.
Результат подсчета колоний в каждой чашке - количество бактерий на 1 мл (см3) или 1 г исследуемого материала с учетом разведения. За окончательное количество бактерий принимают среднеарифметическое результатов подсчета колоний на чашках с посевом двух соседних разведений.
Пример: разведение 10-1 - 250 колоний, разведение 10-2 - 23 колонии.
Общее количество бактерий = 250 х 10 + 23 х 100 / 2 =2400 кое/мл = 2,4 х 102 кое/мл (колониеобразующих единиц на 1 мл).
Результат исследований может быть округлен до 2 - 3 значащих цифр.

Титрационный метод
Используется для определения количества СПМ.
1-й этап: гомогенизация материала. При необходимости приготовление суспензии с целью перевода микроорганизмов в жидкую фазу.
2-й этап: приготовление серии разведений.
3-й этап: посев избранных объемов исследуемого материала (100, 10, 1 мл) и его разведений по 1 мл в жидкую питательную среду. Для повышения точности метода каждый объем может параллельно засеваться в несколько порций питательной среды (двух-, трех-, пятирядный посев). Оптимальным является трехкратное повторение (достаточная достоверность при сравнительно небольшой стоимости).
4-й этап: учет наличия роста на жидкой питательной среде и высев из положительных объемов на плотную питательную среду.
5-й этап: идентификация микроорганизмов, выросших на плотной питательной среде. При этом учитываются культуральные свойства и при необходимости проводятся дополнительные исследования (изучение тинкториальных, морфологических, биохимических и серологических свойств).
Если использован однорядный метод, как правило, результат выражается в виде титра искомого микроорганизма, за который принимается наименьший объем (наибольшее разведение), в котором еще он был обнаружен.
Если был использован многорядный метод, учет результатов проводится с помощью специальных таблиц, позволяющих по комбинации положительных объемов, давших рост, определить титр, индекс (НВЧ).

Метод мембранных фильтров
Используется для определения количества СПМ в материалах, содержащих мало взвешенных веществ, например, для определения ОКБ и ТКБ. Для его осуществления необходимо специальное оборудование, фильтры и фильтрационные установки.
Для санитарно-бактериологических исследований используются особые фильтры, непроницаемые для бактерий (см. таблицу). Перед употреблением фильтры стерилизуются кипячением. Фильтрационная установка состоит из фильтрационного аппарата (фильтр Зейтца и др.) и источника создания вакуума (насос Камовского, водоструйный насос и др.).
Для стерилизации фильтры помещают в воду, предварительно нагретую до 80 0С, а затем нитроцеллюлозные мембранные фильтры подвергают трехкратному кипячению по 10 мин со сменой воды, а мембранные фильтры «Владипор» - однократному кипячению в течение 10-15 мин.
Порядок работы:
1. Фильтрационный аппарат стерилизуют фламбированием при помощи смоченного в спирте ватного тампона;
2. Стерильный мембранный фильтр помещают на сетку фильтрационного аппарата стерильным пинцетом и закрепляют устройство;
3. В стакан фильтрационного прибора наливают необходимый объем исследуемого материала или его разведения. При фильтровании небольших объемов жидкости (1 мл) в стакан предварительно наливают 10 мл стерильной воды. Общий объем фильтруемой жидкости не должен быть больше 100 мл. Для больших объемов берут несколько фильтров;
4. Создают вакуум в приемном сосуде;
5. После окончания фильтрации жидкости, выждав некоторое время для удаления излишка влаги, при сохранении вакуума аппарат разбирают и стерильным пинцетом, не переворачивая, переносят фильтр на поверхность плотной питательной среды, избегая появления пузырьков воздуха между фильтром и средой;
6. При наличии в жидкости большого количества взвешенных веществ поверх рабочего фильтра помешают планктонный фильтр. На питательную среду в этом случае переносят оба фильтра;
7. Культивируют посевы 24 ч при 37 0С;
8. Проводят подсчет колоний, типичных для искомого микроорганизма (объем фильтруемой жидкости подбирается с таким расчетом, чтобы на фильтре вырастало не более 30 колоний);
9. Постановка дополнительных тестов для идентификации (определение тинкториальных, морфологических, биохимических свойств). При этом с фильтра исследуется несколько типичных колоний;
10. Выражение результата в виде индекса по формуле:
Индекс = N х 1000/ V,
N – количество колоний, V – профильтрованный объем воды в миллилитрах.


Характеристика отечественных фильтров, используемых
в санитарной микробиологии


Вид фильтра и его назначение
Нитроцеллюлозные мембранные фильтры
Фильтрующие мембраны «Владипор» МФА-МА


№ фильтра
диаметр пор,
мкм
№ фильтра
диаметр пор, мкм

Планктонный фильтр при наличии в воде большого количества взвешенных веществ

Основной рабочий фильтр, непроницаемый для определяемых микроорганизмов
6




3
2


3,5




0,7
0,5


10




5
6
7
8
0,951-1,050




0,451-0,550
0,551-0,650
0,651-0,750
0,751-0,850



Приложение №4

Микробиологические критерии оценки качества воды
Нормативный документ
Объект
исследования
Нормируемые
показатели

СанПиН 2.1.5.980-00 «Водоотведение населенных мест, санитарная охрана водных объектов. Гигиенические требования к охране поверхностных вод»;

МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды

Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов №2285-81.
Бытовые сточные воды перед спуском в водоемы


Термотолерантные колиформные бактерии не более 100 КОЕ на 100 мл;
Общие колиформные бактерии не более 500 на 100 мл;
Колифаги не более 10 БОЕ на 100 мл
Отсутствие возбудителей инфекционных заболеваний

2. СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения, Контроль качества»;

ГОСТ 2761-84 «Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения»;

МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды;

Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов №2285-81.
Вода поверхностных источников (питьевая)


















Термотолерантные колиформные бактерии не допускаются в 100 мл;
Общие колиформные бактерии не допускаются в 100 мл;
Колифаги не допускаются в 100мл;
Споры сульфитредуцирующих клостридий не допускаются в 20 мл;
Общее микробное число не более 50 КОЕ на 1 мл;
Отсутствие возбудителей инфекционных заболеваний

СанПиН 2.1.4.1175-02 «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализрованных источников водоснабжения. Санитарная охрана источников»;

МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды



Вода подземных источников, колодцев, родников (питьевая)
Термотолерантные колиформные бактерии не допускаются в 100 мл;
Общие колиформные бактерии не допускаются в 100 мл;
Общее микробное число не более 100 КОЕ на 1 мл;
Колифаги не допускаются в 100 мл
Отсутствие возбудителей инфекционных заболеваний

СанПиН 2.1.2.1188-03 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов. Контроль качества»;

МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды

Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов №2285-81.

Методические рекомендации по обнаружению и идентификации Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных водах), МЗ СССР от 24.05.84 г.
Вода плавательных бассейнов
Термотолерантные колиформные бактерии не допускаются в 100 мл;
Общие колиформные бактерии не более 1 КОЕ на 100 мл;
Колифаги не допускаются в 100 мл;
Золотистый стафилококк не допускается в 100 мл;
Синегнойная палочка не допускается в 100 мл;
Отсутствие возбудителей кишечных инфекций.


5. Отсутствуют нормативные документы (НД)
Вода из чайника
Отсутствие патогенных бактерий


КОЕ - колониеобразующих единиц,
БОЕ - бляшкообразующих единиц


Приложение № 5

Санитарно-показательные микроорганизмы

Показатели фекального загрязнения:
Колиформные бактерии: БГКП (представители семейств Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia); вид E. coli;
общие колиформные бактерии (ОКБ) и термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ)
энтерококки;
клостридии (главным образом, Cl. perfringens);
фаги кишечной палочки (коли-фаги).

Показатели загрязнения разлагающимися отбросами:
термофилы;
протей.

Показатели воздушно-капельного загрязнения:
золотистый стафилококк;
зеленящие и гемолитические стрептококки;

Микроорганизмы порчи (для пищевых продуктов):
дрожжи;
плесневые грибы.

Показатели промышленного загрязнения:
производственные штаммы микроорганизмов


Приложение №6

Колиформные санитарно-показательные
микроорганизмы




Ферментация лактозы до КГ при
37 0С в течение 24-48 ч.

Ферментация лактозы до КГ и альдегида при 37 0С в течение
24-48 ч.

Ферментация лактозы до КГ и альдегида при 44,5 оС в течение
24 ч.

Ферментация лактозы до КГ при 44,5 оС в течение 18-24 ч, не способные использовать цитрат в качестве единственного источника углерода

Колиформные бактерии

БГКП



ОКБ




ТКБ
(входят в число ОКБ)



Цитрат-негативные кишечные палочки - вид E. coli










Грамотрицательные, не образующие спор, оксидазоотрицательные палочки












Примечание. «К» - ферментация углеводов с образованием кислоты, «Г» - ферментация углеводов с образованием газа, «КГ» - ферментация углеводов с образованием кислоты и газа.
Приложение №7
Исследование бактериальной загрязнённости
поверхностей

В санитарной практике для оценки самых разнообразных поверхностей: кожи, оборудования, посуды и т. д. используют различные методы. Наиболее часто к исследованию поверхностей прибегают при проведении текущего санитарного надзора за детскими и лечебными учреждениями, за предприятиями пищевой промышленности и пищеблоками. Все методы санитарно-бактериологического исследования поверхностей можно разделить на две группы: основанные на взятии смывов и контактные.

Методы смывов

Тампонный метод. Для взятия смыва стерильный ватный или марлевый тампон увлажняют стерильным физиологическим раствором или питательной средой и тщательно протирают участок обследуемой поверхности площадью 100 см2 (10 х 10 см), для чего может быть использована специальная проволочная рамка, фламбируемая перед каждым исследованием. После взятия смыва тампон погружают на 1/3 в пробирку с жидкой питательной средой, обламывают выступающую часть тампона и погружают его в питательную среду. В таком виде проба транспортируется в лабораторию. Этот метод позволяет получить качественную оценку изучаемой поверхности (наличие или отсутствие определенного вида микробного загрязнения на площади 100 см2). При необходимости количественной оценки уровня микробного загрязнения тампон погружают в физиологический раствор (10 мл) и тщательно встряхивают для десорбции микроорганизмов, после чего определяют концентрацию бактерий в физиологическом растворе. Для этого делают высевы определенных разведений физиологического раствора на питательные среды.

Метод стерильных марлевых салфеток. Непосредственно перед исследованием стерильные марлевые салфетки размером 5 х 5 см смачивают физиологическим раствором или питательной средой. В момент взятия смыва салфетку удерживают стерильным пинцетом. Дальнейшие исследования аналогичны таковым при использовании тампонов.

Контактные методы

Метод агаровой заливки. Для осуществления данного метода необходимо иметь специальные металлические кольца. Кольцо стерилизуют фламбированием и помещают узкой частью на обследуемую поверхность. Затем в кольцо заливают расплавленную и остуженную плотную питательную среду с удвоенной концентрацией агара. После застывания среды кольцо снимают с поверхности, переворачивают и вытряхивают образовавшийся агаровый блок в чашку Петри. Чашку помещают в термостат и по истечении срока инкубации подсчитывают количество выросших колоний.

Метод агаризованных фильтров по Л.И. Адельсон. Мембранные фильтры, смоченные расплавленной и остуженной плотной питательной средой, после застывания среды помещают на исследуемую поверхность и слегка прижимают. Затем фильтры помещают отпечатанной поверхностью вверх в чашку Петри. После инкубации в термостате подсчитывается количество колоний.

Использование бакпечаток. Бакпечатка - пластмассовый сосуд одноразового употребления, имеющий специальное углубление для заливки питательной среды, при изготовлении подвергающийся стерилизации излучением. Бакпечатка заполняется избранной агаризованной питательной средой заранее. Перед использованием ее открывают и прикасаются поверхностью питательной среды к исследуемому объекту. После инкубации в термостате проводят дальнейшее исследование.

Смывы с рук. Марлевой салфеткой 5 на 5 см тщательно протирают руки (ладони, межпальцевые и околоногтевые пространства). После забора проб марлевые салфетки помещают в пробирки или колбы с широким горлом, наполненные стерильной водопроводной водой или 0,9% раствором хлорида натрия и стеклянными бусами. Встряхивают 10 мин. Затем салфетку и 0,5 мл смыва с салфетки засевают в две пробирки с 5 мл питательной среды, либо засевают на две чашки с МПА. В посевах не должны присутствовать золотистый стафилококк, синегнойная палочка, кишечная палочка, протеи и другие энтеробактерии.
Приложение № 8

Санитарно-микробиологические нормативы оценки качества
основных пищевых продуктов



Продукты

Нормируемые
микроорганизмы

Регламентированные
микробиологические показатели:
КМАФАнМ
(КОЕ / г, мл (см3));
коли-титр
(мл);
Объемы или масса продукта, в которых не допускается присутствие определенных групп микроорганизмов
(г, мл (см3))
Нормативные
документы


1.
Молоко, молокопродукты
Молоко сырое (высший сорт)




Молоко пастеризованное (группа А)






Сливки пастеризованные группа А (в бутылках и пакетах)






МАФАнМ
БГКП
Патогенные м/о, в том числе сальмонеллы

МАФАнМ
БГКП
Патогенные м/о, в т. ч. Сальмонллы
Стафилококк золотистый



МАФАнМ
БГКП
Патогенные м/о, в т.ч. сальмонеллы

Стафилококк золотистый



Не более 3 х 105
Не допускаются
Не допускаются в 25 см3


Не более 5 х 104
Коли-титр 1,0
Не допускаются в 25 см3

Не допускается в 1 см3



Не более 1 х 105
Коли-титр 0,1
Не допускаются в 25 см3

Не допускается в 1 см3

СанПиН 2.3.2.1078-01;
СанПиН 2.3.4.551-96;
ГОСТ 9225-84;
ГОСТ Р 50480-93;

ГОСТ 10444.2-94;
ГОСТ 10444.9-88;
ГОСТ 10444.12-85;
ГОСТ 10444.15-94;
ГОСТ 50474-93;
ГОСТ 26668-85;
ГОСТ 26669-85;
ГОСТ 26670-91;
ГОСТ 29185-91;
ГОСТ 28566-90;
ГОСТ 13928-84;
ГОСТ 26809-86


Примечание:
МАФАнМ - мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы;
КМАФАнМ - количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов;
БГКП - бактерии группы кишечных палочек (колиформные бактерии);
КОЕ /г, мл (см3) - колониеобразующих единиц на 1 г, мл (см3).


Приложение № 9

Оценка свежести мяса путем микроскопии
(ГОСТ 23392-78)


Результат микроскопии мазка-отпечатка мяса,
окрашенного по Граму
Оценка свежести
мяса


1. Микрофлора не обнаружена или в поле зрения менее 10 бактериальных клеток. Следов распада мышечной ткани нет
2. В поле зрения не более 30 бактериальных клеток. Есть признаки распада мышечной ткани (ядра мышечных волокон в состоянии распада, исчерченность волокон слабо различима)
3. В поле зрения более 30 бактериальных клеток. Значительный распад мышечной ткани (почти полное исчезновение ядер и полное исчезновение исчерченности мышечных волокон)
1. Свежее

2. Сомнительной свежести



3. Несвежее




Примечание:
На одном стекле исследуют 25 полей зрения.


Приложение № 10

Сводная таблица основных питательных сред,
используемых в санитарной микробиологии


Микроорганизм
Питательные среды

Санитарно-показательные микроорганизмы

БГКП:
в воде
в почве


Кишечные палочки:
в пищевых продуктах
в молоке

Энтерококки



Cl. perfringens

Нитрифицирующие бактерии

Стафилококки

Стрептококки в воздухе


ГПС, ЛПС, Эндо, глюкоза с ВР
Кесслер, Эндо, глюкоза с ВР



КОДА
Кесслер, Эндо, Козера

Щелочно-полимиксиновая среда, желчная среда, молочно-ингибиторная среда с полимиксином и теллуритом калия или ТТХ

Вильсона-Блэра

Виноградского

Солевой бульон, ЖСА, МСА

Кровяной агар

Некоторые патогенные и условно-патогенные микроорганизмы

Сальмонеллы


Шигеллы

Bacillus cereus

Магниевая среда, висмут-сульфитный агар, селенитовый бульон

Селенитовый бульон, Плоскирева

Солевой полимиксиновый агар с ТТХ



Приложение № 11
Описание основных питательных сред для обнаружения микроорганизмов в объектах окружающей среды

Среды для обнаружения колиформных палочек (БГКП, ОКБ, ТКБ)
Глюкозо-пептонная среда (ГПС)
1% петонная вода + 0,5% хлорида натрия и 0,5% глюкозы. Индикатор - спиртовой раствор бромтимолового синего или индикатор Андрадэ (кислый фуксин, обесцвеченный NaOH). В концентрированной среде количество всех ингредиентов увеличено в 10 раз. Используется для первичного посева воды. Положительный результат отмечают через сутки по помутнению, образованию кислоты с газом или без него.
Лактозо-пептонная вода (ЛПС)
Аналогична предыдущей среде, только вместо глюкозы берут лактозу.
Глюкоза с ВР
Полужидкий агар с 1% глюкозы. Индикатор ВР - смесь воднорго голубого (В) и розоловой кислоты (Р). Исходный цвет среды розоватый, при подкислении - синий, при подщелачивании - красный или ярко-розовый. Газ обнаруживают по разрывам в столбике агара.
Лактоза с ВР
Аналогична предыдущей среде, но вместо глюкозы 1% лактоза.
Среда ЭНДО
МПА + 1% лактозы + индикатор (основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Колонии микробов, разлагающих лактозу (эшерихии), красного цвета с металлическим блеском, лактозонегативные (сальмонеллы, шигеллы) - остаются бесцветными.
Среда Козера
Синтетическая среда: в дистиллированной воде растворены фосфат натрия и калия, сернокислый магний и лимоннокислый натрий. В среде растут только цитратпозитивные кишечные палочки, которые могут использовать цитрат в качестве единственного источника углерода.
Среда Кесслер
1% пептонная вода + желчь + лактоза + раствор генцианового фиолетового (с поплавком). Используется для накопления кишечных палочек в материале, содержащем значительную сопутствующую флору, угнетающуюся генциановым фиолетовым и желчью.
Среда КОДА
Питательный бульон + сульфанол + лактоза + бромтимоловый синий. Элективно-дифференциальная среда для колиформных бактерий. Элективный фактор - сульфанол. При росте лактозоположительных колиформных бактерий первоначальный синий цвет меняется на темно-зеленый или ярко-желтый.
Лактозная среда с борной кислотой
Пептонная вода + 0,5% лактозы + борная кислота. Кишечные палочки расщепляют лактозу до кислоты и газа при 43 0С, несмотря на присутствие ингибиторов. Представители родов Enterobacter, Citrobacter и др. на этой среде газ не образуют.
Среды для обнаружения энтерококков
Щелочно-полимиксиновая среда
МПБ + глюкоза + дрожжевой экстракт + антибиотик полимиксин (селективный фактор) + бромтимоловый синий (индикатор). Исходный цвет среды синий, при росте энтерококков - желтый. Дрожжевой экстракт является стимулятором роста энтерококков.
Среды для обнаружения Cl. perfringens.
Среда Вильсона-Блэра
Щелочной МПА + 1% глюкозы + сульфит натрия + хлорид железа. Cl. perfringens образует черные колонии за счет восстановления сернистого натрия, который, соединяясь с хлорным железом, образует черное сернистое железо.
Среды для обнаружения нитрифицирующих бактерий
Среда Виноградского
Синтетическая среда: дистиллированная вода + соли сульфата аммония, двузамещенного фосфата калия, сульфата магния + мел. В присутствии нитрифицирующих бактерий в среде появляются азотная и азотистая кислоты, их обнаруживают по синему окрашиванию при добавлении индикатора дифениламина.
Среды для обнаружения стафилококков
Солевой бульон
МПБ + 9% хлорида натрия. Используется для первичного накопительного посева материала. Высокая концентрация хлорида натрия играет роль элективного фактора.
Желточно-солевой агар (ЖСА, среда Г.Н. Чистовича)
МПА + раствор яичного желтка + 6,5% хлорида натрия, Хлорид натрия - элективный фактор. Около колоний стафилококков, выделяющих фермент лецитовителлазу, образуется зона помутнения за счет продуктов расщепления лецитина, не растворимых в воде.

Среды для обнаружения стрептококков
Кровяной агар
МПА + 3 - 5% дефибринированной крови. По характеру гемолиза можно различить гемолитические («бета»-гемолиз) и зеленящие («альфа»-гемолиз) стрептококки.
Среды для обнаружения некоторых патогенных и условно-патогенных микроорганизмов
Для сальмонелл
Магниевая среда
Пептонная вода + дрожжевой экстракт (стимулятор роста сальмонелл) + водный раствор бриллиантового зеленого + хлорид магния (элективные факторы). Используется для первичного накопительного посева.
Селенитовая среда
Пептонная вода+ лактоза + раствор кислого селенистокислого натрия (ингибитор роста посторонней микрофлоры). Используется для первичного накопительного посева.
Висмут-сульфит агар
МПА + глюкоза + лимоннокислый висмут + сульфат натрия + соль Мора (индикатор на сероводород) + раствор бриллиантового зеленого (ингибитор сопутствующей микрофлоры). Сальмонеллы образуют на этой среде черные колонии. Эшерихии вырастают редко.
Для шигелл
Селенитовая среда (см. выше)
Среда Плоскирева
МПА + лактоза + желчные соли и бриллиантовый зеленый (оба ингибиторы посторонней микрофлоры) + нейтральный красный (индикатор). Колонии шигелл вырастают на этой среде бесцветными, так как не расщепляют лактозу. Колонии лактозопозитивных эшерихий имеют розовый цвет
Для Bacillus cereus
Солевой полимиксиновый агар с ТТХ
МПА + полимиксин + 6% хлорида натрия (элективные факторы) + ТТХ + раствор яичных желтков. Bacillus cereus вырастает на этой среде зернистыми колониями рубинового цвета с неровными краями, окруженными зоной помутнения (за счет лецитовителлазы). Используется для выделения Bacillus cereus при первичном посеве материала.

Обязательная литература
Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология : учебник для вузов / Л.Б. Борисов. – М.: МИА, 2002 г.
Бухарин, О.В. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии, иммунологии. – Оренбург, 2009 г.
Санитарная микробиология : учебно-методическое пособие / под ред. проф. В.П. Иванова. – Л., 1988.
Санитарная микробиология : учебно-методическое пособие / А.А. Сазанская, Л.Ю. Бутакова, В.А. Юрова и др. – Барнаул: АГМУ, 2004.
Дополнительная литература
Поздеев, О.К. Медицинская микробиология : учебник для вузов / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.
Коротаев, А.И., Бабичев, С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. – С.-П. : Специальная литература, 1998 г.
Учебное издание






Методические указания
по медицинской микробиологии
для самостоятельной подготовки
студентов лечебного, педиатрического, медико-профилактического факультетов


Часть 1. Общая микробиология
Часть 2. Частная микробиология



Издается в авторской редакции






Подписано в печать 24.07.09
Формат 60х90/16. Бумага офсетная.
Печать ризографическая.
Гарнитура Таймс Нью Роман.
Тираж 500 экз. Объем 8 п. л.


РИО Алтайского государственного
медицинского университета
г. Барнаул, пр. Ленина, 40








13PAGE 15


13PAGE 141615




Заголовок 1 Заголовок 2 Заголовок 3 Заголовок 915

Приложенные файлы

  • doc 15911513
    Размер файла: 1 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий