Методы фармакогностического анализа лекарсвенного растительного сырья. Часть II. Калинкина Г.И.


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«
Сибирский государственный медицинский

университет

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»





Г.И.Калинкина, Е.Н.Сальникова,

Н.В.Исайкина,
Н.Э.Кол
омиец




М
етоды фармакогностического анализа
лекарственного растительного сырья


Часть
II

Химический анализ


Учебное пособие




Рекомендуется Учебно
-
методическим
объединением
по медицинскому и
фармацевтическому образованию вузов России
в качестве учебног
о пособия для студентов,
обучающихся по специальности 060108
(040500)

Фармация




Томск

Сибирский государственный медицинский

университет

2008


2

УДК
615.322:615.074 (075.8)

ББК
Р 282.11.я7+Г4я7


М 545


Рецензенты:

Самылина И.А.


заведующая кафедрой фарм
акогноз
ии 1 ММА им.
И.М.Сеченова, д
-
р фарм
.
наук, профессор;

Куркин В.А.


заведующий кафедрой фармакогнозии с ботан
и
кой и
основами фитотерапии Самарского государственного мед
и
цинского
университ
е
та, д
-
р фарм
.
наук, профессор.





М545

Калинкина Г.И., Сал
ьникова Е.Н., Исайкина Н.В.,
Коломиец Н.Э.

Методы фармакогностического анализа
лекарственного растительного сырья.
В 2
-
х ч.

Ч
.

II
.
Химический
анализ: учебное пособие.
/
Г.И.
Калинкина,
Е.Н.
Сальникова,
Н.В.
Исайкина,
Н.Э.

Коломиец
/


Томск: СибГМУ, 200
8
.
-
55
с.




П
особие для лабораторных занятий
и фитохимических
исследований
включает методики качественного обнаружения и
количественного определения основных групп биологически активных
веществ в лекарственном растительном сырье.
В пособии изложены
некоторые тео
ретические вопросы фитохимического анализа, схемы
качественных реакций, вопросы для подготовки к занятиям.

Учебное пособие составлено в соответствии с программой по
фармакогнозии для студентов фармацевтических вузов (факультетов),
рекомендованной ГОУ ВУНМЦ
МЗ РФ (2000г.)

П
редназначено для студентов
, интернов и аспирантов.

фармацевтическ
их
факультетов высших учебных заведений.










© Сибирский государственный медицинский университет
, 200
8

©

Калинкина Г.И., Сальникова Е.Н., Исайкина Н.В., Коломиец Н.Э.
, 2
00
8




3


СОДЕРЖАНИЕ


ТЕМА
1.

К
ачественное обнаружение и количественное
определение витаминов в
лекарственном
растительном сырье

5

ТЕМА
2.

К
оличественное определение эфирных масел в
лекарственном

растительном сырье. Анализ
эфирн
ых масел

9

ТЕМА
3.

Качествен
ное обнаружение и количественное
определение антраценпроизводных в
лекарственном

растительном сырье

1
8

ТЕМА
4.

Качественное обнаружение и количественное
определение сапонинов в
лекарственном

растительном сырье

2
6

ТЕМА
5.

Качественное обнаружение и количе
ственное
определение арбутина в
лекарственном

растительном сырье

2
9

ТЕМА
6

Качественное обнаружение и количественное
определение флавоноидов в
лекарственном

растительном сырье

3
3

ТЕМА

7.

К
ачественное обнаружение кумаринов
в
растительном сырье

40

ТЕМА
8.

Качественное обнаружение и количественное
определение дубильных веществ
(танидов) в
лекарственном
растительном сырье

4
3

ТЕМА
9.

Качественное обнаружение и количественное
определение алкалоидов в
лекарственном

растительном сырье

4
9


Р
екомендуемая литерат
ура

5
4




4


ВВЕДЕНИЕ


Учебное пособие является продолжением пособия
«Методы фармакогностического анализа лекарственного
растительного сырья» и содержит методики
качественного
обнаружения и количественного определения основных групп
биологически активных вещ
еств в лекарственном растительном
сырье. В пособии изложены некоторые теоретические вопросы
фитохимического анализа,
формулы
действующих веществ,
схемы качественных реакций, вопросы для подготовки к
занятиям.

Умение правильно провести
химический
анализ
ле
карственного растительного сырья имее
т большое значение
для
будущей деятельности провизора, так как позволяе
т обеспечить
потребителей до
б
рокачественным лекарственным сырьем,
соответствующим требов
а
ниям нормативной документации.

В данном учебном пособии пре
дставлены современные
м
е
тодики
химического анализа
качества лекарственного
растительного сырья.
Методики качественного обнаружения и
количественного определения биологически активных
(действующих) веществ
лекарственного растительного сырья
приведены на осн
овании действующих нормативных документов,
которые не о
т
ражены в учебниках и учебных пособиях по
фармако
г
нозии.

Пособие составлено с учетом программы по фармакогнозии
на додипломном и последипломном уровнях подготовки
провиз
о
ров. Приведенные в пособии мате
риалы могут быть
использованы в учебном процессе в фармацевтических ВУЗах и
факультетах для студентов, интернов, аспирантов и
разработчиков проектов Фарм
а
копейных статей.











5

ТЕМА 1.
КАЧЕСТВЕННОЕ ОБНАРУЖЕНИЕ И
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОП
РЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ
В
РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ


ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ

1.

Понятие о витаминах и их значение.

2.

Классификация витаминов.

3.

Физико
-
химические свойства аскорбиновой кислоты.

4.

Методы количественного определения аскорбиновой

кислоты
в растительном сырье.

5.

Физико
-
химичес
кие свойства витамина К.

6.

Качественное
о
бнаружение в
итамина К в растительном

сырье.


РАБОТА НА ЗАНЯТИИ


ЗАДАНИЕ
1
.

К
оличественное определение
аскорбиновой
кис
лоты
в растительном сырье


Объекты исследования:

П
лоды
ш
иповника

(ГФ
-
XI
, вып. 2, с. 294
)
.


Метод
определения аскорбиновой кислоты основан
на
е
е способности восстанавливать 2,6
-
дихлорфенолиндофенол:


O
O
H
H
O
O
C
H
H
C
H
2
O
H
H
O

+

O
N
C
I
C
I
O
H



Аскорбиновая
кислота


2,6
-
дихлорфенолиндофенол


O
O
O
O
H
C
H
H
O
C
H
2
O
H

+

H
O
N
H
O
H
C
I
C
I

Дегидроаскорбиновая
кислота


2,6
-
дихлорфенолиндофенол

(восстановленная
фор
ма
, бесцветная
)


6

2,6
-
дихлорфенолиндофенол в щелочной среде имеет
синюю окраску, в кислой
-
красную, а при восстановлении
-

обесцв
ечивается:


O
N
C
I
C
I
O
N
a

С
иний

O
N
C
I
C
I
O
H

К
расный

H
O
N
H
O
H
C
I
C
I

Бесцветный


Методика
.
2,0
г измельченного сырья помещают в
фарфоровую ступку, где тщательно растирают со стеклянным
порошком и
постепенно добавляют 150 мл свежепрокипяченой и
охлажденной воды
очищенной
, настаивают 10 минут. Затем
смесь
размешивают
и извлечение фильтруют в коническую
колбу объемом 100

мл. В колбу на 100 мл вносят 1 мл
полученного фильт
рата, 1 мл 2% раствора хлорис
то
водородной
кислоты, 13 мл воды, перемешивают и титруют из микропипетки
раствором 2,6
-
дихлорфенолиндофенол
ята натрия (0,001 моль/л)

до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30
-
60
секунд. Титрование продолжают не более 2 минут. В случае
интенс
ивного окрашивания фильтрата или высокого содержания
в нем аскорбиновой кислоты (расход реактива более 2 мл),
исходное извлечение разбавляют водой в 2 раза.


Содержание аскорбиновой кислоты

(Х)
вычисляют по
формуле:


V

0
,000088

150


100


100

Х



m


1

(100

W)

,
гд
е



7

0,000088

-
количество аскорбиновой кислоты, соответствующее
1

мл раствора 2,6
-
дихлорфенолиндофенол
ят
а
натрия
(0,001 моль/л)
,
в граммах;


V
-

объем раствора 2,6
-
дихлорфенолиндофенол
ят
а
натрия
(0,001 моль/л)
,
пошедшего на

ти
трование, в
миллилитрах;

m

-
масса сырья, в граммах;

W

-
потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.


Примечание.

п
риготовление раствора

2,6
-
дихлорфенолиндофенолята натрия

(0,001 моль/л): 0,22г
2,6
-
дихлорфенолиндофенолята натрия
растворяют в 500м
л
свежепрокипяченной и охлажденной воды при энергичном
взбалтывании (для растворения навески раствор оставляют на
ночь).
Раствор фильтруют в мерную колбу вместимостью 1л и
доводят объем раствора водой до метки. Срок годности раствора не
более 7 суток при у
словии хранения в холодном, темном месте.

Установка титра.

Несколько кристаллов (3
-
5) аскорбиновой
кислоты растворяют в 50мл 2% раствора серной кислоты; 5мл
полученного раствора титруют из микробюретки раствором
2,6
-
дихлорфенолиндофенолята натрия
до появ
ления розового
окрашивания, исчезающего в течение 1
-
2 недель.

Другие 5мл этого же раствора аскорбиновой кислоты титруют
калия йодата (0,001 моль/л)
в присутствии нескольких кристаллов
(около 2мг) калия иодида и 2
-
3 капель раствора крахмала до
появления г
олубого окрашивания.

Поправочный коэффициент вычисляют по формуле:

1
V
V
К

,

где

V



объем раствора калий йодата (0,001 моль/л), пошедшего на
титрование, в миллилитрах;

V
1


объем раствора
2,6
-
дихлорфенолиндофенолята натрия
,
пошедшего н
а
титрование
, в миллилитрах.


ЗАДАНИЕ
2.
Качественное обнаружение
витамина К
мет
одом тонкослойной хроматографии


Объекты исследования
:


Л
истья
к
рапивы

(ГФ
-
XI
, вып. 2, с. 274
)
.


8

O
O
C
H
3

Витамин К
1
(филлохинон)


Методика.

Аналитиче
скую пробу сырья измельчают до
размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером
0,25 мм; 1 г измельченного сырья
помещают в колбу
вместимостью
5
0 мл, прибавляют 25
мл гексана и перемешивают
на механ
ическом встряхивателе
в течение
3
0 мин
. Затем

фильтруют, отгоняют растворитель
на водяной бане с прямым
холодильником до объема 0,5
-
1 мл
при температуре водяной
бани не выше
60

0
С
.

Микропипеткой наносят 0,1 мл
извлечения полосой
шириной 1,5

2 см на пластинку «Силуфол» (размером 13

5 см)
на расстояни
и 1,5
см от края. Пластинку подсуш
ивают на воздухе
в течение 3

5 мин и хроматографируют в
гексане

восходящим
способом. Когда фронт растворителей пройдет 10 см, пластинку
вынимают из камеры, вы
сушивают на воздухе в течение 2

3 мин
и выдерживают в УФ

свете

при длине волны 360 нм в течение
2 мин; на пластинке должн
а
появиться
зона адсорбции
с желто
-
зеленой флюоресценцией (витамин К
1
).


КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1.

Какие химические свойства аскорбиновой кислоты лежат в
основе метода ее количественного определения в
ра
стительном сырье?

2.

Как проводят извлечение аскорбиновой кислоты из сырья?

3.

С какой целью при титровании в фильтр
ат добавляют
хлористоводородную
кислоту?

4.

Почему ограничено время титрования извлечения из сырья?

5.

Как проводится и
дентификация
витамина
К методом
т
онкослойной хроматографии
?







9

ТЕМА 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФИРНЫХ
МАСЕЛ В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ.

АНАЛИЗ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ




ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ

1.

Понятие об эфирных маслах.

2.

Классификация эфирных масел.

3.

Физико
-
химические свой
ства эфирных масел и методы их
получения из растительного сырья
.

4.

Анализ эфирных масел на подлинность, чистоту и
доброкачественность по ГФ
XI
: качественные реакции,
физико
-
химические константы, методы их определения,
аналитическое значение.

5.

Фракционн
ый анализ эфирных масел и методы
идентификации его отдельны
х компонентов (методы БХ,
ТСХ, Г
ЖХ, ВЭЖХ).

6.

Правила хранения эфирных масел.

7.

Методы количественного определения эфирных масел в
растительном сырье: принцип и выбор метода, достоинства и
недостатк
и, аппаратура.


РАБОТА НА ЗАНЯТИИ

Объекты исследования:

1.

По
беги

б
агульника болотного

(ГФ
-
XI
, вып. 2, с. 226);

2.

Т
рава
т
ысячелистника
(ГФ
-
XI
, вып. 2, с. 325).


ЗАДАНИЕ 1.

Количественное определение
эфирного
масла в растительном сырье (ГФ
XI
, вып. 1, с. 290)


Определение содержания эфирного масла проводят путем
его перегонки с водяным паром из сырья с последующим
измерением объема. В ГФ
XI
приведены 4 метода определения
содержания эфирного масла. Выбор метода зависит от свойств
эфирного масла. Наиболее часто ис
пользуют методы 1 и 2.
Сырье, содержащее эфирное масло, которое при перегонке
претерпевает изменения, образует эмульсию, легко загустевает
или имеет плотность, близкую к единице, анализируют методами
3 или 4. Масса сырья, степень его измельчения, время пер
егонки,
метод и возможные растворители указаны в соответствующей

10

нормативной документации на лекарственное сырье, с которой
вы должны предварительно ознакомиться.


Метод 1
(метод Гинзберга)


Для определения эфирного масла используют прибор,
изображенный на

рис
унке
1
.


Методика.

Навеску измельченного сырья помещают в
широкогорлую круглодонную или плоскодонную колбу
вместимостью 1000 мл, приливают 300 мл воды и закрывают
резиновой пробкой с обратным шари
ковым холодильником. В
пробке укрепляют

металли
ческие крючки, на которые при
помощи тонкой проволоки подвешивают градуированный
приемник так, чтобы конец холодильника находился над
воронкообразным расширением приемника, не касаясь его.
Приемник должен свободно помещаться в горле колбы, не
касаясь стено
к, и отстоять от уровня воды не менее чем на 50 мм.
Колбу с содержимым нагревают и кипятят в течение времени,
указанного в соответствующей нормативной документации на
лекарственное растительное сырье. Объем масла в
градуированной части приемника замеряют п
осле окончания
перегонки и охлаждения прибора до комнатной температуры.
После 6
-
8 определений холодильник и градуированный приемник
необходимо промыть последовательно ацетоном и водой.

Содержание эфирного масла в объемно
-
весовых процентах
(
X
)
в пересчете
на абсолютно
-
сухое сырье вычисляют по
формуле:

V



100


100

Х



m


(100

W)

,
где


V

-
объем эфирного масла, в миллилитрах;

m

-
масса сырья, в граммах;

W

-
потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.


Метод 2
(метод Клевенджера)


Для опред
еления эфирного масла используют
прибор,
изображенный на
рисунке
2
.
Прибор для определения эфирного
масла состоит из круглодонной колбы
а
вместимостью 1000 мл,
паропроводной изогнутой трубки
б
, холодильника
в,

градуированной трубки приемника
г
, оканчивающе
йся внизу
спускным краном
д
,
и сливной трубкой
е
. В верхней части

11

приемника имеется расширение
ж

с боковой трубкой
з
, которая
служит для внесения растворителя эфирного масла в дистиллят и
сообщения внутренней части прибора с атмосферой. Колба и
паропроводн
ая трубка соединяются через нормальный шлиф. Для
заполнения прибора водой используется резиновая трубка
и

с
внутренним диаметром 4,5
-
5 мм, длиной 450 мм и воронка
к
,
диаметром 30
-
40 мм. Перед каждым определением через прибор
пропускают пар в течение 15
-
20
мин. После 6
-
8 определений
прибор необходимо промыть последовательно ацетоном и водой.


Рис. 1.
Прибор для определения
содержания эфирного масла методом
1
(метод Гинзберга)
.
Рис. 2.
Прибор для определения
содер
жания эфирного масла
методом 2
(метод Клевенджера)
.

а
-
широкогорлая круглодонная

или плоскодонная колба;

а
-
круглодонная колба;

б
-
резиновая пробка;

б
-
паропроводная

изогнутая
т
рубка;
в
-
обратный шариковый холодильник;
в
-
холодильник;

г
-
градуированный приемник.

г
-
градуированная трубка
п
риемника

д
-
спускной кран;


е
-
сливная трубка;


ж
-
расширение;


з
-
боковая трубка;


и
-
резиновая трубка;


к
-
воронка.

а

г

б

в

г

и

к

е

д

г

ж

з

в

б

а


12

Примечание:
Допускается применение такого же ра
зборного
прибора, у которого паропроводная трубка
б
сочленена с
холодильником через нормальный шлиф, а сливная трубка

заменена каучуковой.

Методика.

Навеску измельченного сырья помещают в
колбу, приливают 300 мл воды, колбу соединяют с
паропроводной трубко
й и заполняют водой градуированную и
сливную трубки через кран при помощи резиновой трубки,
оканчивающейся воронкой. Колбу с содержимым нагревают и
кипятят с интенсивностью, при которой скорость стекания
дистиллята составляет 60
-
65 капель в 1 ми
н в течение времени,
указанного в соответствующей нормативной документации на
лекарственное растительное сырье. Через 5 мин после окончания
перегонки открывают кран, постепенно спуская дистиллят так,
чтобы эфирное масло заняло градуированную часть трубки
п
риемника, и еще через 5 мин. замеряют объем эфирного масла.

Содержание эфирного масла в объемно
-
весовых процентах
(
X
)
в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по
формуле:


V



100


100

Х



m

(100

W)

,
где


V

-
объем эфирного масла, в миллил
итрах;

m

-
масса сырья, в граммах;

W

-
потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.


ЗАДАНИЕ
2.

Анализ эфирных масел


Объекты исследования:

1. Пихтовое масло
(
ВФС 42
-
2109
-
92
)
;

2. Мятное масло
(
ГФ Х, статья
477
, с
. 488
)
;

3. Эвкалиптовое масло
(
ГФ
Х, статья
475
, с
. 486
)
.


1.

Определение подлинности образца эфирного масла
(ГФ
XI
, вып. 1, с. 287)


а) Определение цвета и прозрачности
анализируемого
образца, проводят путем сравнения его со стандартным образцом
того же наименования.


13

Схема 1.

АНА
ЛИЗ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ







































ЭФИРНЫЕ

МАСЛА

Установление качественного состава
эфирных
масел. Фракционный анализ:
бумажная, тонкослойная хроматография;
газожидкостная хроматография (ГЖХ);
высокоэффективная жидкостная
хроматография (ВЭЖХ)

Свободные
органические

кислоты


Фенолы


Терпеноиды

Доброкачественность, чистота,
изменения при хран
ении



Органолептическая

проба:

1.

Цвет

2.

Запах

3.

Вкус

4.

Прозрачность

5.

Консистенция





Количественное
определение
действующих
веществ

Физико
-
химические
константы:

1.

Растворимость

2.

Показатель
рефракции

3.

Плотность

4.

Оптическая
активность

5.

Кислотное
число

6.

Эфирное число

7.

Эф
ирное число
после
ацетилирования


14

б) Определение запаха

2 капли масла наносят на полоску фильтровальной
бумаги длиной 12 см и шириной 5 см. Через каждые 15 минут
сравнивают запах испытуемого образца с запахом
кон
трольного образца, нанесенного таким же образом на другую
полоску фильтровальной бумаги. В течение одного часа запах
должен быть одинаков.


в
) Определение вкуса
анализируемого образца
проводят
путем прикладывания к языку полоски фильтровальной
бумаги
с нанесенной на нее каплей эфирного масла.


2.

Определение посторонних примесей (чистота)

а) Определение примеси спирта

2
-
3 капли эфирного масла наносят на воду, налитую на
часовое стекло и наблюдают на черном фоне: не должно быть
заметного помут
нения вокруг капель масла;

1 мл эфирного масла наливают в пробирку, закрывают
рыхлым комочком ваты, в середину которого помещен
кристалл
фуксина, и

доводят до кипения. При наличии сп
ирта
пары его растворяют фуксин
и вата окрашивается в фиолетово
-
розо
вый цвет.


б) Определение примеси жирных и минеральных масел

1 мл эфирного масла взбалтывают в пробирке с 10
мл спирта: не должно наблюдаться помутнения и капель
жирного масла;

каплю эфирного масла н
аносят на фильтровальную
бумагу:
при нал
ичии примеси жирного масла после испарения
эфирного масла остается жирное пятно.


3
.

Определение показателя преломления

Показатель преломления определяют
при помощи
рефрактометра.



Показатель
пре
ломления


это
отношение скорости
распространения света в
воздухе к скорости распространения
света в испытуемом растворе. Перед определением рефрактометр
необходимо проверить с помощью воды, показатель преломления
которой равен 1,3330 при 20°С
.



15

4. Определение химических констант (ГФ
Х
I
, вып.

1, с.

191)

а)

Опреде
ление кислотного
числ
а



Кислотное число

-
это количество миллиграммов КОН,
необходимое для ней
трализации свободных кислот в 1
г
исследуемого вещества. Обычно количество кислот в эфирном
масле незначительно, но при длительном хранении в результате
окислител
ьных процессов количество
свободных кислот в
эфирном масле
увеличивается.

Методика.
1мл эфирного масла

помещают в колбу
вместимостью 250 мл и
раст
воряют в 1
0
мл

95% этилового
спирта
,
предварительн
о нейтрализованного
по фенолфталеину
0,1 моль/л раствором

NaOH
(если нужно нагревают с обратным
холодильником на водяной бане до полно
го растворения).
Прибавляют 1
-
2 капли
раствора фенолфталеина и титруют при
постоянном перемешивании 0,1 моль/л
NaOH
до появления
розового окраш
ивания, не исчезающего в течение
30с
. 1 мл 0,1
моль/л
NaOH

соответствует 5,61 мг КОН.


Кислотное число

К
ч
вычисляют по формуле:

V


5,61

К
ч


m


,
где

V

-

объем раствора
NaOH
(0,1 моль/л), израсходованный
на титрование, в миллилитрах;

m

-
масса навески эфирного масла, в граммах
;

5
,61

-
количество миллиграммов КОН, соответствующее 1 мл
раствора
N
аОН (0,1 моль/л).


б) Определение эфирного числа
(ГФ
XI
, вып.

1, с.

288)



Эфирное
число


это

количество миллиграммов
КОН,
пошедшее на омыление сложных эфиров, содержащихся в 1 г
эфирного
масла
.

Э
фирное число определяют в растворе, полученном после
определения кислотного числ
а. К этому раствору прибавляют 1
0
мл спиртового раствора КОН (0,5 моль/л), соединяют колбу с
воздушным холодильником
(диаметр трубки 1 см, длина 100 см)

и нагревают на
водяной бане в течение 1 часа с момента
закипания. Одновременно в ту же б
аню помещают в равных
условиях 1
0 мл спиртового раствора КОН (0,5 моль/л).

16

Контрольный опыт необходим потому, что фактор спиртового
раствора щелочи не стабилен, особенно при нагреван
ии. По
окончании омыл
ения в обе колбы добавляют по 2
0 мл воды и
избыток КОН титруют р
аствором хлористоводородной
кислоты
(0,5
моль/л) до обесцвечивания

(индикатор фенолфталеин).



Эфирное число
(
X
1
)
вычисляют по формуле:

(
V
1



V
2
)

28
,05

X
1



m


,
где

V
1

-
количество милл
илитров раствора хлористоводородной

кислоты (0,5 моль/л), израсходованное на титрование в
контрольном опыте;

V
2

-
количество миллили
тров раствора хлористоводородной
кислоты (0,5 моль/л), израсходованное на титрование
исследуемого в
ещества;

m

-
навеска масла, в граммах;

28,05

-
количество миллиграммов КОН, соответствующее 1
мл

раствора КОН (0,5 моль/л).


Примечание:
приготовление (0,5 моль/л) спиртового
раствора калия гидроксида. 33 г кали едкого растворяют в
20мл воды в мер
ной колбе вместимостью 1 л и доводят
объем раствора очищенным спиртом до 1л. Раствор
оставляют на 24 часа. Сливают прозрачную жидкость с
осадка в стеклянный сосуд с хорошо подобранной
резиновой пробкой.


Установка титра. 25 мл раствора хлористоводородной

кислоты (0,5 моль/л) титруют приготовленным раствором
кали едкого до слабо
-
розового окрашивания (индикатор
-

фенолфталеин). Молярность раствора вычисляют по
второму способу. Титр раствора устанавливают каждый
раз перед применением. Хранить в склянках с ре
зиновыми
пробками в защищенном от света месте.


Проанализируйте полученные результаты и сделайте
вывод о подлинности, чистоте и доброкачественности эфирного

масла.





17


КОНТРОЛЬНЫЕ

ВОПРОСЫ

1.
Как определить в эфирном масле примесь спирта и жирного
масл
а. На каких свойствах
эфирных масел
основаны эти
пробы.

2.
Как влияет примесь спирта или жирного масла в эфирном
масле на величину его плотности и показателя преломления.

3.
Как изменится величина кислотного числа при гидролизе
сложных эфиров, содержащих
ся в эфирном масле.

4.
Как изменится величина эфирного числа при наличии в нем
примеси жирного масла.

5.
Как изменятся физико
-
химические показатели эфирных масел
при нарушении правил их хранения и упаковки.

6.
На каких свойствах эфирных масел осно
вано их
количественное определение и выбор метода.



























18


ТЕМА 3.
КАЧЕСТВЕННОЕ
ОБНАРУЖЕНИЕ
И
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
А
НТРАЦЕНПРОИЗВОДНЫХ

В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ


ВОПРОСЫ


ДЛЯ

ПОДГОТОВКИ


К

ЗАНЯТИЮ

1.
Понятие
об антраценпроизводных: стро
ение,
классификация,
физико
-
химические свойства окисленных и восстановленных
форм.

2.
Экстракция антраценпроизводных из сырья,
методы очистки от
сопутствующих веществ.

3.
Качествен
ные реакции на окисленные и
восстановленные
формы, химизм реакций, аналитиче
ский эффект.

4.
Метод
к
оличественного определения антраценпроизводных
в сырье: принцип метода, основные этапы, достоинства и
недостатки.


РАБОТА

НА

ЗАНЯТИИ


Объекты исследования
:

1.

К
ора


к
рушины (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 231);

2.

Л
истья
с
енны (ГФ
Xl
, вып. 2, с.
269);

3.

К
орни
р
евеня
(ГФ
Xl
, вып. 2, с. 352);

4.

К
орневища и корни
м
арены (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 366).


ЗАДАНИЕ

1.

Качественное
обнаружение
антраценпроизводных в растительном сырье


1.
Микро
химическая р
еакция на сырье

При смачивании поверхности лекарственного
расти
тельного сырья, содержащего антраценпроизводные, 1
-
2
каплями 10% раствора щелочи наблюдается кроваво
-
красное
окрашивание.


2
.
Реакция Борнтрегера


Реакция

основана на способности окисленных форм
антрацена давать вишнево
-
красное окрашивание со щелочью и
амм
иаком.

Методика.

0,5 г измельченного сырья
кипятят в колбе

вместим
остью 50 мл с 10 мл 10% раствором
щелочи. При этом

19

происходит щелочной гидролиз антрагликозидов, окисление
восстановленных форм и взаимодействие агликонов со щелочью
с образованием красного
окрашивания (антрахиноляты). В случае
присутствия в растениях дубильных веществ, флавоноидов и
пигментов извлечение может быть не красным, а бурым. К
извлечению прибавляют 10 мл воды и фильтруют через вату в
делительную воронку вместимостью 100 мл. Фильтра
т
подкисляют 10% раство
ром хлористо
водородной к
ислоты до
слабокислой реакции (
по лакмусу). При этом исчезает красное
окрашивание, раствор становится мутным за счет выпадения в
осадок агликонов антрахинонов, нерастворимых в воде. Затем
прибавляют 10 мл хлор
оформа и содержимое делительной
воронки взбалтывают. Агликоны растворяются в хлороформе,
окрашивая его в желтый цвет. 3 мл хлороформного извлечения
встряхивают в пробирке с равным объемом аммиака. При
наличии антраценпроизводных аммиачный слой окрашивается
в
вишнево
-
красный цвет (за счет эмодина), а хлороформный слой
остается окрашенным в желтый цвет (за счет хризофанола).

Примечание:
оставшееся хлороформное извлечение используйте
для идентификации антрагликозидов методом бумажной хроматографии.


O
H
O
H
C
H
3
O
O

+
2

N
а
O
H

O
N
a
O
N
a
C
H
3
O
O

+
H
2
O

Хризофанол (3
-
метилхризацин)



O
H
O
H
C
H
2
O
H
O
O

+
2

N
H
4
O
H

O
N
H
4
O
N
H
4
C
H
3
O
O

+
2

H
2
O

Алоээмодин (3
-
метоксихризацин)




3
.
Реакция с 1% спиртовым раствором ацетата магния

Реакция основана на способности антраценпроизводных
давать окрашен
ные комплексы с ацетатом магния;
при этом 1,2
-

20

диоксипроизвод
ные образуют фиолетовое окрашивани
е; 1,4
-
пурпурное;
1,6 и 1,8
-
оранжево
-
красное.

Методика.

1,0 г сырья помещают в колбу
вместимо
стью
50 мл со шлифом, добавляют

10
мл 95% спирта и нагревают с
обратным холодильником на кипящей бане 10 минут.
Полученное извл
ечение охлаждают, фильтруют. К 1 мл
спиртового извлечения добавляют несколько капель
раствора
ацетата магния
. Отмечают характер образовавшейся окраски и
делают заключение о строении антраценпроизводных.


4
.
Реакция микровозгонки (м
икросублимаци
и)

Антраценп
роизводные легко
возгоняются при температуре 100
0
С
и выше.
Реакцию проводят в сухой пробирке или на предметном
стекле.

Методика.

В сухую пробирку
или на предметное стекло

помещают небольшое количество порошка
сырья
и нагревают на
спиртовке или на плитке.
Антраценпроизводные, возгоняясь,
конденсируются на холодных стенках пробирки
или на холодном
предметном стекле, которым накрывают стекло с порошком при
появлении дымка,
в виде желтого налета. При воздействии на
него 1 капли щелочи последний окрашивается в
вишнево
-
красный цвет.


5.
Идентификация
антраценпроизводных методом
тонкослойной хроматографии

Хлороформное извлечение, оставшееся
после
проведения
реакции Борнтрегера,
переносят в
стаканчик вместимостью 30
-
50
мл;
5
-
6 капель извлечения по капле (каждая кап
ля должна
высохнуть) наносят на стартовую линию пластинки «Силуфол».
На расстоянии 2 см от первого пятна наносят образцы известных
веществ (свидетели). Хроматограмму помещают в камеру
,
на дне
которой налита система рас
творителей: хлороформ
-
этанол (9:1)

так
ое количество, чтобы край пластинки погрузился на 1 см.
После окончания хроматографирования (фронт растворителя не
доходит до края 1
-
2 см) хроматограмму вынимают из камеры,
отмечают линию финиша, высушивают и просматривают в
видимом и УФ
-
свете до и после п
роявления парами аммиака.



21

Рассчитайте величину
R
f
. Сделайте заключение о
качественном составе антраценпроизводных исследуемого сырья.
Зарисуйте схему хроматограммы.

















Рис.
3.

Схема хроматограммы антрацен
производных кассии
остролистной.

А



извлечение из листьев сенны;

В


реин.


ЗАДАНИЕ

2
.

Количественное
определение
антраценпроизводных
в растительном сырье
методом
фотоколориметрии


Метод основан на способности окисленных форм
производных антрацена давать со щелочами вишнево
-
красное
окрашива
ние. Определяется сумма всех агликонов,
содержащихся в сырье в свободном виде и образовавшихся после
гидролиза антрагликозидов ледяно
й уксусной кислотой (схема
2)
.

Методика.

Аналитическую пробу сырья измельчают и
просеивают через сито с отверстиями диаме
тром 1 мм. Точную
навеску сырья 0,05 г помещают в колбу на 100 мл, прибавляют
7,5 мл ледяной уксусной кислоты и смесь нагревают на кипящей
водяной бане с
обратным холодильником в течение
15 мин.
После охлаждения в колбу добавляют через холодильник (ставят


Линия

старта

Линия

финиша

А

В

1

2

3

4

5

6

7

8

9


22

на него маленькую воронку) добавляют 30 мл хлороформа и
кипятят на водяной бане 15 мин.

Затем извлечение охлаждают,
фильтруют через вату в
делительную в
оронку вместимостью
300 мл и вату
промывают
1
0
мл хлороформа. Вату перенося
т обратно в колбу, прибавляют
15

мл хлороформа и кипятят с обратным х
олодильником 10 мин.
Охлажденное хлороформное извлечение
фильтруют
через вату
в
ту же делительную воронку
. Колбу дважды споласкивают
хлороформом (по 10 мл) и фильтруют через ту же вату.

К о
бъединенным извлечениям ост
орожно,
по стенкам
делительной воронки прибавляют 100 мл щелочно
-
аммиачного
раствора (5% раствора
натрия гидроксида
, содержащего 2%
раствора

аммиака)
и осторожно взбалтывают 5
-
7 мин
, охлаждая
воронку под струей холодной воды.

После
полного
расс
лоения жидкости в делительн
ой
воронке прозрачный красный
верхний слой, не фильтруя,
помещают в мерную колбу на 250 мл, а нижний
-
хлороформный
слой
-
обрабатывают повторно 2
0 мл щелочно
-
аммиачным
раствора. Извлечение повторяют
до прекращения окрашивания
щ
елочно
-
аммиачного раствора
(полное извлечение
антраценпроизводных). Сливают окрашенные извлечения в ту же
мерную колбу и доводят объем щелочно
-
аммиачным раствором
до метки 250 мл.

Из колбы берут мерной пипеткой 25 мл и помещают в
колбу на 100 мл, закрывают
обратным холодильником и
нагревают на кипящей водяной бане 15 мин. При этом
происходит окисление тех производных антрацена, которые были
еще в восстановленной форме. Интенсивность и оттенок красного
окрашивания при этом изменяются. После охлаждения измеря
ют
оптическую плотность раствора на фотоколориметре ФЭК
-
М при
длине волны 540 нм
(
зеленый светофильтр
)
, контроль
-
щелочно
-
аммиачный раствор, кювета
-
10 мм,.

Растворы интенсивной окраски разбавляют перед
колориметрированием щелочно
-
аммиачным раствором, а
к
оэффициент разбавления помещают как множитель в числитель
формулы расчета.

Концентрацию производных антрацена
(агликонов)
в
колориметрируемом
растворе
определяют по калибровочному

график
у
.


23

Содержание производных антрацена (агликонов)

в
процентах (
X
) в пере
счете на абсолютно
-
сухое сырье вычисляют
по формуле:

С

250


К


100

100

X


m


(100

W)

,
где

С

-
содержание
производных антрацена
в 1 мл
колориметрируемого раствора, найденное по
калибровочному графику, в граммах;

m


-
масса сырья, в граммах;

250

-
объем
щелочно
-
аммиачного извлечения, в
миллилитрах;

W

-
потеря в массе при высушивании сырья, в процентах;

К

-
коэффициент разбавления.


П
римечание
:

В методику количественного определения
внесены изменения по сравнению с ГФ
XI
: диэтиловый эфир
з
аменен хлороформом.

1.

Построение калибровочного графика.

50,0 кобальта
хлорида (
CoCl
2


6
H
2
0), высушенного до постоянной массы,
помещают в мерную колбу на 500 мл, растворяют в 250
мл воды, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислот
ы и
раствор доводят до метки. Из этого раствора готовят серию
разбавленных растворов, измеряют оптическую плотность
растворов кобальта хлорида в пределах концентрации от 0,25
до 30% на фотоэлектроколориметре при длине волны около
530 нм в кювете с толщин
ой слоя 10 мм, используя в качестве
раствора сравнения воду.
Для построения калибровочного
графика
по оси ординат откладывают значения оптической
плотности, а по оси абсцисс

концентрацию растворов. При
этом концентрации растворов кобальта хлорида выражаю
т в
соответствующих концентрациях производных антрацена.
Приготовление эталонных растворов и определение их
оптической плотности проводят не менее трех раз.

2.

Приготовление щелочно
-
аммиачного раствора.

50г
гидроксида натрия растворяют при перемешивании в 870
мл
воды. После охлаждения раствора прибавляют 80 мл

концентрированного раствора аммиака и перемешивают.
Раствор годен в течение суток.





24



Схема 2.


КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТРАЦЕНПРОИЗВОДНЫХ

В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ





































Точная навеска сырья

0,05 г

+7,5 мл ледяной уксусной
кислоты, нагревание на водяной
бане 15 минут

Гидролиз антрагликозидов и окисление
восстановленных фо
рм антрацена

+ хлороформ 30 мл (15 минут)

и 15 мл (10 минут)

Экстракция

фильтрация

Хлороформное извлечение

+ щелочно
-
аммиачный раствор
по 100, 20, 10 мл и т.д. до
полного извлечения

Хлороформ

Щелочно
-
аммиачное
извлечение (верхний слой)

25 мл, н
агревание на
водяной бане 15 минут

Измерение оптической
плотности на ФЭК
(зеленый светофильтр)


25


КОНТРОЛЬНЫЕ

ВОПРОСЫ

1.

Почему при обнаружении антраценпроизводных в сырье
нельзя ограничиться только реакцией со щелочью в водном
или спиртовом извлечении?

2.

Назовите качественные реакции, используемые для
обнаружения антраценпроизводных. Напишите хим
ические
реакции?

3.

Какое окрашивание со щелочью дают окисленные
и восстановленные формы производных антрацена?

4.

Что происходит при нагревании навески сырья с ледяной
уксусной кислотой?

5.

Назовите основные этапы
фото
колориметрического м
етода
количественного определения антраценпроизводных.
Что
позволяет определить этот метод?

6.

С какой целью нагревают щелочно
-
аммиачный раствор
перед
фото
колориметрированием?

7.

Как определить содержание в сырье восстановленных
форм антраценп
роизводных?

8.

Какие реакции мо
жно использовать для
проявления
антраценпроизводных на хроматограммах?





















26

ТЕМА 4.
КАЧЕСТВЕННОЕ
ОБНАРУЖЕНИЕ
И
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ САПОНИНОВ В
РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ


ВОПРОСЫ

ДЛЯ

ПОДГОТОВКИ

К

ЗАНЯТИЮ

1.

П
онятие о сапонинах, строение,
классифика
ция,
физико
-
химические свойства.

2.

Экстракция сапонинов из сырья, методы очистки от
сопутствующих веществ.

3.

Качественные реакции, основанные на биологических,
физических и химических свойствах сапонинов.

4.

Методы
кол
ичест
венного определения: принцип метода,
их
сравнительная характеристика
.


РАБОТА НА ЗАНЯТИИ

Объекты исследования
:

1.
К
орни
с
олодки (ГФ
X
, с. 583
);

2. Корневища с корнями

синюхи
(ГФ
Xl
, вып. 2, с. 362);


ЗАДАНИЕ 1.

Качественное обнару
жение сапонинов в
растите
льном сырье


1.
Определение гемолитич
еской активности
растительного сырья

Методика.

1,0 г воздушно
-
сухого измельченного сырья
помещают в пробирку, заливают 10 мл изотонического раствора
натрия хлорида и настаивают на водяной бане в течение 15 мин.
Настой ф
ильтруют и определяют гемолитическую активность: к 1
мл настоя добавляют 1 мл 2%
-
ной дефибринированной взвеси
раствора эритроцитов в изотоническом растворе. При наличии
сапонинов раствор становится прозрачным, ярко
-
красным,
вследствие растворения эритроцит
ов («лаковая кровь»).


2.
Определение химической группы
сапонинов
(реакция
на пенообразование)

0,5 г воздушно
-
сухого измельченного сырья помещают в
пробирку, заливают 5 мл воды и нагревают
на водяной бане 15
мин. Настой
фильтруют и разливают в 2 пробирки.
В одну
пробир
ку наливают 5 мл
хлористоводородной
кислоты (0,1
моль/л), в другую
-
5 мл раствора натрия гидроксида (0,1 моль/л),

27

энергично встряхивают в течение минуты и сравнивают
высоту
столбов пены. При наличии в сырье тритерпеновых сапонинов в
обеих про
бирках образуется пена, равная по объему и стойкости
.

Если содержатся сапонины стероидной
группы
в щелочной среде

образуется более стойкая и мощная пена.


O
O
H
O
B
A
C
D
E
F
2
3
4
5
6
7
8
9
1
0
1
1
1
2
1
1
3
1
4
1
5
1
6
1
7
1
8
1
9
2
0
2
1
2
2
2
3
2
4
2
5
2
6
2
7


Стероидный сапонин (сапогенин «нормального» ряда)

H
O
A
B
C
D
E
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
0
1
1
1
2
1
3
1
4
1
5
1
6
1
7
1
8
1
9
2
0
2
1
2
2
2
3
2
4
2
5
2
6
2
7
2
8
2
9
3
0


Тритерпеновый сапонин (
β

амириновый агликон)

Запишите результаты исследования и сделайте вывод о
группе сапонинов
в исследуемом лекарственном сырье.


3. Реакция с ацетатом свинца

К 2 мл водного настоя в пробирке прибавляют несколько

капель ацетата свинца. Образуется осадок.
Причем
тритерпеновые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца,
а стероидные

основным.


4. Реакция с 1% спиртовым раствором холестерина

К 1
мл спиртового раствора сапонинов прибавляют
несколько капель 1% спирт
ового раствора холестерина.
Образуется осадок.


28

5. Реакция Лафона

К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл
кон
центрированной серной кислоты, 1 мл этилового спирта и 1
каплю 10%
раствор
а сернокислого железа. При
нагревании
появляется сине
-
зеленое окрашивание.


6. Реакция с 10% р
аствором нитрата натрия и
концентрированной серной кислотой

К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл 10% раствора
нитрата натрия и 1 каплю концентрированной серной кислоты.
Появляется кроваво
-
красное окрашивание.


7. Реакция Либермана
-
Бур
хардта (на стероидное
кольцо)

Для проведения этой реакции испытуемое вещество
растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют смесь
уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты
(50:1). Через некоторое время развивается окраска от розовой до
зел
еной и синей.



КОНТРОЛЬНЫЕ

ВОПРОСЫ

1.

Как проводится проба, позволяющая определить химическую
группу сапонинов?

2.

Что такое пенное число и гемолитический индекс? Как
проводится их определение?

3.

Все ли виды лекарственного растительного сырья,
содержащие с
апонин
ы
,

вызывают гемолиз?

4.

Какое значение для медицинской практики имеет способность
сапонинов связывать холестерин?











29


ТЕМА 5. КАЧЕСТВЕННОЕ
ОБНАРУЖЕНИЕ
И
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АРБУТИНА В
РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ


ВОПРОСЫ

ДЛЯ

ПОДГОТОВКИ

К

ЗАНЯТ
ИЮ

1.

Понятие о фенольных соединениях, строение,
классификация, физико
-
химические свойства.

2.

Экстракция арбутина из сырья, методы очистки извлечения.

3.

Качественные реакции на арбутин.

4.

Количественное определение арбутина: принцип
метода, дост
оинства и недостатки.


РАБОТА НА ЗАНЯТИИ


Объекты исследования
:

1.
Л
истья
т
олокнянки (ГФ
XI
, вып. 2, с. 275
-
277);

2.
Л
истья
б
русники (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 278
-
279).


ЗАДАНИЕ
1.
Качественное обнаружение
арбутина в
растительном сырье


O
H
O
O
O
H
O
H
O
H
C
H
2
O
H

Арбутин


0,5 г сырья, измельченного до частиц размером 1 мм,
помещают в пробирку, заливают 10 мл воды, кипятят в течение 2
-
3 мин и
фильтруют через бумажной фильтр:


1.
К 1
мл
фильтра прибавляют небольшой кристаллик
железа сульфата закисного, п
роявляется красновато
-
фиолетовое,
затем темно
-
фиолетовое окрашивание
и, наконец,
те
мно
-
фиолетовый осадок (арбутин);


2.

К 1 мл фильтрата (в фарфоровой
ча
шке) прибавляют 4
мл раствора аммиака и по каплям 1 мл 10% раствора
натрия


30

фосфорно
-
молибденовокислого
в хлористоводородной

кислоте
,
появляется синее окрашиван
ие (арбутин);

5.

К 2

3 мл фильтрата (в ф
арфоровой чашке) прибавляют 2

3
капли раствора железоаммониевых квасцов; появляется
черно
-
синее окрашивание и осадок (дубильные вещества).


Запишите результаты р
еакций и сделайте выводы
о
присутствии арбутина в анализируемом сырье.


ЗАДАНИЕ

2.

Количественное опред
еление арбутина в
растительном сырье

Метод количественного определения арбутина основан на
гидролизе арбутина с образованием гидрохинона, который
количес
твенно определяется йодом в щелочной среде,
созда
ваемой
натрия гидрокарбонатом.

Методика.

0,5 г (точная навеска) листьев, измельченных и
просеянных сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм,
помещают в колбу на 100 мл, заливают 50 мл воды и кипятят на
плит
ке 30 мин. Для уменьшения испарения в колбу вставляют
воронку. Горячее извлечение фильтруют в мерную колбу
вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, избегая
попадания растительного материала на фильтр. Растительный
материал в колбе вновь заливают 25 мл во
ды и кипятят 20 минут.
После этого горячее извлечение вместе с сырьем

переносят на
фильтр
,
остаток на фильтре промывают дважды горячей водой
(по 10 мл)
,
ко всему фильтрату добавляют 3 мл раствора свинца
ацетата основного для осаждения балластных веществ,
п
еремешивают, охлаждают и доводят объем фильтрата водой до
метки.

Колбу помещают в кипящую баню и выдерживают до
полной ко
агуляции осадка,

Г
орячую жидкость полностью
фильтруют в сухую колбу через бумажный фильтр, прикрывая
воронку ч
ашкой Петри или часовым с
теклом
(
во
избежании

испарения)
,
затем проводится гидролиз арбутина: после
охлаждения к фильтрату приливают 1 мл концентрированной
серной кислоты, колбу взвешивают с погрешностью ± 0,01 г,
присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на плитке
в течен
ие 1,5 часов, поддерживая равномерное и слабое кипение.


31

После охлаждения и
доведения первоначальной массы,
жидкость фильтруют в сухую колбу, к фильтрату добавляют 0,1 г
цинковой пыли и встряхивают в течение 5 минут для
восстановления хинонов, которые могут
образоваться из
гидрохинона в процессе нагревания пробы на плитке в
присутствии серной кислоты, затем жидкость нейтрализуют по
лакмусу натрия гидрокарбонатом (около 1
-
1,5 г
) приба
вляют еще
2
,0 г натрия гидрока
рбоната; после его растворения жидкость
фильтр
уют в сухую колбу через бумажный фильтр.

50 мл фильтрата (брать пипеткой), что соответствует
половине навески
,
помещают в плоскодонную колбу
вместимостью 500 мл, прибавляют 1 мл раствора крахмала, 20 мл
дистиллированной воды и н
емедленно титруют из полу
ми
кро
бюретки раствором йода (0,1 моль/л) до появления синего
окрашивания, не исчезающего в течение одной минуты.

Содержание арбутина в пересчете на абсолютно сухое
сырье в процентах (
X
) вычисляют по формуле:


V



0,01361


2


100


100

X


m



(100

W)

,
где


0,01361

-
количество арбутина, соответствующее 1 мл
раствора йода

(0,1 моль/л),
в
г
раммах
;

V

-

объем раствора йода (0,1 моль/л), израсходованного
на

титрование извлечения,
в миллилитрах
;

m

-
масса сырья,
в
г
раммах
;

W

-
потеря массы при высушиван
ии сырья,
в
процентах
.


Примечание:
приготовление раствора йода (0,1 моль/л).
13г кристаллического йода растворяют в растворе 36г
калия йодида в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 1
л и доводят объем раствора водой до метки.

Установка титра. К 25мл р
аствора натрия тиосульфата (0,1
моль/л) прибавляют 25 мл воды и титруют
приготовленным раствором йода до синего окрашивания
(индикатор
-
крахмал). Молярность раствора вычисляют по
второму способу.
Титр раствора устанавливают каждый
раз перед применением. Х
ранить в сосудах темного стекла
с притерыми пробками в защищенном от света месте.



32


КОНТРОЛЬНЫЕ

ВОПРОСЫ


1.

На каких свойствах
арбутина основано его количественное
определение
в ЛРС
?

2.

С какой
целью прибавляется порошок цинка при
количественном определен
ии арбутина?

3.

Для чего добавляется к извлечению раствор свинца
ацетата
основного?

4.

Как проводится гидролиз арбутина?

5.

Почему после нейтрализации жидкости натрия
гидрокарбонатном добавляют его еще 2 г?

6.

Качественные реакции на арбутин.




























33

ТЕМА 6. КАЧЕСТВЕННОЕ
ОБНАРУЖЕНИЕ
И
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ

В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ


ВОПРОСЫ

ДЛЯ

ПОДГОТОВКИ

К

ЗАНЯТИЮ

1.

Понятие о флавоноидах, строение, классификация,
физико
-
химические свойства.

2.

Методы качественного обнаружения флав
оноидов в сырье
:

а) качественные реакции, химизм реакций,
аналитический
эффект
;

б)
х
роматографический анализ (
метод
ы хроматографии на

бумаге
, тонкослойная

хроматография
,
ВЭЖХ).

3.

Методы количественного определения флавоноидов в сырье
:

а) экстракция флавоноид
ов из сырья
;

б) методы очистки извлечения, содержащего флавоноиды
;

в)

количественное
определение
флавоноидов
методом
спектрофотометрии.


РАБОТА НА ЗАНЯТИИ



Объекты исследования:

1.
Ц
ветки
в
асилька синего (ГФ
XI
, вып. 2, с. 238
);

2.
П
лоды
б
оярышника (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 283
);

3.
Ц
ветки
б
ессмертника песчаного (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 244
);

4.
Ц
ветки
п
ижмы (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 247
);

5
.
Т
рава
з
веробоя (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 323
);

6
.
Т
рава
г
орца птичьего (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 330
);

7
.
Т
рава
т
ысячелистника (ГФ
Xl
, вып. 2, с. 325
).


ЗАДАНИЕ
1.

Качественное обнаружение
флавоноидов в
растительном сырье

0,5 г измельченного сырья помещают в колбу
вместимостью 30 мл с воздушным холодильником, заливают 15
мл 70% этанола и нагревают на кипящей бане в течение 10 мин.

После ох
лаждения
жидкость фильтруют и
проводят
качественн
ые реакции на
флавоноид
ы
.


1.
Цианидиновая реакция или проба Синода


В три пробирки наливают по 1 мл фильтрата. В одну
пробирку добавляют порошок магния, во вторую
-
цинка, в

34

третью
-
только фильтрат. Затем во все т
ри пробирки добавляют
по 5
-
7 капель к
онцентрированной хлористоводородной
кислоты.
При наличии значительного количества флавоноидов в
пробирках с магнием и цинком сразу же появляется розовое,
оранжевое или красное окрашивание. При малом количестве
флавоноид
ов необходимо нагревание. Для этого пробирки
помещают в водяную баню на 10 минут, а затем наблюдают
окраску.

Флавонолы, флаваноны и флавоны при восстановлении
магнием или цинк
ом в присутствии хлористоводородной
ки
слоты
дают розовое, красное или оранжевое о
крашивание,
обусловленное

образованием антоцианидинов.

Третья пробирка контрольная: появление розового или
красного окрашивания в ней указывает на присутствие в сырье
антоциановых пигментов, халконов и ауронов, которые при
добавлении только одной ко
нцентри
рованной
хлористоводородной
кислоты образуют красное окрашивание за
счет образования оксониевых солей.

O
O
H
O
H
O
R
O
H
O
O
H

M
g

+

H
C
I
(
2
H
)
+

Флавонолы, флаваноны, флавоны



O
O
H
O
H
O
R
H
O
O
H
O
H
H

H
C
I
-

H
2
O

Хроменол



O
+
O
H
O
H
O
H
H
O
O
H
C
I
-

Цианидин хлорид


35

2.
Реакция с алюминия хлоридом

К 1 мл фильтрата добавляют 3
-
5 капель 5% спиртового
раствора реактива. При наличии флавоноидов, содержащих в
положении
5

ОН
-
группу
,
появляется лимонно
-
желтое
окрашивание.


O
O
H
O
H
O
R
O
H
O
O
A
I

3. Реакция с аммиаком, натрия гидрокарбонатом,
щелочью

К 1 мл фильтрата добавляют 3
-
5 капель 5% раствора
реактива. При наличии флавонов, флаванонов, флавонолов и
флаванонолов появ
ляется желтое окрашивание, при нагревании
переходящее в оранжевое или красное, антоцианы дают синее
или фиолетовое окрашивание.


4.
Реакция с солями железа (
III
)

К 1 мл фильтрата добавляют 2
-
3 капли 1% раствора железа
(
III
) хлорида или железоаммонийных ква
сцов. При наличии
флавоноидов с орто
-
диоксигруппировкой в кольце
В
появляется
черно
-
синее окрашивание и осадок. Эту реакцию дают и другие
фенольные соединения.

Из приведенных реакций специфическими являются
цианидиновая проба
и
реакция с алюминия хлоридом.

Результаты качественных реакций оформите
таблицей

Реактив


Результат реакции (цвет,
осадок или другие
изменения
)


Заключение о наличие
флавоноидов и их
принадлежности к той или иной
группе по классификации


Примечание.
При проведении качеств
енных реакций
сырье
должно быть предварительно освобождено от
пигментов
экстрагированием в аппарате Сокслета хлороформом или
другим органическим растворителем.



36

5.
Х
роматографическое

исследование флавоноидов

Оставшееся после качественного анализа спиртовое
извлечение у
паривают до половины объема. На круглый диск
хроматографической бумаги на расстоянии 0,5 см от центра
наносят исследуемое извлечение, а в качестве свидетелей
-

спиртовые растворы рутина, кверцетина или других веществ.
Диаметр пятна не

должен превышать 5 м
м. В центр диска вводят
фитиль из хроматографической бумаги. Хроматографирование
проводят в чашке Петри, в качестве растворителя используют
15%
кислоту
уксусную
; э
кспозиция 20
-
25 минут. Хроматограммы
высушивают
под тягой
до испарения растворителя и
просмат
ривают в УФ
-
свете
сначала
без предварительного
проявления, а затем после проявления алюминия хлоридом и
парами аммиака.


Зарисуйте схему хроматограммы, сделайте вывод о числе
веществ флавоноидной природы, их строении.


ЗАДАНИЕ
3
.

Количественное
определение
флавоноидов

в

растительном сырье


1.
Количественное определение флавоноидов в трав
е
горца птичьего (спорыша) (ГФ

Х
I
, вып. 2, с. 330)

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера
частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Около 0,5 г (
точная навеска) сырья помещают в колбу со шлифом
вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70% спирта, колбу
присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на
кипящей водяной бане в течение 30 минут. Затем колбу
охлаждают до комнатной температуры под струей
холодной воды
и фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу
вместимостью 50 мл, фильтр промывают 70% спиртом и доводят
объем фильтрата до метки (
раствор А
).

4 мл раствора
А
помещают в мерную колбу вместимостью
25 мл, прибавляют
1 каплю разведенной хлор
истоводородной
кислоты
,
2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% спирте и
доводят объем раствора 95% спиртом до метки; через 20 минут
измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре
при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.


37

В качеств
е раствора сравнения используют следующий
раствор: 4 мл раствора
А
помещают в мерную колбу
вместимостью 25 мл, прибавляют 1 к
аплю разведенной
хлористоводородной
кислоты и доводят объем раствора 95%
спиртом до метки.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете
на
авикулярин и абсолютно
-
сухое сырье в процентах (
X
) вычисляют
по формуле:

D

50


100


25

X


330

m


(100

W)

,
где


D

-
оптическая плотность испытуемого раствора;

330

-
удельный показатель поглощения комплекса
авикулярина с алюминия хлоридом
при 410 нм;

m

-
масса сырья,
в
г
раммах
;

W

-
потеря в массе при высушивании сырья,
в процентах
.


Запишите кратко методику определения,
рассчитайте содержание флавоноидов и сделайте вывод о
соответствии сырья

требованиям ФС
.


2.
Количественное определение флавоноидов в цветках
василька синего (ГФ
XI
, вып
.2, с.238).

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера
частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Около 0,3 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в

колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 10
0 мл 1% раствора
хлористоводородной
кислоты, колбу выдерживают на водяной
бане при температуре 40
-
45°С в течение 15 мин. Извлечение
фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 250 мл.

Вату с сырьем снова помеща
ют в колбу, прибавляют 10
0
мл 1% раствора хлористоводородной
кислоты, предварительно
смывая частицы сырья с воронки в колбу, и повторяют это
экстрагирование указанным выше способом. Затем содержимое
колбы фильтруют через вату в ту же мерную колбу и после
о
хлаждения доводят до ме
тки 1% раствором хлористоводородной

кислоты. Полученное извлечение фильтруют через бумажный
фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата, и измеряют
оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны

38

510 нм в кювете с толщиной сло
я 10 мм.

В качестве раствора
сравнения исполь
зуют 1% раствор хлористоводородной
кислоты.

Содержание суммы антоцианов в пересчете на цианидин
-
3,5
-
дигликозид в абсолютно
-
сухом сырье в процентах (
X
)
вычисляют по формуле:


D


2
50


100


X


453


m



(100

W)

,
где


D

-
оптическая плотность испытуемого раствора;

453


-
удельный показатель поглощения цианидин
-
3,5
-
дигликозида в 1% растворе хлористоводородной
кислоты;

m

-
масса сырья,
в
г
раммах
;

W

-
потеря
в массе при высушивании сырья, в процентах
.


3.
Количественное определение фл
авоноидов в траве
зверобоя (ГФ

Х
I
,

вып.2,

с.323)

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера
частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.
0,5 г (точная навеска) сырья помещают в колбу на 100 мл,
прибавляют 2
0 мл 50% спирта. Колбу нагревают с обратным
холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин.
Извлечение фильтруют через вату в мерную колбу на 50 мл. Вату
с сырьем возвращают в колбу
,
прибавляют 20 мл 50% спирта и
проводят повторную экстракцию. Филь
труют извлечение в ту же
мерную колбу. После охлаждения объем

извлечения доводят 50%
спиртом до метки и перемешивают
(
раствор А
).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл
раствора
А
,
1 каплю разведенной уксусной кислоты,
1 мл
раствора алюминия хлори
да в 95% спирте и доводят объем
раствора 95 %
спиртом до метки. Через 40 мин
измеряют
оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине
волны 415 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве
раствор
а сравнения используют раствор, состоящий из 1
мл
извлечения,
1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный
95% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.


39

Параллельно измеряют оптическую плот
ность раствора
Государственного стандартного образца (ГСО)
рутина,
приготовленного аналогично испыт
уемому раствору.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и
абсолютно
-
сухое сырье в процентах (
X
) вычисляют по формуле:


D

c

50


100



100

X
3


D
0


m



100


(100

W)

,
где


D

-
оптическая плотность испытуемого раствора;

D
0

-
оптическа
я плотность раствора ГСО рутина;

m

-
масса сырья,
в
г
раммах
;

с

-
масса ГСО рутина,
в граммах
;

W

-
потеря в массе при высушивании сырья,
в процентах
.


П
римечание
:
п
риготовление раствора Государственного
стандартного образца (ГСО) рутина: около 0,05 г (т
очная
навеска) ГСО рутина, предварительно высушенного при
температуре 130
-
135°С в течение 3 ч, растворяют в 85 мл
95% спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при
нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят объем
раствора тем же спиртом до метки и пере
мешивают.


КОНТРОЛЬНЫЕ

ВОПРОСЫ

1.

Как получить извлечение из сырья для проведения
качественных реакций?

2.

Назовите качественные
реакции на флавоноиды,
на каких
свойст
вах флавоноидов они основаны?
Химизм реакций.
Почему при проведении пробы Синода
необходимо делать
контрольную пробу?

3.

Какие качественные реакции являются специфическими, а
какие общими для фенольных соединений?

4.

Какую флуоресценцию развивает большинство флавоноидов в
УФ
-
свете?

5.

Какие качественные реакции могут быть использованы
для

количественного определения флавоноидов?

6.

Назовите
методы и
основные э
тапы количественного
определения флавоноидов
в ЛРС
.



40

ТЕМА 7. КАЧЕСТВЕННОЕ
ОБНАРУЖЕНИЕ
КУМАРИНОВ

В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ


ВОПРОСЫ

ДЛЯ

ПОДГОТОВКИ

К

ЗАНЯТИЮ

1.

Понятие о кумарина
х, строение, классификация,
физико
-
химические свойства.

2.

Экстракция кумари
нов из сырья, методы очистки от
сопутствующих веществ.

3.

Качественные реакции, химизм реакций, аналитический
эффект.


РАБОТА НА ЗАНЯТИИ


Объекты исследования:

Т
рава
д
онника



ЗАДАНИЕ
1
.

Получение извлечения
из растительного
сырья
, содержащего кумарины


0,5 г

измельченного сырья помещают в колбу на 50 мл,
заливают 15 мл 95% спирта и нагревают с воздушным
холодильником на кипящей водяной бане 10 мин. Содержимое
колбы фильтруют через вату
.

С
полученным
извлечением проводят качественные
реакции на кумарины и хроматографическое исследование.


ЗАДАНИЕ
2.
Качественное обнаружение
кумаринов в
растительном сырье


1.

Лактонная проба


Реакция основана на способности кумаринов при
нагреван
ии в щелочной среде
,
образовывать соли желтого цвета,
растворимые в воде, которые при подкислении превращаются в
исходные продукты, не растворимые в воде.


В пробирку наливают 1 мл исходного раствора, добавляют
0,5 мл 10% раствора натрия или калия гидрокси
да, нагре
вают на
кипящей водяной бане. В
присутствии кумаринов появляется
желтое окрашивание. Содержимое пробирки охлаждают,
добавляют 4 мл дистилли
рованной воды, 10% раствор

41

хлористо
водородной кислоты до кислой реакции (по лакмусу).
Появление осадка или п
омутнение раствора подтверждает
присутствие кумаринов в сырье.

O
C
O

+
N
a
O
H

H
C
C
H
C
O
O
O
N
a
H

+
H
C
l

H
C
C
H
C
O
O
O
H
H

-
H
2
O

O
C
O



2.

Реакция азосочетания

Реакция о
снована на способности кумаринов образовывать
с ароматическими аминопроизводными окрашенные продукты.


К 1 мл исходного раствора добавляют 3 мл раствора натрия
гидроксида (0,1 м
оль/л), нагревают на водяной бане, охлаждают и
смешивают с 1 мл свежеприготовленного диазотированного
раствора сульфаниловой кислоты (готовится путем смешения 1
мл сульфаниловой кислоты и 2 мл 10% раствора натрия нитрита).
В присутствии кумаринов в зависим
ости от их химической
структуры появляется окрашивание от красно
-
оранжевого до
вишнево
-
красного.

O
C
O

+
N
a
O
H

C
C
H
C
O
H
O
N
a
O

+

N
S
O
2
N
N
H
2
+


O
C
N
N
S
O
2
N
H
2
O



Примечание
:

п
риготовление диазореактива (ГФ
XI
, ч.2, с.107
)
.

а
)
приготовление раствора сульфаниловой кислоты:


42

4,5 г сульфаниловой кислоты и
45
мл
конц. хлористо
водородной
кислоты в 500 мл воды.

б)
пригото
вление раствора натрия нитрита:
(ГФ
XI
, ч.2, с. 120)

10 г
натрия нитрита растворяют в воде и доводят объем раствора
водой до 100 мл.


ЗАДАНИЕ
3.
Идентификация кумаринов методо
м
хроматографии в тонком слое
сорбента


На стартовую линию хроматогра
фической
пластинки
«Силуфол»

наносят капилляром
спиртовое извлечение из сырья
и
раствор известного кумарина (свидетеля). После нанесения
каждой капли дают возможность ей подсохнуть. Разделение
проводят в камере, в системе хлороформ
-
этанол (9:1).

После подн
ятия
фронта растворителя на 15
-
18 см
,
хроматограммы вынимают из камеры, подсушивают под тягой, а
затем высушивают при 100
-
120°С. Хроматограммы
просматривают в УФ
-
свете. Кумарины в
зависимости от
структуры флуоре
сцируют ярко
-
голубым, зеленовато
-
голубым,
фио
летовым, зеленым цветом.
П
ятна кумаринов
отмечают
простым карандашом. Хроматограмму на пластинке «Силуфол»
проявляют путем опрыскивания 10%
спиртовым
раствором
натрия гидроксида
, подсушивания при 100
-
120°
С и
о
прыскивания диазотированной
сульфаниловой кисло
той
.
Появляются пятна кумаринов от
оранжево
-
красного до сине
-
фиолетового
цвета
.

Рассчитывают величину
R
f
, сравнивая с
R
f
достоверных
обр
азцов кумаринов, идентифицируют
компоненты исследуемого
извлечения
и делают
заключение о качествен
ном составе
кумаринов.
Зарисовывают
схему хроматограммы.


КОНТРОЛЬНЫЕ

ВОПРОСЫ

1.

Как получить извл
ечение кумаринов из сырья и очистить
его
от сопутствующих веществ?

2.

Почему для извлечения кумаринов из ЛРС не используют
воду?

3.

Что происходит при взаимодействии
кумаринов со щелочью?

Напишите схему реакции, укажите аналитический эффект.

4.

Как провести реакцию азосочетания и является ли
она
специфической для кумаринов? Напишите схемы реакций.

5.

К
ак
ую

флуоресценци
ю проявляют

кумарины в УФ
-
свете?


43

ТЕМА 8. КАЧЕСТВЕННОЕ
ОБНАРУЖЕНИЕ
И
КОЛИЧЕСТВЕ
ННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДУБИЛЬНЫХ
ВЕЩЕСТВ (ТАННИДОВ) В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ


ВОПРОСЫ

ДЛЯ

ПОДГОТОВКИ

К

ЗАНЯТИЮ

1.

Понятие о дубильных веществах, строение,
классификация,
физико
-
химические свойства, применение в медицине.

2.

Экстракция
дубильных веществ
из растительног
о сырья.

3.

Качественные реакции обнаружения дубильных веществ в
сырье
:

a)

специфические реакции
;

б)
реакции отличия групп
дубильных веществ
(гидролизуемые
или конденсированные)
.

4.

Методы количественного определения дубильных веществ
в
лекарственном сырье
.


РАБ
ОТА НА ЗАНЯТИИ


Объекты исследования:

1.

К
ора

д
уба (ГФ
XI
, вып. 2, с. 233
);

2.

П
лоды
ч
ерники (ГФ
XI
, вып. 2, с. 291
);

3.

П
лоды
ч
еремухи (ГФ
XI
, вып. 2, с. 292
);

4.

К
орневища
б
адана (ГФ
XI
, вып. 2, с. 357
);

5.

К
орневища
з
меевика (ГФ
XI
, вып. 2, с. 358
);


ЗАДАНИЕ

1
.
Качест
венное обнаружение
д
убильных
веществ в
растительном сырье


1.

Экстракция дубильных веществ из сырья

5 г измельченного сырья помещают в колбу вместимостью
250 мл, заливают 100 мл кипящей воды, кипятят на плитке в
течение 5 мин, фильтруют через складчатый фильт
р. Полученное
извлечение используют для проведения качественных реакций.


2.

Реакции обнаружения дубильных веществ



Реакция с раствором желатина


К 3
-
5 мл извлечения добавляют 2
-
3 капли 1% раствора
желатина в 10% растворе натрия хлорида. При наличии таннидов

образуется белый осадок или помутнение раствора от
образовавшихся желатинтаннатов, которые растворимы в

44

избытке реактива. Результаты анализа наблюдают на черном
фоне, сравнивая с исходным извлечением.


Реакция с солями алкалоидов

К 3
-
5 мл извлечения добав
ляют 2
-
3 капли 1% раствора
солей кодеина, хинина или другого алкалоида. При наличии
таннидов выпадает осадок или наблюдается помутнение
раствора.


Реакция с калия дихроматом

К 3
-
5 мл извлечения добавляют 2
-
3 капли 5% раствора
калия бихромата. При наличии т
аннидов наблюдается
потемнение раствора или выпадение желто
-
коричневого осадка.


Реакция со
свинцом основным уксуснокислым


К
3
-
5 мл извлечения добавляют раствор свинца основного
уксуснокислого. При наличии таннидов выпадает осадок
.


Реакция с
реактивом Фо
лина
-
Денис
а

(смесь

фосфомолибденовой и фосфовольфрамовой кис
лот)

К 3
-
5 мл извлечения добавляют 3
-
5 капель реактива
Фолина
-
Дениса и небольшое количество натрия карбоната. При
наличии таннидов образуется вольфрамовая или молибденовая
синь. Окраска устойчива.
Эта реакция может быть использована
для количественного определения дубильных веществ.

Результаты
реакций
фиксируют и указывают, какие
реакции являются специфическими.


3.

Реакции отличия групп таннидов:



Реакция с солями железа (
III
)


К 2
-
3 мл извлечения д
обавляют 3 капли 1% раствора
железоаммонийных квасцов. Гидролизуемые дубильные
вещества дают при этом черно
-
синее окрашивание,
конде
н
сированные
-
черно
-
зеленое.


Реакция с бромной водой


К 5 мл извлечения добавляют несколько капель бромной
вод
ы и жидкость
доводят до кипения
(под тягой!).
Конденсированные дубильные вещества сразу образуют желто
-
оранжевый осадок, а гидролизуемые выпадают в осадок только
при добавлении избытка бромной воды (постепенно).


Реакция свинца аце
тата среднего в уксусной среде

К 1 мл
извлечения добавляют 2 мл 10% уксусной кислоты
и 1 мл
10%
раствора свинца ацетата среднего. При наличии

45

гидролизуемых дубильных веществ выпадает белый осадок,
осадок отфильтровывают
;
к фильтрату добавляют 10 капель 1%
раствора
железоаммонийных квасцов и 0,
5 г
натрия ацетата (не
встряхивать!). При наличии в сырье конденсированных
дубильных веществ фильтрат окрашивается в черно
-
зеленый
цвет.


Реакция с формальдегидом и концентриро
ванной
хлористо
водородной кислотой


К
25 мл извле
чения прибавляют 5 мл 40% раств
ора
формальдегида и 3 мл
концентрированной

хлористо
водородной
кислоты. Смесь кипятят 30 минут в колбе с обратным
холодильником. При наличии конденсированных дубильных
веществ и галловой кислоты образуется
осадок кирпично
-
красного цвета; п
осле охл
аждения
осадок отфильтровывают.

К
10 мл фильтрата в пробирке добавляют 1 мл 1 %
раствор
а железоаммонийных квасцов и 1 г
кристаллического
натрия ацетата (не взбалтывать!). При наличии в сырье
дубильных веществ гидролизуемой группы образуется сине
-
фиолетовое окрашив
ание около кристаллов натрия ацетата.

Р
езультаты реакций
фиксируют и
дела
ют
заключение о
характере дубильных веществ в анализируемом сырье.


ЗАДАНИЕ
3.

К
оличественное определение дубильных
веществ в растительном сырье (ГФ
XI
, вып.1, с.286
).
Схема 3.


Фарма
копейный метод количественного определения
дубильных веществ в растительном сырье основан на их ле
гкой
окисляемости калия перманганатом в
присутствии

индигосульфокислоты при комн
атной температуре.
Индигосульфо
кислота является индикатором и регулятором
реак
ции.

Методика.

Около 2 г
(точная навеска) измельченного
сырья, просеянного сквозь
сито с диаметром отверстий 3 мм
,
помещают в коническую колбу
вместимостью 500 мл, заливают
20
0 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным
холодильником на плитке с закр
ытой спиралью в течение 30
минут при периодическом перемешивании.


46

Жидкость охлаждают до комнатной температуры и
процеживают в мерную колбу вместимостью 250 мл через вату
так, чтобы частицы сырья не попали в колбу.
Сырье в колбе

ополаскивают 30
-
40 мл теплой
воды и фильтруют в ту же мерную
колбу.Экстракт доводят до метки водой.
Затем отбирают мерной
пипеткой 25 мл полученного извлечения в коническую колбу
вместимостью 750 мл, прибавляют 500 мл воды, 25 м
л
индигосульфокислоты и титруют
при постоянном
перемешив
ании раствором калия перманганата (0,02 моль/л) до
золотисто
-
желтого окрашивания.

Параллельно проводят контрольный опыт (определяют
индиго число). Берут 25 мл индигосульфокислоты, прибавляют
500 мл воды и титруют калия перманганатом (0,02 моль/л) до
золоти
сто
-
желтого окрашивания.

Реакция образования изатина в эквивалентной точке
титрования
:


H
O
3
S
C
C
H
N
O
S
O
3
H
C
O
N
H
O
индигосульфокислота

K
M
n
O
4

N
O
3
S
N
H
C
C
O
O
изатин


Содержание дубильных веществ
X
в проц
ентах в пересчете

на абсолютно
-
сухое сырье вычисляют по формуле:


(
V
0



V
)

0,004157

250

100

100

X


25


m


(100


W
)

,
где



Vo

-

объем раствора калия перманганата (0,02 моль/л),
израсходованного на титрование извлечения, в
миллилитрах;

V

-

объем раствора калия перманганата (0,02 моль/л),
израсходованного на титрование в контрольном
опыте, в миллилитрах;

m

-
масса сырья, в граммах;


47

0,004157


-

количество дубильных веществ, соответствующее 1
мл раствора калия перманганата (0,02 моль/л)
в
пересчете на танин, в граммах;

W

-
потеря в массе при
высушивании сырья, в процентах;

250

-
общий объем извлечения, в миллилитрах;

25

-
объем извлечения, взятого для титрования, в
миллилитрах.

Примечание.

Приготовление раствора индигосульфо
-
кисло
ты. 1 г и
н
дигокармина растворяют в 25 мл
концентрированной се
р
ной кислоты, затем прибавляют
дополнительно 25 мл ко
н
центрированной серной кислоты
и разбавляют водой до 1000 мл, осторожно вливая
полученный раствор в воду, в мерной колбе вместимостью
1000 мл
.

Схема 3.


КОЛИЧЕСТВЕННОЕ

ОП
РЕДЕЛЕНИЕ

ДУБИЛЬНЫХ

ВЕЩЕСТВ

В


РАСТИТЕЛЬНОМ

СЫРЬЕ























Навеска ЛРС (2,0)

Кипячение на плитке 30 минут

Фильтрация в мерную колбу
V
 200

250 мл

Аликвота 25 мл

Титрование раствором
KMnO
4
(0,02 моль/л)

+ 250 мл
горячей воды

+ 500 мл воды + 25 мл
индигосульфокислоты


48


КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ


1.

Как получить извлечение
из сырья для проведения
качественных реакций и количественного определения
дубильных веществ?

2.

Какие реа
кции на дубильные вещества
являются
специфическими?

3.

Какими реакциями можно доказать наличие в
сырье
гидролизуемых
и

конденсированных
таннидов?

4.

Почему титрование калия
перманга
натом нужно
проводить
медленно и при большом разведении?

5.

Для чего ставится контро
льный опыт при
определении
количественного содержания дубильных веществ в
лекарственном растительном сырье по ГФ
XI
?

6.

Преимущество
и недостатки
перманганатометрического
метода количественного определения дубильных
веществ
перед другими методами?

























49

ТЕМА 9. КАЧЕСТВЕННОЕ


ОБНАРУЖЕНИЕ


И
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

АЛКАЛОИДОВ

В

РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ



ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ

1.

Понятие об алкалоидах, строение, классификация,
физико
-
химические свойства.

2.

Экстракция алкалоидов из растител
ьного сырья. Методы
очистки.

3.

Методы обнаружения алкалоидов в сырье:

a)

качественные реакции
;

в)
хроматографический анализ
.

4.

Методы количественного определения алкалоидов в
лекарствен
ном растительном сырье: принцип метода, их
сравнительная характеристика.


РАБО
ТА НА ЗАНЯТИИ


Объекты исследования:

1.

Л
истья
к
расавки (ГФ
XI
, вып. 2, с. 251
);

2.

Л
истья
б
елены
(ГФ
XI
, вып. 2, с.
260
);

3.

Л
истья
д
урмана
(ГФ
XI
, вып. 2, с. 272
);

4.

Т
рава
т
ысячелистника (ГФ
Xl
, вып. 2,
с. 325
).


ЗАДАНИЕ
1
.

Качественное обнаружение алкалоидов
в
рас
тительном сырье


1.
Получение извлечения из сырья для проведения
качественных реакций

1 г измельченного растительного сырья помещают в колбу
вместимостью 100 мл,
заливают 10 мл 1% раствора
хлористо
водородной кислоты и нагревают на кипящей водяной
б
ане в течение 5 минут. После охлаждения извлечение
фильтруют через бумажный фильтр.

Извлечение
по 1
-
2 капли помещают на предметное стекло
и
в каждую
каплю
осторожно, по каплям, добавляют
соответствующий реактив на алкал
оиды, при этом не касаясь

капельнице
й с реактивами капли извлечения.
При наличии
алкалоидов тотчас или через некоторое время должен
образоваться осадок. Интенсивность осадка зависит как от
количественного содержания алкалоидов, так и от
чувствительности алкалоида к реактиву.


50

Общеосадительны
е реактивы:



реактив Майера
(
HgCI
2

KI
)



реактив Вагнера
(
I
2
KI
)



реактив Драгендорфа (В
iI
3
К
I
4
)



10% раствор танина



1% раствор кремневольфрамовой
кислоты
(
SiO
2
*12
WO
3
*
nH
2
O
)



раствор фосфорномолибденовой
кислоты Н
7
Р(Мо
2
О
7
)
6

2
О



1% раствор пикриновой кислоты

Резуль
таты
реакций
фиксируют и делают вывод о
наличии
или отсутствии алкалоидов в растительном сырье.


ЗАДАНИЕ
2
.
Количественное определение
суммы
алкалоидов в сыр
ье растений семейства пасленовые
(ГФ
XI
, вып. 2, с.252). Схема 4.

Метод основан на выделении из сыр
ья алкалоидов
-
оснований органическими растворителями и последующем
переводе их для очистки в алкалоиды
-
соли. Причем эта
процедура повторяется, после чего титриметрически определяют
сумму алкалоидов.

Методика.

Аналитическую пробу сырья измельчают до
размера
частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий
1 мм. 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в
колбу на 200 мл, приливают 80 мл хлороформа и 3
-
5 мл раствора
аммиака (9,5
-
10,5 %), закрывают колбу корковой пробкой с
бумажной прокладкой и в
збалтывают на встряхивающем
аппарате в течение 1 часа.
Периодически необходимо проверять с
помощью универсальной индикаторной бумаги наличие
щелочной среды в извлечении.

Хлороформное извлечение фильтруют через вату в мерный
цилиндр в вытяжном шкафу. Хлороф
ормное извлечение
подкисляют разбавленной хлористоводородной кислотой по
индикатору и максимально извлекают алкалоиды 1% раствором
хлористоводородной кислоты порциями по 20, 15, 10 мл (проба с
реактивом Майера) в делительной воронке на 150
-
200 мл.

С каждой
порцией 1% раствора хлористоводородной
кислоты встряхивают делительную воронку в течение 2
-
Зминут.
После расслоения жидкости в воронке кислотные извлечения
собирают в колбу на 200 мл.


51

Кислотное извлечение подщелачивают раствором аммиака
до щелочной реакци
и по фенолфталеину и алкалоиды извлекают
последовательно 10; 7,5; 5 мл хлороформа, взбалтывая по 3
минуты.

Хлороформные извлечения фильтруют в вытяжном шкафу
в колбу через бумажный фильтр, на который предварительно
помещают 4
-
5 г свежепрокаленного сульфата
натрия, смоченного
хлороформом. Фильтр дважды промывают хлороформом по 5 мл.
Хлороформ отгоняют на водяной бане с прямым холодильником
до объема 0,5
-
1 мл, остатки хлороформа удаляют продуванием
воздуха до исчезновения запаха растворителя.

Схема 4
.

КОЛИЧЕС
ТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛ
ЕНИЕ АЛКАЛОИДОВ

В
РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ



























Точная навеска сырья

5,0 г

+ 80 мл хлороформа + 3
-
5 мл
раствора
NH
4
OH
, встряхивают 1 час

Хлороформное извлечение

фильтрат

подкисляют 2
-
3 мл разб.
HCI

извлекают 1% р
-
ром
HCI
порциями
по 20, 15,
10 мл

Кислотное извлечение

подщелачивают раствором
NH
4
OH

по ф/ф, извлекают хлороформом
порциями по 10; 7,5; 5 мл

Хлороформное извлечение

фильтруют через бумажный фильтр
с б/вод.
Na
2
SO
4
, отгоняют
хлороформ

Сухой остаток (сумма алкалоидов)

+ 10 мл 0,0
2 моль/л р
-
ра
HCI
,
подогревают на водяной бане + 2
капли метил/кр. + 1 капля метил/син.

Титрование

избыток
HCI
оттитровывают 0,02 моль/л р
-
ром
NaOH

до зеленого окрашивания


52

Сухой остаток растворяют в 10
мл (0,02 моль/л) раствора
хлористо
водородной кислоты при нагревании на водяной бане,
прибавляют 2 капли спиртового раствора метилового красного и
1 каплю ме
тиленового синего, избыток хлористо
водородной
кислоты оттитровывают раствором
NaOH
(0,02 моль/л) до
появления зеленой окраски.

Содержание алкалоидов в сырье в процентах (
X
) в
пересчете на абсолютно сухое сырье рассчитывают по формуле:


(10


V
)

0,00578
0


100

100

X


m


(100


W
)

,
где


V

-

кол
-
во раствора гидроксида натрия (0,02 моль/л)
пошедшее на титрование, в миллилитрах;

m

-
масса сырья, в граммах;

0,005780

-

количество алкалоидов в пересчете на гиосциамин
соответствует 1
мл 0,02 моль/л раствора
хлористоводородной кислоты;

W

-
потеря в массе при высушивании сырья, в
процентах.


С
одержание алкалоидов в сырье
сравнивают с
требованиями ФС
и делают
заключение о соответстви
и сырья
ФС
.


ЗАДАНИЕ

3
.

Идентификация алкалоидов
мет
одом
тонкослойной
хроматографии


Оттитрованную жидкость, оставшуюся
после

количественного определения, подщелачивают аммиаком по
фенолфталеиновой бумажке, переносят в делительную воронку и
извлекают алкалоиды 20 мл хлороформа. Хлороформ
ное
извлечение взба
лтывают с 2 г
безводного натрия сульфата,
фильтруют и хлороформ отгоняют до объема, равного 1
-
2 мл (для
красавки) или 0,5 мл (для белены). Хлороформный раствор
алкалоидов используют для хроматографии.

На линию старта
пластинки «Силуфол»
(1,5 см
от нижнего
края пластинки) по
середине наносят капилляром
последовательно 5
-
10 капель хлороформного раствора

53

ал
калоидов. На расстоянии 1,5
-
2 см
по обе стороны наносят
известные вещества

-
растворы атропина и скополамина.

Пластинку осторожно помещают в хроматографичес
кую
камеру в систему растворителей (хлороформ
-
эта
нол в
соотношении 9:1)
. Когда фронт растворит
елей пройдет
расстояние 10
-
11 см
, пластинку вынимают, подсушивают под
тягой и помещают в эксикатор, насыщенный парами йода.

Алкалоиды обнаруживают
в виде темно
-
б
урых пятен.
Находят центры пятен, измеряют расстояние от центра пятна до
старта и от старта до фронта и рассчитывают значение
R
f
.

Зарисовывают схему хроматограммы, записывают

значения
R
f
и делают
вывод о качественном составе алкалоидов
в
исследуемом сырье
.


КОНТРОЛЬНЫЕ

ВОПРОСЫ

1.

К
ак
получить извлечение из сырья для проведения
качественных реакций на алкалоиды?

4.

Назовите общеосадительные реактивы
на алкалоиды
и
укажите
окраску образовавшихся осадков.

5.

Назовите этапы количественного определения алкалоидов.

6.

Поче
му для подщелачивания используется раствор аммиака, а
не щелочи?

7.

Как проверить полноту извлечения алкалоидов п
ри переводе
их из хлороформного извлечения в водную фазу
и из водного
извлечения в хлороформ?

8.

Что такое
R
f
и как рассчитывается его значение?















54


РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА


1.
Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества
лекарственных растений / В.П.Георгиевский, Н.Ф.Комиссаренко,
С.Е. Дмитрук.
-
Новосибирск: Наука,1990.

336 с.

2. Государственные стандарты СССР. Лекарственное
раст
ительное сырье. М.: Изд
-
во стандартов, 1980.
-
196 с.

3.
Государственная фармакопея СССР.
X
-
е изд.

М, 1968.
-

1079с.


4.
Государственная фармакопея СССР. Вып.1
.
/ МЗ СССР.
-
11
-
е изд., доп.
-
М: Медицина, 1987.
-
334с.

5.
Государственная фармакопея СССР. Вып.
2. Общие методы
анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.
-
11
-
е
изд., доп.
-
М: Медицина, 1989.
-
400 с.

6.
Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных
растений / Н.И. Гринкевич, Л.А. Сафронич.
-
Москва: Высшая
школа, 1983.
-
176 с.

7.
Краснов, Е.А. Выделение и анализ природных
биологически активных веществ / Е.А. Краснов, Т.П. Березовская
и др. Под ред. Е.Е.Сироткиной.
-
Томск, 1987.

184 с.

8.
Куркин
,
В.А. Фармакогнозия

/
В.А.Куркин
.
-

Учебник для
студентов фармацевтических вузов.
-

Са
мара
: ООО «Офорт»,
ГОУВПО «СамГМУ»
, 200
4
.
-
1180с.



9. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия
:
учебник

4
-
е изд.,
перераб. и доп. / Д.А. Муравьева, Самылина И.А., Яковлев Г.П.
-

М. : Медицина, 2002.
-
656 с.



55

Учебное издание




МЕТОДЫ

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОГ
О

АНА
ЛИЗА
ЛЕКАРСТВЕННОГО

РАСТИТЕЛЬНОГО

СЫРЬЯ


ЧАСТЬ
II


ХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ


Учебное пособие

Авторы:

Калинкина Галина Ильинична
, д
-
р
фарм.н
аук
, профессор

Сальникова Екатерина Никифоровна, к
анд
.фарм.н
аук
, доцент

Исайкина Надежда Валентиновна,
к
анд
.фарм.н
аук
, ст
.преподаватель

Коломиец Наталья Эдуардовна,
к
анд
.фарм.н
аук
, ассистент







Напечатано в авторской редакции


Подписано в печать
03.12.
2008

г.

Формат 60х84
16
1
. Бумага офсетная.

Печать ризограф. Гарнитура «
Times
». Печ.лист.
3
,4
3
.

Тираж
10
0
экз. Заказ №





Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии
СибГМУ

634050, г.Томск,
ул.Московский тракт, 2


Приложенные файлы

  • pdf 15559799
    Размер файла: 687 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий